2024年5月23日发(作者：武依瑶)
牛β乳球蛋白（β-Lg）酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用
目的：本试剂盒用于测定牛血清、血浆、组织
等样本中β乳球蛋白（β-Lg）的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛β乳球蛋白（β-Lg）水平。用纯化的牛β乳
球蛋白（β-Lg）捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入牛β乳球
蛋白（β-Lg），再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底
洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的
黄色。颜色的深浅和样品中的牛β乳球蛋白（β-Lg）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下
测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛β乳球蛋白（β-Lg）含量。
试剂盒组成：
试剂盒组成
说明书
封板膜
密封袋
酶标包被板
标准品
酶标试剂
样品稀释液
显色剂A液
显色剂B液
终止液
20×浓缩洗涤液
48孔配置
1份
2片
1个
1×48
0.3ml×6管
5 ml×1瓶
3 ml×1瓶
3 ml×1瓶
3 ml×1瓶
3 ml×1瓶
15ml×1瓶
96孔配置
1份
2片
1个
1×96
0.3ml×6管
10 ml×1瓶
6 ml×1瓶
6 ml×1瓶
6 ml×1瓶
6 ml×1瓶
25ml×1瓶
保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
注：标准品浓度依次为：200、100、50、25、12.5、0 μg/mL.
样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集
上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心
20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次
离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转
订购热线：4008898798 QQ：2881505690 2881505696
/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞
浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分
钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备
用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将
标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检
测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上
进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl
（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃
动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显
色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液
后15分钟以内进行。
注意事项：
1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值
大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计
算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物请避光保存。
7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
订购热线：4008898798 QQ：2881505690 2881505696
138****8258
2024年5月23日发(作者：武依瑶)
牛β乳球蛋白（β-Lg）酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用
目的：本试剂盒用于测定牛血清、血浆、组织
等样本中β乳球蛋白（β-Lg）的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛β乳球蛋白（β-Lg）水平。用纯化的牛β乳
球蛋白（β-Lg）捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入牛β乳球
蛋白（β-Lg），再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底
洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的
黄色。颜色的深浅和样品中的牛β乳球蛋白（β-Lg）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下
测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛β乳球蛋白（β-Lg）含量。
试剂盒组成：
试剂盒组成
说明书
封板膜
密封袋
酶标包被板
标准品
酶标试剂
样品稀释液
显色剂A液
显色剂B液
终止液
20×浓缩洗涤液
48孔配置
1份
2片
1个
1×48
0.3ml×6管
5 ml×1瓶
3 ml×1瓶
3 ml×1瓶
3 ml×1瓶
3 ml×1瓶
15ml×1瓶
96孔配置
1份
2片
1个
1×96
0.3ml×6管
10 ml×1瓶
6 ml×1瓶
6 ml×1瓶
6 ml×1瓶
6 ml×1瓶
25ml×1瓶
保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
注：标准品浓度依次为：200、100、50、25、12.5、0 μg/mL.
样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集
上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心
20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次
离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转
订购热线：4008898798 QQ：2881505690 2881505696
/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞
浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分
钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备
用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将
标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检
测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上
进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl
（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃
动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显
色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液
后15分钟以内进行。
注意事项：
1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值
大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计
算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物请避光保存。
7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
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