2024年5月23日发(作者：南萍韵)
丛枝菌根研究方法
一、检测孢子含量的方法
A
湿筛倾注法
1. 称取一定重量的土壤样品（最好是取自 15cm 表层植物根系附近的土壤） ，放在容器内用 水浸泡
20-30min ，使土壤松散。如果土壤粘性很大，也可加入各种土壤分散剂。
2. 选用一套洁净的具有孔径为 0.5-0.034mm 的土壤筛，依次重叠起来。最底层用一物体垫 着（如培
养皿、木块等物） ，使筛面稍微倾斜。
3. 用玻璃棒搅动浸泡的水溶液，停置几秒钟后，使大的石砾和杂物沉淀下去，即将悬浮的 土壤溶液慢
慢地倒在最上一层孔径最大的土壤筛上。 倾倒时，最好集中倒在筛面的一个点上， 不要使整个筛面都
沾有土壤溶液。
4. 用清水依次轻轻冲洗停留在筛面上的筛出物， 以免在上层粗筛面的剩留物中夹藏有
根真菌孢子。
5. 用洗瓶将停留在筛面上的筛出物轻轻冲洗到一个清洁的培养皿里面，再将滤液通过细筛 并用水冲
洗。在冲下来的筛出物中，除有许多细的沙砾和杂质外，就含有 VA 菌根真菌的不 同直径的孢子。
6. 将含有筛出物的培养皿放在双目实体解剖显微镜下观察。
VA 菌
B
蔗糖离心法
1. 称取 10 g 菌剂，置入大烧杯中加 500 ml 水，搅拌，静置 10 s。
2. 先后过 80目分样筛、 400目分样筛， 将400目筛子上的残余物用药匙转入 50ml 离心管 中，后
用清水冲洗筛子， 将残余物全部转入离心管中， 配平，3000转/min离心10 min。（注
分样筛最好直径为 12 cm 左右，便于下面放置烧杯过筛）
3. 去掉上清液，在离心管中加入预先配制好的质量分数为 50%的蔗糖溶液，玻璃棒搅匀，
。 配平，3000转/min离心10 min （注意离心前离心管壁上不能有残余物）
4. 将 400 目筛子呈一斜面放置，离心后的蔗糖溶液过筛子的下侧，用水将筛子上的残留物
轻轻洗入划线培养皿中。 （注意水不能加太多以防影响检测，培养皿划线便于统计）
5. 解剖镜镜检统计培养皿中的孢子数目，计算出菌剂中的孢子含量。
注：溶于蔗糖溶液中的孢子仍可进行接种。
A. Gerdema nn J W, Nicols on T H,1963. Spores of mycorrhizal en dog one species extracted from soil
。
by wet sieving and decanting. Transactions of the British Mycological Society, 46: 235-244
B刘润进，李晓林.2000.丛枝菌根及其应用•北京：科学出版社： 190-194
二、检测菌根侵染率的方法（曲利苯蓝染色改良法）
Phillips J M , Hayman D S, 1970. Improved procedures for clearing and staining parasitic and
vesicular-arbuscular mycorrhizal fungi for rapid assessment of infection. Transactions of the British
Mycological Society, 55: 158~161
挑根一碱液软化一酸化一染色一脱色一制片、镜检
1.
中。
2.
明为标准
）
。
3. 弃去碱液，用清水洗 3~5次（晾至室温后再冲洗），加入2%盐酸室温下酸化 5 min。
4. 加入0.05%曲利苯蓝于90
C
水浴锅中染色 30min。
5.
溶液后用自来水冲洗，加入乳酸甘油溶液
24h,（晾至室温后再冲洗，也可直接脱色） 。
去除曲利苯蓝后，弃去
（1:1:1 ）室温下脱色
加入10% KOH在90
C
的水浴锅中染色 45~60 min
将洗净的粗细合适的根系剪成 1 cm左右的根段至于三角瓶
（去除细胞质，便于染色。一般幼根 需要时间较短约0.5 h，老根需要时间长约 1 h,以根系相对透
6. 用镊子夹取15条排列在载玻片上，每个样 30条2个片，显微镜镜检（10X10）。
说明：常规制片用水即可，或封固剂（聚乙烯醇1.66g，甘油1 ml，乳酸20ml，蒸馏水10ml） 制片片
子可以保存较长时间， 但容易产生气泡，经脱色后的植物根系可以在甘油中保存数月。
三、统计方法
Estimati on of mycorrhizal coloni zati on accord ing to
丛枝菌根真菌侵染性的评估方法(Trourelot等，1986)
* Trouvelot A, Kough JL & Gia nin azzi-Pearson V (1986) Mesure du taux de
mycorhization VA d
'
un syst eradiculaire. Recherche de m
e
thodes d
'
estimation ayant une
Trouvelot et al
2024年5月23日发(作者：南萍韵)
丛枝菌根研究方法
一、检测孢子含量的方法
A
湿筛倾注法
1. 称取一定重量的土壤样品（最好是取自 15cm 表层植物根系附近的土壤） ，放在容器内用 水浸泡
20-30min ，使土壤松散。如果土壤粘性很大，也可加入各种土壤分散剂。
2. 选用一套洁净的具有孔径为 0.5-0.034mm 的土壤筛，依次重叠起来。最底层用一物体垫 着（如培
养皿、木块等物） ，使筛面稍微倾斜。
3. 用玻璃棒搅动浸泡的水溶液，停置几秒钟后，使大的石砾和杂物沉淀下去，即将悬浮的 土壤溶液慢
慢地倒在最上一层孔径最大的土壤筛上。 倾倒时，最好集中倒在筛面的一个点上， 不要使整个筛面都
沾有土壤溶液。
4. 用清水依次轻轻冲洗停留在筛面上的筛出物， 以免在上层粗筛面的剩留物中夹藏有
根真菌孢子。
5. 用洗瓶将停留在筛面上的筛出物轻轻冲洗到一个清洁的培养皿里面，再将滤液通过细筛 并用水冲
洗。在冲下来的筛出物中，除有许多细的沙砾和杂质外，就含有 VA 菌根真菌的不 同直径的孢子。
6. 将含有筛出物的培养皿放在双目实体解剖显微镜下观察。
VA 菌
B
蔗糖离心法
1. 称取 10 g 菌剂，置入大烧杯中加 500 ml 水，搅拌，静置 10 s。
2. 先后过 80目分样筛、 400目分样筛， 将400目筛子上的残余物用药匙转入 50ml 离心管 中，后
用清水冲洗筛子， 将残余物全部转入离心管中， 配平，3000转/min离心10 min。（注
分样筛最好直径为 12 cm 左右，便于下面放置烧杯过筛）
3. 去掉上清液，在离心管中加入预先配制好的质量分数为 50%的蔗糖溶液，玻璃棒搅匀，
。 配平，3000转/min离心10 min （注意离心前离心管壁上不能有残余物）
4. 将 400 目筛子呈一斜面放置，离心后的蔗糖溶液过筛子的下侧，用水将筛子上的残留物
轻轻洗入划线培养皿中。 （注意水不能加太多以防影响检测，培养皿划线便于统计）
5. 解剖镜镜检统计培养皿中的孢子数目，计算出菌剂中的孢子含量。
注：溶于蔗糖溶液中的孢子仍可进行接种。
A. Gerdema nn J W, Nicols on T H,1963. Spores of mycorrhizal en dog one species extracted from soil
。
by wet sieving and decanting. Transactions of the British Mycological Society, 46: 235-244
B刘润进，李晓林.2000.丛枝菌根及其应用•北京：科学出版社： 190-194
二、检测菌根侵染率的方法（曲利苯蓝染色改良法）
Phillips J M , Hayman D S, 1970. Improved procedures for clearing and staining parasitic and
vesicular-arbuscular mycorrhizal fungi for rapid assessment of infection. Transactions of the British
Mycological Society, 55: 158~161
挑根一碱液软化一酸化一染色一脱色一制片、镜检
1.
中。
2.
明为标准
）
。
3. 弃去碱液，用清水洗 3~5次（晾至室温后再冲洗），加入2%盐酸室温下酸化 5 min。
4. 加入0.05%曲利苯蓝于90
C
水浴锅中染色 30min。
5.
溶液后用自来水冲洗，加入乳酸甘油溶液
24h,（晾至室温后再冲洗，也可直接脱色） 。
去除曲利苯蓝后，弃去
（1:1:1 ）室温下脱色
加入10% KOH在90
C
的水浴锅中染色 45~60 min
将洗净的粗细合适的根系剪成 1 cm左右的根段至于三角瓶
（去除细胞质，便于染色。一般幼根 需要时间较短约0.5 h，老根需要时间长约 1 h,以根系相对透
6. 用镊子夹取15条排列在载玻片上，每个样 30条2个片，显微镜镜检（10X10）。
说明：常规制片用水即可，或封固剂（聚乙烯醇1.66g，甘油1 ml，乳酸20ml，蒸馏水10ml） 制片片
子可以保存较长时间， 但容易产生气泡，经脱色后的植物根系可以在甘油中保存数月。
三、统计方法
Estimati on of mycorrhizal coloni zati on accord ing to
丛枝菌根真菌侵染性的评估方法(Trourelot等，1986)
* Trouvelot A, Kough JL & Gia nin azzi-Pearson V (1986) Mesure du taux de
mycorhization VA d
'
un syst eradiculaire. Recherche de m
e
thodes d
'
estimation ayant une
Trouvelot et al