2024年5月24日发(作者：石双)
ABI7500荧光定量PCR仪标准操作规程
1. 目的
为规范使用人正确和正常的使用ABI 7500型核酸扩增荧光定量检测仪，保证扩增及结果分
析的标准化、规范化，特制定本规程。
2. 适用范围
适用于本公司ABI7500荧光定量PCR仪的操作。
3. 职责
3.1 使用人员负责本规程的实施。
3.2 设备使用人负责设备维护保养工作；设备责任人负责设备的定期维护保养工作。
3.3 质量监督员负责监督本规程的实施。
4. 内容
4.1 程序设置
4.1.1 打开电脑及仪器电源，待仪器电源项显示power绿色状态。
4.1.2 双击电脑桌面上的7500 software V2.3 图标打开程序，打开程序单击OK，待软件连接仪
器并测试校准状态后（若有出现连接失败可尝试重启电脑，检查USB线接口），出现如下界面，
单击Design Wizard选项，红色箭头指示位置有个下拉菜单，如下图所示。
下拉菜单中有一个Advanced Setup（高级设置）选项，如箭头所示：
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ABI7500荧光定量PCR仪标准操作规程
点击这个选项，可以进入下面这个界面，
①
②
③
如上图所示，红色箭头从上到下指示的分别是①实验名称、②仪器型号和③反应程序类型。
（带*号 的必需填）
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ABI7500荧光定量PCR仪标准操作规程
①
②
③
此图是上面图的延续（自己电脑显示不完全），红色箭头从上到下指示的分别是①Plate
Setup选项、②探针类型和③程序应用速度类型，一般使用的探针就是TaqMan探针，速度类
型选择默认就可以了（如果是7500fast的话则有快速模式可以选择）。下一步我们可以看到左
上角的红色箭头指示的一个Plate Setup选项，点击这个选项，就可以进入下一个设置界面。
① ②
③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧ ⑨ ⑩
红色箭头①和②指的是设定反应探针和反应样品名称，箭头③处可以填写反应探针名称
（如P1,HBV,HCV）。箭头⑤是选择报告荧光，一般使用的发光基团是FAM，箭头⑥是选择粹
灭荧光，达安现在使用的是TAMRA荧光，科华现在使用的是BHQ，在这个仪器中无此选择
项，那么就选择none。箭头⑧处可以填写样品名称。点击箭头④和箭头⑨处可以添加反应探
针体系名称和样品名称。箭头⑦和箭头⑩是选择对应探针体系和对应样品的曲线颜色，可选择
也可以不选。（另：探针跟样品设定后可保存，方便以后实验调用，具体是点击箭头①②下面
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的Saved Taeget，下次调用则点击 Add Saved就可调出。）
为了方便讲解，我假定有1个反应探针DAAN和1个样本HBV1，如上图所示。设定完
成之后，我们点击红色箭头所指的选项，进入下个界面。
在上图，我们可以看到一个类似反应板的界面，黑色箭头①指示的有玫瑰红色下划线那一
排在选定反应孔后会显示出样本孔总数，标准品总数和阴性对照总数。从黑色箭头②可以看出
暂时还有48个反应孔空余。蓝色箭头①和②分别是放大这个孔板界面的按钮，蓝色箭头③是
显示大小还原默认设置按钮。
开始设置时，首先我们如红色箭头①所示选定A1孔，红色箭头②指示的是反应探针名称，
红色箭头③指示的样品类型，选定反应体系后可以在U——未知样本，S——标准样本，N——
阴性样本中选择一个。红色箭头⑤是个下拉菜单可以选择反应探针，在红色箭头④指示的框里
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单击鼠标，显示打钩就说明选定了反应体系。红色箭头⑥指示的是样品名称，红色箭头⑧是个
下拉菜单可以选择样品名称。在红色箭头⑦指示的框里单击鼠标，显示打钩就说明选定了样品
名称。红色箭头⑨指示的参比荧光，仪器默认是ROX，但是产品一般没有添加ROX荧光，所
以必须选择None。红色箭头⑩指示的定量标准品的设置，可根据标准曲线的值从4567升序或
是从7654降序的排列，单击可弹出以下界面，具体如下。
①
②
③
④
⑤
上图中，红色箭头①表示标准品的数量，②表示标准品是否走重复孔，③表示起始的浓度，
④表示10×的话则为升序，按照4567的浓度；1:10的话则为降序，按照7654的浓度。
例如：做了4个标准品，每个标准品做1个（即没有做复孔），起始浓度为10000，选择
10×，选择箭头⑤的自己选择孔位，点击左下角的Apply，则在第10排按照4567次方的顺序
排列。
此外也可以选择鼠标双击类似反应孔板的那个界面，会出现下面这个界面：
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⑤
② ①
③
④
如上图所示，选定反应孔双击后会出现这样一个界面，红色箭头①指示的Task—样品反
应类型，红色箭头②是指示的是Target—反应探针，红色箭头③指示的是Sample—样品名称。
这三个都是下拉菜单，可以选择前面设置好的反应体系和 样品名称。红色箭头④是个文本框，
可以备注样本的详细信息。按照样本放置的实际情况设置好之后，可以点击红色箭头⑤指示的
Run Method选项进入下个界面。
①
⑦
②③ ④
⑤⑥
上图的箭头①是设定反应体系体积的，箭头②是添加反应程序阶段的，箭头③是添加反应
程序步骤的，箭头⑤和⑥是制订收集荧光信号的标志，例如箭头⑥所示高亮显示时表示在此步
骤收集荧光信号。（切记，收集荧光只能1个地方，若是出现2个收集荧光信号的，则软件上
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会有出现蓝色的错误提示）
设定好循环条件，就可以进行模板保存，以便下次实验时调用程序，点击位于软件中间最
右方的键（注：这个键是由于本人电脑不是宽屏的（14寸acer。。。），如果是AB配的E6500
电脑则可以在软件上全部显示，不会出现键或是那些滑动条，但是。。字体会小点，，），
选择保存运行的模板，命名。下次实验使用的时候就不用再在设条件，直接点击open run
method，调出你所需要做的实验的扩增条件。
还有上图左方的reaction setup（反应体系设置）和materials list（耗材清单）不需要我们
去设置。
点击箭头⑦所指的run进入运行界面。
①
②
③
④
⑤
直接点击上图中的绿色START按钮，根据提示保存实验文件后开始实验，实验开始后在
绿色START按钮右方可出现实验的预计剩余时间。
箭头②表示的是实时的曲线图谱，③表示的是实时的温度曲线图谱，④表示的是实验的条
件。实验结束后按箭头⑤所指的分析，出现以下界面。
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⑧
①
②
③
④
⑤
⑥
⑦
做完实验后，曲线会出现在上图，以对数图谱的形式出现，若想换为线性图谱，可点击箭
头①所指示的去选择log或linear，其次，再点击箭头⑧的分析按钮（有实验数据的话会出现
的是analysis），样本的结果跟CT会在右边的96孔面板中出现，上面的显示不完全，曲线的
基线baseline跟阈值threshold设置是在上图数字⑦下面的那个地方（不是箭头⑦所指的地方），
进行设置。
箭头③表示的是实验标准曲线的参数。
箭头④⑤表示的是每个孔的原始光谱图。
箭头⑥表示的是一些附加的报警信息，例如重复孔偏差了，荧光偏差了，质控失控了。
箭头⑦表示的是上面4中图谱的集合，可自己选择组合查看。
4.1.3 实验结束后填写《设备使用记录》
4.2 结果分析
4.2.1 在analysis setup里面修改各个探针的baseline与threshold数值，点击绿色analyze图标，
软件及完成自动分析。
4.2.2 在amplification plot界面查看所有样品的扩增曲线。
4.2.3 整体曲线的观察,将所有曲线选中进行整体观察。
4.2.3.1 观察是否存在污染情况（包括标本污染和试剂污染），特别应注意大量曲线在同一 Ct
值出现上涨的情况。
4.2.3.2 观察是否有光路传导阻滞或电压波动等机器原因形成的异常曲线。
4.2.4 对照、质控品、标准品的分析
4.2.4.1 阴性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阴性标本。
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作用：用以监测实验室和前处理过程中是否存在污染。
4.2.4.2 阳性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阳性标本。
作用：用以监测实验能否正常检出阳性标本，避免假阴性的出现。
4.2.4.3 阳性室内质控品的分析：阳性室内质控品：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已
知或未知浓度的阳性室内质控血清。
作用：用以监控日常实验的精密度。
4.2.4.4 阳性标准品的分析：各梯度曲线的分布是否均匀，若各梯度曲线均未分开，则表明阳
性标准品稀释可能存在问题，提示实验中存在较大人为误差。
4.2.4.5 观察各曲线的 Ct 值是否在平日的正常位置：
若出现低拷贝标准品做不出，而各曲线 Ct 值均后移，则判断是否为试剂扩增效率下降（如
试剂过期或保存条件不合格）。
出现低拷贝标准品做不出，而高拷贝曲线 Ct 值均正常，则提示可能存在低拷贝阳性标准
品的降解情况。
若高拷贝标准品出现 Ct 值后移，且能排除上述情况，则判断是否为试剂灵敏度下降。
得出定量结果：调节基线和阈值以得到一较好的标准曲线。电脑据此曲线给出实验结果值。
4.3 仪器维护
4.3.1 注意开机关机顺序，机器开机后即可使用，无需预热。
4.3.2 电脑上使用专用U盘等移动存储设备，建议使用光盘刻录来转移数据。
4.3.3 针对电脑硬盘，进行周期性碎片整理，并将试验数据备份到其他存储设备上（比如光盘）
4.3.4 仪器表面与电脑表面应每月用软布擦拭（无需用水，禁用有机溶剂，会溶解机器表面的
漆层）。
4.3.5 灯泡更换：在灯泡使用达到寿命后（2000小时），或者意外损坏后需要更换。机器关闭
电脑30分钟后，打开前面上半册面板，取出旧灯泡，在操作过程中需要戴无尘手套操作，注
意灯泡高温。然后将新灯泡，用气吹吹掉表面的灰尘，安装灯泡。
4.3.6 样品孔清洁：样品孔污染后会影响PCR扩增的信号，是的该孔信号高于其他孔，造成假
阳性的结果，需要每月执行background校正，针对信号值超过72000的孔，使用棉签与去离
子水进行清洁。清洁时关闭机器电源，打开前面上半面板，将热盖板（黑色面板）推到后面，
清洁相应的孔，然后恢复原状，重新执行background校正，直到所有的信号值均低于72000。
4.3.7 按照仪器出厂说明书每6个月对仪器进行纯荧光校正和ROI校正。
4.3.8 仪器在搬运后需要进行背景校正、纯荧光校正和ROI校正，所有校正通过后才能进行实
验。
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4.4 维修
如出现故障，按照《设备管理制度》实施。
5. 支持文件
5.1 《设备管理制度》
6. 相关记录
6.1 《设备使用记录》
6.2 《设备维护保养计划清单》
7. 文件修改记录
序号 修改条款
1
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3
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5
修改方式
（补充或删减）
修改原因
修改前内容
修改人/日期 批准人/日期
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1. 目的
为规范使用人正确和正常的使用ABI 7500型核酸扩增荧光定量检测仪，保证扩增及结果分
析的标准化、规范化，特制定本规程。
2. 适用范围
适用于本公司ABI7500荧光定量PCR仪的操作。
3. 职责
3.1 使用人员负责本规程的实施。
3.2 设备使用人负责设备维护保养工作；设备责任人负责设备的定期维护保养工作。
3.3 质量监督员负责监督本规程的实施。
4. 内容
4.1 程序设置
4.1.1 打开电脑及仪器电源，待仪器电源项显示power绿色状态。
4.1.2 双击电脑桌面上的7500 software V2.3 图标打开程序，打开程序单击OK，待软件连接仪
器并测试校准状态后（若有出现连接失败可尝试重启电脑，检查USB线接口），出现如下界面，
单击Design Wizard选项，红色箭头指示位置有个下拉菜单，如下图所示。
下拉菜单中有一个Advanced Setup（高级设置）选项，如箭头所示：
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点击这个选项，可以进入下面这个界面，
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如上图所示，红色箭头从上到下指示的分别是①实验名称、②仪器型号和③反应程序类型。
（带*号 的必需填）
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①
②
③
此图是上面图的延续（自己电脑显示不完全），红色箭头从上到下指示的分别是①Plate
Setup选项、②探针类型和③程序应用速度类型，一般使用的探针就是TaqMan探针，速度类
型选择默认就可以了（如果是7500fast的话则有快速模式可以选择）。下一步我们可以看到左
上角的红色箭头指示的一个Plate Setup选项，点击这个选项，就可以进入下一个设置界面。
① ②
③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧ ⑨ ⑩
红色箭头①和②指的是设定反应探针和反应样品名称，箭头③处可以填写反应探针名称
（如P1,HBV,HCV）。箭头⑤是选择报告荧光，一般使用的发光基团是FAM，箭头⑥是选择粹
灭荧光，达安现在使用的是TAMRA荧光，科华现在使用的是BHQ，在这个仪器中无此选择
项，那么就选择none。箭头⑧处可以填写样品名称。点击箭头④和箭头⑨处可以添加反应探
针体系名称和样品名称。箭头⑦和箭头⑩是选择对应探针体系和对应样品的曲线颜色，可选择
也可以不选。（另：探针跟样品设定后可保存，方便以后实验调用，具体是点击箭头①②下面
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的Saved Taeget，下次调用则点击 Add Saved就可调出。）
为了方便讲解，我假定有1个反应探针DAAN和1个样本HBV1，如上图所示。设定完
成之后，我们点击红色箭头所指的选项，进入下个界面。
在上图，我们可以看到一个类似反应板的界面，黑色箭头①指示的有玫瑰红色下划线那一
排在选定反应孔后会显示出样本孔总数，标准品总数和阴性对照总数。从黑色箭头②可以看出
暂时还有48个反应孔空余。蓝色箭头①和②分别是放大这个孔板界面的按钮，蓝色箭头③是
显示大小还原默认设置按钮。
开始设置时，首先我们如红色箭头①所示选定A1孔，红色箭头②指示的是反应探针名称，
红色箭头③指示的样品类型，选定反应体系后可以在U——未知样本，S——标准样本，N——
阴性样本中选择一个。红色箭头⑤是个下拉菜单可以选择反应探针，在红色箭头④指示的框里
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单击鼠标，显示打钩就说明选定了反应体系。红色箭头⑥指示的是样品名称，红色箭头⑧是个
下拉菜单可以选择样品名称。在红色箭头⑦指示的框里单击鼠标，显示打钩就说明选定了样品
名称。红色箭头⑨指示的参比荧光，仪器默认是ROX，但是产品一般没有添加ROX荧光，所
以必须选择None。红色箭头⑩指示的定量标准品的设置，可根据标准曲线的值从4567升序或
是从7654降序的排列，单击可弹出以下界面，具体如下。
①
②
③
④
⑤
上图中，红色箭头①表示标准品的数量，②表示标准品是否走重复孔，③表示起始的浓度，
④表示10×的话则为升序，按照4567的浓度；1:10的话则为降序，按照7654的浓度。
例如：做了4个标准品，每个标准品做1个（即没有做复孔），起始浓度为10000，选择
10×，选择箭头⑤的自己选择孔位，点击左下角的Apply，则在第10排按照4567次方的顺序
排列。
此外也可以选择鼠标双击类似反应孔板的那个界面，会出现下面这个界面：
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⑤
② ①
③
④
如上图所示，选定反应孔双击后会出现这样一个界面，红色箭头①指示的Task—样品反
应类型，红色箭头②是指示的是Target—反应探针，红色箭头③指示的是Sample—样品名称。
这三个都是下拉菜单，可以选择前面设置好的反应体系和 样品名称。红色箭头④是个文本框，
可以备注样本的详细信息。按照样本放置的实际情况设置好之后，可以点击红色箭头⑤指示的
Run Method选项进入下个界面。
①
⑦
②③ ④
⑤⑥
上图的箭头①是设定反应体系体积的，箭头②是添加反应程序阶段的，箭头③是添加反应
程序步骤的，箭头⑤和⑥是制订收集荧光信号的标志，例如箭头⑥所示高亮显示时表示在此步
骤收集荧光信号。（切记，收集荧光只能1个地方，若是出现2个收集荧光信号的，则软件上
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会有出现蓝色的错误提示）
设定好循环条件，就可以进行模板保存，以便下次实验时调用程序，点击位于软件中间最
右方的键（注：这个键是由于本人电脑不是宽屏的（14寸acer。。。），如果是AB配的E6500
电脑则可以在软件上全部显示，不会出现键或是那些滑动条，但是。。字体会小点，，），
选择保存运行的模板，命名。下次实验使用的时候就不用再在设条件，直接点击open run
method，调出你所需要做的实验的扩增条件。
还有上图左方的reaction setup（反应体系设置）和materials list（耗材清单）不需要我们
去设置。
点击箭头⑦所指的run进入运行界面。
①
②
③
④
⑤
直接点击上图中的绿色START按钮，根据提示保存实验文件后开始实验，实验开始后在
绿色START按钮右方可出现实验的预计剩余时间。
箭头②表示的是实时的曲线图谱，③表示的是实时的温度曲线图谱，④表示的是实验的条
件。实验结束后按箭头⑤所指的分析，出现以下界面。
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①
②
③
④
⑤
⑥
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做完实验后，曲线会出现在上图，以对数图谱的形式出现，若想换为线性图谱，可点击箭
头①所指示的去选择log或linear，其次，再点击箭头⑧的分析按钮（有实验数据的话会出现
的是analysis），样本的结果跟CT会在右边的96孔面板中出现，上面的显示不完全，曲线的
基线baseline跟阈值threshold设置是在上图数字⑦下面的那个地方（不是箭头⑦所指的地方），
进行设置。
箭头③表示的是实验标准曲线的参数。
箭头④⑤表示的是每个孔的原始光谱图。
箭头⑥表示的是一些附加的报警信息，例如重复孔偏差了，荧光偏差了，质控失控了。
箭头⑦表示的是上面4中图谱的集合，可自己选择组合查看。
4.1.3 实验结束后填写《设备使用记录》
4.2 结果分析
4.2.1 在analysis setup里面修改各个探针的baseline与threshold数值，点击绿色analyze图标，
软件及完成自动分析。
4.2.2 在amplification plot界面查看所有样品的扩增曲线。
4.2.3 整体曲线的观察,将所有曲线选中进行整体观察。
4.2.3.1 观察是否存在污染情况（包括标本污染和试剂污染），特别应注意大量曲线在同一 Ct
值出现上涨的情况。
4.2.3.2 观察是否有光路传导阻滞或电压波动等机器原因形成的异常曲线。
4.2.4 对照、质控品、标准品的分析
4.2.4.1 阴性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阴性标本。
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作用：用以监测实验室和前处理过程中是否存在污染。
4.2.4.2 阳性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阳性标本。
作用：用以监测实验能否正常检出阳性标本，避免假阴性的出现。
4.2.4.3 阳性室内质控品的分析：阳性室内质控品：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已
知或未知浓度的阳性室内质控血清。
作用：用以监控日常实验的精密度。
4.2.4.4 阳性标准品的分析：各梯度曲线的分布是否均匀，若各梯度曲线均未分开，则表明阳
性标准品稀释可能存在问题，提示实验中存在较大人为误差。
4.2.4.5 观察各曲线的 Ct 值是否在平日的正常位置：
若出现低拷贝标准品做不出，而各曲线 Ct 值均后移，则判断是否为试剂扩增效率下降（如
试剂过期或保存条件不合格）。
出现低拷贝标准品做不出，而高拷贝曲线 Ct 值均正常，则提示可能存在低拷贝阳性标准
品的降解情况。
若高拷贝标准品出现 Ct 值后移，且能排除上述情况，则判断是否为试剂灵敏度下降。
得出定量结果：调节基线和阈值以得到一较好的标准曲线。电脑据此曲线给出实验结果值。
4.3 仪器维护
4.3.1 注意开机关机顺序，机器开机后即可使用，无需预热。
4.3.2 电脑上使用专用U盘等移动存储设备，建议使用光盘刻录来转移数据。
4.3.3 针对电脑硬盘，进行周期性碎片整理，并将试验数据备份到其他存储设备上（比如光盘）
4.3.4 仪器表面与电脑表面应每月用软布擦拭（无需用水，禁用有机溶剂，会溶解机器表面的
漆层）。
4.3.5 灯泡更换：在灯泡使用达到寿命后（2000小时），或者意外损坏后需要更换。机器关闭
电脑30分钟后，打开前面上半册面板，取出旧灯泡，在操作过程中需要戴无尘手套操作，注
意灯泡高温。然后将新灯泡，用气吹吹掉表面的灰尘，安装灯泡。
4.3.6 样品孔清洁：样品孔污染后会影响PCR扩增的信号，是的该孔信号高于其他孔，造成假
阳性的结果，需要每月执行background校正，针对信号值超过72000的孔，使用棉签与去离
子水进行清洁。清洁时关闭机器电源，打开前面上半面板，将热盖板（黑色面板）推到后面，
清洁相应的孔，然后恢复原状，重新执行background校正，直到所有的信号值均低于72000。
4.3.7 按照仪器出厂说明书每6个月对仪器进行纯荧光校正和ROI校正。
4.3.8 仪器在搬运后需要进行背景校正、纯荧光校正和ROI校正，所有校正通过后才能进行实
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4.4 维修
如出现故障，按照《设备管理制度》实施。
5. 支持文件
5.1 《设备管理制度》
6. 相关记录
6.1 《设备使用记录》
6.2 《设备维护保养计划清单》
7. 文件修改记录
序号 修改条款
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（补充或删减）
修改原因
修改前内容
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