2024年6月13日发(作者：邸曼吟)
药 物 生 物 技 术
210
PharmaceuticalBiotechnology
2001,8
(
4
)
:210
～
212
L
2精氨酸产生菌的选育及其发酵条件
王 霞
,
许正宏
,
敖宗华
,
孙志浩
,
陶文沂
(
无锡轻工大学生物制药研究室
,
无锡
214036
)
①
摘 要 以谷氨酸棒杆菌
(
Glutamicumcorynebacterium
)
JHA5
(
His
-
,SG
r
)
为出发菌株
,
经硫酸二乙酯
(
DES
)
和亚硝基胍
(
NTG
)
逐级诱变处理
,
获得一株精氨酸高产菌
JDN28
2
50
(
His
-
SG
r
D
2
Arg
r
L
2
HA
r
)
。在以
120g/L
葡萄
糖为碳源、
50g/L
硫酸铵为氮源的培养基中培养
4d,
产酸可达
30g/L
。
关键词
L
2精氨酸
;
诱变育种
;
谷氨酸棒杆菌
中图分类号
:TQ922
文献标识码
A
文章编号
:1005
2
8915
(
2001
)
04
2
0210
2
03
L
2精氨酸是一种具有胍基的人和动物的半必
需碱性氨基酸
,
也是生物体尿素循环中的一种重要
中间代谢物。
L
2精氨酸在医药工业上具有广泛的
用途
[1]
。它是复方氨基酸输液的主要成分之一
,
也被广泛用于氨中毒性肝昏迷的解毒剂和肝功能
的促进剂
,
对病毒性肝炎疗效显著
,
同时对肠道溃
疡、血栓形成、神经衰弱和男性无精等症状都有一
定的治疗效果
[1]
。采用传统的提取法生产
L
2精氨
酸远不能满足其日益增长的需要
,
因此国内外许多
学者致力于
L
2精氨酸生产菌的选育、工程菌的构
建以及生产工艺等方面的研究。国外采用发酵法
生产
L
2精氨酸较早
,
日本在这方面的研究处于领
先水平
,
他们对黄色棒杆菌进行诱变
,
突变株产酸
可达
40
～
50g/L
[2
～
5]
,
国内在这方面的研究主要是
80
年代
,
中科院微生物研究所以谷氨酸产生菌钝
1
1
2
培养基
1
1
2
1
1
琼脂完全培养基
(
%
)
葡萄糖
2
1
0,
牛肉
膏
1
1
0,
蛋白胨
1
1
0,
酵母膏
0
1
5,NaCl0
1
5,
琼脂
2
1
0,pH7
1
0
～
7
1
2
1
1
2
1
2
琼脂基础培养基
(
%
)
葡萄糖
1
1
0,
(
NH
4
)
2
SO
4
0
1
3,KH
2
PO
4
0
1
1,MgSO
4
・
7H
2
O0
1
05,
FeSO
4
・
7H
2
O0
1
002,MnSO
4
・
H
2
O0
1
002,
琼脂
μ
g/L,
硫胺
2
1
0,pH7
1
0
～
7
1
2
(
另外加入生物素
30
μ
g/L
)
素
200
1
1
2
1
3
摇瓶种子培养基
(
%
)
葡萄糖
3
1
0,
玉米
浆
2
1
0,
(
NH
4
)
SO
4
2
1
0,KH
2
PO
4
0
1
1,MgSO
4
0
1
05,
尿素
0
1
15
1
1
2
1
4
摇瓶发酵培养基
(
%
)
葡萄糖
12
1
0,
(
NH
4
)
2
SO
4
4
1
5,KH
2
PO
4
0
1
1,MgSO
4
0
1
05,CaCO
3
3
1
0,
玉米浆
2
1
5,pH7
1
0
～
7
1
2
齿棒杆菌为出发菌株
,
经
NTG
多次逐级诱变
,
获
得了一株能够积累大量精氨酸的菌株
971
1
1
。该
菌株培养
96h,
产酸达
34g/L
。但由于该菌株产
酸水平不稳定等原因
,
未能实现该品种生产的国产
化
[6
～
8]
。本文报道了以谷氨酸棒杆菌
(
Glutamicumcorynebacterium
)
JHA5
为出发菌的
诱变育种及高产突变株产酸条件的初步研究结果。
1
材料和方法
1
1
1
菌株
如无特别说明
,
所有摇瓶培养条件均为
30
℃、
往复式摇床上
96r/min,96h
。
1
1
3
主要试剂
硫酸二乙酯
(
DES
)
:
上海试剂厂生产
;
亚硝基
胍
(
NTG
)
:
瑞士
Fluka
公司产品
;D
2
Arginine
、
L
2
Homoarginine:Sigma
公司产品。
1
1
4
DES
和
NTG
诱变方法
取试管斜面培养物一环
,
接入装有
30ml
种子
培养基的
250ml
三角瓶中于往复式摇床上
,96r/
min,30
℃培养
14h
后离心收集菌体
,
无菌生理盐
谷氨酸棒杆菌
(
Glutamicumcorynebacterium
JHA5
)(
His
-
,SG
r
)
水洗涤
3
次
,
用
0
1
1mol/LpH7
1
0
磷酸盐缓冲液调
整菌浓度达
1
×
10
9
个
/ml
。加入
DES
至终浓度为
①
收稿日期
:2000
2
10
2
10
作者简介
:
王霞
(
1974
年生
)
,
女
,
山东省泰安人
,
无锡轻工大学硕士
,
主要从事生物制药研究
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.
王 霞等
:
L
2精氨酸产生菌的选育及其发酵条件
211
1%,30
℃处理
30min
。
NTG
诱变的基本步骤同
DES
诱变
,NTG
浓
Tab1
ThegeneticstabilityofmutantJDN28
2
50
Generation
Productivity
(
g/L
)
1
26
1
5
2
27
1
4
3
27
1
5
4
25
1
7
5
26
1
3
度为
0
1
5mg/ml,
磷酸缓冲液为
0
1
1mol/LpH
6
1
0
。
1
1
5
药物抗性株的检出方法
将上述经诱变处理过的菌液涂布含有一定浓
度药物的基本培养基平板后
,
置于
30
℃培养
3
～
5d,
挑选长出的大菌落
,
即为药物抗性变异株。
1
1
6
分析方法
1
1
6
1
1
菌体生长测定
吸
0
1
2ml
菌液
,
加入
0
1
25mol/LHCl5ml
摇
匀以蒸馏水作空白于
562nm
处测
OD
值。
1
1
6
1
2
L
2精氨酸测定
[9,10]
纸层析法、比色定量
法
2
结果与讨论
2
1
1
L
2精氨酸产生菌
JDN28
2
50
的选育
以
JHA5
(
His
-
,SG
r
)
为出发菌株
,
经
DES
诱变
由上表可见
,
该突变株的遗传稳定性较好
,
连
续传代
5
代
,
其产酸未见明显变化。
2
1
2
碳源对
JDN28
2
50
产酸的影响
碳源是构成菌体和合成精氨酸碳架及能量的
来源
,
不同的菌种对碳源的利用情况不同。分别考
察不同碳源对
JDN28
2
50
产精氨酸的影响
,
结果表
明
:
该菌株在以葡萄糖、蔗糖为碳源时
,
精氨酸的产
量较高。进一步考察葡萄糖浓度对其精氨酸产量
的影响
,
当葡萄糖浓度由
6%
增加到
12%
时产酸量
显著增加
,12%
到
15%
产酸量趋于平缓。
2
1
3
硫酸铵浓度对精氨酸产量的影响
由于发酵产物精氨酸分子中氮元素的含量高
达
32
1
15%,
所以发酵培养基中必须含有较高比例
的氮源以满足菌体生长及精氨酸合成的需要。考
察硫酸铵浓度对产酸的影响
,
结果如图
1
所示
:
以及
D
2
Arg
平板筛选
,
共获得
D
2
Arg
r
变异株
190
株
,
经摇瓶筛选
,
获得两株精氨酸产量较高的菌
,
分
别命名为
JD190
2
5
和
JD190
2
28,
其
L
2精氨酸产量
分别为
9
1
8g/L
和
9
1
4g/L,
比出发菌株增长近
1
倍。
分别对
JD190
2
5
和
JD190
2
28
进行
NTG
诱变
,
并结合
L
2
HA
抗性平板筛选
,
最终获得一株
L
2
HA
r
变异株
JDN28
2
50,
其
L
2精氨酸的产量达
25
1
4
g/L
。具体选育谱系如下图
:
Fig1
Effectofconcentrationof
(
NH4
)
2
SO
4
onproduction
of
L
2
arginine
L
2精氨酸的生物合成受其自身的反馈抑制和
反馈阻遏
,
选育结构类似物抗性变异株以解除
L
2
精氨酸自身的反馈调节使
L
2精氨酸得以积累。根
据这一基本原理
,
我们采用选育
L
2精氨酸结构类
似物
D
2
Arg
、
L
2
HA
抗性变异株的方法
,
获得了能
够积累大量
L
2精氨酸的变异株菌
JDN28
2
50,
其产
量有了大幅度提高。
将变异株
JDN
2
28
2
50
在新鲜斜面上连续传代
5
代
,
考察它们的产酸情况
,
结果如表
1
。
由图
2
知随着硫酸铵浓度的增加精氨酸产量
显著增加
,
但当硫酸铵浓度超过
5%
时产酸又显著
下降。
2
1
4
玉米浆对
L
2精氨酸产量的影响
玉米浆中富含
B
族维生素、生物素、嘌呤、嘧
啶等微量有机物质
,
这些物质对前期菌体生长和中
后期产酸都是很重要的
,
考察玉米浆浓度对产酸的
影响如图
2
所示。随着玉米浆浓度的增加产酸增
加
,
玉米浆浓度为
2
1
5%
时
,
产酸最高达
33g/L,
进
一步增加玉米浆浓度
,
其产酸量反而降低。
2
1
5
碳酸钙浓度对
L
2精氨酸产量的影响
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.
212
药物生物技术第
8
卷第
4
期
由图
3
知随
CaCO
3
用量的增加产酸量增加
,
当达到
30g/L
时产酸量最大
,
由
30g/L
增加到
50
g/L
时产酸有下降趋势。
参考文献
[1]
BarbulA
1精氨酸
:
生物化学、生理学及治疗学意义
[J]
1氨基
酸杂志
,1987,2:39.
[2]
YoshidaH,ArakiK,NakayamaK
1
Mechanismof
L
2
Arginine
Production
(
1
)
:105.
[3]
YoshidaH,ArakiK,NakayamaK
1
L
2
ArginineProductionby
ArginineAnalog
2
resistantMutantsofMicroorganisms[J]
1
AgricBiolChem
,1981,45
(
4
)
:959.
by
L
2
Arginine
2
producingMutantsof
Corynebacteriumglutarmixum[J]
1
AgricBiolChem
,1979,43
Fig2
Effectofconcentrationofcornsteepliquoron
productionof
L
2
arginine
发酵液中硫酸铵的消耗会引起发酵液生理酸
性
,
对产酸不利
,
必须用碳酸钙中和
,
以维持发酵过
程中的一定的
pH
值。考察发酵液中碳酸钙的用
量对精氨酸产量的影响
,
结果如图
3
所示
:
[4]
TakayasuT,Ajinomoto
1
ProcessforProducing
L
2
arginineby
fermentatiion[P]
1
EuropeanPatent
,0
2
378223A1.
[5]
AzumaT,AoyaglS,ToshigideA
1
Processforproducing
L
2
arginine[J]
1
AgricBiolChem,
1972,36:1675.
[6]
路志强
,
龚建华
,
丁久元1
L
2精氨酸产生菌诱变育种的研究
[J]
1微生物学报
,1988,28
(
2
)
:131
1
[7]
龚建华
,
丁久元
,
路志强1
L
2精氨酸发酵条件的研究
[J]
1微
生物学报
,1988,28
(
3
)
:257.
[8]
龚建华
,
丁久元
,
陈琦1发酵法生产
L
2精氨酸放大过程的工
艺研究
[J]
1微生物学报
,1991,31
(
6
)
:460.
[9]
蒙绮芳
,
赖碧清
,
周锡梁1精氨酸测定方法的研究
[J]
1氨基
酸和生物资源
,1998,20
(
3
)
:1.
[10]
北京师范大学生物系生化教研室主编1基础生物化学实验
[M]
1北京
:
高等教育出版社
,1982.
Fig3
EffectofconcentrationofCaCO
3
ontheproduction
of
L
2
arginine
TheBreedingof
L
2
ArginineHyper
2
producingMutant
WANGXia,XUZheng
2
hong,AOZhong
2
hua,SUNZhi
2
hao,TAOWen
2
yi
(
Schoolofbiotechnology,WuxiUniversityofLightIndustry,Wuxi
214036
)
Abstract
A
L
2
argininehyper
2
producingmutantJDN28
2
50
(
His
2
SG
r
D
2
Arg
r
L
2
HA
r
)
wasobtainedbythe
combinationtreatmentwithdiethylsulfate
(
DES
)
andN
2
methyl
2
N,
2
nitroso
2
guanidine
(
NTG
)
1
Whenitwas
culturedat30
℃
for96h,itcouldaccumulate25
2
30g/L
L
2
arginineinthemediumcontaining120g/Lglucose
and50g/L
(
NH
4
)
2
SO
4
1
Keywords
L
2
arginine,breeding,
Glutamicumcorynebacterium
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.
2024年6月13日发(作者：邸曼吟)
药 物 生 物 技 术
210
PharmaceuticalBiotechnology
2001,8
(
4
)
:210
～
212
L
2精氨酸产生菌的选育及其发酵条件
王 霞
,
许正宏
,
敖宗华
,
孙志浩
,
陶文沂
(
无锡轻工大学生物制药研究室
,
无锡
214036
)
①
摘 要 以谷氨酸棒杆菌
(
Glutamicumcorynebacterium
)
JHA5
(
His
-
,SG
r
)
为出发菌株
,
经硫酸二乙酯
(
DES
)
和亚硝基胍
(
NTG
)
逐级诱变处理
,
获得一株精氨酸高产菌
JDN28
2
50
(
His
-
SG
r
D
2
Arg
r
L
2
HA
r
)
。在以
120g/L
葡萄
糖为碳源、
50g/L
硫酸铵为氮源的培养基中培养
4d,
产酸可达
30g/L
。
关键词
L
2精氨酸
;
诱变育种
;
谷氨酸棒杆菌
中图分类号
:TQ922
文献标识码
A
文章编号
:1005
2
8915
(
2001
)
04
2
0210
2
03
L
2精氨酸是一种具有胍基的人和动物的半必
需碱性氨基酸
,
也是生物体尿素循环中的一种重要
中间代谢物。
L
2精氨酸在医药工业上具有广泛的
用途
[1]
。它是复方氨基酸输液的主要成分之一
,
也被广泛用于氨中毒性肝昏迷的解毒剂和肝功能
的促进剂
,
对病毒性肝炎疗效显著
,
同时对肠道溃
疡、血栓形成、神经衰弱和男性无精等症状都有一
定的治疗效果
[1]
。采用传统的提取法生产
L
2精氨
酸远不能满足其日益增长的需要
,
因此国内外许多
学者致力于
L
2精氨酸生产菌的选育、工程菌的构
建以及生产工艺等方面的研究。国外采用发酵法
生产
L
2精氨酸较早
,
日本在这方面的研究处于领
先水平
,
他们对黄色棒杆菌进行诱变
,
突变株产酸
可达
40
～
50g/L
[2
～
5]
,
国内在这方面的研究主要是
80
年代
,
中科院微生物研究所以谷氨酸产生菌钝
1
1
2
培养基
1
1
2
1
1
琼脂完全培养基
(
%
)
葡萄糖
2
1
0,
牛肉
膏
1
1
0,
蛋白胨
1
1
0,
酵母膏
0
1
5,NaCl0
1
5,
琼脂
2
1
0,pH7
1
0
～
7
1
2
1
1
2
1
2
琼脂基础培养基
(
%
)
葡萄糖
1
1
0,
(
NH
4
)
2
SO
4
0
1
3,KH
2
PO
4
0
1
1,MgSO
4
・
7H
2
O0
1
05,
FeSO
4
・
7H
2
O0
1
002,MnSO
4
・
H
2
O0
1
002,
琼脂
μ
g/L,
硫胺
2
1
0,pH7
1
0
～
7
1
2
(
另外加入生物素
30
μ
g/L
)
素
200
1
1
2
1
3
摇瓶种子培养基
(
%
)
葡萄糖
3
1
0,
玉米
浆
2
1
0,
(
NH
4
)
SO
4
2
1
0,KH
2
PO
4
0
1
1,MgSO
4
0
1
05,
尿素
0
1
15
1
1
2
1
4
摇瓶发酵培养基
(
%
)
葡萄糖
12
1
0,
(
NH
4
)
2
SO
4
4
1
5,KH
2
PO
4
0
1
1,MgSO
4
0
1
05,CaCO
3
3
1
0,
玉米浆
2
1
5,pH7
1
0
～
7
1
2
齿棒杆菌为出发菌株
,
经
NTG
多次逐级诱变
,
获
得了一株能够积累大量精氨酸的菌株
971
1
1
。该
菌株培养
96h,
产酸达
34g/L
。但由于该菌株产
酸水平不稳定等原因
,
未能实现该品种生产的国产
化
[6
～
8]
。本文报道了以谷氨酸棒杆菌
(
Glutamicumcorynebacterium
)
JHA5
为出发菌的
诱变育种及高产突变株产酸条件的初步研究结果。
1
材料和方法
1
1
1
菌株
如无特别说明
,
所有摇瓶培养条件均为
30
℃、
往复式摇床上
96r/min,96h
。
1
1
3
主要试剂
硫酸二乙酯
(
DES
)
:
上海试剂厂生产
;
亚硝基
胍
(
NTG
)
:
瑞士
Fluka
公司产品
;D
2
Arginine
、
L
2
Homoarginine:Sigma
公司产品。
1
1
4
DES
和
NTG
诱变方法
取试管斜面培养物一环
,
接入装有
30ml
种子
培养基的
250ml
三角瓶中于往复式摇床上
,96r/
min,30
℃培养
14h
后离心收集菌体
,
无菌生理盐
谷氨酸棒杆菌
(
Glutamicumcorynebacterium
JHA5
)(
His
-
,SG
r
)
水洗涤
3
次
,
用
0
1
1mol/LpH7
1
0
磷酸盐缓冲液调
整菌浓度达
1
×
10
9
个
/ml
。加入
DES
至终浓度为
①
收稿日期
:2000
2
10
2
10
作者简介
:
王霞
(
1974
年生
)
,
女
,
山东省泰安人
,
无锡轻工大学硕士
,
主要从事生物制药研究
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.
王 霞等
:
L
2精氨酸产生菌的选育及其发酵条件
211
1%,30
℃处理
30min
。
NTG
诱变的基本步骤同
DES
诱变
,NTG
浓
Tab1
ThegeneticstabilityofmutantJDN28
2
50
Generation
Productivity
(
g/L
)
1
26
1
5
2
27
1
4
3
27
1
5
4
25
1
7
5
26
1
3
度为
0
1
5mg/ml,
磷酸缓冲液为
0
1
1mol/LpH
6
1
0
。
1
1
5
药物抗性株的检出方法
将上述经诱变处理过的菌液涂布含有一定浓
度药物的基本培养基平板后
,
置于
30
℃培养
3
～
5d,
挑选长出的大菌落
,
即为药物抗性变异株。
1
1
6
分析方法
1
1
6
1
1
菌体生长测定
吸
0
1
2ml
菌液
,
加入
0
1
25mol/LHCl5ml
摇
匀以蒸馏水作空白于
562nm
处测
OD
值。
1
1
6
1
2
L
2精氨酸测定
[9,10]
纸层析法、比色定量
法
2
结果与讨论
2
1
1
L
2精氨酸产生菌
JDN28
2
50
的选育
以
JHA5
(
His
-
,SG
r
)
为出发菌株
,
经
DES
诱变
由上表可见
,
该突变株的遗传稳定性较好
,
连
续传代
5
代
,
其产酸未见明显变化。
2
1
2
碳源对
JDN28
2
50
产酸的影响
碳源是构成菌体和合成精氨酸碳架及能量的
来源
,
不同的菌种对碳源的利用情况不同。分别考
察不同碳源对
JDN28
2
50
产精氨酸的影响
,
结果表
明
:
该菌株在以葡萄糖、蔗糖为碳源时
,
精氨酸的产
量较高。进一步考察葡萄糖浓度对其精氨酸产量
的影响
,
当葡萄糖浓度由
6%
增加到
12%
时产酸量
显著增加
,12%
到
15%
产酸量趋于平缓。
2
1
3
硫酸铵浓度对精氨酸产量的影响
由于发酵产物精氨酸分子中氮元素的含量高
达
32
1
15%,
所以发酵培养基中必须含有较高比例
的氮源以满足菌体生长及精氨酸合成的需要。考
察硫酸铵浓度对产酸的影响
,
结果如图
1
所示
:
以及
D
2
Arg
平板筛选
,
共获得
D
2
Arg
r
变异株
190
株
,
经摇瓶筛选
,
获得两株精氨酸产量较高的菌
,
分
别命名为
JD190
2
5
和
JD190
2
28,
其
L
2精氨酸产量
分别为
9
1
8g/L
和
9
1
4g/L,
比出发菌株增长近
1
倍。
分别对
JD190
2
5
和
JD190
2
28
进行
NTG
诱变
,
并结合
L
2
HA
抗性平板筛选
,
最终获得一株
L
2
HA
r
变异株
JDN28
2
50,
其
L
2精氨酸的产量达
25
1
4
g/L
。具体选育谱系如下图
:
Fig1
Effectofconcentrationof
(
NH4
)
2
SO
4
onproduction
of
L
2
arginine
L
2精氨酸的生物合成受其自身的反馈抑制和
反馈阻遏
,
选育结构类似物抗性变异株以解除
L
2
精氨酸自身的反馈调节使
L
2精氨酸得以积累。根
据这一基本原理
,
我们采用选育
L
2精氨酸结构类
似物
D
2
Arg
、
L
2
HA
抗性变异株的方法
,
获得了能
够积累大量
L
2精氨酸的变异株菌
JDN28
2
50,
其产
量有了大幅度提高。
将变异株
JDN
2
28
2
50
在新鲜斜面上连续传代
5
代
,
考察它们的产酸情况
,
结果如表
1
。
由图
2
知随着硫酸铵浓度的增加精氨酸产量
显著增加
,
但当硫酸铵浓度超过
5%
时产酸又显著
下降。
2
1
4
玉米浆对
L
2精氨酸产量的影响
玉米浆中富含
B
族维生素、生物素、嘌呤、嘧
啶等微量有机物质
,
这些物质对前期菌体生长和中
后期产酸都是很重要的
,
考察玉米浆浓度对产酸的
影响如图
2
所示。随着玉米浆浓度的增加产酸增
加
,
玉米浆浓度为
2
1
5%
时
,
产酸最高达
33g/L,
进
一步增加玉米浆浓度
,
其产酸量反而降低。
2
1
5
碳酸钙浓度对
L
2精氨酸产量的影响
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.
212
药物生物技术第
8
卷第
4
期
由图
3
知随
CaCO
3
用量的增加产酸量增加
,
当达到
30g/L
时产酸量最大
,
由
30g/L
增加到
50
g/L
时产酸有下降趋势。
参考文献
[1]
BarbulA
1精氨酸
:
生物化学、生理学及治疗学意义
[J]
1氨基
酸杂志
,1987,2:39.
[2]
YoshidaH,ArakiK,NakayamaK
1
Mechanismof
L
2
Arginine
Production
(
1
)
:105.
[3]
YoshidaH,ArakiK,NakayamaK
1
L
2
ArginineProductionby
ArginineAnalog
2
resistantMutantsofMicroorganisms[J]
1
AgricBiolChem
,1981,45
(
4
)
:959.
by
L
2
Arginine
2
producingMutantsof
Corynebacteriumglutarmixum[J]
1
AgricBiolChem
,1979,43
Fig2
Effectofconcentrationofcornsteepliquoron
productionof
L
2
arginine
发酵液中硫酸铵的消耗会引起发酵液生理酸
性
,
对产酸不利
,
必须用碳酸钙中和
,
以维持发酵过
程中的一定的
pH
值。考察发酵液中碳酸钙的用
量对精氨酸产量的影响
,
结果如图
3
所示
:
[4]
TakayasuT,Ajinomoto
1
ProcessforProducing
L
2
arginineby
fermentatiion[P]
1
EuropeanPatent
,0
2
378223A1.
[5]
AzumaT,AoyaglS,ToshigideA
1
Processforproducing
L
2
arginine[J]
1
AgricBiolChem,
1972,36:1675.
[6]
路志强
,
龚建华
,
丁久元1
L
2精氨酸产生菌诱变育种的研究
[J]
1微生物学报
,1988,28
(
2
)
:131
1
[7]
龚建华
,
丁久元
,
路志强1
L
2精氨酸发酵条件的研究
[J]
1微
生物学报
,1988,28
(
3
)
:257.
[8]
龚建华
,
丁久元
,
陈琦1发酵法生产
L
2精氨酸放大过程的工
艺研究
[J]
1微生物学报
,1991,31
(
6
)
:460.
[9]
蒙绮芳
,
赖碧清
,
周锡梁1精氨酸测定方法的研究
[J]
1氨基
酸和生物资源
,1998,20
(
3
)
:1.
[10]
北京师范大学生物系生化教研室主编1基础生物化学实验
[M]
1北京
:
高等教育出版社
,1982.
Fig3
EffectofconcentrationofCaCO
3
ontheproduction
of
L
2
arginine
TheBreedingof
L
2
ArginineHyper
2
producingMutant
WANGXia,XUZheng
2
hong,AOZhong
2
hua,SUNZhi
2
hao,TAOWen
2
yi
(
Schoolofbiotechnology,WuxiUniversityofLightIndustry,Wuxi
214036
)
Abstract
A
L
2
argininehyper
2
producingmutantJDN28
2
50
(
His
2
SG
r
D
2
Arg
r
L
2
HA
r
)
wasobtainedbythe
combinationtreatmentwithdiethylsulfate
(
DES
)
andN
2
methyl
2
N,
2
nitroso
2
guanidine
(
NTG
)
1
Whenitwas
culturedat30
℃
for96h,itcouldaccumulate25
2
30g/L
L
2
arginineinthemediumcontaining120g/Lglucose
and50g/L
(
NH
4
)
2
SO
4
1
Keywords
L
2
arginine,breeding,
Glutamicumcorynebacterium
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.