2024年8月1日发(作者：楚夏岚)
2002
年
12
月 第
24
卷第
6
期
中国
防痨杂志
・
313
・
・论著・
吉林市结核分支杆菌
IS6110DNA
指纹图谱特征分析
李书琳
,
韩中波
,
徐新顺
,
张永胜
,
李 昕
11111
摘要
:
目的 分析吉林市结核分支杆菌
IS6110RFLP
图谱特征。方法 对
53
株结核分支杆菌
分离株进行
IS6110
基因分型
,
得到
IS6110RFLP
图谱
;
按菌株指纹特征的同源性高低予以分组
,
并
进行分析。结果 吉林市结核分支杆菌
IS6110RFLP
图谱特征为
:
(
1
)
IS6110
拷贝数目平均为
13
个
;
(
2
)
A
、
B
两组同源性很高
,
具有“北京基因型”特征
,C
组多态性较强
;
(
3
)
IS6110RFLP
图谱特征分
布无地域差异
;
(
4
)
耐药菌株与敏感菌株图谱特征无明显差异
,
但初治耐药菌株成簇率较高。结论
吉林市结核分支杆菌
IS6110RFLP
图谱特征以“北京基因型”为主
;
但还具一些独有的特征。
关键词
:
分支杆菌
,
结核
;DNA
指纹
;
吉林市
TheanalysisofcharacteristicsofIS6110fingerprintpatternsof
Mycobacteriumtuberculosis
strainsinJilinCity
LIShu
2
lin
,
HANZhong
2
bo
,
XUXin
2
shun
,
etal
.
JilinCityTuberculosisInstitute
,
Jilin
132011
Abstract:Objective
ToanalyzethecharacteristicsofIS6110restrictionfragmentlengthpolymor
2
phism
(
RFLP
)
patternsof
mycobacteriumtuberculosis
s
53of
Mycobacteriumtuberculosis
strainswereisolatedfromthe53caseswithpulmonarytuberculosis,IS6110
RFLPpatternswereproducedbyDNAfingerprinting.
Mycobacteriumtuberculosis
strainsweredivided
intogroupsaccordingtotheirhomologyofIS6110fingerprinting,s
Thechar
2
acteristicsofIS6110RFLPpatternsof
Mycobacteriumtuberculosis
strainsisolatedfromJilinCity
showed:
(
1
)
TheaverageofthecopiesofIS6110was13.
(
2
)
Thehomologyofthestrainsbetweengroup
dthecharacteristicof
“
Beijinggenotypestrains
”
.Strains
ingroupChadhighpolymorphism.
(
3
)
ThecharacteristicsofIS6110patternswerenotrelatedtothe
geographicdistributionofthepatients.
(
4
)
Theclusteringrateofstrainsininitialcasesofdrug
2
resistance
washigh;asforthecharacteristicofthepatterns,therewerenodifferencesbetweenthestrainsofdrug
2
resistanceandthoseofnon
2
drug
2
sion
ThemaintypeoftheIS6110RFLPpatternsof
Mycobacteriumtuberculosis
strainsinJilinCitywas
“
Binjinggenotypestrains
”
,buttherewasafeature
specially,thatwasthehighpolymorphism.
Keywords:Mycobacterium,tuberculosis;DNAfingerprint;Jilincity
结核病分子流行病学随着分子生物学新技术的
应用得到迅速发展
,
一些国家和地区已推广和使用
于结核病流行病学、传染和病因学的研究。
DNA
指
纹技术是采用
DNA
限制性片断长度多态性
(
Re
2
基金项目
:
吉林省卫生厅医学科研基金
(
2000-143
)
;
作者单位
:1
1吉林市结核病防治研究所 吉林
132011;
收稿日期
:2002-06-
27;
作者简介
:
李书琳
(
1956-
)
,
男
,
吉林市结核病防治研究所所长
,
主任医师
,
吉林省防痨协会检验委员会主任委员
,
省结核病细菌学重点研
究室主任。
© 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
・
314
・
2002
年
12
月 第
24
卷第
6
期
中国
防痨杂志
strictionFragmrntLengthPolynorphism,RFLP
)
的
方法进行分析。在结核分支杆菌
DNA
中
,
存在着
重复序列
DR
、
MPTRS
、
PGRS
和插入序列
IS6110
、
IS1081,
对于一般的使用
IS6110RFLP
方法是容易
[1,2]
标准化
,
重复性好
,
最可靠的方法。本文对吉林
市分离的
53
株结核分支杆菌进行
IS6110RFLP
图
谱分析
,
现将结果报告如下。
材料与方法
1
1抽取具有流行病学相应原始资料的结核分
代替反应体系中
dTTP
的量。
(
dUTP
2
Dig
∶
Roche
公
司
)
,
经
PCR
扩增
,
得到地高辛标记的
245bp
的
IS6110
探针。通过凝胶电冰和杂交试验检测探针。
[1]
4
1结核杆菌
IS6110RFLP
图谱的制备
(
1
)
限制性内切酶
ρ
vu
Ⅱ
(
promega
公司
)
酶切。
(
2
)
酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳
,
紫外线下观察
DNA
标准移到至少
10cm,
停止电泳。
(
3
)
碱洗变
性
,
用带正电尼龙膜
(
Anersham
公司
)
进行
DNA
Southern
转移。
(
4
)
预杂交后
,
加入变性的探针进行
杂交
,42
℃
15h
。
(
5
)
杂交后洗膜加入
Anti
2
Dig
2
Ap
(
Roche
公司
)
与探针上标记的地高辛反应。
(
6
)
采
支杆菌临床分离株
53
株
,
接种于罗氏培养基
37
℃
28
天
,
刮取菌落
,
进行后述步骤实验。
[3]
2
1
DNA
提取及定量
取结核分支杆菌菌落
,
放入
IXTE
中研磨混匀
,
80
℃
,30min
灭活
,
加入溶菌酶
(
promega
公司
,
终浓
μ
g
P
ml
)
37
℃度
1
水溶过夜
,
加入
SDS
P蛋白酶
K65
℃
μμ
1h;
加入
100l5MNaCl,100lCTAB
P
NaCl
混合后
置于
65
℃水溶
30min
。酚、氯仿抽提
DNA
二次
,
DNA
抽提相中加无水乙醇
-20
℃过夜
,
沉淀去上
清
,
用
70%
冷乙醇漂洗、风干。
752
紫外分析仪定
量。
3
1
PCR
法制备
IS6110
探针
引物
1
(
5
′
CGTGAGGGCATCGAGGTGGC
)
,
引
物
2
(
5
′
GCGTAGGCGTCGGTGACAAA
)
模板为
BCG
的
DNA
(
约
50ng
)
,
以
dUTP
2
Dig
∶
dTTP=3
∶
1
用发光自显影技术
(
CDP
2
star:Roche
公司
)
检测杂交
带
,
得出
IS6110RFLP
图谱。
5
1
IS6110RFLP
图谱分析
以
DNAMarker
2
Dig
2
Labeled
(
Roche
公司
)
为分
子量标准
,
将每张图谱标准化
,
按指纹特征同源性高
低予以分组并进行分析。
(
酶试剂量按说明书操作
,
以上未标明厂家的试剂均由华美公司提供
)
结 果
1
1
53
株结核分支杆菌
IS6110RFLP
图谱显示
IS6110
拷贝数量平均为
13
个
,
最少的
3
个拷贝
,
最
多的
19
个拷贝
,
未见无
IS6110
拷贝的菌株。
IS6110
拷贝数在
9
个及
15
个处有两个峰
(
图
1
)
。
图
1
53
株菌株的
IS6110
拷贝数和分布情况
2
1根据本市结核杆菌
IS6110
指纹图谱特征
,
按同源性高低进行分组
,53
株结核分支杆菌中
,31
株
(
58.4%
)
可成簇
,
按其特征分为
A
、
B
两组
;A
组
IS6110
拷贝数平均为
14
个
,
在低分子量
1.0kb
～
1.
2kb
处有
3
个相近的共有拷贝
,
在
1.8kb
、
2.9kb
、
3.
3kb
、
4.8kb
处还有
4
个共有拷贝。
B
组
IS6110
拷贝
很高。剩余
22
株菌株图谱特征同源性很低
,IS6110
拷贝数较少为
3
～
12
个
,
平均为
8
个
,
菌株间几乎没
有分子量相近的共有拷贝
,
呈现出多态性特征
,
把它
们分到
C
组
(
图
2
)
。
3
1
53
例患者均为吉林市人
,
其中
,
男性
39
例
,
女性
14
例
,
男、女比例为
2.8
∶
1
。结核分支杆菌
IS6110
指纹特征分布与患者年龄、职业和地域的关
数平均为
15
个
,
低分子量
1.0kb
～
1.2kb
处有
4
个
相近的共有拷贝
,
在
2.0kb
、
2.9kb
、
3.3kb
、
3.7kb
、
4.
4kb
、
5.0kb
处还有
6
个共有拷贝。
A
、
B
两组相似性
系
(
表
1
)
,
可看出
40
～
49
年龄段与其它年龄段不
同
,
多态性较高
(
C
组占
64.2%
)
。工人、干部
C
组
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2002
年
12
月 第
24
卷第
6
期
中国
防痨杂志
・
315
・
的比例较大
,
分别为
50%
、
71.4%,
明显高于农民的
27.8%
。显示工人、干部的结核分支杆菌
IS6110
指
纹多态性强于农民。
图
2
结核分支杆菌
IS6110RFLPDNA
指纹图谱
1,15
为分子量标准
,A
组
3,5;B
组
4,7,8,9,10,13,14;C
组
2,6,11,12,16;6
与
12
为
同一标本。
表
1
IS6110
指纹特征分布与患者年龄、职业和地域的关系
项目
A
组菌株数
(
%
)
年龄
<40
40-49
50-59
≥
60
职业
工人
农民
干部
其它
地域
县区
郊区
市区
5
(
29.4
)
3
(
20.0
)
6
(
28.6
)
5
(
29.4
)
6
(
40.0
)
6
(
28.5
)
7
(
41.2
)
6
(
40.0
)
9
(
42.9
)
2
(
20.0
)
7
(
38.9
)
1
(
14.3
)
4
(
22.2
)
3
(
30.0
)
6
(
33.3
)
1
(
14.3
)
7
(
38.9
)
5
(
50.0
)
5
(
27.8
)
5
(
71.4
)
7
(
38.9
)
7
(
26.9
)
2
(
14.3
)
3
(
42.9
)
2
(
33.3
)
10
(
38.5
)
3
(
21.4
)
2
(
28.6
)
2
(
33.3
)
9
(
34.6
)
9
(
64.2
)
2
(
28.6
)
2
(
33.3
)
B
组菌株数
(
%
)
C
组菌株数
(
%
)
表
2
53
株结核分支杆菌的药物敏感性与
IS6110
指纹特征分布的关系
耐药情况
敏感
耐药
耐多药
A
组菌株数
(
%
)
6
(
25.0
)
8
(
27.6
)
3
(
21.3
)
B
组菌株数
(
%
)
8
(
33.3
)
9
(
31.0
)
2
(
15.4
)
C
组菌株数
(
%
)
10
(
41.7
)
12
(
41.4
)
8
(
61.5
)
表
3
初始敏感株与初始耐药株的
IS6110
指纹特征分布的关系
A
组菌株数
(
%
)
B
组菌株数
(
%
)
6
(
3.3
)
4
(
36.4
)
10
(
34.4
)
C
组菌株数
(
%
)
7
(
38.9
)
2
(
18.2
)
9
(
32.2
)
初始敏感
初始耐药
合计
5
(
27.8
)
5
(
45.4
)
10
(
34.4
)
讨 论
4
1结核分支杆菌
IS6110
指纹特征分布与药物
DNA
指纹法做为分子生物学的一项新技术
,
经
敏感性情况分析
,
敏感菌株与耐药菌株的
IS6110
指
纹特征分布未见明显差异
,
初治耐药菌株
,
主要分布
在
A
、
B
两组共
9
株占
81.2%,
成簇率很高
;
耐多药
菌株主要分布在
C
组共
8
株占
61.5%,
显示出较强
的多态性
(
表
2
、
3
)
。
常被用于结核病传播链的证实和鉴定
,
外源再感染
与内源复发的区分、传染源的追踪、实验室交叉污染
[4,5]
的鉴定
,
增加对耐药的了解等方面。本市结核
病疫情仍较严重
,
分子流行病学研究正成为我们加
强结核病控制的一个新手段。
由于
IS6110
在不同菌株中的拷贝数和位置不
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316
・
2002
年
12
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24
卷第
6
期
中国
防痨杂志
同
,
呈现
IS6110RFLP
的多态性。本市的
IS6110
RFLP
图谱
,
根据其特征分为三组
,A
、
B
两组的同源
性很高
,
菌株间相互关系密切
,
可成簇
,
这部分菌株
属于一个基因进化家族
,
并都具有“北京基因型”的
特征
,
说明本市菌株以“北京基因型”为主
(
58.4%
)
;
介于北京市报道的
80.5%
和韩国
43%,
蒙古
50%
(
C
)
组的菌株为
22
的比例之间。非“北京基因型”
株
(
41.6%
)
,
高于北京市的
19.5%,
反映本市菌株
IS6110
指纹的多态性强于北京市。其原因可能是
:
(
1
)
本市为满族发源地
,
古代可能具有本地的不同于
“北京基因型”的基因型
,50
年前的几次迁移潮使关
内人群大量迁移到此
,
带来具有关内特征的“北京基
因型”。
(
2
)
少数民族
(
满、朝、回族
)
所占比例较大
,
指纹特征可能是存在民族之间的差异。
(
3
)
与朝鲜、
韩国、蒙古、俄罗斯相符
,
不同国家、民族的频繁接
触。以上只是推论
,
尚有待证实。
由指纹特征分布联系患者自然情况资料可看
出
,40
～
49
岁段比较特殊
,
多态性变化大
(
C
组占
64.2%
)
,
与其它年龄组对比有明显差别
,
原因有待
分析。从职业上看
,
工人、干部的多态性较强
,
农民
的指纹特征的同源性较高。从本市地域看
,
未呈现
出明显的地域特征。
我市的敏感菌株与耐药菌株的
IS6110
指纹特
征分布未体现出明显差异。初治耐药菌株成簇率高
(
81.8%
)
,
多态性较差
,
表明患者多为近期感染
[8]
,
同时还揭示该类型菌株造成的人群感染数可能较
大。耐多药菌株
,
指纹多态性强
,
可能揭示本市耐多
药结核病疫情较严重。
本文主要对结核杆菌
IS6110
指纹图谱特征进
行初步研究
,
对存在的问题及一些有待证实的推论
将进一步研究探讨。
参考文献
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2
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,2001,24
(
9
)
:
253
～
255.
・病例报告・
乌体林斯致腹泻
1
例
陈尊杰
患者
,
男
,48
岁
,
因反复咳嗽
,
咯黄黏痰
,
间断咯
血丝痰
3
年
,
在院外不规则应用抗结核治疗
,
病情反
复
,
为进一步治疗
,
于
2001
年
10
月
28
日收住本院。
查体
:T37.2
℃
,P96
次P分
,R20
次P分
,Bp14.5
P
10.
6kPa
神清。听诊
:
左上中肺闻及少许湿性罗音
;
心
律整
,
无杂音
;
腹平软
,
肝脾未触及。辅助检查
:
胸片
提示
:
左上中斑片状阴影并空洞形成。血抗结核抗
1
体阳性
,
痰涂片抗酸染色
3
次均阳性
,
痰结核杆菌培
养阳性。肝、肾功能正常。大、小便常规正常。入院
诊断
:
左上中继发型肺结核并空洞形成。入院后予
3HREZ+AMK
P
9HRZ
方案治疗
,
并加用乌体林斯
治疗。乌体林斯由成都金星健康药业有限公司
(
中
德合资
)
生产
(
批号
:200106201
)
。用法
:
乌体林斯
μ
g
臀部肌肉深注射
,
每
2
周
1
次。
(
下转
349
页
)
17.2
作者单位
:1
1广东省汕头市第二人民医院
515073;
收稿日期
:2002-06-18
。
© 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
2024年8月1日发(作者：楚夏岚)
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12
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・论著・
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IS6110DNA
指纹图谱特征分析
李书琳
,
韩中波
,
徐新顺
,
张永胜
,
李 昕
11111
摘要
:
目的 分析吉林市结核分支杆菌
IS6110RFLP
图谱特征。方法 对
53
株结核分支杆菌
分离株进行
IS6110
基因分型
,
得到
IS6110RFLP
图谱
;
按菌株指纹特征的同源性高低予以分组
,
并
进行分析。结果 吉林市结核分支杆菌
IS6110RFLP
图谱特征为
:
(
1
)
IS6110
拷贝数目平均为
13
个
;
(
2
)
A
、
B
两组同源性很高
,
具有“北京基因型”特征
,C
组多态性较强
;
(
3
)
IS6110RFLP
图谱特征分
布无地域差异
;
(
4
)
耐药菌株与敏感菌株图谱特征无明显差异
,
但初治耐药菌株成簇率较高。结论
吉林市结核分支杆菌
IS6110RFLP
图谱特征以“北京基因型”为主
;
但还具一些独有的特征。
关键词
:
分支杆菌
,
结核
;DNA
指纹
;
吉林市
TheanalysisofcharacteristicsofIS6110fingerprintpatternsof
Mycobacteriumtuberculosis
strainsinJilinCity
LIShu
2
lin
,
HANZhong
2
bo
,
XUXin
2
shun
,
etal
.
JilinCityTuberculosisInstitute
,
Jilin
132011
Abstract:Objective
ToanalyzethecharacteristicsofIS6110restrictionfragmentlengthpolymor
2
phism
(
RFLP
)
patternsof
mycobacteriumtuberculosis
s
53of
Mycobacteriumtuberculosis
strainswereisolatedfromthe53caseswithpulmonarytuberculosis,IS6110
RFLPpatternswereproducedbyDNAfingerprinting.
Mycobacteriumtuberculosis
strainsweredivided
intogroupsaccordingtotheirhomologyofIS6110fingerprinting,s
Thechar
2
acteristicsofIS6110RFLPpatternsof
Mycobacteriumtuberculosis
strainsisolatedfromJilinCity
showed:
(
1
)
TheaverageofthecopiesofIS6110was13.
(
2
)
Thehomologyofthestrainsbetweengroup
dthecharacteristicof
“
Beijinggenotypestrains
”
.Strains
ingroupChadhighpolymorphism.
(
3
)
ThecharacteristicsofIS6110patternswerenotrelatedtothe
geographicdistributionofthepatients.
(
4
)
Theclusteringrateofstrainsininitialcasesofdrug
2
resistance
washigh;asforthecharacteristicofthepatterns,therewerenodifferencesbetweenthestrainsofdrug
2
resistanceandthoseofnon
2
drug
2
sion
ThemaintypeoftheIS6110RFLPpatternsof
Mycobacteriumtuberculosis
strainsinJilinCitywas
“
Binjinggenotypestrains
”
,buttherewasafeature
specially,thatwasthehighpolymorphism.
Keywords:Mycobacterium,tuberculosis;DNAfingerprint;Jilincity
结核病分子流行病学随着分子生物学新技术的
应用得到迅速发展
,
一些国家和地区已推广和使用
于结核病流行病学、传染和病因学的研究。
DNA
指
纹技术是采用
DNA
限制性片断长度多态性
(
Re
2
基金项目
:
吉林省卫生厅医学科研基金
(
2000-143
)
;
作者单位
:1
1吉林市结核病防治研究所 吉林
132011;
收稿日期
:2002-06-
27;
作者简介
:
李书琳
(
1956-
)
,
男
,
吉林市结核病防治研究所所长
,
主任医师
,
吉林省防痨协会检验委员会主任委员
,
省结核病细菌学重点研
究室主任。
© 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
・
314
・
2002
年
12
月 第
24
卷第
6
期
中国
防痨杂志
strictionFragmrntLengthPolynorphism,RFLP
)
的
方法进行分析。在结核分支杆菌
DNA
中
,
存在着
重复序列
DR
、
MPTRS
、
PGRS
和插入序列
IS6110
、
IS1081,
对于一般的使用
IS6110RFLP
方法是容易
[1,2]
标准化
,
重复性好
,
最可靠的方法。本文对吉林
市分离的
53
株结核分支杆菌进行
IS6110RFLP
图
谱分析
,
现将结果报告如下。
材料与方法
1
1抽取具有流行病学相应原始资料的结核分
代替反应体系中
dTTP
的量。
(
dUTP
2
Dig
∶
Roche
公
司
)
,
经
PCR
扩增
,
得到地高辛标记的
245bp
的
IS6110
探针。通过凝胶电冰和杂交试验检测探针。
[1]
4
1结核杆菌
IS6110RFLP
图谱的制备
(
1
)
限制性内切酶
ρ
vu
Ⅱ
(
promega
公司
)
酶切。
(
2
)
酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳
,
紫外线下观察
DNA
标准移到至少
10cm,
停止电泳。
(
3
)
碱洗变
性
,
用带正电尼龙膜
(
Anersham
公司
)
进行
DNA
Southern
转移。
(
4
)
预杂交后
,
加入变性的探针进行
杂交
,42
℃
15h
。
(
5
)
杂交后洗膜加入
Anti
2
Dig
2
Ap
(
Roche
公司
)
与探针上标记的地高辛反应。
(
6
)
采
支杆菌临床分离株
53
株
,
接种于罗氏培养基
37
℃
28
天
,
刮取菌落
,
进行后述步骤实验。
[3]
2
1
DNA
提取及定量
取结核分支杆菌菌落
,
放入
IXTE
中研磨混匀
,
80
℃
,30min
灭活
,
加入溶菌酶
(
promega
公司
,
终浓
μ
g
P
ml
)
37
℃度
1
水溶过夜
,
加入
SDS
P蛋白酶
K65
℃
μμ
1h;
加入
100l5MNaCl,100lCTAB
P
NaCl
混合后
置于
65
℃水溶
30min
。酚、氯仿抽提
DNA
二次
,
DNA
抽提相中加无水乙醇
-20
℃过夜
,
沉淀去上
清
,
用
70%
冷乙醇漂洗、风干。
752
紫外分析仪定
量。
3
1
PCR
法制备
IS6110
探针
引物
1
(
5
′
CGTGAGGGCATCGAGGTGGC
)
,
引
物
2
(
5
′
GCGTAGGCGTCGGTGACAAA
)
模板为
BCG
的
DNA
(
约
50ng
)
,
以
dUTP
2
Dig
∶
dTTP=3
∶
1
用发光自显影技术
(
CDP
2
star:Roche
公司
)
检测杂交
带
,
得出
IS6110RFLP
图谱。
5
1
IS6110RFLP
图谱分析
以
DNAMarker
2
Dig
2
Labeled
(
Roche
公司
)
为分
子量标准
,
将每张图谱标准化
,
按指纹特征同源性高
低予以分组并进行分析。
(
酶试剂量按说明书操作
,
以上未标明厂家的试剂均由华美公司提供
)
结 果
1
1
53
株结核分支杆菌
IS6110RFLP
图谱显示
IS6110
拷贝数量平均为
13
个
,
最少的
3
个拷贝
,
最
多的
19
个拷贝
,
未见无
IS6110
拷贝的菌株。
IS6110
拷贝数在
9
个及
15
个处有两个峰
(
图
1
)
。
图
1
53
株菌株的
IS6110
拷贝数和分布情况
2
1根据本市结核杆菌
IS6110
指纹图谱特征
,
按同源性高低进行分组
,53
株结核分支杆菌中
,31
株
(
58.4%
)
可成簇
,
按其特征分为
A
、
B
两组
;A
组
IS6110
拷贝数平均为
14
个
,
在低分子量
1.0kb
～
1.
2kb
处有
3
个相近的共有拷贝
,
在
1.8kb
、
2.9kb
、
3.
3kb
、
4.8kb
处还有
4
个共有拷贝。
B
组
IS6110
拷贝
很高。剩余
22
株菌株图谱特征同源性很低
,IS6110
拷贝数较少为
3
～
12
个
,
平均为
8
个
,
菌株间几乎没
有分子量相近的共有拷贝
,
呈现出多态性特征
,
把它
们分到
C
组
(
图
2
)
。
3
1
53
例患者均为吉林市人
,
其中
,
男性
39
例
,
女性
14
例
,
男、女比例为
2.8
∶
1
。结核分支杆菌
IS6110
指纹特征分布与患者年龄、职业和地域的关
数平均为
15
个
,
低分子量
1.0kb
～
1.2kb
处有
4
个
相近的共有拷贝
,
在
2.0kb
、
2.9kb
、
3.3kb
、
3.7kb
、
4.
4kb
、
5.0kb
处还有
6
个共有拷贝。
A
、
B
两组相似性
系
(
表
1
)
,
可看出
40
～
49
年龄段与其它年龄段不
同
,
多态性较高
(
C
组占
64.2%
)
。工人、干部
C
组
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2002
年
12
月 第
24
卷第
6
期
中国
防痨杂志
・
315
・
的比例较大
,
分别为
50%
、
71.4%,
明显高于农民的
27.8%
。显示工人、干部的结核分支杆菌
IS6110
指
纹多态性强于农民。
图
2
结核分支杆菌
IS6110RFLPDNA
指纹图谱
1,15
为分子量标准
,A
组
3,5;B
组
4,7,8,9,10,13,14;C
组
2,6,11,12,16;6
与
12
为
同一标本。
表
1
IS6110
指纹特征分布与患者年龄、职业和地域的关系
项目
A
组菌株数
(
%
)
年龄
<40
40-49
50-59
≥
60
职业
工人
农民
干部
其它
地域
县区
郊区
市区
5
(
29.4
)
3
(
20.0
)
6
(
28.6
)
5
(
29.4
)
6
(
40.0
)
6
(
28.5
)
7
(
41.2
)
6
(
40.0
)
9
(
42.9
)
2
(
20.0
)
7
(
38.9
)
1
(
14.3
)
4
(
22.2
)
3
(
30.0
)
6
(
33.3
)
1
(
14.3
)
7
(
38.9
)
5
(
50.0
)
5
(
27.8
)
5
(
71.4
)
7
(
38.9
)
7
(
26.9
)
2
(
14.3
)
3
(
42.9
)
2
(
33.3
)
10
(
38.5
)
3
(
21.4
)
2
(
28.6
)
2
(
33.3
)
9
(
34.6
)
9
(
64.2
)
2
(
28.6
)
2
(
33.3
)
B
组菌株数
(
%
)
C
组菌株数
(
%
)
表
2
53
株结核分支杆菌的药物敏感性与
IS6110
指纹特征分布的关系
耐药情况
敏感
耐药
耐多药
A
组菌株数
(
%
)
6
(
25.0
)
8
(
27.6
)
3
(
21.3
)
B
组菌株数
(
%
)
8
(
33.3
)
9
(
31.0
)
2
(
15.4
)
C
组菌株数
(
%
)
10
(
41.7
)
12
(
41.4
)
8
(
61.5
)
表
3
初始敏感株与初始耐药株的
IS6110
指纹特征分布的关系
A
组菌株数
(
%
)
B
组菌株数
(
%
)
6
(
3.3
)
4
(
36.4
)
10
(
34.4
)
C
组菌株数
(
%
)
7
(
38.9
)
2
(
18.2
)
9
(
32.2
)
初始敏感
初始耐药
合计
5
(
27.8
)
5
(
45.4
)
10
(
34.4
)
讨 论
4
1结核分支杆菌
IS6110
指纹特征分布与药物
DNA
指纹法做为分子生物学的一项新技术
,
经
敏感性情况分析
,
敏感菌株与耐药菌株的
IS6110
指
纹特征分布未见明显差异
,
初治耐药菌株
,
主要分布
在
A
、
B
两组共
9
株占
81.2%,
成簇率很高
;
耐多药
菌株主要分布在
C
组共
8
株占
61.5%,
显示出较强
的多态性
(
表
2
、
3
)
。
常被用于结核病传播链的证实和鉴定
,
外源再感染
与内源复发的区分、传染源的追踪、实验室交叉污染
[4,5]
的鉴定
,
增加对耐药的了解等方面。本市结核
病疫情仍较严重
,
分子流行病学研究正成为我们加
强结核病控制的一个新手段。
由于
IS6110
在不同菌株中的拷贝数和位置不
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・
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・
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年
12
月 第
24
卷第
6
期
中国
防痨杂志
同
,
呈现
IS6110RFLP
的多态性。本市的
IS6110
RFLP
图谱
,
根据其特征分为三组
,A
、
B
两组的同源
性很高
,
菌株间相互关系密切
,
可成簇
,
这部分菌株
属于一个基因进化家族
,
并都具有“北京基因型”的
特征
,
说明本市菌株以“北京基因型”为主
(
58.4%
)
;
介于北京市报道的
80.5%
和韩国
43%,
蒙古
50%
(
C
)
组的菌株为
22
的比例之间。非“北京基因型”
株
(
41.6%
)
,
高于北京市的
19.5%,
反映本市菌株
IS6110
指纹的多态性强于北京市。其原因可能是
:
(
1
)
本市为满族发源地
,
古代可能具有本地的不同于
“北京基因型”的基因型
,50
年前的几次迁移潮使关
内人群大量迁移到此
,
带来具有关内特征的“北京基
因型”。
(
2
)
少数民族
(
满、朝、回族
)
所占比例较大
,
指纹特征可能是存在民族之间的差异。
(
3
)
与朝鲜、
韩国、蒙古、俄罗斯相符
,
不同国家、民族的频繁接
触。以上只是推论
,
尚有待证实。
由指纹特征分布联系患者自然情况资料可看
出
,40
～
49
岁段比较特殊
,
多态性变化大
(
C
组占
64.2%
)
,
与其它年龄组对比有明显差别
,
原因有待
分析。从职业上看
,
工人、干部的多态性较强
,
农民
的指纹特征的同源性较高。从本市地域看
,
未呈现
出明显的地域特征。
我市的敏感菌株与耐药菌株的
IS6110
指纹特
征分布未体现出明显差异。初治耐药菌株成簇率高
(
81.8%
)
,
多态性较差
,
表明患者多为近期感染
[8]
,
同时还揭示该类型菌株造成的人群感染数可能较
大。耐多药菌株
,
指纹多态性强
,
可能揭示本市耐多
药结核病疫情较严重。
本文主要对结核杆菌
IS6110
指纹图谱特征进
行初步研究
,
对存在的问题及一些有待证实的推论
将进一步研究探讨。
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9
)
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253
～
255.
・病例报告・
乌体林斯致腹泻
1
例
陈尊杰
患者
,
男
,48
岁
,
因反复咳嗽
,
咯黄黏痰
,
间断咯
血丝痰
3
年
,
在院外不规则应用抗结核治疗
,
病情反
复
,
为进一步治疗
,
于
2001
年
10
月
28
日收住本院。
查体
:T37.2
℃
,P96
次P分
,R20
次P分
,Bp14.5
P
10.
6kPa
神清。听诊
:
左上中肺闻及少许湿性罗音
;
心
律整
,
无杂音
;
腹平软
,
肝脾未触及。辅助检查
:
胸片
提示
:
左上中斑片状阴影并空洞形成。血抗结核抗
1
体阳性
,
痰涂片抗酸染色
3
次均阳性
,
痰结核杆菌培
养阳性。肝、肾功能正常。大、小便常规正常。入院
诊断
:
左上中继发型肺结核并空洞形成。入院后予
3HREZ+AMK
P
9HRZ
方案治疗
,
并加用乌体林斯
治疗。乌体林斯由成都金星健康药业有限公司
(
中
德合资
)
生产
(
批号
:200106201
)
。用法
:
乌体林斯
μ
g
臀部肌肉深注射
,
每
2
周
1
次。
(
下转
349
页
)
17.2
作者单位
:1
1广东省汕头市第二人民医院
515073;
收稿日期
:2002-06-18
。
© 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.