2024年8月1日发(作者：淳于觅荷)
• 302 •
中国防痨杂志 2021 年 3 月第 43 卷第 3 期 Chin J Antituben^March 2021，V〇1. 43,No. 3
•病例报告•
LSWiO基因缺失结核分枝杆菌感染的肺结核一例
谈小文王媛崔晓利党丽云雷静任斐赵国连
分子生物学检测方法因其具有检测敏感度高、特异性强
和时效性高等特点，成为结核病快速珍断的重要检测手段。
对于分子生物学检测，寻找检测效率高且存在特异性的靶基
因尤为重要，分子检测靶基因的种属特异性和多拷贝序列是
确保检测结果准确性和高效性的重要因素。结核病分子生
物学病原诊断常用的诊断靶标有
rfiiVAjqB
和基因等，以上基因均属于管家基因。其中
IS6n
〇为
多拷贝基因，其用于病原学诊断敏感度高于单拷贝基因，但
是基因并非存在于所有结核分枝杆菌中，有的菌株
/S6]
〗
0
基因缺失，可能造成假阴性结果
2
。本研究对西安
市胸科医院收治的
1
例基因零拷贝菌株感染的结核
病患者病原学诊断过程及分离株测序结果进行分析，旨在为
临床诊断工作提供借鉴。
临床资料
患者，男，
50
岁。因间断咳嗽、咳痰、胸闷、气促
10
个
月，伴发热
1
周，于
2020
年
6
月
13
日入住西安市胸科医院。
患者
5
年前无明显诱因出现咳嗽、咳白色黏痰，未行特殊处
理。
2019
年
8
月
27
日患者因胸闷、气促，就诊于当地医院，
诊断为
“
尘肺
”
，给予对症治疗后症状稍有好转，但活动后仍
感到气促，休息后可缓解，随着病程进展，气促症状逐渐加
重。患者于
2020
年
6
月
5
日出现发热，最高体温
37.9
。，午
后明显
.
无畏寒、寒颤，就诊于山阳县中医医院，行胸部
CT
示双肺出现病灶并形成空洞，不排除肺结核可能，遂来我院
做进一步诊断治疗。患病期间，患者无咯血，无胸痛和心慌，
无恶心和呕吐，体质量
6
个月减轻
10 kg
。
人院时体格检查:体温
37 °C
，
脉搏
92
次
/min,
呼吸频率
开放科学（资源服务）标识码（
OSID)
的开放科
学计划以二维码为入口，提供丰富的线上扩展
功能，包括作者对论文背景的语音介绍、该研究
的附加说明、与读者的交互问答、拓展学术圈等。
读者“扫一扫”此二维码即可获得上述增值服务。
doi
：
10. 3969/j. issn. 1000-6621. 2021. 03. 020
基金项目：陕西省重点研发计划项目（
2018SF-254)
作者单位
:71010
〇西安市胸科医院检验科
通信作者：赵国连，
Email:****************
24
次
/min
,血压
140/100 mmHg(l mmHg=0. 133 kPa
)。患
者神志清楚
•
呼吸平稳，口齿清晰，全身皮肤黏膜无黄染，全
身浅表淋巴结无肿大
;
胸廓正常，无肋间隙增宽;双肺叩诊清
音，呼吸音粗，闻及干性啰音
;
心率
92
次
/min,
节律齐，无杂
音
;
腹部柔软，无压痛、反跳痛
;
肝脾肋下未扪及；四肢活动正
常，双下肢未见浮肿。
实验室检查：白细胞（
WBC) 5. 53 X 109/L[
正常范围：
(3.50
〜
9.50)
乂
109/1^],
血红蛋白（只
13)88/1(
正常范围：
13
〇〜
l75g/L),
血红细胞沉降率（
ESR)25 _/1 h
(正常范
围：
0
〜
15mm/l h),C
反应蛋白（
CRP)130. 94 mg/L
(正常范
围：
0
〜
6_00 mg/L);
抗链球菌溶素
O(ASO
)、类风湿因子
(1^)
、免疫球蛋白（每
0
、
181^
、
18
八
)
均阴性
,
结核感染
1
'细胞
斑点试验
(T-SPOT. TB)
阳性；降钙素原
1. 05 Fg/L
(正常范
围：
0
〜
0_ 50
吨
/L);
结核抗体五项
:38kDa
抗体阳性，培养滤液
蛋白
10(CFP-10)
抗体阳性，其余为阴性。痰标本涂片分枝
杆菌抗酸染色阳性
（+ + + +
)。痰标本分枝杆菌复合群核
酸检测
(
双通道
PCR-
荧光探针法)结果为非结核分枝杆菌核
酸阳性。结核分枝杆菌核酸检测
(RNA
恒温扩增)结果为结
核分枝杆菌阳性。为进一步验证双通道
PCR
-荧光探针法的
假阴性及
RNA
恒温扩增检测假阳性的可能,用同一份标本
进行结核分枝杆菌核酸检测
(
恒温扩增荧光法
),
结果为阴性
;
GeneXpert MTB/RIF
检测（巢式探针
-
焚光定量
PCR
法）结
核分枝杆菌阳性，利福平野生型。同时对患者人院标本进行
分枝杆菌
BACTEC MGIT 960
液体培养，
1
周后痰培养分枝
杆菌阳性
.MPB 64
单克隆抗体检测阳性。痰标本直接提取
的核酸样本及培养后细菌提取的核酸样本同时做分枝杆菌
菌种基因鉴定（
DNA
微阵列芯片法）结果均为结核分枝杆
菌。为进一步明确分子生物学检测结果不一致的原因，通过
痰标本直接提取核酸及培养后细菌提取核酸进行《们】
0
基
因测序
.
测序结果显示，该例患者感染的结核分枝杆菌为
基因零拷贝菌株。对培养后的菌株进行结核分枝杆
菌药物敏感性
(
微孔板法）试验显示除异烟肼和帕司烟肼耐
药外，其余药品均敏感。
影像学检查
:
患者人院前查胸部
CT(
山阳县中医医院，
2020-06-11):
胸廓对称无畸形，双侧肺野透光度降低，支气
中国防痨杂志
2021
年
3
月第
.〗3
卷第
3
期
Chin J 2021
，
V
〇
I. 43,No. 3
管血管束增重、紊乱
,
双肺弥漫性粟粒状、
斑片状及条索状密度稍高影.双肺上叶后
段可见较大不规则厚壁空洞，边缘毛糙，
壁内凹凸不平，不光整，心影形态大小未
见异常。人院后在我院查胸部
• 303 •
CT(2020-
07-06
):双肺多叶多段有散在分布微小结
节密度增高影并空洞形成；尘肺；双侧胸
腔积液及胸膜增厚粘连（图
1
〜
4
)。
治疗情况:患者住院初期分子诊断已
明确为结核分枝杆菌感染.而培养结果未
出，无法进行药物敏感性检测，且患者病
情复杂，病灶较重.遂给予左氧氟沙星加
强抗结核治疗，联合
H-R-ZKH:
异烟肼；
图
1
〜
4
患者，男，
50
岁。胸部
CT
扫描
(2020-07-06)
显示，双肺弥漫分布粟粒状、斑片状
R:
利福平
;Z:
吡嗪酰胺；
E:
乙胺丁醇)方案
行抗结核治疗，并常规辅以预防性保肝治
疗。人院
及条索样密度增高影
.
边界欠清晰
•
密度不均匀，双肺上叶近肺门处病灶实变，以右肺为
著，局部伴空洞形成
.
右肺上叶部分支气管变窄
;
双肺门可见增大的淋巴结，伴钙化；双侧
胸膜增厚、粘连
15 d
后分枝杆菌培养阳性，微孔
板药物敏感性检测结果提示患者对异烟
肼和帕司烟肼耐药，胸部
CT
检查（
2020-07-06
)结果显示治
usno
为靶点的分子检测可能造成假阴性结果的可能。
在结核分枝杆菌检测中具有特异性、稳定性及高拷
疗效果不理想。经过评估，对该例患者治疗方案进行修正，
继续给予左氧氟沙星加强抗结核治疗，联合
R-Z-E-Am
贝性，相比于单拷贝的其他序列如
更高的敏感度和特异度，因此
MPB64
、
MTP40
等具有
(Am:
阿米卡星）方案行抗结核治疗,并转至耐药科继续治
疗
,
患者诉因家庭原因坚持出院，于
出院。
/S6]]0
是目前临床分子生物
2020
年
7
月
8
日办理
学结核分枝杆菌诊断最常用的扩增粑点[6:。
但是
以
/6'6
】』
0
低拷贝甚至零拷贝的结核分枝杆菌将会对
IS6110
为检测粑点的检测方法的阳性率及准确性造成一
IS6110
缺失菌株(北京基因古
13. 5%
〜
23. 57
%&7]。
讨 论
定影响。我国已有文献报道
结核分枝杆菌复合群是引起肺结核的主要病原体，
代株)在中国不同地区的流行率为
裴秀英等
IS6110
是结核分枝杆菌基因组中的一段多拷贝保守序列，
含有
M
对
16
株分离自上海的结核分枝杆菌菌株应用
术进行研究，发现
1361 bp
核苷酸和
28 bp
的反向末端的重复序列，只存
RFLP
技
1
株
IS6110
零拷贝株和
1
株
在于结核分枝杆菌复合群中[2]。对于我国广泛流行的北京
基因型结核分枝杆菌
:3:
，根据菌株基因组核转录因子
(nuclear
IS6110
单拷贝株。然而
.
目前对于中国大部分地区
IS6110
拷贝数分布的研究还不足.低拷贝或零拷贝菌株对临床诊断
的影响还需要进一步探究。
本例患者人院初期应用以和
分枝杆菌复合群核酸检测方法（双通道
transcription factors
，
NTF
)区域中是否存在结核分枝杆菌特
异性插人序列
（insertion sequence
，
IS)6110
,可分为北京基因
型古代株和北京基因型现代株
代株的
/«05
为靶基因的
2
个亚型[4]。北京基因型古
北京基因型现代株
PCR-
荧光探针法），
16S
NTF
区中没有
/^no,
而
NTF
结果为非结核分枝杆菌阳性，而以结核分枝杆菌复合群
区中至少含有
1
个
K6IJ0
。
IS6110
、
rRNA
序列特异性片段为靶标的结核分枝杆菌核酸检测方
法
近年来，基于针对结核分枝杆菌特定序列的
(RNA
恒温扩增
)
结果为结核分枝杆菌.出现两种分子生
hsp65
、
16S rRNA
、中
)B RRDR
区域、
85B
抗原
、38 kDa
抗原
物学检测结果不一致的情况。为进一步验证检测结果的准
确性
.
笔者又应用以
的某些序列的聚合酶链反应（
PCR)
扩增.已经开发了许多结
核病分子诊断方法。虽然大多数结核分枝杆菌分离株中
7.S6]]0
为单耙基因的结核分枝杆菌核
.
酸检测方法
(
恒温扩增荧光法），结果为结核分枝杆菌阴性
而以基因
W
基因为高拷贝基因，但谢彤等
[:>
报道天津地区
517
81 bp
利福平耐药核心区域（
RRDR
)为靶基
测（巢式探针
-
荧光定量
例临床分离株中
70
株为
/•S6]]0
基因缺陷株，其检出率髙达
因的
GeneXpert MTB/RIF
检
PCR
13. 5%,
所以临床应用中要警惕单拷贝或零拷贝分离株对以
法）
,
结果为结核分枝杆菌
.
利福平敏感。基于
4
种不同的分
• 304 •
中国防痨杂志 2021 年 3 月第 43 卷第 3 期 Chin J Antituberc,March 2021,V〇1. 43,No. 3
子生物学检测试剂得到的检测结果存在差异，通过分析各种
检测试剂的检测原理及检测靶点，怀疑为基因缺失
菌株.最后通过测序技术鉴定该例患者感染菌株为
测人员需要对不同检测试剂的检测原理进行熟练掌握，当不
同试验的检测结果出现不一致时，要积极协助临床进行分
析，以免出现错误判断
•
延误患者的诊断与治疗。
基因缺失。
本例患者出现两种分子生物学检测结果不一致的情况，
对针对
1S6110
单耙点的
PCR
方法在结核分枝杆菌检测方
面的可靠性会造成影响，导致假阴性结果的出现.而低拷贝
菌株因其多态性有限，也同样会影响其在基因分型中的鉴定
能力。因此，在结核病诊断方面需联合其他的基因靶点，如
MPB64
、
MTP40
、
16S rRNA
、
hsp65
等组成多重
PCR
法提高
临床标本中分枝杆菌检测的准确性。
除了选择合适的靶基因，不同原理的分子生物学检测技
术对结核分枝杆菌核酸检测阳性率也有一定的差异。本例
患者应用
4
种方法对结核分枝杆菌进行核酸检测，在实际应
用中都有可能出现假阳性或假阴性的情况.无法对原始标本
中结核分枝杆菌拷贝数实现绝对定量。数字聚合酶链式反
应
（digital polymerase chain reaction
，
dPCR
)是一项基于单分
子目标基因
PCR
扩增的绝对定量技术，比标准实时反转录
-
聚合酶链反应
（reverse transcription-polymerase chain reac_.
tion
，
RT-PCR)
具有更高的敏感度和准确性，且
dPCR
具有
无需循环
CT
值和标准曲线即可实现样品中
DNA
分子绝对
定量的优点[9]，未来可能对于低浓度和低拷贝的结核分枝杆
菌核酸检测具有广泛的应用前景，但还需进行更多的研究加
以证实。
综上，基于目前结核分枝杆菌的分子生物学检测诊断试
剂的广泛应用，要警惕单拷贝或者零拷贝分离株对以
IS6110
为靶点的分子检测可能造成假阴性结果的可能。实验室检
参考文献
[1]
中华医学会结核病学分会临床检验专业委员会.结核病病原
学分子诊断专家共识
.
中华结核和呼吸杂志，
2018,41 (9):
688-695. doi
：
10. 3760/cma. j. issn. 1001-0939. 2018. 09. 008.
[2] Thierry D» Brisson-Noel A, Vincent-Levy-Frebault V, et al.
Characterization of a Mycobacterium tuberculosis insertion
sequence
，
IS6110，and its application in diagnosis. J Clin
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2668-2673. doi
：
10. 1128/JCM. 28.
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328-337. doi
：
10. 1016/
S1473-3099C07)70108-1.
[4] Mokrousov I, Ly HM, Otten T, et al. Origin and primary dis
persal of the Mycobacterium tuberculosis Beijing genotype
：
clues
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1357-1364. doi
：
10. 1101/gr. 3840605.
[5]
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2018, 40(3): 269-273. doi:
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[6]
刘东鑫.中国结核分枝杆菌耐药特征研究及新型恒温扩增诊
断方法的建立
.
北京：中国疾病预防控制中心，
2019.
[7]
刘美伶
.
华东部分地区
W
-北京基因型结核分枝杆菌传播特征
研究
.
上海：复旦大学，
2013.
[8]
裴秀英，戴寿芝，王民，等
.IS6110
-限制性片段长度多态性
DNA
分型在结核分子流行病学研究中的应用.中华结核和呼
吸杂志，
2002, 25(1): 18-20. doi:10.3760/j:issn:1001-0939.
2002. 01. 006.
[9] Whale AS, Bushell CA, Grant PR» et al. Detection of Rare
Drug ResivStance Mutations by Digital PCR in a Human Influenza
A Virus Model System and Clinical Samples. J Clin Microbiol.
2016, 54(2
)：
392-400. doi
：
10. 1128/JCM. 02611-15.
(
收稿日期：
2020-ll-07)
(
本文编辑
:
郭萌）
2024年8月1日发(作者：淳于觅荷)
• 302 •
中国防痨杂志 2021 年 3 月第 43 卷第 3 期 Chin J Antituben^March 2021，V〇1. 43,No. 3
•病例报告•
LSWiO基因缺失结核分枝杆菌感染的肺结核一例
谈小文王媛崔晓利党丽云雷静任斐赵国连
分子生物学检测方法因其具有检测敏感度高、特异性强
和时效性高等特点，成为结核病快速珍断的重要检测手段。
对于分子生物学检测，寻找检测效率高且存在特异性的靶基
因尤为重要，分子检测靶基因的种属特异性和多拷贝序列是
确保检测结果准确性和高效性的重要因素。结核病分子生
物学病原诊断常用的诊断靶标有
rfiiVAjqB
和基因等，以上基因均属于管家基因。其中
IS6n
〇为
多拷贝基因，其用于病原学诊断敏感度高于单拷贝基因，但
是基因并非存在于所有结核分枝杆菌中，有的菌株
/S6]
〗
0
基因缺失，可能造成假阴性结果
2
。本研究对西安
市胸科医院收治的
1
例基因零拷贝菌株感染的结核
病患者病原学诊断过程及分离株测序结果进行分析，旨在为
临床诊断工作提供借鉴。
临床资料
患者，男，
50
岁。因间断咳嗽、咳痰、胸闷、气促
10
个
月，伴发热
1
周，于
2020
年
6
月
13
日入住西安市胸科医院。
患者
5
年前无明显诱因出现咳嗽、咳白色黏痰，未行特殊处
理。
2019
年
8
月
27
日患者因胸闷、气促，就诊于当地医院，
诊断为
“
尘肺
”
，给予对症治疗后症状稍有好转，但活动后仍
感到气促，休息后可缓解，随着病程进展，气促症状逐渐加
重。患者于
2020
年
6
月
5
日出现发热，最高体温
37.9
。，午
后明显
.
无畏寒、寒颤，就诊于山阳县中医医院，行胸部
CT
示双肺出现病灶并形成空洞，不排除肺结核可能，遂来我院
做进一步诊断治疗。患病期间，患者无咯血，无胸痛和心慌，
无恶心和呕吐，体质量
6
个月减轻
10 kg
。
人院时体格检查:体温
37 °C
，
脉搏
92
次
/min,
呼吸频率
开放科学（资源服务）标识码（
OSID)
的开放科
学计划以二维码为入口，提供丰富的线上扩展
功能，包括作者对论文背景的语音介绍、该研究
的附加说明、与读者的交互问答、拓展学术圈等。
读者“扫一扫”此二维码即可获得上述增值服务。
doi
：
10. 3969/j. issn. 1000-6621. 2021. 03. 020
基金项目：陕西省重点研发计划项目（
2018SF-254)
作者单位
:71010
〇西安市胸科医院检验科
通信作者：赵国连，
Email:****************
24
次
/min
,血压
140/100 mmHg(l mmHg=0. 133 kPa
)。患
者神志清楚
•
呼吸平稳，口齿清晰，全身皮肤黏膜无黄染，全
身浅表淋巴结无肿大
;
胸廓正常，无肋间隙增宽;双肺叩诊清
音，呼吸音粗，闻及干性啰音
;
心率
92
次
/min,
节律齐，无杂
音
;
腹部柔软，无压痛、反跳痛
;
肝脾肋下未扪及；四肢活动正
常，双下肢未见浮肿。
实验室检查：白细胞（
WBC) 5. 53 X 109/L[
正常范围：
(3.50
〜
9.50)
乂
109/1^],
血红蛋白（只
13)88/1(
正常范围：
13
〇〜
l75g/L),
血红细胞沉降率（
ESR)25 _/1 h
(正常范
围：
0
〜
15mm/l h),C
反应蛋白（
CRP)130. 94 mg/L
(正常范
围：
0
〜
6_00 mg/L);
抗链球菌溶素
O(ASO
)、类风湿因子
(1^)
、免疫球蛋白（每
0
、
181^
、
18
八
)
均阴性
,
结核感染
1
'细胞
斑点试验
(T-SPOT. TB)
阳性；降钙素原
1. 05 Fg/L
(正常范
围：
0
〜
0_ 50
吨
/L);
结核抗体五项
:38kDa
抗体阳性，培养滤液
蛋白
10(CFP-10)
抗体阳性，其余为阴性。痰标本涂片分枝
杆菌抗酸染色阳性
（+ + + +
)。痰标本分枝杆菌复合群核
酸检测
(
双通道
PCR-
荧光探针法)结果为非结核分枝杆菌核
酸阳性。结核分枝杆菌核酸检测
(RNA
恒温扩增)结果为结
核分枝杆菌阳性。为进一步验证双通道
PCR
-荧光探针法的
假阴性及
RNA
恒温扩增检测假阳性的可能,用同一份标本
进行结核分枝杆菌核酸检测
(
恒温扩增荧光法
),
结果为阴性
;
GeneXpert MTB/RIF
检测（巢式探针
-
焚光定量
PCR
法）结
核分枝杆菌阳性，利福平野生型。同时对患者人院标本进行
分枝杆菌
BACTEC MGIT 960
液体培养，
1
周后痰培养分枝
杆菌阳性
.MPB 64
单克隆抗体检测阳性。痰标本直接提取
的核酸样本及培养后细菌提取的核酸样本同时做分枝杆菌
菌种基因鉴定（
DNA
微阵列芯片法）结果均为结核分枝杆
菌。为进一步明确分子生物学检测结果不一致的原因，通过
痰标本直接提取核酸及培养后细菌提取核酸进行《们】
0
基
因测序
.
测序结果显示，该例患者感染的结核分枝杆菌为
基因零拷贝菌株。对培养后的菌株进行结核分枝杆
菌药物敏感性
(
微孔板法）试验显示除异烟肼和帕司烟肼耐
药外，其余药品均敏感。
影像学检查
:
患者人院前查胸部
CT(
山阳县中医医院，
2020-06-11):
胸廓对称无畸形，双侧肺野透光度降低，支气
中国防痨杂志
2021
年
3
月第
.〗3
卷第
3
期
Chin J 2021
，
V
〇
I. 43,No. 3
管血管束增重、紊乱
,
双肺弥漫性粟粒状、
斑片状及条索状密度稍高影.双肺上叶后
段可见较大不规则厚壁空洞，边缘毛糙，
壁内凹凸不平，不光整，心影形态大小未
见异常。人院后在我院查胸部
• 303 •
CT(2020-
07-06
):双肺多叶多段有散在分布微小结
节密度增高影并空洞形成；尘肺；双侧胸
腔积液及胸膜增厚粘连（图
1
〜
4
)。
治疗情况:患者住院初期分子诊断已
明确为结核分枝杆菌感染.而培养结果未
出，无法进行药物敏感性检测，且患者病
情复杂，病灶较重.遂给予左氧氟沙星加
强抗结核治疗，联合
H-R-ZKH:
异烟肼；
图
1
〜
4
患者，男，
50
岁。胸部
CT
扫描
(2020-07-06)
显示，双肺弥漫分布粟粒状、斑片状
R:
利福平
;Z:
吡嗪酰胺；
E:
乙胺丁醇)方案
行抗结核治疗，并常规辅以预防性保肝治
疗。人院
及条索样密度增高影
.
边界欠清晰
•
密度不均匀，双肺上叶近肺门处病灶实变，以右肺为
著，局部伴空洞形成
.
右肺上叶部分支气管变窄
;
双肺门可见增大的淋巴结，伴钙化；双侧
胸膜增厚、粘连
15 d
后分枝杆菌培养阳性，微孔
板药物敏感性检测结果提示患者对异烟
肼和帕司烟肼耐药，胸部
CT
检查（
2020-07-06
)结果显示治
usno
为靶点的分子检测可能造成假阴性结果的可能。
在结核分枝杆菌检测中具有特异性、稳定性及高拷
疗效果不理想。经过评估，对该例患者治疗方案进行修正，
继续给予左氧氟沙星加强抗结核治疗，联合
R-Z-E-Am
贝性，相比于单拷贝的其他序列如
更高的敏感度和特异度，因此
MPB64
、
MTP40
等具有
(Am:
阿米卡星）方案行抗结核治疗,并转至耐药科继续治
疗
,
患者诉因家庭原因坚持出院，于
出院。
/S6]]0
是目前临床分子生物
2020
年
7
月
8
日办理
学结核分枝杆菌诊断最常用的扩增粑点[6:。
但是
以
/6'6
】』
0
低拷贝甚至零拷贝的结核分枝杆菌将会对
IS6110
为检测粑点的检测方法的阳性率及准确性造成一
IS6110
缺失菌株(北京基因古
13. 5%
〜
23. 57
%&7]。
讨 论
定影响。我国已有文献报道
结核分枝杆菌复合群是引起肺结核的主要病原体，
代株)在中国不同地区的流行率为
裴秀英等
IS6110
是结核分枝杆菌基因组中的一段多拷贝保守序列，
含有
M
对
16
株分离自上海的结核分枝杆菌菌株应用
术进行研究，发现
1361 bp
核苷酸和
28 bp
的反向末端的重复序列，只存
RFLP
技
1
株
IS6110
零拷贝株和
1
株
在于结核分枝杆菌复合群中[2]。对于我国广泛流行的北京
基因型结核分枝杆菌
:3:
，根据菌株基因组核转录因子
(nuclear
IS6110
单拷贝株。然而
.
目前对于中国大部分地区
IS6110
拷贝数分布的研究还不足.低拷贝或零拷贝菌株对临床诊断
的影响还需要进一步探究。
本例患者人院初期应用以和
分枝杆菌复合群核酸检测方法（双通道
transcription factors
，
NTF
)区域中是否存在结核分枝杆菌特
异性插人序列
（insertion sequence
，
IS)6110
,可分为北京基因
型古代株和北京基因型现代株
代株的
/«05
为靶基因的
2
个亚型[4]。北京基因型古
北京基因型现代株
PCR-
荧光探针法），
16S
NTF
区中没有
/^no,
而
NTF
结果为非结核分枝杆菌阳性，而以结核分枝杆菌复合群
区中至少含有
1
个
K6IJ0
。
IS6110
、
rRNA
序列特异性片段为靶标的结核分枝杆菌核酸检测方
法
近年来，基于针对结核分枝杆菌特定序列的
(RNA
恒温扩增
)
结果为结核分枝杆菌.出现两种分子生
hsp65
、
16S rRNA
、中
)B RRDR
区域、
85B
抗原
、38 kDa
抗原
物学检测结果不一致的情况。为进一步验证检测结果的准
确性
.
笔者又应用以
的某些序列的聚合酶链反应（
PCR)
扩增.已经开发了许多结
核病分子诊断方法。虽然大多数结核分枝杆菌分离株中
7.S6]]0
为单耙基因的结核分枝杆菌核
.
酸检测方法
(
恒温扩增荧光法），结果为结核分枝杆菌阴性
而以基因
W
基因为高拷贝基因，但谢彤等
[:>
报道天津地区
517
81 bp
利福平耐药核心区域（
RRDR
)为靶基
测（巢式探针
-
荧光定量
例临床分离株中
70
株为
/•S6]]0
基因缺陷株，其检出率髙达
因的
GeneXpert MTB/RIF
检
PCR
13. 5%,
所以临床应用中要警惕单拷贝或零拷贝分离株对以
法）
,
结果为结核分枝杆菌
.
利福平敏感。基于
4
种不同的分
• 304 •
中国防痨杂志 2021 年 3 月第 43 卷第 3 期 Chin J Antituberc,March 2021,V〇1. 43,No. 3
子生物学检测试剂得到的检测结果存在差异，通过分析各种
检测试剂的检测原理及检测靶点，怀疑为基因缺失
菌株.最后通过测序技术鉴定该例患者感染菌株为
测人员需要对不同检测试剂的检测原理进行熟练掌握，当不
同试验的检测结果出现不一致时，要积极协助临床进行分
析，以免出现错误判断
•
延误患者的诊断与治疗。
基因缺失。
本例患者出现两种分子生物学检测结果不一致的情况，
对针对
1S6110
单耙点的
PCR
方法在结核分枝杆菌检测方
面的可靠性会造成影响，导致假阴性结果的出现.而低拷贝
菌株因其多态性有限，也同样会影响其在基因分型中的鉴定
能力。因此，在结核病诊断方面需联合其他的基因靶点，如
MPB64
、
MTP40
、
16S rRNA
、
hsp65
等组成多重
PCR
法提高
临床标本中分枝杆菌检测的准确性。
除了选择合适的靶基因，不同原理的分子生物学检测技
术对结核分枝杆菌核酸检测阳性率也有一定的差异。本例
患者应用
4
种方法对结核分枝杆菌进行核酸检测，在实际应
用中都有可能出现假阳性或假阴性的情况.无法对原始标本
中结核分枝杆菌拷贝数实现绝对定量。数字聚合酶链式反
应
（digital polymerase chain reaction
，
dPCR
)是一项基于单分
子目标基因
PCR
扩增的绝对定量技术，比标准实时反转录
-
聚合酶链反应
（reverse transcription-polymerase chain reac_.
tion
，
RT-PCR)
具有更高的敏感度和准确性，且
dPCR
具有
无需循环
CT
值和标准曲线即可实现样品中
DNA
分子绝对
定量的优点[9]，未来可能对于低浓度和低拷贝的结核分枝杆
菌核酸检测具有广泛的应用前景，但还需进行更多的研究加
以证实。
综上，基于目前结核分枝杆菌的分子生物学检测诊断试
剂的广泛应用，要警惕单拷贝或者零拷贝分离株对以
IS6110
为靶点的分子检测可能造成假阴性结果的可能。实验室检
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(
收稿日期：
2020-ll-07)
(
本文编辑
:
郭萌）