2024年8月2日发(作者：韦绢)
BeijingSolarbioScience&TechnologyCo.,Ltd
Tel:400-968-6088
Fax:
Http://
EdUApollo488invitrokit
货号：
CA1172
规格：
100T
保存：室温运输，
2-8°C
储存，勿冻存，荧光试剂请避光保存，可稳定储存一年。
试剂
EdU
溶液
(
试剂
A)
Apollo
反应缓冲液
(
试剂
B)
Apollo催化剂溶液(试剂C)
Apollo荧光染料溶液(试剂D)
Apollo缓冲添加剂(试剂E)
Hoechst33342(试剂F)
浓度
1000×
20×
100×
300×
粉末
100×
规格
20μL
500μL
100μL
30μL
100mg
150μL
产品说明：
EdU
（
5-Ethynyl-2’-deoxyuridine
）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替胸腺
嘧啶（
T
）渗入正在复制的
DNA
分子中，通过基于
EdU
与
Apollo
荧光染料的特异性反应快速检测细胞
DNA
复制活性，可快速准确的检测细胞的增值能力。与
BrdU
检测方法相比，
EdU
检测方法更快速、
更灵敏、更准确。
EdU
与
T
非常相似，而
EdU
染料只有
BrdU
抗体的
1/500
，在细胞内很容易扩散，无
需
DNA
变性（酸解、热解、酶解等），可有效避免样品损伤，而且无需抗原抗体反应，能在细胞和
组织水平更准确地反映
DNA
复制活性。
本试剂盒适用于体外培养细胞的增值检测（
Apollo488
：
Ex=490nm
，
Em=520nm
）。贴壁细胞宜
采用荧光检测方式，适用于荧光显微镜、共聚焦显微镜、高内涵筛选仪检测。悬浮细胞可在孵育
EdU
后进行涂片，涂片后从固定开始跟贴壁细胞采用相同的染色检测流程。
技术参数：
Apollo488：最大激发波长（Ex）：490nm；最大发射波长（Em）：520nm
Hoechst33342：
最大激发波长（
Ex
）：
350nm
；最大发射波长（
Em
）：
461nm
实验准备：
1.1×PBS(pH7.2~7.6)
2.
渗透剂
(
含
0.5%TritonX-100
的
PBS)
3.
甘氨酸溶液
(2mg/mL)
（去离子水配置）
4.细胞固定液(含4%多聚甲醛的PBS)
5.96/24/12/6孔培养板或培养皿等
注意：请使用一次性手套，废液请妥善处理。
操作步骤（仅供参考）：
第
1
页共
4
页
荧光显微镜检测方法（以
96
孔板，
A549
贴壁细胞为例）
1
、
EdU
标记
1.1.
用细胞培养基按
1000
：
1
的比例稀释
EdU
溶液
(
试剂
A)
，制备适量
50μMEdU
培养基；
注：
1
）
EdU
浓度与孵育时间相关，短时间孵育（
<2h
）宜采用高浓度（
10-50μM
），长时间孵育
（
>24h
）宜采用低浓度（
1-10μM
）；
2
）如果需配置
10μMEdU
培养基，需调整为
5000
：
1
稀释比例；
3
）配置好的培养基建议现配现用。
1.2.
每孔加入
100μL50μMEdU
培养基孵育
2
小时，弃培养基；
注：
1
）最佳孵育时间与细胞周期相关（附表），大多数肿瘤细胞系均可采用
2
小时孵育时间；
2
）
EdU
培养基用量以没过细胞为宜，但需要保证
EdU
孵育时间内的营养物质持续供给；
清洗细胞
1-2
次，每次
5
分钟。
注：清洗目的是将未渗入
DNA
的
EdU
洗脱，清洗方式依据不同的细胞类型而定，贴壁不牢的
细胞请降低清洗强度。
2
、细胞固定化
2.1.
每孔加入
50μL
细胞固定液
(
即含
4%
多聚甲醛的
PBS)
室温孵育
30
分钟，弃固定液；
注：
1
）低浓度的多聚甲醛有利于细胞结构的保持，
2
）可采用其他方式进行细胞固定。
2.2.
每孔加入
50μL2mg/mL
甘氨酸，脱色摇床孵育
5
分钟后，弃甘氨酸溶液；
注：目的是中和多聚甲醛，保证染色反应体系；
当采用其他方式进行细胞固定时可酌情省略此步骤；
2.3.
每孔加入
100μLPBS
，脱色摇床清洗
5
分钟，弃
PBS
；
2.4.
每孔加入
100μL
渗透剂
(0.5%TritonX-100
的
PBS)
脱色摇床孵育
10
分钟；
PBS
清洗
1
次，
5
分
钟。
注：当实验需要进行其他抗体染色时，或由于某些细胞类型对染料的吸附性较高，可能需要增
强细胞膜通透性。
3
、
Apollo
染色
3.1.
每孔加入
100μL
的
1×Apollo
染色反应液，避光、室温、脱色摇床孵育
30
分钟后，弃染色反应
液；
注：
1
）染色液用量与细胞量相关，以覆盖细胞为宜；
2
）孵育时间可以进行适当调整，调整范围为
10-30
分钟。
3.2.
加入
100μL
渗透剂
(0.5%TritonX-100
的
PBS)
脱色摇床清洗
2-3
次，每次
10
分钟，弃渗透剂；
3.3.
（可选）每孔每次加入
100μL
甲醇清洗
1-2
次，每次
5
分钟；
PBS
清洗
1
次，每次
5
分钟。
注：由于某些细胞对染料的吸附性较高，需采用加强方式洗脱以降低染料背景。
4
、
DNA
染色
4.1.
用去离子水按
100:1
的比例稀释试剂
F
，制备适量
1×Hoechst33342
反应液，避光保存；
4.2.
每孔加入
100μL1×Hoechst33342
反应液，避光、室温、脱色摇床孵育
30
分钟后，弃染色反应
液；
4.3.
每孔每次加入
100μLPBS
清洗
1-3
次；
4.4.
客户可选择进行其他染色步骤，否则每孔加入
100μLPBS
保存待用。
第
2
页共
4
页
建议染色完成后立即进行观测；如果条件限制，请避光
4℃
湿润保存待测，但不应超过
3
天。
若为细胞爬片或涂片，可使用抗荧光淬灭封片剂封片后
4℃
保存及进行检测。
实验参考
表
1
细胞系
细胞周期
孵育时间
人胚胎细胞
~30min
5min
酵母细胞
~3h
20min
EdU
孵育时间设定参考
人成纤维细胞
~18h
2h
人宫颈癌细胞
~21h
2h
人胚肾细胞系
~25h
2h
人神经细胞
~5d
1d
注：1）EdU孵育时间取决于细胞周期，一般为细胞周期的1/10至1/5，但大多数细胞系均可采用2h
孵育时间；
2）考虑到细胞培养基、温度、湿度、光线等其他因素的影响，细胞周期会有所变化。
表2EdU培养基及染色反应液的使用量参考
96
孔板
EdU培养基
染色反应液
配制顺序
1
2
3
4
5
100μL
100μL
表3
48
孔板
200μL
200μL
24
孔板
300μL
300μL
500μL
469μL
25μL
5μL
1.5μL
5mg
12
孔板
500μL
500μL
1mL
938μL
50μL
10μL
3μL
9mg
6
孔板
1mL
1mL
5mL
4.69mL
250μL
50μL
15μL
44mg
5.5cm
小皿
2mL
2mL
10mL
9.38mL
500μL
100μL
30μL
88mg
Apollo染色反应液的配置参考（现用现配）
Apollo染色反应液
去离子水
Apollo反应缓冲液(试剂B)
Apollo催化剂溶液(试剂C)
Apollo荧光染料溶液(试剂D)
Apollo缓冲添加剂(试剂E)
注：
1
）按顺序配制适量
1×Apollo
染色反应液，以免破坏正常的反应体系
(
现用现配，
30
分钟用完
)
；
2）试剂E为白色粉末，较难准确称量，称量误差范围可稍微放宽，但不应超过±20%。且其较易
氧化，使用后请旋紧管盖，如试剂出现棕黄色，则需报废或更换。
FAQ
1.什么样的信号才是真正的EdU阳性信号？
1）Apollo染色信号与核酸染色信号（Hoechst33342或DAPI等核染信号）完全重合，或者与
核重合的信号明显强于胞浆上的信号（染料附着等）。
2）一般部分细胞上的信号呈现上述特征，而不是全部细胞。
2.整个细胞都有EdU信号，或背景信号很强。
1）染色后洗涤不充分，可尝试加强洗涤解决。
2）染色过程中干片，导致染料粘附严重。
3）多聚甲醛固定时间过长而未使用甘氨酸中和。
4）没有阳性信号曝光过度导致背景严重。
第
3
页共
4
页
3.
没有阳性信号。
1
）
EdU
处理时间太短导致没有阳性信号。体外细胞实验一般
EdU
处理时间宜为细胞周期长度
的
1/5-1/10
，阳性率约为
20%-30%
，体内实验需根据目的组织细胞的增值速度进行调整，若细胞增
值速度慢，需要采用长时间的
EdU
处理时间，
2
）对于阴性结果，可设置阳性对照（常见肿瘤细胞株如
HelaEdU
处理
2
小时或者
EdU
处理
6
小时以上的小鼠小肠上皮组织）以确认染色过程无误，对于目的样品，可使用较长的
EdU
处理时间
以尽量先检测出信号，再根据具体信号比例进行
EdU
处理时间的调整。
3
）染色过程干片，导致染料粘附严重
4.
细胞中表达
GFP
，
Apollo
染色后检测不到
GFP
的荧光信号。
Apollo
染料会造成
GFP
的失活，故
Apollo
染色后无法直接检测
GFP
，建议可以使用
GFP
抗体
进行复染医间接检测
GFP
。
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2024年8月2日发(作者：韦绢)
BeijingSolarbioScience&TechnologyCo.,Ltd
Tel:400-968-6088
Fax:
Http://
EdUApollo488invitrokit
货号：
CA1172
规格：
100T
保存：室温运输，
2-8°C
储存，勿冻存，荧光试剂请避光保存，可稳定储存一年。
试剂
EdU
溶液
(
试剂
A)
Apollo
反应缓冲液
(
试剂
B)
Apollo催化剂溶液(试剂C)
Apollo荧光染料溶液(试剂D)
Apollo缓冲添加剂(试剂E)
Hoechst33342(试剂F)
浓度
1000×
20×
100×
300×
粉末
100×
规格
20μL
500μL
100μL
30μL
100mg
150μL
产品说明：
EdU
（
5-Ethynyl-2’-deoxyuridine
）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替胸腺
嘧啶（
T
）渗入正在复制的
DNA
分子中，通过基于
EdU
与
Apollo
荧光染料的特异性反应快速检测细胞
DNA
复制活性，可快速准确的检测细胞的增值能力。与
BrdU
检测方法相比，
EdU
检测方法更快速、
更灵敏、更准确。
EdU
与
T
非常相似，而
EdU
染料只有
BrdU
抗体的
1/500
，在细胞内很容易扩散，无
需
DNA
变性（酸解、热解、酶解等），可有效避免样品损伤，而且无需抗原抗体反应，能在细胞和
组织水平更准确地反映
DNA
复制活性。
本试剂盒适用于体外培养细胞的增值检测（
Apollo488
：
Ex=490nm
，
Em=520nm
）。贴壁细胞宜
采用荧光检测方式，适用于荧光显微镜、共聚焦显微镜、高内涵筛选仪检测。悬浮细胞可在孵育
EdU
后进行涂片，涂片后从固定开始跟贴壁细胞采用相同的染色检测流程。
技术参数：
Apollo488：最大激发波长（Ex）：490nm；最大发射波长（Em）：520nm
Hoechst33342：
最大激发波长（
Ex
）：
350nm
；最大发射波长（
Em
）：
461nm
实验准备：
1.1×PBS(pH7.2~7.6)
2.
渗透剂
(
含
0.5%TritonX-100
的
PBS)
3.
甘氨酸溶液
(2mg/mL)
（去离子水配置）
4.细胞固定液(含4%多聚甲醛的PBS)
5.96/24/12/6孔培养板或培养皿等
注意：请使用一次性手套，废液请妥善处理。
操作步骤（仅供参考）：
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荧光显微镜检测方法（以
96
孔板，
A549
贴壁细胞为例）
1
、
EdU
标记
1.1.
用细胞培养基按
1000
：
1
的比例稀释
EdU
溶液
(
试剂
A)
，制备适量
50μMEdU
培养基；
注：
1
）
EdU
浓度与孵育时间相关，短时间孵育（
<2h
）宜采用高浓度（
10-50μM
），长时间孵育
（
>24h
）宜采用低浓度（
1-10μM
）；
2
）如果需配置
10μMEdU
培养基，需调整为
5000
：
1
稀释比例；
3
）配置好的培养基建议现配现用。
1.2.
每孔加入
100μL50μMEdU
培养基孵育
2
小时，弃培养基；
注：
1
）最佳孵育时间与细胞周期相关（附表），大多数肿瘤细胞系均可采用
2
小时孵育时间；
2
）
EdU
培养基用量以没过细胞为宜，但需要保证
EdU
孵育时间内的营养物质持续供给；
清洗细胞
1-2
次，每次
5
分钟。
注：清洗目的是将未渗入
DNA
的
EdU
洗脱，清洗方式依据不同的细胞类型而定，贴壁不牢的
细胞请降低清洗强度。
2
、细胞固定化
2.1.
每孔加入
50μL
细胞固定液
(
即含
4%
多聚甲醛的
PBS)
室温孵育
30
分钟，弃固定液；
注：
1
）低浓度的多聚甲醛有利于细胞结构的保持，
2
）可采用其他方式进行细胞固定。
2.2.
每孔加入
50μL2mg/mL
甘氨酸，脱色摇床孵育
5
分钟后，弃甘氨酸溶液；
注：目的是中和多聚甲醛，保证染色反应体系；
当采用其他方式进行细胞固定时可酌情省略此步骤；
2.3.
每孔加入
100μLPBS
，脱色摇床清洗
5
分钟，弃
PBS
；
2.4.
每孔加入
100μL
渗透剂
(0.5%TritonX-100
的
PBS)
脱色摇床孵育
10
分钟；
PBS
清洗
1
次，
5
分
钟。
注：当实验需要进行其他抗体染色时，或由于某些细胞类型对染料的吸附性较高，可能需要增
强细胞膜通透性。
3
、
Apollo
染色
3.1.
每孔加入
100μL
的
1×Apollo
染色反应液，避光、室温、脱色摇床孵育
30
分钟后，弃染色反应
液；
注：
1
）染色液用量与细胞量相关，以覆盖细胞为宜；
2
）孵育时间可以进行适当调整，调整范围为
10-30
分钟。
3.2.
加入
100μL
渗透剂
(0.5%TritonX-100
的
PBS)
脱色摇床清洗
2-3
次，每次
10
分钟，弃渗透剂；
3.3.
（可选）每孔每次加入
100μL
甲醇清洗
1-2
次，每次
5
分钟；
PBS
清洗
1
次，每次
5
分钟。
注：由于某些细胞对染料的吸附性较高，需采用加强方式洗脱以降低染料背景。
4
、
DNA
染色
4.1.
用去离子水按
100:1
的比例稀释试剂
F
，制备适量
1×Hoechst33342
反应液，避光保存；
4.2.
每孔加入
100μL1×Hoechst33342
反应液，避光、室温、脱色摇床孵育
30
分钟后，弃染色反应
液；
4.3.
每孔每次加入
100μLPBS
清洗
1-3
次；
4.4.
客户可选择进行其他染色步骤，否则每孔加入
100μLPBS
保存待用。
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建议染色完成后立即进行观测；如果条件限制，请避光
4℃
湿润保存待测，但不应超过
3
天。
若为细胞爬片或涂片，可使用抗荧光淬灭封片剂封片后
4℃
保存及进行检测。
实验参考
表
1
细胞系
细胞周期
孵育时间
人胚胎细胞
~30min
5min
酵母细胞
~3h
20min
EdU
孵育时间设定参考
人成纤维细胞
~18h
2h
人宫颈癌细胞
~21h
2h
人胚肾细胞系
~25h
2h
人神经细胞
~5d
1d
注：1）EdU孵育时间取决于细胞周期，一般为细胞周期的1/10至1/5，但大多数细胞系均可采用2h
孵育时间；
2）考虑到细胞培养基、温度、湿度、光线等其他因素的影响，细胞周期会有所变化。
表2EdU培养基及染色反应液的使用量参考
96
孔板
EdU培养基
染色反应液
配制顺序
1
2
3
4
5
100μL
100μL
表3
48
孔板
200μL
200μL
24
孔板
300μL
300μL
500μL
469μL
25μL
5μL
1.5μL
5mg
12
孔板
500μL
500μL
1mL
938μL
50μL
10μL
3μL
9mg
6
孔板
1mL
1mL
5mL
4.69mL
250μL
50μL
15μL
44mg
5.5cm
小皿
2mL
2mL
10mL
9.38mL
500μL
100μL
30μL
88mg
Apollo染色反应液的配置参考（现用现配）
Apollo染色反应液
去离子水
Apollo反应缓冲液(试剂B)
Apollo催化剂溶液(试剂C)
Apollo荧光染料溶液(试剂D)
Apollo缓冲添加剂(试剂E)
注：
1
）按顺序配制适量
1×Apollo
染色反应液，以免破坏正常的反应体系
(
现用现配，
30
分钟用完
)
；
2）试剂E为白色粉末，较难准确称量，称量误差范围可稍微放宽，但不应超过±20%。且其较易
氧化，使用后请旋紧管盖，如试剂出现棕黄色，则需报废或更换。
FAQ
1.什么样的信号才是真正的EdU阳性信号？
1）Apollo染色信号与核酸染色信号（Hoechst33342或DAPI等核染信号）完全重合，或者与
核重合的信号明显强于胞浆上的信号（染料附着等）。
2）一般部分细胞上的信号呈现上述特征，而不是全部细胞。
2.整个细胞都有EdU信号，或背景信号很强。
1）染色后洗涤不充分，可尝试加强洗涤解决。
2）染色过程中干片，导致染料粘附严重。
3）多聚甲醛固定时间过长而未使用甘氨酸中和。
4）没有阳性信号曝光过度导致背景严重。
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没有阳性信号。
1
）
EdU
处理时间太短导致没有阳性信号。体外细胞实验一般
EdU
处理时间宜为细胞周期长度
的
1/5-1/10
，阳性率约为
20%-30%
，体内实验需根据目的组织细胞的增值速度进行调整，若细胞增
值速度慢，需要采用长时间的
EdU
处理时间，
2
）对于阴性结果，可设置阳性对照（常见肿瘤细胞株如
HelaEdU
处理
2
小时或者
EdU
处理
6
小时以上的小鼠小肠上皮组织）以确认染色过程无误，对于目的样品，可使用较长的
EdU
处理时间
以尽量先检测出信号，再根据具体信号比例进行
EdU
处理时间的调整。
3
）染色过程干片，导致染料粘附严重
4.
细胞中表达
GFP
，
Apollo
染色后检测不到
GFP
的荧光信号。
Apollo
染料会造成
GFP
的失活，故
Apollo
染色后无法直接检测
GFP
，建议可以使用
GFP
抗体
进行复染医间接检测
GFP
。
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