2024年3月8日发(作者:昌半香)
OLYMPUS钠钾氯离子选择性电极ISE间接电位法测定作业指导书
1. 实验原理[1]
传统的血液样品的离子检测方法是用火焰光度学方法,样品被已知离子(通常为锂离子或铯离子)浓度的溶液稀释,雾化并通过火焰成为离子态。这些离子象不同频率的光子一样稀放能量,光的强度与样品中的离子浓度有关。新发现的钠离子选择性玻璃、和选择性吸收钾和氯的有机化合物使得探测器可以直接接触生物体液进行测量,这些感受器即所谓离子选择性电极。
OLYMPUS 电解质分析仪使用离子选择性电极技术检测生物体液中的钠、钾、氯离子浓度。钠、钾电极采用对钠、钾离子敏感的膜电极;氯电极采用分子机制的PVC膜,仅对氯离子敏感。电极电位可与内参比电极产生的稳定电位比较而测得。离子选择性电极使得电位随样品的离子浓度的改变而改变,变化的电位
与离子浓度呈对数关系,以能斯特方程表示:
RT㏑(γC)
E=E+——————
NF
其中:E=在样品溶液中的电极电位
E=在标准状态下的电极电位
RT/nF=一个与电极反应值有关的常量
㏑=取自然对数
r=溶液中的离子活度
c=溶液中的离子浓度
检测时利用了比较法。首先,加入样品,再加入稀释液,混匀后吸进装载电极的分析单元中,测量电位,然后加入标准液测量电位,测量电位,二者的差与样品中钠、钾、氯离子浓度和它们在标准液中的浓度之比存在对数关系,因已知电位与标准液中钠、钾、氯离子浓度的关系,计算机可据能斯特方程计算出样品中钠、钾、氯离子浓度。
0
2. 标本采集[2,3]
2.1 病人准备:无特殊要求。最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
2.2 类型:血清、肝素锂抗凝血浆或尿液。
3. 标本采集、处理与贮存:应尽量避免标本溶血或严重脂血。溶血标本,红细胞中的钾会释放到血清或血浆中,造成假性钾便高。因此血清、肝素锂抗凝血浆标本应及时离心分离血清或血浆并避免残留红细胞。严重脂血的标本,会造成假性低、钠钾血症,应通过超速离心消除脂血的影响。血清或血浆标本的稳定性:在2~25℃贮存,氯稳定7天,钾6周,钠2周。24小时尿液标本不添加防腐剂,混浊尿应离心后吸取上清液,严禁酸化尿液。尿标本的稳定性:在2~25℃贮存,氯稳定7天[6],钾在2~8℃贮存稳定2个[4]月,在15~25℃贮存稳定45天稳定45天[4],钠在2~25℃贮存。
4. 标本运输:室温条件下运输
5. 标本拒收标准:细菌污染、溶血、严重脂血的不能做测定。
6. 实验材料:
6.1 日本OLYMPUS ISE试剂与标准液
浓度
试剂稳货号 试剂名称 规格 成分 (单位:定性
mol/L)
Triethanola66320
ISE缓冲液
4×mine
2000ml
防腐剂
Na
66319
ISE中值
标准液
4×2000ml
K
Cl
防腐剂
66318
ISE参比液
4×1000ml
氯化钾
防腐剂
4.3
0.13
1个月
3.1
适量
1.0
2个月
适量
适量
0.1
2个月
Na
ISE低值6631血清标准7
液
防腐剂
Na
ISE高值6631血清标准6
液
防腐剂
100ml Cl
4×K
100ml Cl
4×K
130
3.5
90天
85
适量
160
6
90天
120
适量
低(50)高(200)
Na
ISE低/高6631值尿标准5
液
防腐剂
(180)
适量
6631ISE内参2×25ml 氯化钾 3.3 90天
100ml Cl
低(50)高4×K
(100) 90天
低(10)高
4 比液 氯化银
防腐剂
饱和
适量
ISE Na/K6631选择性监7
测液
6.1.1 试剂组成:见上表。
6.1.2 试剂准备:试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存
货号为66314的试剂应保存于15~25℃,若开启使用,在15~25℃保存可稳定90天。其它试剂未开启前在2~25℃保存可稳定至失效期;一旦开启在2~25℃保存其有效期见上表。
6.1.4 变质指示:当试剂有浊度时,表明有细菌污染或过失效期不能继续使用。
6.1.5 注意事项:货号为66317、66316、66315、66314和66313的试剂在每次使用后均应立即盖好盖子。ISE内参比液在保存期间可有部分沉淀释出,这不会影响2×25ml
防腐剂 适量
Na 150
90天
试剂性能,但在使用前应充分混匀试剂。试剂中含防腐剂。不可入口!避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品:使用OLYMPUS公司提供的ISE低/高值血清标准液或ISE低/高值尿标准液对自动分析仪进行校准,每天开机前校准或在下列情况下校准:试剂批号更换、质控数值明显漂移或失控、更换电极、主要的预防性保养后或关键部件更换后。
6.3 质控品:具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
7. 仪器:奥林巴斯AU1000 ISE 分析仪
8. 操作步骤:参见AU1000 ISE分析仪操作规程.SOP文件
9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制:在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。
质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法:使用OLYMPUS公司提供的ISE低/高值血清标准液或ISE低/高值尿标准液校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果,以mmol/L报告。
12. 参考值范围(成人)见下表:
血清
钠 钾 氯
136-146mm3.5-5.1mm98-106mmool/L ol/L l/L
血浆 136-146mm3.4-4.5mm98-106mmool/L ol/L l/L
尿液(24小40-220mmo25-125mmo110-250mm时) l/天 l/天 ol/天
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验,每个实验室应建立自己的参考值。(由于分析方法局限性,应注意对高脂血症和高蛋白血症的病人标本检测结果的解释。)
13. 临床意义
13.1 钾离子是细胞内液中的主要阳离子。钾离子测定可用于诊断电解质失衡,心律不齐,肌无力,肝脑病变和肾衰竭,并在糖尿病和静脉输液治疗中检测酮酸中毒。并发醛固酮过多症的高血压患者,超过90%的人K浓度很低。呕吐,腹泻,嗜酒和叶酸缺乏症都可引起K 浓度降低。快速输入K ,晚期肾衰,溶血性病变,外伤,Addison氏综合症,代谢性酸中毒,急性饥饿症,脱水和急救等均可引起K浓度升高。通常情况下, K 经肾小球过滤掉,但在K浓度较低时,
K会保留下来。在饮食增加,高醛固酮症,肾小管性酸中毒和碱中毒发病时,尿液中K的含量上升。
13.2 钠离子是细胞外液中的主要阳离子,人体内的钠平衡由肾脏维持。尿液排泄过多,腹泻,Addison氏综合症,肾小管肾炎等都可引起钠浓度降低。严重脱水,某些类型的脑外伤,糖尿病昏迷和盐摄入过量可导致钠浓度升高。
++++++++
13.3 氯离子是细胞外液中的主要阴离子,它的生理重要性在于能保持人体正常的水代谢,渗透压和细胞外液中正常的离子平衡。在脱水,肾小管酸中毒(高氯代谢酸中毒),食盐摄入过多等情况下,氯的浓度会升高。在水含量过多,慢性呼吸性酸中毒,失盐性肾炎,代谢性碱中毒和充血性心脏衰竭等情况下,氯的浓度会降低。
14. 操作性能
14.1 线性范围
血清
钠
50-200mmol/L
血浆 50-200mmol/L
尿液 10-400mmol/L
钾
1.0-10.0mmol/L
1.0-10.0mmol/L
2.0-200mmol/L
氯
50-200mmol/L
50-200mmol/L
15-400mmol/L
14.2 精密度:重复性的评估是根据NCCLS推荐的标准
方法,AU1000批内重复性小于3%,总不精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。
批 内 精 总 精 密
N=80
血清:
平均值SD
(mmol/L)
钠
钾
氯
138
4.8
90
0.66
0.03
0.58
0.49
0.65
0.64
0.89
0.04
0.63
0.64
0.76
0.71
CV% SD CV%
密 度 度
批 内 精 总 精 密
N=80
尿液:
平均值SD
(mmol/L)
钠
钾
166
100
0.73
0.48
0.44
0.48
1.29
1.30
0.78
1.29
CV% SD CV%
密 度 度
氯 245 1.06 0.43 2.22 0.90
14.3 方法学比较:奥林巴斯AU1000 ISE分析仪(方法1)与其它商品化的ISE分析仪(方法2),共同做同一批病人标本。相关系数及回归方程如下:
钠方法1=(钠方法2)×1.016-2.428,r=0.981(N=239,病人结果数值分布:118.0-157.0mmol/L)。
钾方法1=(钾方法2)×0.977+0.107,r=0.991(N=238,病人结果数值分布:1.5-7.0mmol/L)。
氯方法1=(氯方法2)×1.024-2.302,r=0.977(N=233,病人结果数值分布:80-125.0mmol/L)。
14.4 灵敏度:本法线性下限为血清/血浆钠为50mmol/L,钾为1.0mmol/L,氯为50mmol/L;尿钠为10mmol/L,钾为2.0mmol/L,氯为15mmol/L。
14.5 病人结果可报告范围:血清/血浆钠为
50-200mmol/L,钾为1.0-10.0mmol/L,氯为10-400mmol/L,钾为50-200mmol/L;尿钠为2.0-200mmol/L,氯为15-400mmol/L。
15. 超出范围结果处理:本法线性上限为血清/血浆钠为200mmol/L,钾为10mmol/L,氯为200mmol/L;尿钠为400mmol/L,钾为200mmol/L,氯为400mmol/L。如样品测定值超过上限时,应将样品用去离子水作1:1稀释,重新测定,结果乘以2。
16. 病危报警值的处理:当血清/血浆:钠≥160mmol/L或≤120mmol/L;钾≥6.5mmol/L或≤2.5mmol/L,氯≥115mmol/L或≤80mmol/L时,应在复查该标本检测结果后,及时报告临床医生,必要时可以再抽血复查。
17. 方法局限性
17.1 本法线性上限为血清/血浆钠为200mmol/L,钾为10mmol/L,氯为200mmol/L;尿钠为400mmol/L,钾为200mmol/L,氯为400mmol/L。如样品测定值超过
上限时,应将样品用去离子水作1:1稀释,重新测定,结果乘以2。
17.2 干扰物质:某些抗凝剂、防腐剂、药物、有机化合物会干扰测定,具体参考文献8。
18. 补救措施:当仪器发生故障无法自行解决时,迅速联系仪器厂家进行维修,同时可用VITROS250干化学分析仪或者EASYLYTE Na/K/Cl分析仪测定病人标本。
19. 参考文献:OLYMPUS ISE 试剂说明书和操作手册
1. Tietz NW,Pruden EL,Siggaard-Anderson O.
Electrolytes. In Teitz NW, ed. Fundamentals of
clinical chemistry. Philadelphia: WB Saunders
Company, 1987:614-624.
2. Tietz NW, ed. Clinical guide to laboratory
tests, 3 ed. Philadelphia: WB Saunders company,
1995:124pp,502-504,562-564.
3. Scolt MG, Heusel JW, LeGry VA,
rd
Siggaard-Anderson O. Electrolytes and bloog
gases. In: Burtis CA,Ashwood ER,eds. Tietz
textbook of clinical chemistry. Philadephia:
WB Saunders Company, 1999;1061.
4. Ehret W, Heil W, Scgmitt Y, Topfer G, et al.
Use of anticoagulants in diagnostic laboratory
investigation and stability of blood ,plasma and
serum samples. WHO/DIL/LAB/99.1 Rev.2:26,39,41,48pp.
5. NCCLS. Urinalysis and collection,
transportation, and preservation of urine
apecimens, approved guideline. NCCLS Document
GP16-A2, 2 ed. Pennsylvania: NCCLS, 2001.
6. Young DS. Effects of preanalytical variables
on clinical laboratory tests. 2 ed. Washington.
AACC Press, 1997.
7. Tietz NW, Logan NW. Appendix In: Teitz NW,
ndnd
ed. Fundamentals of clinical chemistry.
Philadelphia: WB Saunders Company, 1987:948,962,965pp.
8. Young DS. Effects of drugs on clinical
laboratory tests, AACC, 5 ed. AACC Press, 2000.
20. 其他:仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。
th
2024年3月8日发(作者:昌半香)
OLYMPUS钠钾氯离子选择性电极ISE间接电位法测定作业指导书
1. 实验原理[1]
传统的血液样品的离子检测方法是用火焰光度学方法,样品被已知离子(通常为锂离子或铯离子)浓度的溶液稀释,雾化并通过火焰成为离子态。这些离子象不同频率的光子一样稀放能量,光的强度与样品中的离子浓度有关。新发现的钠离子选择性玻璃、和选择性吸收钾和氯的有机化合物使得探测器可以直接接触生物体液进行测量,这些感受器即所谓离子选择性电极。
OLYMPUS 电解质分析仪使用离子选择性电极技术检测生物体液中的钠、钾、氯离子浓度。钠、钾电极采用对钠、钾离子敏感的膜电极;氯电极采用分子机制的PVC膜,仅对氯离子敏感。电极电位可与内参比电极产生的稳定电位比较而测得。离子选择性电极使得电位随样品的离子浓度的改变而改变,变化的电位
与离子浓度呈对数关系,以能斯特方程表示:
RT㏑(γC)
E=E+——————
NF
其中:E=在样品溶液中的电极电位
E=在标准状态下的电极电位
RT/nF=一个与电极反应值有关的常量
㏑=取自然对数
r=溶液中的离子活度
c=溶液中的离子浓度
检测时利用了比较法。首先,加入样品,再加入稀释液,混匀后吸进装载电极的分析单元中,测量电位,然后加入标准液测量电位,测量电位,二者的差与样品中钠、钾、氯离子浓度和它们在标准液中的浓度之比存在对数关系,因已知电位与标准液中钠、钾、氯离子浓度的关系,计算机可据能斯特方程计算出样品中钠、钾、氯离子浓度。
0
2. 标本采集[2,3]
2.1 病人准备:无特殊要求。最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
2.2 类型:血清、肝素锂抗凝血浆或尿液。
3. 标本采集、处理与贮存:应尽量避免标本溶血或严重脂血。溶血标本,红细胞中的钾会释放到血清或血浆中,造成假性钾便高。因此血清、肝素锂抗凝血浆标本应及时离心分离血清或血浆并避免残留红细胞。严重脂血的标本,会造成假性低、钠钾血症,应通过超速离心消除脂血的影响。血清或血浆标本的稳定性:在2~25℃贮存,氯稳定7天,钾6周,钠2周。24小时尿液标本不添加防腐剂,混浊尿应离心后吸取上清液,严禁酸化尿液。尿标本的稳定性:在2~25℃贮存,氯稳定7天[6],钾在2~8℃贮存稳定2个[4]月,在15~25℃贮存稳定45天稳定45天[4],钠在2~25℃贮存。
4. 标本运输:室温条件下运输
5. 标本拒收标准:细菌污染、溶血、严重脂血的不能做测定。
6. 实验材料:
6.1 日本OLYMPUS ISE试剂与标准液
浓度
试剂稳货号 试剂名称 规格 成分 (单位:定性
mol/L)
Triethanola66320
ISE缓冲液
4×mine
2000ml
防腐剂
Na
66319
ISE中值
标准液
4×2000ml
K
Cl
防腐剂
66318
ISE参比液
4×1000ml
氯化钾
防腐剂
4.3
0.13
1个月
3.1
适量
1.0
2个月
适量
适量
0.1
2个月
Na
ISE低值6631血清标准7
液
防腐剂
Na
ISE高值6631血清标准6
液
防腐剂
100ml Cl
4×K
100ml Cl
4×K
130
3.5
90天
85
适量
160
6
90天
120
适量
低(50)高(200)
Na
ISE低/高6631值尿标准5
液
防腐剂
(180)
适量
6631ISE内参2×25ml 氯化钾 3.3 90天
100ml Cl
低(50)高4×K
(100) 90天
低(10)高
4 比液 氯化银
防腐剂
饱和
适量
ISE Na/K6631选择性监7
测液
6.1.1 试剂组成:见上表。
6.1.2 试剂准备:试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存
货号为66314的试剂应保存于15~25℃,若开启使用,在15~25℃保存可稳定90天。其它试剂未开启前在2~25℃保存可稳定至失效期;一旦开启在2~25℃保存其有效期见上表。
6.1.4 变质指示:当试剂有浊度时,表明有细菌污染或过失效期不能继续使用。
6.1.5 注意事项:货号为66317、66316、66315、66314和66313的试剂在每次使用后均应立即盖好盖子。ISE内参比液在保存期间可有部分沉淀释出,这不会影响2×25ml
防腐剂 适量
Na 150
90天
试剂性能,但在使用前应充分混匀试剂。试剂中含防腐剂。不可入口!避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品:使用OLYMPUS公司提供的ISE低/高值血清标准液或ISE低/高值尿标准液对自动分析仪进行校准,每天开机前校准或在下列情况下校准:试剂批号更换、质控数值明显漂移或失控、更换电极、主要的预防性保养后或关键部件更换后。
6.3 质控品:具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
7. 仪器:奥林巴斯AU1000 ISE 分析仪
8. 操作步骤:参见AU1000 ISE分析仪操作规程.SOP文件
9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制:在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。
质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法:使用OLYMPUS公司提供的ISE低/高值血清标准液或ISE低/高值尿标准液校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果,以mmol/L报告。
12. 参考值范围(成人)见下表:
血清
钠 钾 氯
136-146mm3.5-5.1mm98-106mmool/L ol/L l/L
血浆 136-146mm3.4-4.5mm98-106mmool/L ol/L l/L
尿液(24小40-220mmo25-125mmo110-250mm时) l/天 l/天 ol/天
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验,每个实验室应建立自己的参考值。(由于分析方法局限性,应注意对高脂血症和高蛋白血症的病人标本检测结果的解释。)
13. 临床意义
13.1 钾离子是细胞内液中的主要阳离子。钾离子测定可用于诊断电解质失衡,心律不齐,肌无力,肝脑病变和肾衰竭,并在糖尿病和静脉输液治疗中检测酮酸中毒。并发醛固酮过多症的高血压患者,超过90%的人K浓度很低。呕吐,腹泻,嗜酒和叶酸缺乏症都可引起K 浓度降低。快速输入K ,晚期肾衰,溶血性病变,外伤,Addison氏综合症,代谢性酸中毒,急性饥饿症,脱水和急救等均可引起K浓度升高。通常情况下, K 经肾小球过滤掉,但在K浓度较低时,
K会保留下来。在饮食增加,高醛固酮症,肾小管性酸中毒和碱中毒发病时,尿液中K的含量上升。
13.2 钠离子是细胞外液中的主要阳离子,人体内的钠平衡由肾脏维持。尿液排泄过多,腹泻,Addison氏综合症,肾小管肾炎等都可引起钠浓度降低。严重脱水,某些类型的脑外伤,糖尿病昏迷和盐摄入过量可导致钠浓度升高。
++++++++
13.3 氯离子是细胞外液中的主要阴离子,它的生理重要性在于能保持人体正常的水代谢,渗透压和细胞外液中正常的离子平衡。在脱水,肾小管酸中毒(高氯代谢酸中毒),食盐摄入过多等情况下,氯的浓度会升高。在水含量过多,慢性呼吸性酸中毒,失盐性肾炎,代谢性碱中毒和充血性心脏衰竭等情况下,氯的浓度会降低。
14. 操作性能
14.1 线性范围
血清
钠
50-200mmol/L
血浆 50-200mmol/L
尿液 10-400mmol/L
钾
1.0-10.0mmol/L
1.0-10.0mmol/L
2.0-200mmol/L
氯
50-200mmol/L
50-200mmol/L
15-400mmol/L
14.2 精密度:重复性的评估是根据NCCLS推荐的标准
方法,AU1000批内重复性小于3%,总不精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。
批 内 精 总 精 密
N=80
血清:
平均值SD
(mmol/L)
钠
钾
氯
138
4.8
90
0.66
0.03
0.58
0.49
0.65
0.64
0.89
0.04
0.63
0.64
0.76
0.71
CV% SD CV%
密 度 度
批 内 精 总 精 密
N=80
尿液:
平均值SD
(mmol/L)
钠
钾
166
100
0.73
0.48
0.44
0.48
1.29
1.30
0.78
1.29
CV% SD CV%
密 度 度
氯 245 1.06 0.43 2.22 0.90
14.3 方法学比较:奥林巴斯AU1000 ISE分析仪(方法1)与其它商品化的ISE分析仪(方法2),共同做同一批病人标本。相关系数及回归方程如下:
钠方法1=(钠方法2)×1.016-2.428,r=0.981(N=239,病人结果数值分布:118.0-157.0mmol/L)。
钾方法1=(钾方法2)×0.977+0.107,r=0.991(N=238,病人结果数值分布:1.5-7.0mmol/L)。
氯方法1=(氯方法2)×1.024-2.302,r=0.977(N=233,病人结果数值分布:80-125.0mmol/L)。
14.4 灵敏度:本法线性下限为血清/血浆钠为50mmol/L,钾为1.0mmol/L,氯为50mmol/L;尿钠为10mmol/L,钾为2.0mmol/L,氯为15mmol/L。
14.5 病人结果可报告范围:血清/血浆钠为
50-200mmol/L,钾为1.0-10.0mmol/L,氯为10-400mmol/L,钾为50-200mmol/L;尿钠为2.0-200mmol/L,氯为15-400mmol/L。
15. 超出范围结果处理:本法线性上限为血清/血浆钠为200mmol/L,钾为10mmol/L,氯为200mmol/L;尿钠为400mmol/L,钾为200mmol/L,氯为400mmol/L。如样品测定值超过上限时,应将样品用去离子水作1:1稀释,重新测定,结果乘以2。
16. 病危报警值的处理:当血清/血浆:钠≥160mmol/L或≤120mmol/L;钾≥6.5mmol/L或≤2.5mmol/L,氯≥115mmol/L或≤80mmol/L时,应在复查该标本检测结果后,及时报告临床医生,必要时可以再抽血复查。
17. 方法局限性
17.1 本法线性上限为血清/血浆钠为200mmol/L,钾为10mmol/L,氯为200mmol/L;尿钠为400mmol/L,钾为200mmol/L,氯为400mmol/L。如样品测定值超过
上限时,应将样品用去离子水作1:1稀释,重新测定,结果乘以2。
17.2 干扰物质:某些抗凝剂、防腐剂、药物、有机化合物会干扰测定,具体参考文献8。
18. 补救措施:当仪器发生故障无法自行解决时,迅速联系仪器厂家进行维修,同时可用VITROS250干化学分析仪或者EASYLYTE Na/K/Cl分析仪测定病人标本。
19. 参考文献:OLYMPUS ISE 试剂说明书和操作手册
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clinical chemistry. Philadelphia: WB Saunders
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3. Scolt MG, Heusel JW, LeGry VA,
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4. Ehret W, Heil W, Scgmitt Y, Topfer G, et al.
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8. Young DS. Effects of drugs on clinical
laboratory tests, AACC, 5 ed. AACC Press, 2000.
20. 其他:仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。
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