2024年3月27日发(作者:潜子轩)
茶树良种场不同品种的SSR鉴定研究
姜燕华;张成才;成浩
【摘 要】以宁海县桥头胡镇汶溪茶叶良种场的15个茶树品种的叶片为试验材料,
每个待鉴定品种随机选择3-4个单株作为待测样本,以国家茶树种质资源圃品种作
为标准品种,采用SSR技术检测待测品种与档案记载情况是否相符。试验结果表明:
通过21对SSR引物的PCR扩增,良种场中的‘龙井43’、‘安吉白茶’和‘迎
霜’的SSR标记数与其对应的标准品种完全一致,说明这3个品种保持原品种的特
征特性;‘歌乐茶’、‘劲峰’和‘平阳特早’3个品种部分样本的标记数与其对
应的标准品种一致,说明这3个品种中的部分单株出现某种程度的变异;‘早逢春’、
‘碧云’、‘竹紫春’、‘乌牛早’、‘水谷茶’和‘福鼎大白茶’6个品种的标
记数与其对应的标准品种出现不一致,说明这6个品种在良种场繁育过程中出现同
名异物或同物异名的错误;良种场中的‘银片’、‘鸠坑种’和‘紫笋’无法确定
其是否属于相应的标准品种,说明在良种收集过程中,无法弄清品种的来源。通过本
研究纠正了品种收集过程中出现的错误,指出了品种繁育过程中出现的突变。
【期刊名称】《茶叶学报》
【年(卷),期】2016(057)003
【总页数】8页(P105-112)
【关键词】茶树 SSR 品种鉴定 无性系
【作 者】姜燕华;张成才;成浩
【作者单位】[1]宁波市宁海县农林局,浙江宁波315600;[2]中国农业科学院茶叶研
究所/国家茶树改良中心,浙江杭州310008
【正文语种】中 文
【中图分类】S571.1
茶树是重要的经济作物,在我国的种植栽培历史悠久。19世纪以前,我国的茶产
业一直处于世界领先地位,而后逐渐衰落,直到新中国成立之后才进入蓬勃发展的
时期。近50年来,我国茶产业的发展基本可以分为3个阶段:扩大种植面积阶段
(1950~1978年)、提高单产阶段(1979~1989年)和提高质量阶段(1990年至
今)[1]。在第一阶段中,我国的茶园面积成倍增加,各地开辟了大量的新茶园。其
中,一部分为生产茶园;另一部分为茶树良种场,陆续引种有不同的茶树良种,为
一定区域内的茶园提供种苗保障。长期以来,一些当时成立的茶树良种场,由于人
员流动和疏于管理,已经失去了作为良种场的功能,转而成为生产茶园,造成了资
源的浪费。如何对这些良种场进行评价,特别是如何对其所种茶树良种进行鉴别,
以考察其是否具有恢复茶树良种场功能的潜质,成为一个亟待解决的问题。
近年来,随着生物技术的发展,分子标记技术已被广泛应用于小麦[2-3]、水稻[4]、
玉米[5-7]、茶叶[8-13]等多种作物研究,尤其是在遗传多样性、亲缘关系、品种
鉴别领域使用最多。其中,简单重复序列标记(SSR,simple sequence repeats),
由于检测方便、鉴别能力高,成为最好的品种鉴别方法之一[5,14]。在茶树品种鉴
别方面,杨阳等使用SSR标记、刘本英等使用ISSR(inter simple sequence
repeats)标记,分别构建了湖南省和云南省主要茶树品种的指纹图谱,为这些茶树
品种的鉴别提供了依据[15-16]。张成才等使用SSR标记对浙江省主要无性系茶树
品种的鉴定进行了研究,并且提出了相应的鉴定标准[17]。
宁海县桥头胡汶溪茶叶良种场位于宁波市宁海县桥头胡镇,始建于1974年,陆续
引种有‘劲峰’、‘迎霜’、‘乌牛早’等10余个茶树良种,直至20世纪90
年代初达到如今的规模。多年来,该良种场由于人员流动、档案不全,一直没能得
到很好地利用。为了确定该良种场所种茶树品种与部分档案记载是否一致,藉此评
估其对当前宁海县茶叶生产、种苗繁育等方面的潜在意义,本实验使用SSR标记
的方法,根据部分档案推测的品种名称,对该良种场种植的15个茶树品种进行验
证。
1.1 取样
‘劲峰’、‘迎霜’、‘乌牛早’等15个待鉴定品种,每个品种分别从茶行中随
机选3~4个单株共59个单株,取叶片作为待鉴定样品(表1)。
从茶树国家种质资源圃中,取与待鉴定材料相应的各品种1芽2叶嫩梢,作为品
种鉴定的标准样。资源圃没有保存‘银片’品种,因此没有取到该品种的标准样;
资源圃没有保存‘水谷茶’品种,保存有‘水古茶’,因此采‘水古茶’为标准样
(表1)。
1.2 基因组DNA的提取及PCR扩增
采样后,将样品迅速放于液氮中冷冻,使用天根生化科技有限公司(DP305)的植物
基因组DNA试剂盒提取各份材料的基因组DNA。检测浓度后,稀释到20
ng·μL-1保存备用。
PCR扩增使用10 μL反应体系,包括DNA模板2 μL,上下游引物各0.2 μL,
Taq酶0.2 μL,10×Buffer 2 μL,dNTP 0.5 μL,加ddH2O至10 μL。PCR扩
增程序为:94℃预变性4 min,94℃变性30 s、58℃退火30 s、72℃延伸30 s
共35个循环,最后72℃延伸10 min。
1.3 电泳检测及数据处理
使用10%聚丙烯酰胺凝胶,在120 V的电压下电泳90 min,银染显色[18-19]。
显色后,人工读带,条带由大到小分别记为A、B、C、D等,无条带或者带型难
以辨认记为“..”,在Excel中进行数据处理,使用Popgen32软件构建遗传聚类
图。
1.4 品种判定标准
本试验,参考水稻[20]和茶树[17]品种鉴定方法对样品品种进行判定:①某一单株
与标准品种差异标记数=0,则判定该单株属于这一品种;②某一单株与标准品种
差异标记数=1,则判定该单株疑似属于这一品种;③某一单株与标准品种差异标
记数≥2,则判定该单株不属于这一品种。
本研究使用实验室前期筛选过的多态性高、带型清晰的21对SSR引物(表2),分
别对15个待鉴定品种的59个单株和14个标准样进行PCR扩增。然后,使用聚
丙烯酰胺凝胶电泳检测PCR扩增产物,银染显色(图1)。人工读带并构建带型模拟
图(图2),然后使用Popgen32软件构建遗传聚类图(图3)。差异标记数统计结果
见表3,检测结果汇总见表4。
待鉴定品种‘安吉白茶’(AJBC),4个样本相互之间的带型完全一致,而且与标准
样品完全一致,因此认为这4个样本所代表的群体为无性系群体,并且属于‘安
吉白茶’品种;同样地,待鉴定品种‘龙井43’(LJ43),4个样本相互间带型一
致,且与标准样品一致,认为这4个样本所代表的群体为‘龙井43’的无性系群
体。待鉴定品种‘迎霜’(YS),4个样本间带型一致,同时与标准样品带型一致,
认为这4个样本所代表的群体为‘迎霜’的无性系群体。
待鉴定品种‘歌乐茶’(GL),4个样本中GL3和GL4带型一致且与标准样品带型
一致,与GL1有1个标记存在差异,与GL2有2个标记存在差异,聚类结果发现
以上4个样本与标准样品一起聚为一类。以上结果表明,这4个样本所代表的群
体为无性系群体,其中混杂有亲缘关系较近的单株,该群体属于‘歌乐茶’品种。
待鉴定品种‘劲峰’(JF),4个样本中JF3和JF4与标准样品带型完全一致,JF2
与标准样品有2个标记差异,而JF1与标准样品差异标记数为13个。因此JF3和
JF4为‘劲峰’;而JF1和 JF2不属于‘劲峰’品种,而且聚类分析结果表明,
JF1与其他3个样本以及标准样品间的亲缘关系较远,JF2与JF3、JF4和标准样
品聚为一类。以上结果表明,这4个样本所代表的群体为‘劲峰’的无性系群体,
但是群体里面混杂有亲缘关系较远的单株。
待鉴定品种‘平阳特早’(PYTZ),4个样本中,PYTZ1、PYTZ2和PYTZ4之间的
带型一致,且与标准样品存在1个标记的差异;PYTZ3与其他3个样本存在2个
标记的差异,与标准样品存在3个标记的差异,聚类分析发现PYTZ3与其他3个
样本以及标准样品的亲缘关系较近。因此认为PYTZ1、PYTZ2和PYTZ4疑似属于
‘平阳特早’品种;PYTZ3不属于‘平阳特早’品种。以上结果表明,这4个样
本所代表的群体,疑似属于‘平阳特早’品种的无性系群体,但其中混杂有亲缘关
系较近的单株。
待鉴定品种‘早逢春’(ZFC),4个样本中,ZFC2和ZFC3之间的带型一致,但与
标准样品存在13个标记的差异;ZFC1与以上两个样本存在9个标记的差异,与
ZFC4存在7个标记的差异,与标准样本存在12个标记的差异;ZFC4与ZFC2和
ZFC3之间存在8个标记的差异,与标准样品存在13个标记的差异;聚类分析发
现4个样本聚为一类,但与标准样品亲缘关系较远。以上结果表明,这4个样本
所代表的群体为无性系群体但不属于‘早逢春’,而且其中混杂了亲缘关系较近的
单株。
待鉴定品种‘碧云’(BY),4个样本中,BY3和BY4带型一致,与BY2存在1个
标记的差异,与BY1存在7个标记的差异;4个样本与标准样品存在5~9个标记
的差异;聚类分析发现,4个样本与标准样品一起聚为一类。以上结果表明,这4
个样本所代表的群体,为无性系群体,该群体里面混杂有亲缘关系较近的单株,该
群体与‘碧云’品种亲缘关系较近,但是不属于‘碧云’品种。
待鉴定品种‘水谷茶’(SG),4个样本中SG2和SG3带型一致,与SG1和SG4
均存在1个标记的差异;SG1和SG4间存在2个标记的差异;4个样本与标准样
品‘水古茶’存在13~14个标记的差异,聚类分析发现4个样本与标准样品‘水
古茶’亲缘关系较远。以上结果表明,这4个样本所代表的群体属于无性系,但
是与标准样品‘水古茶’并非一个品种。
待鉴定品种‘竹紫春’(ZZC),4个样本中ZZC1和ZZC3带型一致,与ZZC2存
在一个标记的差异,与ZZC4存在10个标记的差异;ZZC2和ZZC4存在11个
标记的差异;4个样本与标准样品存在10~14个标记的差异;聚类分析发现
ZZC1、ZZC2和ZZC3聚为一类,ZZC4和标准样品均与它们的遗传关系较远。以
上结果表明,这4个样本所代表的群体,为无性系群体,但混杂有亲缘关系较远
的个体,而且该群体不属于‘竹紫春’品种。
待鉴定品种‘乌牛早’,3个样本中WNZ1和WNZ2有2个标记存在差异,与
WNZ3存在5个标记的差异;WNZ2和WNZ3存在6个标记的差异;3个样本
与标准样品有11~13个标记存在差异;聚类分析发现3个样本聚为一类,但与标
准样品亲缘关系较远。以上结果表明,这3个样本所代表的群体可能属于无性系
群体,但其中混杂有亲缘关系较近的单株,而且该群体并非‘乌牛早’品种。
待鉴定品种‘银片’(YP),4个样本中YP1、YP2和YP4带型完全一致,与YP3
存在1个标记的差异。由此,认为这4个样本所代表的是一个无性系群体,但由
于本试验没有‘银片’标准样品,不能确定该群体是否属于‘银片’品种。
待鉴定品种‘紫笋’(ZS),4个样本中ZS1、ZS2和ZS4间的带型一致,与ZS3
存在1个标记的差异,与标准样品存在7个标记的差异,聚类分析发现4个样本
均与标准样品‘紫笋群体’(群体种)聚为一类。结果表明,这4个样本所代表的群
体为无性系群体,该群体可能由紫笋群体种中的某一单株扩繁而成,因而与标准品
种亲缘关系较近,根据本实验结果难以确定该待测品种为‘紫笋群体’品种。
待鉴定品种‘福鼎大白’(FDDB),4个样本相互之间的差异标记数为14~17个,
与标准样品的差异标记数为9~15个,聚类分析发现FDDB2与标准样品聚为一
类,而其余样本散见于聚类图中。结果表明,这4个样本所代表的群体为群体种,
由于群体种遗传背景复杂,因此无法根据SSR标记确定这4个样本是否属于‘福
鼎大白’。同样类似的还有待鉴定品种‘鸠坑’(JK),4个样本间差异标记数为
10~15个,与标准样品存在13~14个标记的差异,聚类分析发现,4个样本聚
为一类,因此认为此4个样本所代表的群体为群体种,但无法确定这4个样本是
否属于‘鸠坑群体种’。
本试验在取样过程中发现,部分茶树品种混杂有表型明显不一致的单株,结果也表
明,部分品种的确存在杂株。在茶树种苗繁育过程中,良种场通常作为母本园,为
种苗繁育提供扦插穗条。茶树繁殖系数大,这些杂株会同真实品种一起大量扩繁,
经销售流入生产茶园,导致茶树间存在性状差异,最终影响茶叶产量和品质。近年
来,本实验室在多地取样的过程中,发现有些品种存在名称与事实不符的情况,给
生产者和研究者带来了很大的困扰。因此,在建立良种场的过程中,对新引种的品
种一定要严格筛查,首先要保证该品种确为目标品种,然后要剔除那些非目标品种
的单株,保证所种植品种的真实性和纯度,从源头上保证扩繁后的茶苗性状一致。
研究发现,‘龙井43’、‘安吉白茶’、‘歌乐茶’、‘迎霜’、‘劲峰’和
‘平阳特早’等6个待鉴定品种与档案记载的标准样品一致,然而‘歌乐茶’、
‘劲峰’和‘平阳特早’3个品种中混杂有其他品种单株。‘早逢春’、‘碧云’、
‘竹紫春’、‘乌牛早’和‘福鼎大白茶’等5个待鉴定品种,与档案记载的标
准样品不一致,并非档案所述品种。待鉴定品种‘水谷茶’的4个样本均非‘水
古茶’。另外,待鉴定品种‘银片’没有取到相应的标准样品,因此不能确定其4
个样本是否属于‘银片’品种。
本研究中部分待测品种与标准样品存在遗传上的差异,但在聚类时却聚在一起,表
明其亲缘关系较近,推测这些混杂的单株可能是相应标准品种的有性后代(如本试
验中‘紫笋’品种),或其品种繁殖来源于相近或同一品种。如本研究中‘碧云’
品种,它是由云南大叶种天然杂种中单株选育而成。云南大叶种是茶树育种中常用
的材料,通过其育种出的后代具有相似的遗传背景,因此在进行遗传聚类分析时这
些后代往往聚在一起。目前,我国国家级茶树良种中,除了无性系品种,还包括
‘鸠坑种’、‘祁门种’、‘龙井种’和‘紫阳种’等多个有性系品种,这些品种
经自然杂交的种子扩繁而成,遗传背景非常复杂[21]。因此,很难根据SSR标记
的差异数对个别单株进行比较准确的鉴定。本研究中,4个鸠坑种的样本聚为一类,
然而与其标准样品的遗传关系较远,由于其遗传背景复杂,尽管遗传关系较远,仍
很难明确的得出待鉴定品种是否属于‘鸠坑种’的结论。另外,本研究中取‘紫笋
群体’(群体种)作为待鉴定品种‘紫笋’的标准样,4个样本ZS1、ZS2和ZS4间
的带型一致,ZS3存在1个标记的差异,由此推测该品种可能为无性系品种,然
而聚类分析发现,4个待鉴定样本与标准样聚为一类,因此无法明确认定待鉴定品
种‘紫笋’是否属于‘紫笋群体’。以上结果表明,有性系品种的鉴定方法,仍然
需要进一步探索。
本研究使用SSR的方法,对宁海县桥头胡汶溪茶叶良种场的15个茶树品种与档案
记载是否一致进行了研究,纠正品种收集过程中出现的错误,为该良种场茶树资源
的充分利用提供了理论依据,也为其他类似研究提供借鉴。然而,本次试验每个待
鉴定品种仅随机选择了3~4个单株作为样本,而且并未开展形态学方面的调查研
究,由于茶园部分品种混杂度较高,导致很难做到比较全面的评价。
*通讯作者:成浩(1962-),男,研究员,研究方向:茶树种质资源与遗传育种。E-
mail:*********************.com
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2024年3月27日发(作者:潜子轩)
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应的标准品种一致,说明这3个品种中的部分单株出现某种程度的变异;‘早逢春’、
‘碧云’、‘竹紫春’、‘乌牛早’、‘水谷茶’和‘福鼎大白茶’6个品种的标
记数与其对应的标准品种出现不一致,说明这6个品种在良种场繁育过程中出现同
名异物或同物异名的错误;良种场中的‘银片’、‘鸠坑种’和‘紫笋’无法确定
其是否属于相应的标准品种,说明在良种收集过程中,无法弄清品种的来源。通过本
研究纠正了品种收集过程中出现的错误,指出了品种繁育过程中出现的突变。
【期刊名称】《茶叶学报》
【年(卷),期】2016(057)003
【总页数】8页(P105-112)
【关键词】茶树 SSR 品种鉴定 无性系
【作 者】姜燕华;张成才;成浩
【作者单位】[1]宁波市宁海县农林局,浙江宁波315600;[2]中国农业科学院茶叶研
究所/国家茶树改良中心,浙江杭州310008
【正文语种】中 文
【中图分类】S571.1
茶树是重要的经济作物,在我国的种植栽培历史悠久。19世纪以前,我国的茶产
业一直处于世界领先地位,而后逐渐衰落,直到新中国成立之后才进入蓬勃发展的
时期。近50年来,我国茶产业的发展基本可以分为3个阶段:扩大种植面积阶段
(1950~1978年)、提高单产阶段(1979~1989年)和提高质量阶段(1990年至
今)[1]。在第一阶段中,我国的茶园面积成倍增加,各地开辟了大量的新茶园。其
中,一部分为生产茶园;另一部分为茶树良种场,陆续引种有不同的茶树良种,为
一定区域内的茶园提供种苗保障。长期以来,一些当时成立的茶树良种场,由于人
员流动和疏于管理,已经失去了作为良种场的功能,转而成为生产茶园,造成了资
源的浪费。如何对这些良种场进行评价,特别是如何对其所种茶树良种进行鉴别,
以考察其是否具有恢复茶树良种场功能的潜质,成为一个亟待解决的问题。
近年来,随着生物技术的发展,分子标记技术已被广泛应用于小麦[2-3]、水稻[4]、
玉米[5-7]、茶叶[8-13]等多种作物研究,尤其是在遗传多样性、亲缘关系、品种
鉴别领域使用最多。其中,简单重复序列标记(SSR,simple sequence repeats),
由于检测方便、鉴别能力高,成为最好的品种鉴别方法之一[5,14]。在茶树品种鉴
别方面,杨阳等使用SSR标记、刘本英等使用ISSR(inter simple sequence
repeats)标记,分别构建了湖南省和云南省主要茶树品种的指纹图谱,为这些茶树
品种的鉴别提供了依据[15-16]。张成才等使用SSR标记对浙江省主要无性系茶树
品种的鉴定进行了研究,并且提出了相应的鉴定标准[17]。
宁海县桥头胡汶溪茶叶良种场位于宁波市宁海县桥头胡镇,始建于1974年,陆续
引种有‘劲峰’、‘迎霜’、‘乌牛早’等10余个茶树良种,直至20世纪90
年代初达到如今的规模。多年来,该良种场由于人员流动、档案不全,一直没能得
到很好地利用。为了确定该良种场所种茶树品种与部分档案记载是否一致,藉此评
估其对当前宁海县茶叶生产、种苗繁育等方面的潜在意义,本实验使用SSR标记
的方法,根据部分档案推测的品种名称,对该良种场种植的15个茶树品种进行验
证。
1.1 取样
‘劲峰’、‘迎霜’、‘乌牛早’等15个待鉴定品种,每个品种分别从茶行中随
机选3~4个单株共59个单株,取叶片作为待鉴定样品(表1)。
从茶树国家种质资源圃中,取与待鉴定材料相应的各品种1芽2叶嫩梢,作为品
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资源圃没有保存‘水谷茶’品种,保存有‘水古茶’,因此采‘水古茶’为标准样
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1.2 基因组DNA的提取及PCR扩增
采样后,将样品迅速放于液氮中冷冻,使用天根生化科技有限公司(DP305)的植物
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ng·μL-1保存备用。
PCR扩增使用10 μL反应体系,包括DNA模板2 μL,上下游引物各0.2 μL,
Taq酶0.2 μL,10×Buffer 2 μL,dNTP 0.5 μL,加ddH2O至10 μL。PCR扩
增程序为:94℃预变性4 min,94℃变性30 s、58℃退火30 s、72℃延伸30 s
共35个循环,最后72℃延伸10 min。
1.3 电泳检测及数据处理
使用10%聚丙烯酰胺凝胶,在120 V的电压下电泳90 min,银染显色[18-19]。
显色后,人工读带,条带由大到小分别记为A、B、C、D等,无条带或者带型难
以辨认记为“..”,在Excel中进行数据处理,使用Popgen32软件构建遗传聚类
图。
1.4 品种判定标准
本试验,参考水稻[20]和茶树[17]品种鉴定方法对样品品种进行判定:①某一单株
与标准品种差异标记数=0,则判定该单株属于这一品种;②某一单株与标准品种
差异标记数=1,则判定该单株疑似属于这一品种;③某一单株与标准品种差异标
记数≥2,则判定该单株不属于这一品种。
本研究使用实验室前期筛选过的多态性高、带型清晰的21对SSR引物(表2),分
别对15个待鉴定品种的59个单株和14个标准样进行PCR扩增。然后,使用聚
丙烯酰胺凝胶电泳检测PCR扩增产物,银染显色(图1)。人工读带并构建带型模拟
图(图2),然后使用Popgen32软件构建遗传聚类图(图3)。差异标记数统计结果
见表3,检测结果汇总见表4。
待鉴定品种‘安吉白茶’(AJBC),4个样本相互之间的带型完全一致,而且与标准
样品完全一致,因此认为这4个样本所代表的群体为无性系群体,并且属于‘安
吉白茶’品种;同样地,待鉴定品种‘龙井43’(LJ43),4个样本相互间带型一
致,且与标准样品一致,认为这4个样本所代表的群体为‘龙井43’的无性系群
体。待鉴定品种‘迎霜’(YS),4个样本间带型一致,同时与标准样品带型一致,
认为这4个样本所代表的群体为‘迎霜’的无性系群体。
待鉴定品种‘歌乐茶’(GL),4个样本中GL3和GL4带型一致且与标准样品带型
一致,与GL1有1个标记存在差异,与GL2有2个标记存在差异,聚类结果发现
以上4个样本与标准样品一起聚为一类。以上结果表明,这4个样本所代表的群
体为无性系群体,其中混杂有亲缘关系较近的单株,该群体属于‘歌乐茶’品种。
待鉴定品种‘劲峰’(JF),4个样本中JF3和JF4与标准样品带型完全一致,JF2
与标准样品有2个标记差异,而JF1与标准样品差异标记数为13个。因此JF3和
JF4为‘劲峰’;而JF1和 JF2不属于‘劲峰’品种,而且聚类分析结果表明,
JF1与其他3个样本以及标准样品间的亲缘关系较远,JF2与JF3、JF4和标准样
品聚为一类。以上结果表明,这4个样本所代表的群体为‘劲峰’的无性系群体,
但是群体里面混杂有亲缘关系较远的单株。
待鉴定品种‘平阳特早’(PYTZ),4个样本中,PYTZ1、PYTZ2和PYTZ4之间的
带型一致,且与标准样品存在1个标记的差异;PYTZ3与其他3个样本存在2个
标记的差异,与标准样品存在3个标记的差异,聚类分析发现PYTZ3与其他3个
样本以及标准样品的亲缘关系较近。因此认为PYTZ1、PYTZ2和PYTZ4疑似属于
‘平阳特早’品种;PYTZ3不属于‘平阳特早’品种。以上结果表明,这4个样
本所代表的群体,疑似属于‘平阳特早’品种的无性系群体,但其中混杂有亲缘关
系较近的单株。
待鉴定品种‘早逢春’(ZFC),4个样本中,ZFC2和ZFC3之间的带型一致,但与
标准样品存在13个标记的差异;ZFC1与以上两个样本存在9个标记的差异,与
ZFC4存在7个标记的差异,与标准样本存在12个标记的差异;ZFC4与ZFC2和
ZFC3之间存在8个标记的差异,与标准样品存在13个标记的差异;聚类分析发
现4个样本聚为一类,但与标准样品亲缘关系较远。以上结果表明,这4个样本
所代表的群体为无性系群体但不属于‘早逢春’,而且其中混杂了亲缘关系较近的
单株。
待鉴定品种‘碧云’(BY),4个样本中,BY3和BY4带型一致,与BY2存在1个
标记的差异,与BY1存在7个标记的差异;4个样本与标准样品存在5~9个标记
的差异;聚类分析发现,4个样本与标准样品一起聚为一类。以上结果表明,这4
个样本所代表的群体,为无性系群体,该群体里面混杂有亲缘关系较近的单株,该
群体与‘碧云’品种亲缘关系较近,但是不属于‘碧云’品种。
待鉴定品种‘水谷茶’(SG),4个样本中SG2和SG3带型一致,与SG1和SG4
均存在1个标记的差异;SG1和SG4间存在2个标记的差异;4个样本与标准样
品‘水古茶’存在13~14个标记的差异,聚类分析发现4个样本与标准样品‘水
古茶’亲缘关系较远。以上结果表明,这4个样本所代表的群体属于无性系,但
是与标准样品‘水古茶’并非一个品种。
待鉴定品种‘竹紫春’(ZZC),4个样本中ZZC1和ZZC3带型一致,与ZZC2存
在一个标记的差异,与ZZC4存在10个标记的差异;ZZC2和ZZC4存在11个
标记的差异;4个样本与标准样品存在10~14个标记的差异;聚类分析发现
ZZC1、ZZC2和ZZC3聚为一类,ZZC4和标准样品均与它们的遗传关系较远。以
上结果表明,这4个样本所代表的群体,为无性系群体,但混杂有亲缘关系较远
的个体,而且该群体不属于‘竹紫春’品种。
待鉴定品种‘乌牛早’,3个样本中WNZ1和WNZ2有2个标记存在差异,与
WNZ3存在5个标记的差异;WNZ2和WNZ3存在6个标记的差异;3个样本
与标准样品有11~13个标记存在差异;聚类分析发现3个样本聚为一类,但与标
准样品亲缘关系较远。以上结果表明,这3个样本所代表的群体可能属于无性系
群体,但其中混杂有亲缘关系较近的单株,而且该群体并非‘乌牛早’品种。
待鉴定品种‘银片’(YP),4个样本中YP1、YP2和YP4带型完全一致,与YP3
存在1个标记的差异。由此,认为这4个样本所代表的是一个无性系群体,但由
于本试验没有‘银片’标准样品,不能确定该群体是否属于‘银片’品种。
待鉴定品种‘紫笋’(ZS),4个样本中ZS1、ZS2和ZS4间的带型一致,与ZS3
存在1个标记的差异,与标准样品存在7个标记的差异,聚类分析发现4个样本
均与标准样品‘紫笋群体’(群体种)聚为一类。结果表明,这4个样本所代表的群
体为无性系群体,该群体可能由紫笋群体种中的某一单株扩繁而成,因而与标准品
种亲缘关系较近,根据本实验结果难以确定该待测品种为‘紫笋群体’品种。
待鉴定品种‘福鼎大白’(FDDB),4个样本相互之间的差异标记数为14~17个,
与标准样品的差异标记数为9~15个,聚类分析发现FDDB2与标准样品聚为一
类,而其余样本散见于聚类图中。结果表明,这4个样本所代表的群体为群体种,
由于群体种遗传背景复杂,因此无法根据SSR标记确定这4个样本是否属于‘福
鼎大白’。同样类似的还有待鉴定品种‘鸠坑’(JK),4个样本间差异标记数为
10~15个,与标准样品存在13~14个标记的差异,聚类分析发现,4个样本聚
为一类,因此认为此4个样本所代表的群体为群体种,但无法确定这4个样本是
否属于‘鸠坑群体种’。
本试验在取样过程中发现,部分茶树品种混杂有表型明显不一致的单株,结果也表
明,部分品种的确存在杂株。在茶树种苗繁育过程中,良种场通常作为母本园,为
种苗繁育提供扦插穗条。茶树繁殖系数大,这些杂株会同真实品种一起大量扩繁,
经销售流入生产茶园,导致茶树间存在性状差异,最终影响茶叶产量和品质。近年
来,本实验室在多地取样的过程中,发现有些品种存在名称与事实不符的情况,给
生产者和研究者带来了很大的困扰。因此,在建立良种场的过程中,对新引种的品
种一定要严格筛查,首先要保证该品种确为目标品种,然后要剔除那些非目标品种
的单株,保证所种植品种的真实性和纯度,从源头上保证扩繁后的茶苗性状一致。
研究发现,‘龙井43’、‘安吉白茶’、‘歌乐茶’、‘迎霜’、‘劲峰’和
‘平阳特早’等6个待鉴定品种与档案记载的标准样品一致,然而‘歌乐茶’、
‘劲峰’和‘平阳特早’3个品种中混杂有其他品种单株。‘早逢春’、‘碧云’、
‘竹紫春’、‘乌牛早’和‘福鼎大白茶’等5个待鉴定品种,与档案记载的标
准样品不一致,并非档案所述品种。待鉴定品种‘水谷茶’的4个样本均非‘水
古茶’。另外,待鉴定品种‘银片’没有取到相应的标准样品,因此不能确定其4
个样本是否属于‘银片’品种。
本研究中部分待测品种与标准样品存在遗传上的差异,但在聚类时却聚在一起,表
明其亲缘关系较近,推测这些混杂的单株可能是相应标准品种的有性后代(如本试
验中‘紫笋’品种),或其品种繁殖来源于相近或同一品种。如本研究中‘碧云’
品种,它是由云南大叶种天然杂种中单株选育而成。云南大叶种是茶树育种中常用
的材料,通过其育种出的后代具有相似的遗传背景,因此在进行遗传聚类分析时这
些后代往往聚在一起。目前,我国国家级茶树良种中,除了无性系品种,还包括
‘鸠坑种’、‘祁门种’、‘龙井种’和‘紫阳种’等多个有性系品种,这些品种
经自然杂交的种子扩繁而成,遗传背景非常复杂[21]。因此,很难根据SSR标记
的差异数对个别单株进行比较准确的鉴定。本研究中,4个鸠坑种的样本聚为一类,
然而与其标准样品的遗传关系较远,由于其遗传背景复杂,尽管遗传关系较远,仍
很难明确的得出待鉴定品种是否属于‘鸠坑种’的结论。另外,本研究中取‘紫笋
群体’(群体种)作为待鉴定品种‘紫笋’的标准样,4个样本ZS1、ZS2和ZS4间
的带型一致,ZS3存在1个标记的差异,由此推测该品种可能为无性系品种,然
而聚类分析发现,4个待鉴定样本与标准样聚为一类,因此无法明确认定待鉴定品
种‘紫笋’是否属于‘紫笋群体’。以上结果表明,有性系品种的鉴定方法,仍然
需要进一步探索。
本研究使用SSR的方法,对宁海县桥头胡汶溪茶叶良种场的15个茶树品种与档案
记载是否一致进行了研究,纠正品种收集过程中出现的错误,为该良种场茶树资源
的充分利用提供了理论依据,也为其他类似研究提供借鉴。然而,本次试验每个待
鉴定品种仅随机选择了3~4个单株作为样本,而且并未开展形态学方面的调查研
究,由于茶园部分品种混杂度较高,导致很难做到比较全面的评价。
*通讯作者:成浩(1962-),男,研究员,研究方向:茶树种质资源与遗传育种。E-
mail:*********************.com
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