2024年4月2日发(作者：车睿聪)

WB验步骤

实

精品资料

蛋白电泳（制胶、SDS-PAGE电泳）

实验材料：

SDS-PAGE凝胶制备试剂盒、电泳缓冲液、提取的蛋白或全细胞裂解液、

广谱彩虹预染中分子量蛋白Marker、SDS-PAGE Loading Buffer（还原，

5×）、G250蛋白快速染色试剂、若干蒸馏水

实验仪器、耗材：

蛋白电泳仪、制胶仪、水平摇床、15ml离心管、5ml移液器、微量移液器、

1.5ml离心管、塑料饭盒（可在微波炉里加热使用）

配制溶液：

 配制10%APS溶液：-20度保存

0.5g APS + 5ml蒸馏水、2.5g APS + 25ml蒸馏水

 配制200 ml电泳缓冲液：CW0045 Tris-Glycine SDS（ph8.3,10×）

20 ml Tris-Glycine SDS + 180 ml 蒸馏水

 配制1 ml loading buffer：

200 ul 5×loading buffer +800 ul蒸馏水

实验步骤：

一．制胶：

1. 参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。

2. 根据分离蛋白的大小配制分离胶和浓缩胶。

SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围

SDS-PAGE分离胶

浓度

6%胶

8%胶

10%胶

12%胶

15%胶

3. 配制10%分离胶：

将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯或试

管中混合。

加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

配制SDS-PAGE分离胶

分离凝胶所需各组分体积（单位：ml）

最佳分离范围

50-150kD

30-90kD

20-80kD

12-60kD

10-40kD

仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除 谢谢

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2024年4月2日发(作者：车睿聪)

WB验步骤

实

精品资料

蛋白电泳（制胶、SDS-PAGE电泳）

实验材料：

SDS-PAGE凝胶制备试剂盒、电泳缓冲液、提取的蛋白或全细胞裂解液、

广谱彩虹预染中分子量蛋白Marker、SDS-PAGE Loading Buffer（还原，

5×）、G250蛋白快速染色试剂、若干蒸馏水

实验仪器、耗材：

蛋白电泳仪、制胶仪、水平摇床、15ml离心管、5ml移液器、微量移液器、

1.5ml离心管、塑料饭盒（可在微波炉里加热使用）

配制溶液：

 配制10%APS溶液：-20度保存

0.5g APS + 5ml蒸馏水、2.5g APS + 25ml蒸馏水

 配制200 ml电泳缓冲液：CW0045 Tris-Glycine SDS（ph8.3,10×）

20 ml Tris-Glycine SDS + 180 ml 蒸馏水

 配制1 ml loading buffer：

200 ul 5×loading buffer +800 ul蒸馏水

实验步骤：

一．制胶：

1. 参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。

2. 根据分离蛋白的大小配制分离胶和浓缩胶。

SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围

SDS-PAGE分离胶

浓度

6%胶

8%胶

10%胶

12%胶

15%胶

3. 配制10%分离胶：

将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯或试

管中混合。

加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

配制SDS-PAGE分离胶

分离凝胶所需各组分体积（单位：ml）

最佳分离范围

50-150kD

30-90kD

20-80kD

12-60kD

10-40kD

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