2024年4月8日发(作者：涂巧香)
考马斯亮蓝(Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒 M2031 产品说明书
考马斯亮蓝(Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒
Coomassie (Bradford) Protein Assay Kit
产品简介：
Bradford法（考马斯亮蓝法），是目前灵敏度最高的蛋白质测定法之一。当Bradford 染色液（考
马斯亮蓝G250）和蛋白在酸性条件下结合时，溶液颜色由棕黑色转为蓝色，最大吸光值波长由456nm 转
至595nm，吸光值与蛋白质的含量在一定浓度范围内有较好的线性关系，通过测定吸光值大小并对照
标准蛋白的吸光值，推算出蛋白浓度，实现了蛋白浓度测定的快速，稳定和高灵敏度。
Bradford 染色液为2 倍浓缩母液，便于储存。
产品特点:
快速，10-20 个样品只需要10 分钟即可完成测定。
稳定，加样混匀后2 分钟既可测定，1 小时内吸光度变化不超过10%。
最小测量体积为1-20 uL，最低测量蛋白量为0.5 ug。
有常规和微量两种检测模式。
不受绝大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高
达5 mM。
但受略高浓度的表面活性剂影响，各种蛋白质与染料的结合效率可能有差异。
经济实用：在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。
产品组成：
产品组成
规格
Albumin (BSA)蛋白标准
(5mg/ml)
Bradford 2x 染色液
M2031-1
250 次微孔板法或50次比色皿法
0.5ml
25ml
M2031-2
1000次微孔板法或200次比色皿法
1.5ml
100ml
上海美季生物技术有限公司
上海市中山南二路777号2号搂2303
Mbchem™品牌为上海美季生物技术有限公司所有
电话：86- 传真:86--800
本产品仅供科学研究使用
This product is for research use only. Not for human or diagnostic use.
考马斯亮蓝(Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒 M2031 产品说明书
保存温度：
Bradford
染色液2-8℃保存，BSA蛋白标准-20℃保存。有效期一年。
操作步骤：
一、 常规测定
A． 96 孔酶标板测定：
1. 根据需要从冰箱取出适量Bradford 2x 染色液，平衡至室温并混匀；预热酶标仪20分钟。
2. 根据需要取适量标准品,加入去离子水稀释至1mg/ml(原液5mg/ml),并混匀。
注意：原则上
蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以
用去离子水、0.9%NaCl或PBS稀释标准品。稀释后的蛋白标准品也可以
-20℃长期保存。以下步骤
中均默认采用去离子水，可以根据条件选择使用稀释液。
3. 标准曲线绘制。取一块酶标板，按以下表格数据加入试剂：（此方案工作线性范围为
100-1000ug/ml。）
孔号
蛋白标准（l）
去离子水（l）
Bradford 2x 染色液（l）
对应的蛋白含量（g）
最终体积
A
0
100
100
0
B
1
99
100
1
C
2
98
100
2
D
3
97
100
3
E
4
96
100
4
F
6
94
100
6
G
8
92
100
8
H
10
90
100
10
200ul
4. 振荡混匀后，室温放置 5-10 分钟。
5. 用酶标仪测定595nm处的吸光值，以不含BSA 的光吸收值为空白对照。
6. 以蛋白含量（
μ
g）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。
7. 样品测定：将待测蛋白样品用去离子水稀释至适当浓度，取10
μ
l 样品，加入100
μ
l 2x
Bradford 染色液和90μl 的去离子水，混匀后放置5-10 分钟，然后以A 号孔为对照，测
定样品吸收值A595。
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电话：86- 传真:86--800
本产品仅供科学研究使用
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考马斯亮蓝(Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒 M2031 产品说明书
8. 根据测得的吸收值，在标准曲线上即可查得样品的蛋白含量。
9. 计算蛋白浓度：以查得的蛋白含量除以样品体积10
μl
，再乘以相应的稀释倍数即可得到
待测样品的实际浓度。
B． 比色皿测定：
1. 根据需要从冰箱取出适量Bradford 2x 染色液，平衡至室温并混匀；预热酶标仪20分钟。
2. 根据需要取适量标准品,加入去离子水稀释至1mg/ml(原液5mg/ml),并混匀。
注意：原则上
蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可
以用去离子水、0.9%NaCl或PBS稀释标准品。稀释后的蛋白标准品也可以
-20℃长期保存。以下
步骤中均默认采用去离子水，可以根据条件选择使用稀释液。
10. 标准曲线绘制。取8个比色皿分别编号为A-H，按以下表格数据加入试剂：（此方案工作线
性范围为100-1000ug/ml。）
孔号
蛋白标准（l）
去离子水（l）
Bradford 2x 染色液（l）
对应的蛋白含量（g）
最终体积
A
0
500
500
0
B
5
495
500
5
C
10
490
500
10
D
15
485
500
15
E
20
480
500
20
F
30
470
500
30
G
40
460
500
40
H
50
450
500
50
1000ul
3. 振荡混匀后，室温放置 5-10 分钟。
4. 用分光光度计测定595nm处的吸光值，以不含BSA 的光吸收值为空白对照。
5. 以蛋白含量（
μ
g）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。
6. 样品测定：将待测蛋白样品用去离子水稀释至适当浓度，取50
μ
l 样品，加入500
μ
l 2x
Bradford 染色液和450μl 的去离子水，混匀后放置5-10 分钟，然后以A 号比色皿为对
照，测定样品吸收值A595。
上海美季生物技术有限公司
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This product is for research use only. Not for human or diagnostic use.
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7. 根据测得的吸收值，在标准曲线上即可查得样品的蛋白含量。
8. 计算蛋白浓度：以查得的蛋白含量除以样品体积50
μl
，再乘以相应的稀释倍数即可得到
待测样品的实际浓度。
二、微量测定
：
只需要将常规测定第2步中的蛋白标准品加去离子水稀释至50ug/ml（此方案工作线性范
围为5-50ug/ml。）,其它步骤和常规测定相同。
您也可以根据需要调整蛋白标准品的浓度和各管中蛋白标准品的添加量，以便得到更精
确的结果。
常见问题：
1. 当吸光度大于0.8A时，请把样本稀释后再测定。
2. Bradford法测定蛋白浓度时待测样品浓度在 1～1500 微克/毫升浓度范围内有较好的线性
关系。您也可以根据需要调整标准蛋白稀释浓度范围来绘制标准曲线，以便得到更精确的结
果。
3. 最好使用塑料或玻璃比色皿。如使用石英比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇荡洗，以洗
去染色用完后可以乙醇反复清洗。塑料比色皿决不可用乙醇或丙酮长时间浸泡。
4. 比色顺序从蛋白浓度低的管开始，中间不必清洗比色皿，以免影响结果。
5. 疏水蛋白或粘蛋白，可能与染料发生沉淀，加入等体积1N NaOH 可以消除。
6. 如果知道样品的蛋白大体浓度，可以采用相近的3管做标准曲线。
7. 由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此Bradford法用于不同蛋白质
测定时有较大的偏差。
8. Bradford 染色液含有刺激性或者腐蚀性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼
睛和衣服。 若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
9. Bradford 染色液中考马斯亮蓝易聚集成团，每次使用前请颠倒6～8 次并且竖直抓住瓶口做
水平圈动作，旋转瓶中液体，帮助充分混匀，但不可以上下振荡混匀。
10. 低温会降低 Bradford 染色液的敏感度，因此每次使用前应该使Bradford 染色液回复到室
温，可以倒出每次需要的 Bradford 染色液，将原瓶放回冰箱，仅仅将需要的Bradford 染
色液复温，可以减少复温时间。
上海美季生物技术有限公司
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电话：86- 传真:86--800
本产品仅供科学研究使用
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考马斯亮蓝(Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒 M2031 产品说明书
11. 标准品曲线配制时，如果吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小，可根
据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制，或者使用精确度高的加样枪。
12. 由于 Bradford 法在蛋白浓度增高到一定时候，颜色反应并不成比例增加，因此得到的标准
曲线只是在一定范围内可以近似看成直线，每次应按照实际测得的标准曲线计算出相对精确
的蛋白浓度。
13. 需要酶标仪一台，最佳检测波长为 595nm，也可以在570～610nm 之间波长测定，但会降低
一些灵敏度。并需96 孔板。如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定。使用分
光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
14. 不像其它一些蛋白浓度测定方法（包括 Lowry 法），Bradford 法测定蛋白浓度不受绝大部
分样品中的化学物质的影响。样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二流苏糖醇的浓度可高达5mM。
但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS 低于0.125%,Triton X-100 低于0.125%，Tween 20
低于0.06%，可以考虑用超纯水稀释，透析/除盐，ACETONE/TCA 沉淀蛋白后重溶于超纯水等
方法来消除干扰物质的影响。含去垢剂的样品推荐使用Mbchem™的BCA 蛋白浓度测定试剂
盒（Mbchem™ M3020）。
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250 assays
1000 assays
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考马斯亮蓝(Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒
Coomassie (Bradford) Protein Assay Kit
产品简介：
Bradford法（考马斯亮蓝法），是目前灵敏度最高的蛋白质测定法之一。当Bradford 染色液（考
马斯亮蓝G250）和蛋白在酸性条件下结合时，溶液颜色由棕黑色转为蓝色，最大吸光值波长由456nm 转
至595nm，吸光值与蛋白质的含量在一定浓度范围内有较好的线性关系，通过测定吸光值大小并对照
标准蛋白的吸光值，推算出蛋白浓度，实现了蛋白浓度测定的快速，稳定和高灵敏度。
Bradford 染色液为2 倍浓缩母液，便于储存。
产品特点:
快速，10-20 个样品只需要10 分钟即可完成测定。
稳定，加样混匀后2 分钟既可测定，1 小时内吸光度变化不超过10%。
最小测量体积为1-20 uL，最低测量蛋白量为0.5 ug。
有常规和微量两种检测模式。
不受绝大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高
达5 mM。
但受略高浓度的表面活性剂影响，各种蛋白质与染料的结合效率可能有差异。
经济实用：在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。
产品组成：
产品组成
规格
Albumin (BSA)蛋白标准
(5mg/ml)
Bradford 2x 染色液
M2031-1
250 次微孔板法或50次比色皿法
0.5ml
25ml
M2031-2
1000次微孔板法或200次比色皿法
1.5ml
100ml
上海美季生物技术有限公司
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保存温度：
Bradford
染色液2-8℃保存，BSA蛋白标准-20℃保存。有效期一年。
操作步骤：
一、 常规测定
A． 96 孔酶标板测定：
1. 根据需要从冰箱取出适量Bradford 2x 染色液，平衡至室温并混匀；预热酶标仪20分钟。
2. 根据需要取适量标准品,加入去离子水稀释至1mg/ml(原液5mg/ml),并混匀。
注意：原则上
蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以
用去离子水、0.9%NaCl或PBS稀释标准品。稀释后的蛋白标准品也可以
-20℃长期保存。以下步骤
中均默认采用去离子水，可以根据条件选择使用稀释液。
3. 标准曲线绘制。取一块酶标板，按以下表格数据加入试剂：（此方案工作线性范围为
100-1000ug/ml。）
孔号
蛋白标准（l）
去离子水（l）
Bradford 2x 染色液（l）
对应的蛋白含量（g）
最终体积
A
0
100
100
0
B
1
99
100
1
C
2
98
100
2
D
3
97
100
3
E
4
96
100
4
F
6
94
100
6
G
8
92
100
8
H
10
90
100
10
200ul
4. 振荡混匀后，室温放置 5-10 分钟。
5. 用酶标仪测定595nm处的吸光值，以不含BSA 的光吸收值为空白对照。
6. 以蛋白含量（
μ
g）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。
7. 样品测定：将待测蛋白样品用去离子水稀释至适当浓度，取10
μ
l 样品，加入100
μ
l 2x
Bradford 染色液和90μl 的去离子水，混匀后放置5-10 分钟，然后以A 号孔为对照，测
定样品吸收值A595。
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8. 根据测得的吸收值，在标准曲线上即可查得样品的蛋白含量。
9. 计算蛋白浓度：以查得的蛋白含量除以样品体积10
μl
，再乘以相应的稀释倍数即可得到
待测样品的实际浓度。
B． 比色皿测定：
1. 根据需要从冰箱取出适量Bradford 2x 染色液，平衡至室温并混匀；预热酶标仪20分钟。
2. 根据需要取适量标准品,加入去离子水稀释至1mg/ml(原液5mg/ml),并混匀。
注意：原则上
蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可
以用去离子水、0.9%NaCl或PBS稀释标准品。稀释后的蛋白标准品也可以
-20℃长期保存。以下
步骤中均默认采用去离子水，可以根据条件选择使用稀释液。
10. 标准曲线绘制。取8个比色皿分别编号为A-H，按以下表格数据加入试剂：（此方案工作线
性范围为100-1000ug/ml。）
孔号
蛋白标准（l）
去离子水（l）
Bradford 2x 染色液（l）
对应的蛋白含量（g）
最终体积
A
0
500
500
0
B
5
495
500
5
C
10
490
500
10
D
15
485
500
15
E
20
480
500
20
F
30
470
500
30
G
40
460
500
40
H
50
450
500
50
1000ul
3. 振荡混匀后，室温放置 5-10 分钟。
4. 用分光光度计测定595nm处的吸光值，以不含BSA 的光吸收值为空白对照。
5. 以蛋白含量（
μ
g）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。
6. 样品测定：将待测蛋白样品用去离子水稀释至适当浓度，取50
μ
l 样品，加入500
μ
l 2x
Bradford 染色液和450μl 的去离子水，混匀后放置5-10 分钟，然后以A 号比色皿为对
照，测定样品吸收值A595。
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电话：86- 传真:86--800
本产品仅供科学研究使用
This product is for research use only. Not for human or diagnostic use.
考马斯亮蓝(Bradford)法蛋白浓度测定试剂盒 M2031 产品说明书
7. 根据测得的吸收值，在标准曲线上即可查得样品的蛋白含量。
8. 计算蛋白浓度：以查得的蛋白含量除以样品体积50
μl
，再乘以相应的稀释倍数即可得到
待测样品的实际浓度。
二、微量测定
：
只需要将常规测定第2步中的蛋白标准品加去离子水稀释至50ug/ml（此方案工作线性范
围为5-50ug/ml。）,其它步骤和常规测定相同。
您也可以根据需要调整蛋白标准品的浓度和各管中蛋白标准品的添加量，以便得到更精
确的结果。
常见问题：
1. 当吸光度大于0.8A时，请把样本稀释后再测定。
2. Bradford法测定蛋白浓度时待测样品浓度在 1～1500 微克/毫升浓度范围内有较好的线性
关系。您也可以根据需要调整标准蛋白稀释浓度范围来绘制标准曲线，以便得到更精确的结
果。
3. 最好使用塑料或玻璃比色皿。如使用石英比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇荡洗，以洗
去染色用完后可以乙醇反复清洗。塑料比色皿决不可用乙醇或丙酮长时间浸泡。
4. 比色顺序从蛋白浓度低的管开始，中间不必清洗比色皿，以免影响结果。
5. 疏水蛋白或粘蛋白，可能与染料发生沉淀，加入等体积1N NaOH 可以消除。
6. 如果知道样品的蛋白大体浓度，可以采用相近的3管做标准曲线。
7. 由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此Bradford法用于不同蛋白质
测定时有较大的偏差。
8. Bradford 染色液含有刺激性或者腐蚀性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼
睛和衣服。 若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
9. Bradford 染色液中考马斯亮蓝易聚集成团，每次使用前请颠倒6～8 次并且竖直抓住瓶口做
水平圈动作，旋转瓶中液体，帮助充分混匀，但不可以上下振荡混匀。
10. 低温会降低 Bradford 染色液的敏感度，因此每次使用前应该使Bradford 染色液回复到室
温，可以倒出每次需要的 Bradford 染色液，将原瓶放回冰箱，仅仅将需要的Bradford 染
色液复温，可以减少复温时间。
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11. 标准品曲线配制时，如果吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小，可根
据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制，或者使用精确度高的加样枪。
12. 由于 Bradford 法在蛋白浓度增高到一定时候，颜色反应并不成比例增加，因此得到的标准
曲线只是在一定范围内可以近似看成直线，每次应按照实际测得的标准曲线计算出相对精确
的蛋白浓度。
13. 需要酶标仪一台，最佳检测波长为 595nm，也可以在570～610nm 之间波长测定，但会降低
一些灵敏度。并需96 孔板。如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定。使用分
光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
14. 不像其它一些蛋白浓度测定方法（包括 Lowry 法），Bradford 法测定蛋白浓度不受绝大部
分样品中的化学物质的影响。样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二流苏糖醇的浓度可高达5mM。
但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS 低于0.125%,Triton X-100 低于0.125%，Tween 20
低于0.06%，可以考虑用超纯水稀释，透析/除盐，ACETONE/TCA 沉淀蛋白后重溶于超纯水等
方法来消除干扰物质的影响。含去垢剂的样品推荐使用Mbchem™的BCA 蛋白浓度测定试剂
盒（Mbchem™ M3020）。
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1000 assays
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