2024年5月16日发(作者：定雪卉)
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重庆医学２００７年３月第３６卷第６期
・
论 著・
ＴＮＦ— 对人牙周膜成纤维细胞ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ ｍＲＮＡ表达的影响
任 莉，裘松波△，谭颖徽，张 纲，郑加军
（第三军医大学新桥医院口腔科，重庆４０００３７）
摘 要：目的探讨肿瘤坏死因子一ａ（ＴＮＦ—ａ）对人牙周膜成纤维细胞（ＨＰＤＬＦｓ）的核因子一ＫＢ受体活化因子配体（ＲＡＮＫＩ ）
及其饵受体骨保护素（ＯＰＧ）ｍＲＮＡ表达的影响，了解ＴＮＦ＿ａ在破骨细胞性骨吸收调节中的作用机制。方法 将体外培养的人
牙周膜成纤维细胞用不同浓度的ＴＮＦ—ａ处理２４ ｈ，通过半定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）来观察人牙周膜成纤维细胞
ＯＰＧ、ＲＡＮＫＬ ｍＲＮＡ表达强度变化。结果
代谢。
ＴＮＦ—ａ上调人牙周膜成纤维细胞的ＲＡＮＫＬ ｍＲＮＡ表达，ＲＡＮＫＩ ／ＯＰＧ比率呈上
升趋势。结论 ＴＮＦ—ａ通过调节人牙周膜成纤维细胞的ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ的比值可间接地调节破骨细胞分化和活性，从而影响骨
关键词：肿瘤坏死因子一ａ；人牙周膜成纤维细胞；核因子一ＫＢ受体活化因子配体；骨保护素
中图分类号：Ｒ７３０．２１；Ｒ７８０．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７１—８３４８（２００７）０６—５０２～０３
Ｅｆｒｅｃｔ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ－ａｌｐｈａ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ
ｆａｃｔｏｒ－ｋＢ ｌｉｇａｎｄ ａｎｄ ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ ｍＲＮＡ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｌｉｇａｍｅｎｔ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ
ＲＥＮ Ｌ ，ＱｆＵ Ｓｏｎｇ—ｂｏ，ｒＡＮ Ｙｉｎｇ—ｈｕｉ，ｅｔ ａ１．
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｓｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｘｉｎｑｉａｏ Ｈｏｓｐｉｔａｌ， ｒ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ４０００３７，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｉｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ－ａｌｐｈａ（ＴＮＦ—ａ）ｏｎ ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ
ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ－￣Ｂ ｌｉｇａｎｄ（ＲＡＮＫＬ）ａｎｄ ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ（ＯＰＧ）ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｌｉｇａｍｅｎｔ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ（ＨＰＤＩ Ｆｓ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ
ＨＰＤＬＦｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｉｎ ｍｅｄｉａ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ １—１００ ｎｇ／ｍｌ ｏｆ ＴＮＦ—ａ．Ａｈｅｒ ２４ｈ ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ，ｓｅｍｉ—ｑｕａｎｉｔａｔｉｖｅ ＲＴ—ＰＣＲ
ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＯＰＧ ａｎｄ ＲＡＮＫＬ ｍＲＮＡ ｕｓｉｎｇ ｅ—ａｃｔｉｎ ｍＲＮＡ ａｓ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｃｏｎｔｒｏ１．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＴＮＦ—ａ
ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＲＡＮＫＩ ，ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ＲＡＮＫＩ ／ＯＰＧ ｒａｔｉｏ ｉｎ ＨＰＤＩ Ｆｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＴＮＦ—ａ ｍａｙ ｒｅｇｕ—
ｌａｔｅ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ ｂｙ ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＴＮＦ—ａ；ＨＰＤＬＦｓ；ＲＡＮＫＬ；ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ
控制牙周骨质炎症性吸收的前提是有效控制破骨细胞在
牙周局部的分化与活化。近年来骨吸收机制的研究发现核因
子一ＫＢ受体活化因子配体（ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ＮＦ—ＫＢ ｌｉｇａｎｄ，
ＲＡＮＫＬ）及其饵受体骨保护素（ｏｓｔｅＯｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ，ＯＰＧ）是细胞
外调节破骨细胞分化成熟和骨吸收功能的关键因子，是骨形
成、骨吸收的最终介质，该系统的异常将导致骨骼疾病 ｊ。肿
瘤坏死因子一ａ（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ－ａ，ＴＮＦ—ａ）主要是由巨噬
根中２／３的牙周膜，剪成小块均匀地接种在２５ｍｌ培养瓶的瓶
底，翻转培养瓶，向内加入４ｍｌ含有２Ｏ 胎牛血清的ＤＭＥＭ／
Ｆ１２培养液，置二氧化碳培养箱（５ Ｃ（）２、９５ 空气、１００ 湿
度、３７℃恒温）孵育３ｈ，使组织块贴壁，再翻转培养瓶培养。待
细胞汇合至培养瓶８Ｏ 时，即可进行传代。将培养的第３代
成纤维细胞接种到放有盖玻片的６孔板中，待细胞长至半满时
取出玻片。经４ 多聚甲醛固定，吹干，按常规免疫细胞化学
ＳＰ法操作，进行波形丝蛋白、角蛋白染色。光镜下观察胞质染
色情况，可见波形丝蛋白染色阳性，角蛋白染色阴性。
细胞分泌的一种细胞因子，是炎症导致局部牙槽骨吸收的主要
细胞因子之一。有研究发现，抑制ＴＮＦ—ａ在牙周局部与其受
体的结合，可以将炎症牙槽骨局部破骨细胞活性降低６Ｏ 以
上【２］。我们利用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）的方法，观察
ＴＮＦ—ａ是否通过影响人牙周膜成纤维细胞（ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ
ｌｉｇａｍｅｎｔ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ，ＨＰＤＬＦｓ）的ＯＰＧ、ＲＡＮＫＬ ｍＲＮＡ的表
１．３实验分组 收集第５代ＨＰＤＩ Ｆｓ，将细胞消化后按３．５
×１Ｏ 个／ｍｌ密度接种于６孔板中，培养液为含１Ｏ ＦＢＳ的
ＤＭＥＭ／Ｆ１２，培养条件同上。待细胞充分贴壁并达８Ｏ 汇合
时换用无血清ＤＭＥＭ／Ｆ１２继续培养２４ｈ。然后按实验分组改
用含ＴＮＦ—ａ的培养基（１组：０ｎｇ／ｍｌ；２组：１ｎｇ／ｍｌ；３组：１０ｎｇ／
ｍｌ；４组：１００ｎｇ／ｍ１），各组培养时间均为２４ｈ。取ｌ×１０ 个消
达，间接调节破骨细胞的分化和功能，从而刺激骨吸收，抑制骨
形成。
１材料与方法
化细胞提取总ＲＮＡ，每组总ＲＮＡ完成２次ＲＴ—ＰＣＲ，实验共
重复３次。
１．１ 试剂 ＴＮ卜ａ（美国ＰＥＰＲＯＴＥＣＨ公司）、ＤＭＥＭ／Ｆ１２
培养液、胎牛血清（ＨｙＣｌｏｎｅ公司）、胰蛋白酶（Ｒｏｃｈｅ公司）、免
疫组化染色试剂盒、波形丝蛋白、角蛋白（北京中山生物技术有
限公司）、Ｔｒｉｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｏｇｅｎ公司）、ＲＮＡ ＰＣＲ Ｋｉｔ（ＡＭＶ）
１．４逆转录聚合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）
１．４．１总ＲＮＡ提取及检测 采用Ｔｒｉｚｏｌ试剂盒提取ＨＰ—
ＤＬＦｓ总ＲＮＡ，并用无ＲＮＡ酶水溶解，取出少量稀释后经紫
Ｖｅｒ３．０试剂盒（ＴａＫａＲａ公司）、ＤＬ２０００ ｍａｒｋｅｒ（博大泰克公
司）。
外分光光度计测定其浓度和纯度，根据测定值调整ＲＮＡ标本
浓度为ｌｕｇ／１０ｕｌ。
１．２ ＨＰＤＬＦｓ的分离、培养和鉴定 组织块法培养ＨＰＤＬＦｓ，
参照司徒镇强 方法并加以改进。选择１２～２５岁因正畸或
１．４．２ ｃＤＮＡ第一链合成 采用ＴａＫａＲａ ＲＮＡ ＰＣＲ Ｋｉｔ
（ＡＭＶ）Ｖｅｒ３．０试剂盒，１Ｏ ｌ反应体系，包括：ＭｇＣｌｚ ２ ｌ、１０×
ＲＴ Ｂｕｆｆｅｒ １ ｃ上ｌ、ＲＮＡｓｅ Ｆｒｅｅ ｄＨ ２Ｏ ３．７５ｕｌ、ｄＮＴＰ Ｍｉｘｔｕｒｅ（各
１０ｒｅｔｏｏｌ／Ｌ）１ ｃ上ｌ、ＲＮＡｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ０．２５ｕｌ、ＡＭＶ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｉｌ—
阻生需要拔除的健康牙齿。在洁净工作台上用含双抗（青霉素
１００Ｕ／ｍｌ，链霉素１００ｕｇ／ｍ１）的生理盐水反复冲洗，用刀片刮下
＊ 基金项目：重庆市自然科学基金项目（２００５ＢＢ５３００）
通讯作者：电话：（０２３）６８７７４６４５；Ｅ—ｍａｉｌ：ｓｂｑｉｕｌ６＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｎ．ｃｎ
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重庆医学２００７年３月第３６卷第６期
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ｓｃｒｉｐｔａｓｅ ０．５／．１、ＯｌｉｇｏｄＴ—Ａｄａｐｔｏｒ Ｐｒｉｍｅｒ ０．５１，１、总ＲＮＡ １“１。
于紫外线箱中观察并照相记录。产物鉴定以ＤＩ ２０００ ｍａｒｋｅｒ
将以上试剂依次混合后，按以下条件进行逆转录反应：４２ ｃ
为标准。通过Ａｌｐｈａｌｍａｇｅｒ２２００型凝胶成像分析仪对目的基
３０ｍｉｎ、９９ Ｃ ５ｍｉｎ、５ Ｃ ５ｍｉｎ。即完成ｃＤＮＡ第一链的合成并 因和参照基因条带进行像素值测定，并算出二者比值。
灭活逆转录酶。 １．５统计学处理 采用ＳＰＳＳ１０．０软件对数据进行统计学处
１．４．３多聚酶链反应（ＰＣＲ）及产物分析ＰＣＲ扩增（）Ｐ（ 和
理，所有数据以 ± 表示，组问差异性比较作单因素方差分
ＲＡＮＫＩ ，同时扩增ｉ？－ａｃｔｉｎ作为内参照。引物由Ｉｎｖｉｔｏｇｅｎ公
析，Ｐ％０．０５及Ｐ％０．０１表示差异有统计学意义。
司合成，见表１。
２ 结 果
反应体系共５Ｏ ｌ，按下列组成配制ＰＣＲ反应液：５×ＰＣＲ ２．１ ＨＰＤＬＦｓ总ＲＮＡ检测 所提取的ＨＰＤＩ Ｆｓ总ＲＮＡ在
Ｂｕｆｆｅｒ １０／￣１、灭菌蒸馏水２８．７＿５“ｌ、ＴａＫａＲａ Ｅｘ Ｔａｑ ＨＳ ０．２５１，１、
１０ｇ／Ｌ的甲醛变性凝胶电泳后，其条带在紫外灯下观察为３条
上游引物０．５／．１、下游引物０．５／．１，共４０／．１，加入到逆转录反应
带，分别为２８Ｓ、１８ｓ、５ｓ，且各条带清晰拖尾轻，说明其质量和
结束后的ＰＣＲ反应管中，轻轻混匀。采用热启动ＰＣＲ进行扩 丰度均很高。在紫外分光光度计下检测各组ＲＮＡ的Ａ２６０／
增反应。反应条件：９４℃变性２ｍｉｎ、１个循环。９４ Ｃ变性３０ｓ、
Ａ２８０值均介于１．８～２ ０之间，说明其纯度较高。
５７ Ｃ退火４５ｓ、７２‘Ｃ延伸３０ｓ，３０个循环。所有循环最后均
２．２ ＰＣＲ产物分析ＯＰＧ、ＲＡＮＫＩ 、Ｂ—ａｃｔｉｎ的扩增产物分别
７２℃延伸７ｍｉｎ。
为３２６ｂｐ、４０４ｂｐ、５００ｂｐ。各组ＯＰＧ、ＲＡＮＫＬ目的基因条带和
１．４．４ ＰＣＲ产物鉴定和分析 取ＰＣＲ扩增产物１Ｏ“１和６×
Ｂ—ａｃｔｉｎ参照基因条带像素值之比，见表２。
加样缓冲液２／．１点样于１０ｇ／Ｌ琼脂糖凝胶，１００Ｖ电压下电泳，
表１ 扩增片断所用引物序列
与对照组相比： ：Ｐ＜０．０５；一：Ｐ％０．０１。
以上结果表明，低浓度（１ｎｇ／ｍ１）ＴＮＦ—ａ对ＨＰＤＩ Ｆｓ的
破骨细胞分化和活化的主要信号通路，其作用可被ＯＰＧ竞争
ＯＰＧ和ＲＡＮＫＬ ｍＲＮＡ表达的调节作用较空白对照组不明 性阻断。在骨组织，ＯＰＧ能够抑制破骨细胞的分化、成熟及骨
显（Ｐ＞０．０５）。ＴＮＦ～ａ可以下调ＯＰＧ ｍＲＮＡ表达，但这种刺
吸收活性并诱导其凋亡，ＲＡＮＫＩ 则是破骨细胞分化、激活及
激作用不呈剂量依赖性，以１０ｎｇ／ｍｌ ＴＮＦ＿ｎ的作用较空白对 发挥骨吸收活性所必须的。各种骨吸收刺激因子主要作用于
照组较为明显（Ｐ＜０．０５）。本结果同时发现，ＴＮＦ—ａ上调了
成骨／基质细胞，诱导成骨／基质细胞膜上表达ＲＡＮＫＩ 分子，
ＲＡＮＫＬ ｍＲＮＡ的表达及ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ比率。除低浓度
并与破骨细胞前体细胞膜上受体ＲＡＮＫ直接结合，使破骨细
（１ｎｇ／ｍ１）ＴＮＦ—ａ外，ＲＡＮＫＬ ｍＲＮＡ表达及ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ比
胞分化、成熟并产生活性。而ＯＰＧ则由成骨／基质细胞旁分泌
率均较对照组显著升高（Ｐ％０．０１）。
发挥作用，竞争性地与ＲＡＮＫＬ结合，抑制破骨细胞分化、成
３讨 论
熟。ＴＮＦ—ａ有通过该途径调节破骨细胞的理论可能性。
骨吸收的研究是口腔医学中的一个重要课题，随着对破骨 本实验研究发现，低浓度（１ｎｇ／ｍ１）的ＴＮＦ—ａ对ＨＰＤＬＦｓ
细胞调节机制研究的突破，研究者开始对ＲＡＮＫＬ和ＯＰＧ在
的ＲＡＮＫＬ和ＯＰＧ ｍＲＮＡ表达的调节作用不明显（Ｐ＞
口腔骨组织吸收中的作用进行研究。Ｈａｓｅｇａｗａ等 发现体
０．０５），这与Ｒｅｎａｔｅ Ｂａｌｇａ等∞ 在骨髓细胞中的研究结果一
外培养的人乳牙牙周膜细胞可以通过表达ＲＡＮＫＩ 和ＯＰＧ来
致。他们认为ＴＮＦ—ａ在破骨细胞形成过程中的综合作用依赖
调节破骨细胞形成。Ｋａｎｚａｋｉ等 ５ 通过建立牙周膜细胞和外 于其浓度、作用时间和造血环境。但本实验发现ＴＮＦ—ａ可以
周血单核细胞的共同培养体系，发现共同培养体系中的牙周膜
上调ＨＰＤＬＦｓ的ＲＡＮＫＩ ／ＯＰＧ比率，虽然低浓度组较空白对
细胞可通过改变ＲＡＮＫＩ 和ＯＰＧ的表达，从而诱导破骨细胞
照组没有显著差异，但其比率还是有了较大程度的升高。有研
形成，这表明ＲＡＮＫＬ和ＯＰＧ与牙齿和牙槽骨的吸收关系密
究者将ＲＡＮＫＬ和ＯＰＧ ｍＲＮＡ单独分开来研究，其缺点就是
切。
将ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ这个整体分割开来，单独考虑干预过程中某
ＴＮＦ—ａ具有破骨细胞激活因子的活性，促进牙槽骨吸收
一
细胞因子的改变对骨代谢的影响，这种单向改变的绝对值不
过程的作用是通过破骨细胞发挥作用的，但破骨细胞表面没有
能说明体内ＲＡＮＫＩ 或ＯＰＧ的缺乏或过剩情况。我们倾向于
ＴＮＦ—ａ受体，因而ＴＮＦ—ａ可能是通过作用于牙周膜内其他细
整体研究，用ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ这个指标来衡量骨吸收和骨形成
胞成分，使之进一步作用于破骨细胞。有研究表明在Ｍ—ＣＳＦ
的平衡关系。Ｏｓｈｉｒｏ等＿ｇ 的研究揭示ＯＰＧ基因敲除鼠在切牙
协同作用下，ＲＡＮＫＬ能诱导大鼠骨髓ＴＲＡＰ（＋）的破骨细胞
的移动中可检测到破骨细胞数量增多，牙槽骨破坏严重，而
的形成 ｊ。现已证明ＴＮＦ—ａ和ＲＡＮＫＬ相互作用可以增强人
ＲＡＮＫＬ的表达量与正常鼠一致，表明ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ的相对
类破骨细胞活性 ］。研究发现，ＲＡＮＫＩ ／ＲＡＮＫ系统是介导
浓度决定了牙槽骨的的骨吸收平衡。由此可见，在体内骨吸收
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重庆医学２００７年３月第３６卷第６期
Ｈａｓｅｇａｗａ Ｔ，Ｋｉｋｕｉｒｉ Ｔ．Ｈｕｎｍａｎ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｌｉｇａｍｅｎｔ
和骨形成的平衡关系中，ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ比率是一个重要的杠
杆。
ｃｅｌｌｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｄｅｃｉｄｕｏｕｓ ｔｅｅｔｈ ｉｎｄｕｃｅ ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｏｇｅｎｅ—
本实验结果证实，ＴＮＦ－ａ能够刺激ＨＰＤＬＦｓ的ＲＡＮＫＬ
ｓｉｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｅｌｌ，２００２，３４（１）：４４
Ｋａｎｚａｋｉ Ｈ．Ｃｈｉｂａ Ｍ．Ｔａｋａｈａｓｈｉ Ｉ．ｅｔ ａ１．Ｄｕａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
ｏｆ ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｂｙ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｌｉｇａｍｅｎｔ ｃｅｌｌｓ
ｍＲＮＡ表达，ｌｎｇ／ｍｌ浓度组的刺激作用虽不如１０ｎｇ／ｍｌ，但仍
较对照组有较高的ＲＡＮＫＬ ｍＲＮＡ的表达。ＴＮＦ—ａ下调
ＯＰＧ ｍＲＮＡ表达，但不呈剂量依赖性。研究证实ＴＮＦ—ａ能上
调ＲＡＮＫＬ／０ＰＧ的比率，因而提示ＴＮＦ ａ可能通过上调ＨＰ—
ＤＬＦｓ的ＲＡＮＫＩ ／ＯＰＧ浓度比，影响ＯＰＧ／ＲＡＮＫＬ／ＲＡＮＫ
ｔｈｒｏｕｇｈ ＲＡＮＫＬ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ＯＰＧ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ［Ｊ］．
Ｄｅｎｔ Ｒｅｓ，２００１，８Ｏ（３）：８８７
杨健，谭颖徽，裘松波．核因子一 Ｂ受体活化因子配体诱导
大鼠骨髓破骨细胞形成的实验研究［Ｊ］．重庆医学，２００４，
３３（３）：３８４
信号系统，以旁分泌调节破骨细胞分化，刺激骨吸收和抑制骨
形成。
参考文献：
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ｒ２］Ａｓｓｕｍａ Ｒ，Ｏａｔｅｓ Ｔ，Ｃｏｃｈｒａｎ Ｄ，ｅｔ ａ１．ＩＬ－１ ａｎｄ ＴＮＦ
ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｎｄ ｂｏｎｅ
ｌｏｓｓ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９８，
］ ］ ］ ］ ］ ］
ｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｃｉｓｏｒｓ ｉｎ ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ－ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ［Ｊ］．
Ａｎａｔ Ｒｅｃ，２００２，２６６（４）：２１８
１６０：４０３
［３］司徒镇强，吴军正主编．细胞培养［Ｍ］．西安：世界图书出
版社，２００４．７２
（收稿日期：２００６—１２ ０２）
・
短篇及病例报道・
泰能致哮喘样发作１例
段利平，王秀芝
（北京军区北戴河疗养院第二疗养区
中图分类号：Ｒ５９５．４
１临床资料
０６６１００）
文献标识码：Ｂ 文章编号：１６７１—８３４８（２００７）０６ ５０４—０１
司生产的泰能（ｉ．０ｇ）静滴抗感染治疗，用药约１０ｍｉｎ后，患者
突发呼吸困难，不能平卧，大汗。查体：双肺满布双期高调哮鸣
音，心率ｉｉ０次／ｍｉｎ，律齐。立即停用泰能，给予地塞米１０ｍｇ
静注，５ 葡萄糖注射液２５０ｍｌ加氨茶碱注射液０．２５ｇ静滴平
喘，２０ｍｉｎ后患者症状明显减轻，３０ｍｉｎ后症状完全消失，查体
患者，６２岁，因发热、咳嗽、咳痰１个月于２００４年１２月１８
１５Ｉ入院。患者于入院前１个月受凉后出现发热，体温最高
３８．５℃，畏寒无寒战，咳嗽，就诊于社区诊所，给予静滴青霉素、
环丙沙星感染治疗１０ｄ，体温仍波动于３８．０～３８．５℃，咳嗽症
状无明显缓解，并出现咳痰，为黄色脓痰，１Ｏ～２Ｏ口／ｄ，无痰中
带血，痰无臭味，遂改抗生素为先锋Ｖ、阿奇霉素静滴继续抗感
染治疗半月余，上述症状仍无好转。为求进一步诊治入我院。
既往体健，否认药物过敏史。
体格检查：体温３７．５℃，脉搏９２次／ｍｉｎ，呼吸２Ｏ次／ｍｉｎ，
双肺呼吸音粗，未闻及喘鸣音。后改抗生素为“头孢哌酮钠／舒
巴坦钠、盐酸左氧氟沙星”静滴联合抗感染治疗，１个月后患者
临床症状消失，查体双肺呼吸音清，未闻及干湿性罗音。复查
胸片：双肺纹理增重，未见片状影。患者痊愈出院。
２讨 论
血压１３０／８５ｍｍ Ｈｇ（１ｍｍ Ｈｇ一０．１３３ｋＰａ）。慢性病面容，营 泰能（亚胺培南／西司他丁钠盐）是一种广谱的０一内酰胺类
抗生素。它具有强力抑制细胞壁合成的能力，可杀灭绝大部分
革兰阳性和阴性的需氧和厌氧病原菌。它的不良反应有局部
红斑、疼痛和硬结，血栓性静脉炎。有皮疹、瘙痒及中毒性表皮
坏死，有胃肠道反应，血细胞减少，肝酶增高及幻觉、错乱状态
及癫痫发作＿１］。也有味觉异常，听觉丧失报道。但本例患者用
养差，自动体位。全身淋巴结未触及，颈静脉无怒张。双肺呼
吸音粗，双侧腋下、背底可闻及散在细湿【罗音，未闻及哮鸣音。
心界不大，心率９２次／ｍｉｎ，律齐，各瓣膜听诊区未闻及病理性
杂音。腹软，未触及包块，无压痛、反跳痛、肌紧张，肠鸣音正
常。辅助检查：心电图示：窦性心律，正常心电图。胸片：双肺
纹理重，双侧中下肺野可见大片状高密度阴影，边缘模糊，左肺
较明显。化验检查：血常规：ｗＢＣ ８．１２×１Ｏ ／Ｌ、Ｎ ０．７８、
Ｈｂｌ５６ｇ／Ｌ、ＰＬＴ１９２×１０ ／Ｌ，ＥＳＲ ２０ｍｍ／第１小时，ＰＰＤ Ｃ
药后出现哮喘样发作，目前尚无报道，谨请医师注意。
参考文献：
试验阴性。痰培养加药敏提示：可见铜绿假单胞菌生长，对泰
能敏感。入院诊断：双侧肺炎。
［１］陈新谦，金有豫，汤光主编．新编药物学［Ｍ］．第１５版．北
京：人民卫生出版社，２００３．７３
（收稿日期：２００６—０８—１６）
治疗过程：入院后给予抗感染、止咳化痰等对症治疗。
２００４年１２月２６日依据药敏试验给予杭州默沙东制药有限公
2024年5月16日发(作者：定雪卉)
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５０２
重庆医学２００７年３月第３６卷第６期
・
论 著・
ＴＮＦ— 对人牙周膜成纤维细胞ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ ｍＲＮＡ表达的影响
任 莉，裘松波△，谭颖徽，张 纲，郑加军
（第三军医大学新桥医院口腔科，重庆４０００３７）
摘 要：目的探讨肿瘤坏死因子一ａ（ＴＮＦ—ａ）对人牙周膜成纤维细胞（ＨＰＤＬＦｓ）的核因子一ＫＢ受体活化因子配体（ＲＡＮＫＩ ）
及其饵受体骨保护素（ＯＰＧ）ｍＲＮＡ表达的影响，了解ＴＮＦ＿ａ在破骨细胞性骨吸收调节中的作用机制。方法 将体外培养的人
牙周膜成纤维细胞用不同浓度的ＴＮＦ—ａ处理２４ ｈ，通过半定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）来观察人牙周膜成纤维细胞
ＯＰＧ、ＲＡＮＫＬ ｍＲＮＡ表达强度变化。结果
代谢。
ＴＮＦ—ａ上调人牙周膜成纤维细胞的ＲＡＮＫＬ ｍＲＮＡ表达，ＲＡＮＫＩ ／ＯＰＧ比率呈上
升趋势。结论 ＴＮＦ—ａ通过调节人牙周膜成纤维细胞的ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ的比值可间接地调节破骨细胞分化和活性，从而影响骨
关键词：肿瘤坏死因子一ａ；人牙周膜成纤维细胞；核因子一ＫＢ受体活化因子配体；骨保护素
中图分类号：Ｒ７３０．２１；Ｒ７８０．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７１—８３４８（２００７）０６—５０２～０３
Ｅｆｒｅｃｔ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ－ａｌｐｈａ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ
ｆａｃｔｏｒ－ｋＢ ｌｉｇａｎｄ ａｎｄ ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ ｍＲＮＡ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｌｉｇａｍｅｎｔ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ
ＲＥＮ Ｌ ，ＱｆＵ Ｓｏｎｇ—ｂｏ，ｒＡＮ Ｙｉｎｇ—ｈｕｉ，ｅｔ ａ１．
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｓｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｘｉｎｑｉａｏ Ｈｏｓｐｉｔａｌ， ｒ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ４０００３７，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｉｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ－ａｌｐｈａ（ＴＮＦ—ａ）ｏｎ ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ
ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ－￣Ｂ ｌｉｇａｎｄ（ＲＡＮＫＬ）ａｎｄ ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ（ＯＰＧ）ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｌｉｇａｍｅｎｔ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ（ＨＰＤＩ Ｆｓ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ
ＨＰＤＬＦｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｉｎ ｍｅｄｉａ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ １—１００ ｎｇ／ｍｌ ｏｆ ＴＮＦ—ａ．Ａｈｅｒ ２４ｈ ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ，ｓｅｍｉ—ｑｕａｎｉｔａｔｉｖｅ ＲＴ—ＰＣＲ
ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＯＰＧ ａｎｄ ＲＡＮＫＬ ｍＲＮＡ ｕｓｉｎｇ ｅ—ａｃｔｉｎ ｍＲＮＡ ａｓ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｃｏｎｔｒｏ１．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＴＮＦ—ａ
ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＲＡＮＫＩ ，ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ＲＡＮＫＩ ／ＯＰＧ ｒａｔｉｏ ｉｎ ＨＰＤＩ Ｆｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＴＮＦ—ａ ｍａｙ ｒｅｇｕ—
ｌａｔｅ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ ｂｙ ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＴＮＦ—ａ；ＨＰＤＬＦｓ；ＲＡＮＫＬ；ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ
控制牙周骨质炎症性吸收的前提是有效控制破骨细胞在
牙周局部的分化与活化。近年来骨吸收机制的研究发现核因
子一ＫＢ受体活化因子配体（ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ＮＦ—ＫＢ ｌｉｇａｎｄ，
ＲＡＮＫＬ）及其饵受体骨保护素（ｏｓｔｅＯｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ，ＯＰＧ）是细胞
外调节破骨细胞分化成熟和骨吸收功能的关键因子，是骨形
成、骨吸收的最终介质，该系统的异常将导致骨骼疾病 ｊ。肿
瘤坏死因子一ａ（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ－ａ，ＴＮＦ—ａ）主要是由巨噬
根中２／３的牙周膜，剪成小块均匀地接种在２５ｍｌ培养瓶的瓶
底，翻转培养瓶，向内加入４ｍｌ含有２Ｏ 胎牛血清的ＤＭＥＭ／
Ｆ１２培养液，置二氧化碳培养箱（５ Ｃ（）２、９５ 空气、１００ 湿
度、３７℃恒温）孵育３ｈ，使组织块贴壁，再翻转培养瓶培养。待
细胞汇合至培养瓶８Ｏ 时，即可进行传代。将培养的第３代
成纤维细胞接种到放有盖玻片的６孔板中，待细胞长至半满时
取出玻片。经４ 多聚甲醛固定，吹干，按常规免疫细胞化学
ＳＰ法操作，进行波形丝蛋白、角蛋白染色。光镜下观察胞质染
色情况，可见波形丝蛋白染色阳性，角蛋白染色阴性。
细胞分泌的一种细胞因子，是炎症导致局部牙槽骨吸收的主要
细胞因子之一。有研究发现，抑制ＴＮＦ—ａ在牙周局部与其受
体的结合，可以将炎症牙槽骨局部破骨细胞活性降低６Ｏ 以
上【２］。我们利用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）的方法，观察
ＴＮＦ—ａ是否通过影响人牙周膜成纤维细胞（ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ
ｌｉｇａｍｅｎｔ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ，ＨＰＤＬＦｓ）的ＯＰＧ、ＲＡＮＫＬ ｍＲＮＡ的表
１．３实验分组 收集第５代ＨＰＤＩ Ｆｓ，将细胞消化后按３．５
×１Ｏ 个／ｍｌ密度接种于６孔板中，培养液为含１Ｏ ＦＢＳ的
ＤＭＥＭ／Ｆ１２，培养条件同上。待细胞充分贴壁并达８Ｏ 汇合
时换用无血清ＤＭＥＭ／Ｆ１２继续培养２４ｈ。然后按实验分组改
用含ＴＮＦ—ａ的培养基（１组：０ｎｇ／ｍｌ；２组：１ｎｇ／ｍｌ；３组：１０ｎｇ／
ｍｌ；４组：１００ｎｇ／ｍ１），各组培养时间均为２４ｈ。取ｌ×１０ 个消
达，间接调节破骨细胞的分化和功能，从而刺激骨吸收，抑制骨
形成。
１材料与方法
化细胞提取总ＲＮＡ，每组总ＲＮＡ完成２次ＲＴ—ＰＣＲ，实验共
重复３次。
１．１ 试剂 ＴＮ卜ａ（美国ＰＥＰＲＯＴＥＣＨ公司）、ＤＭＥＭ／Ｆ１２
培养液、胎牛血清（ＨｙＣｌｏｎｅ公司）、胰蛋白酶（Ｒｏｃｈｅ公司）、免
疫组化染色试剂盒、波形丝蛋白、角蛋白（北京中山生物技术有
限公司）、Ｔｒｉｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｏｇｅｎ公司）、ＲＮＡ ＰＣＲ Ｋｉｔ（ＡＭＶ）
１．４逆转录聚合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）
１．４．１总ＲＮＡ提取及检测 采用Ｔｒｉｚｏｌ试剂盒提取ＨＰ—
ＤＬＦｓ总ＲＮＡ，并用无ＲＮＡ酶水溶解，取出少量稀释后经紫
Ｖｅｒ３．０试剂盒（ＴａＫａＲａ公司）、ＤＬ２０００ ｍａｒｋｅｒ（博大泰克公
司）。
外分光光度计测定其浓度和纯度，根据测定值调整ＲＮＡ标本
浓度为ｌｕｇ／１０ｕｌ。
１．２ ＨＰＤＬＦｓ的分离、培养和鉴定 组织块法培养ＨＰＤＬＦｓ，
参照司徒镇强 方法并加以改进。选择１２～２５岁因正畸或
１．４．２ ｃＤＮＡ第一链合成 采用ＴａＫａＲａ ＲＮＡ ＰＣＲ Ｋｉｔ
（ＡＭＶ）Ｖｅｒ３．０试剂盒，１Ｏ ｌ反应体系，包括：ＭｇＣｌｚ ２ ｌ、１０×
ＲＴ Ｂｕｆｆｅｒ １ ｃ上ｌ、ＲＮＡｓｅ Ｆｒｅｅ ｄＨ ２Ｏ ３．７５ｕｌ、ｄＮＴＰ Ｍｉｘｔｕｒｅ（各
１０ｒｅｔｏｏｌ／Ｌ）１ ｃ上ｌ、ＲＮＡｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ０．２５ｕｌ、ＡＭＶ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｉｌ—
阻生需要拔除的健康牙齿。在洁净工作台上用含双抗（青霉素
１００Ｕ／ｍｌ，链霉素１００ｕｇ／ｍ１）的生理盐水反复冲洗，用刀片刮下
＊ 基金项目：重庆市自然科学基金项目（２００５ＢＢ５３００）
通讯作者：电话：（０２３）６８７７４６４５；Ｅ—ｍａｉｌ：ｓｂｑｉｕｌ６＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｎ．ｃｎ
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重庆医学２００７年３月第３６卷第６期
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ｓｃｒｉｐｔａｓｅ ０．５／．１、ＯｌｉｇｏｄＴ—Ａｄａｐｔｏｒ Ｐｒｉｍｅｒ ０．５１，１、总ＲＮＡ １“１。
于紫外线箱中观察并照相记录。产物鉴定以ＤＩ ２０００ ｍａｒｋｅｒ
将以上试剂依次混合后，按以下条件进行逆转录反应：４２ ｃ
为标准。通过Ａｌｐｈａｌｍａｇｅｒ２２００型凝胶成像分析仪对目的基
３０ｍｉｎ、９９ Ｃ ５ｍｉｎ、５ Ｃ ５ｍｉｎ。即完成ｃＤＮＡ第一链的合成并 因和参照基因条带进行像素值测定，并算出二者比值。
灭活逆转录酶。 １．５统计学处理 采用ＳＰＳＳ１０．０软件对数据进行统计学处
１．４．３多聚酶链反应（ＰＣＲ）及产物分析ＰＣＲ扩增（）Ｐ（ 和
理，所有数据以 ± 表示，组问差异性比较作单因素方差分
ＲＡＮＫＩ ，同时扩增ｉ？－ａｃｔｉｎ作为内参照。引物由Ｉｎｖｉｔｏｇｅｎ公
析，Ｐ％０．０５及Ｐ％０．０１表示差异有统计学意义。
司合成，见表１。
２ 结 果
反应体系共５Ｏ ｌ，按下列组成配制ＰＣＲ反应液：５×ＰＣＲ ２．１ ＨＰＤＬＦｓ总ＲＮＡ检测 所提取的ＨＰＤＩ Ｆｓ总ＲＮＡ在
Ｂｕｆｆｅｒ １０／￣１、灭菌蒸馏水２８．７＿５“ｌ、ＴａＫａＲａ Ｅｘ Ｔａｑ ＨＳ ０．２５１，１、
１０ｇ／Ｌ的甲醛变性凝胶电泳后，其条带在紫外灯下观察为３条
上游引物０．５／．１、下游引物０．５／．１，共４０／．１，加入到逆转录反应
带，分别为２８Ｓ、１８ｓ、５ｓ，且各条带清晰拖尾轻，说明其质量和
结束后的ＰＣＲ反应管中，轻轻混匀。采用热启动ＰＣＲ进行扩 丰度均很高。在紫外分光光度计下检测各组ＲＮＡ的Ａ２６０／
增反应。反应条件：９４℃变性２ｍｉｎ、１个循环。９４ Ｃ变性３０ｓ、
Ａ２８０值均介于１．８～２ ０之间，说明其纯度较高。
５７ Ｃ退火４５ｓ、７２‘Ｃ延伸３０ｓ，３０个循环。所有循环最后均
２．２ ＰＣＲ产物分析ＯＰＧ、ＲＡＮＫＩ 、Ｂ—ａｃｔｉｎ的扩增产物分别
７２℃延伸７ｍｉｎ。
为３２６ｂｐ、４０４ｂｐ、５００ｂｐ。各组ＯＰＧ、ＲＡＮＫＬ目的基因条带和
１．４．４ ＰＣＲ产物鉴定和分析 取ＰＣＲ扩增产物１Ｏ“１和６×
Ｂ—ａｃｔｉｎ参照基因条带像素值之比，见表２。
加样缓冲液２／．１点样于１０ｇ／Ｌ琼脂糖凝胶，１００Ｖ电压下电泳，
表１ 扩增片断所用引物序列
与对照组相比： ：Ｐ＜０．０５；一：Ｐ％０．０１。
以上结果表明，低浓度（１ｎｇ／ｍ１）ＴＮＦ—ａ对ＨＰＤＩ Ｆｓ的
破骨细胞分化和活化的主要信号通路，其作用可被ＯＰＧ竞争
ＯＰＧ和ＲＡＮＫＬ ｍＲＮＡ表达的调节作用较空白对照组不明 性阻断。在骨组织，ＯＰＧ能够抑制破骨细胞的分化、成熟及骨
显（Ｐ＞０．０５）。ＴＮＦ～ａ可以下调ＯＰＧ ｍＲＮＡ表达，但这种刺
吸收活性并诱导其凋亡，ＲＡＮＫＩ 则是破骨细胞分化、激活及
激作用不呈剂量依赖性，以１０ｎｇ／ｍｌ ＴＮＦ＿ｎ的作用较空白对 发挥骨吸收活性所必须的。各种骨吸收刺激因子主要作用于
照组较为明显（Ｐ＜０．０５）。本结果同时发现，ＴＮＦ—ａ上调了
成骨／基质细胞，诱导成骨／基质细胞膜上表达ＲＡＮＫＩ 分子，
ＲＡＮＫＬ ｍＲＮＡ的表达及ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ比率。除低浓度
并与破骨细胞前体细胞膜上受体ＲＡＮＫ直接结合，使破骨细
（１ｎｇ／ｍ１）ＴＮＦ—ａ外，ＲＡＮＫＬ ｍＲＮＡ表达及ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ比
胞分化、成熟并产生活性。而ＯＰＧ则由成骨／基质细胞旁分泌
率均较对照组显著升高（Ｐ％０．０１）。
发挥作用，竞争性地与ＲＡＮＫＬ结合，抑制破骨细胞分化、成
３讨 论
熟。ＴＮＦ—ａ有通过该途径调节破骨细胞的理论可能性。
骨吸收的研究是口腔医学中的一个重要课题，随着对破骨 本实验研究发现，低浓度（１ｎｇ／ｍ１）的ＴＮＦ—ａ对ＨＰＤＬＦｓ
细胞调节机制研究的突破，研究者开始对ＲＡＮＫＬ和ＯＰＧ在
的ＲＡＮＫＬ和ＯＰＧ ｍＲＮＡ表达的调节作用不明显（Ｐ＞
口腔骨组织吸收中的作用进行研究。Ｈａｓｅｇａｗａ等 发现体
０．０５），这与Ｒｅｎａｔｅ Ｂａｌｇａ等∞ 在骨髓细胞中的研究结果一
外培养的人乳牙牙周膜细胞可以通过表达ＲＡＮＫＩ 和ＯＰＧ来
致。他们认为ＴＮＦ—ａ在破骨细胞形成过程中的综合作用依赖
调节破骨细胞形成。Ｋａｎｚａｋｉ等 ５ 通过建立牙周膜细胞和外 于其浓度、作用时间和造血环境。但本实验发现ＴＮＦ—ａ可以
周血单核细胞的共同培养体系，发现共同培养体系中的牙周膜
上调ＨＰＤＬＦｓ的ＲＡＮＫＩ ／ＯＰＧ比率，虽然低浓度组较空白对
细胞可通过改变ＲＡＮＫＩ 和ＯＰＧ的表达，从而诱导破骨细胞
照组没有显著差异，但其比率还是有了较大程度的升高。有研
形成，这表明ＲＡＮＫＬ和ＯＰＧ与牙齿和牙槽骨的吸收关系密
究者将ＲＡＮＫＬ和ＯＰＧ ｍＲＮＡ单独分开来研究，其缺点就是
切。
将ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ这个整体分割开来，单独考虑干预过程中某
ＴＮＦ—ａ具有破骨细胞激活因子的活性，促进牙槽骨吸收
一
细胞因子的改变对骨代谢的影响，这种单向改变的绝对值不
过程的作用是通过破骨细胞发挥作用的，但破骨细胞表面没有
能说明体内ＲＡＮＫＩ 或ＯＰＧ的缺乏或过剩情况。我们倾向于
ＴＮＦ—ａ受体，因而ＴＮＦ—ａ可能是通过作用于牙周膜内其他细
整体研究，用ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ这个指标来衡量骨吸收和骨形成
胞成分，使之进一步作用于破骨细胞。有研究表明在Ｍ—ＣＳＦ
的平衡关系。Ｏｓｈｉｒｏ等＿ｇ 的研究揭示ＯＰＧ基因敲除鼠在切牙
协同作用下，ＲＡＮＫＬ能诱导大鼠骨髓ＴＲＡＰ（＋）的破骨细胞
的移动中可检测到破骨细胞数量增多，牙槽骨破坏严重，而
的形成 ｊ。现已证明ＴＮＦ—ａ和ＲＡＮＫＬ相互作用可以增强人
ＲＡＮＫＬ的表达量与正常鼠一致，表明ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ的相对
类破骨细胞活性 ］。研究发现，ＲＡＮＫＩ ／ＲＡＮＫ系统是介导
浓度决定了牙槽骨的的骨吸收平衡。由此可见，在体内骨吸收
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重庆医学２００７年３月第３６卷第６期
Ｈａｓｅｇａｗａ Ｔ，Ｋｉｋｕｉｒｉ Ｔ．Ｈｕｎｍａｎ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｌｉｇａｍｅｎｔ
和骨形成的平衡关系中，ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ比率是一个重要的杠
杆。
ｃｅｌｌｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｄｅｃｉｄｕｏｕｓ ｔｅｅｔｈ ｉｎｄｕｃｅ ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｏｇｅｎｅ—
本实验结果证实，ＴＮＦ－ａ能够刺激ＨＰＤＬＦｓ的ＲＡＮＫＬ
ｓｉｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｅｌｌ，２００２，３４（１）：４４
Ｋａｎｚａｋｉ Ｈ．Ｃｈｉｂａ Ｍ．Ｔａｋａｈａｓｈｉ Ｉ．ｅｔ ａ１．Ｄｕａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
ｏｆ ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｂｙ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｌｉｇａｍｅｎｔ ｃｅｌｌｓ
ｍＲＮＡ表达，ｌｎｇ／ｍｌ浓度组的刺激作用虽不如１０ｎｇ／ｍｌ，但仍
较对照组有较高的ＲＡＮＫＬ ｍＲＮＡ的表达。ＴＮＦ—ａ下调
ＯＰＧ ｍＲＮＡ表达，但不呈剂量依赖性。研究证实ＴＮＦ—ａ能上
调ＲＡＮＫＬ／０ＰＧ的比率，因而提示ＴＮＦ ａ可能通过上调ＨＰ—
ＤＬＦｓ的ＲＡＮＫＩ ／ＯＰＧ浓度比，影响ＯＰＧ／ＲＡＮＫＬ／ＲＡＮＫ
ｔｈｒｏｕｇｈ ＲＡＮＫＬ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ＯＰＧ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ［Ｊ］．
Ｄｅｎｔ Ｒｅｓ，２００１，８Ｏ（３）：８８７
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３３（３）：３８４
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ｒ２］Ａｓｓｕｍａ Ｒ，Ｏａｔｅｓ Ｔ，Ｃｏｃｈｒａｎ Ｄ，ｅｔ ａ１．ＩＬ－１ ａｎｄ ＴＮＦ
ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｎｄ ｂｏｎｅ
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］ ］ ］ ］ ］ ］
ｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｃｉｓｏｒｓ ｉｎ ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ－ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ［Ｊ］．
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（收稿日期：２００６—１２ ０２）
・
短篇及病例报道・
泰能致哮喘样发作１例
段利平，王秀芝
（北京军区北戴河疗养院第二疗养区
中图分类号：Ｒ５９５．４
１临床资料
０６６１００）
文献标识码：Ｂ 文章编号：１６７１—８３４８（２００７）０６ ５０４—０１
司生产的泰能（ｉ．０ｇ）静滴抗感染治疗，用药约１０ｍｉｎ后，患者
突发呼吸困难，不能平卧，大汗。查体：双肺满布双期高调哮鸣
音，心率ｉｉ０次／ｍｉｎ，律齐。立即停用泰能，给予地塞米１０ｍｇ
静注，５ 葡萄糖注射液２５０ｍｌ加氨茶碱注射液０．２５ｇ静滴平
喘，２０ｍｉｎ后患者症状明显减轻，３０ｍｉｎ后症状完全消失，查体
患者，６２岁，因发热、咳嗽、咳痰１个月于２００４年１２月１８
１５Ｉ入院。患者于入院前１个月受凉后出现发热，体温最高
３８．５℃，畏寒无寒战，咳嗽，就诊于社区诊所，给予静滴青霉素、
环丙沙星感染治疗１０ｄ，体温仍波动于３８．０～３８．５℃，咳嗽症
状无明显缓解，并出现咳痰，为黄色脓痰，１Ｏ～２Ｏ口／ｄ，无痰中
带血，痰无臭味，遂改抗生素为先锋Ｖ、阿奇霉素静滴继续抗感
染治疗半月余，上述症状仍无好转。为求进一步诊治入我院。
既往体健，否认药物过敏史。
体格检查：体温３７．５℃，脉搏９２次／ｍｉｎ，呼吸２Ｏ次／ｍｉｎ，
双肺呼吸音粗，未闻及喘鸣音。后改抗生素为“头孢哌酮钠／舒
巴坦钠、盐酸左氧氟沙星”静滴联合抗感染治疗，１个月后患者
临床症状消失，查体双肺呼吸音清，未闻及干湿性罗音。复查
胸片：双肺纹理增重，未见片状影。患者痊愈出院。
２讨 论
血压１３０／８５ｍｍ Ｈｇ（１ｍｍ Ｈｇ一０．１３３ｋＰａ）。慢性病面容，营 泰能（亚胺培南／西司他丁钠盐）是一种广谱的０一内酰胺类
抗生素。它具有强力抑制细胞壁合成的能力，可杀灭绝大部分
革兰阳性和阴性的需氧和厌氧病原菌。它的不良反应有局部
红斑、疼痛和硬结，血栓性静脉炎。有皮疹、瘙痒及中毒性表皮
坏死，有胃肠道反应，血细胞减少，肝酶增高及幻觉、错乱状态
及癫痫发作＿１］。也有味觉异常，听觉丧失报道。但本例患者用
养差，自动体位。全身淋巴结未触及，颈静脉无怒张。双肺呼
吸音粗，双侧腋下、背底可闻及散在细湿【罗音，未闻及哮鸣音。
心界不大，心率９２次／ｍｉｎ，律齐，各瓣膜听诊区未闻及病理性
杂音。腹软，未触及包块，无压痛、反跳痛、肌紧张，肠鸣音正
常。辅助检查：心电图示：窦性心律，正常心电图。胸片：双肺
纹理重，双侧中下肺野可见大片状高密度阴影，边缘模糊，左肺
较明显。化验检查：血常规：ｗＢＣ ８．１２×１Ｏ ／Ｌ、Ｎ ０．７８、
Ｈｂｌ５６ｇ／Ｌ、ＰＬＴ１９２×１０ ／Ｌ，ＥＳＲ ２０ｍｍ／第１小时，ＰＰＤ Ｃ
药后出现哮喘样发作，目前尚无报道，谨请医师注意。
参考文献：
试验阴性。痰培养加药敏提示：可见铜绿假单胞菌生长，对泰
能敏感。入院诊断：双侧肺炎。
［１］陈新谦，金有豫，汤光主编．新编药物学［Ｍ］．第１５版．北
京：人民卫生出版社，２００３．７３
（收稿日期：２００６—０８—１６）
治疗过程：入院后给予抗感染、止咳化痰等对症治疗。
２００４年１２月２６日依据药敏试验给予杭州默沙东制药有限公