2024年5月16日发(作者：尔安顺)
中国美容医学２０１２年３月第２１卷第３期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｅｓｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｍａｒ．２０１２．Ｖｏ１．２１．Ｎｏ．３ ４３３
都可见表达，阳性率分别为８９．４７％和１００％，正常体积乳房组
ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｊ Ｈａｓｔ Ｒｅｃｏｎｓｔｒ Ａｅｓｔｈｅｔ Ｓｕｒｇ，２００８，６ １（５）：
较肥大乳房组染色稍深，虽然肥大乳房组ＥＲ 的阳性率
４９３．
（８９．４７％）要低于正常体积乳房组（１Ｏ０％），但两组间统计学比
［２］孙家明，乔群，戚可名．肥大乳房和小乳房乳腺组织中雌激素受体的
较尚不能认为有显著性差异（Ｐ＞０．０５）。故认为ＥＲ 在乳房
表达［Ｊ］．中华整形外科杂志，２００４，２０（６）：４１６・４１８．
发育过程中可能只是起到基础抑制作用，同乳房肥大的发生
［３］Ｓｉｇｕｒｄｓｏｎ ＬＪ，Ｋｉｒｋｌａｎｄ ＳＡ．Ｂｒｅａｓｔ ｖｏｌｕｍｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ
不具有相关性，乳房肥大的发生主要应该是ＥＲ ｏ的正性作
ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ：ａｎ ａｃｃｕｒａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ ｕｓｉｎｇ ｔｗｏ ａｎｔｈｒｏｐｏｍｏｒｐｈｉｃ
用。过去有研究显示，乳腺增生病和乳腺纤维腺瘤中也有ＥＲ
ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｈａｓｔ Ｒｅｃｏｎｓ￣Ｓｕｒｇ，２００６，Ｉ１８（２）：３１３－３２０．
表达的升高，但是这些疾病的临床表现又完全不同于乳房肥
［４］张芾男，滕利，杨锴，等．青春期乳房肥大症乳腺组织中雌激素受体
的表达［Ｊ］．中国美容医学，２００７，１６（２）：１５６—１５８．
大症，其发病机制同乳房肥大有着怎样的差别，目前尚无人
［５］Ｂａｋｅｒ ＳＢ，Ｂｕｒｋｅｙ ＢＡ，Ｔｈｏｍｔｏｎ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｊｕｖｅｎｉｌｅ ｇｉｇａｎｔｏｍａｓｔｉａ：
研究，有待于我们在以后的实验中继续探讨。
ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｏｕｒ ｃａｓｅｓ ａｎｄ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ［Ｊ］．Ａｎｎ Ｐｌａｓｔ
３．４雌激素受体亚型在肥大乳房组织中表达的研究不仅有
Ｓｕｒｇ，２００１，４６（５）：５１７—５２５．
助于肥大乳房病因的进一步深入和确定，而且也为肥大乳房
［６］Ｌｅｅ ＹＲ，Ｐａｒｋ Ｊ，Ｙｕ ＨＮ，Ｋｉｍ ＪＳ，Ｙｏｕｎ ＨＪ，Ｊｕｎｇ ＳＨ．Ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ
的治疗提供了新思路。Ｂａｋｅｒ Ｅ 等采用雌激素受体拮抗剂三苯
ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ １７ｂｅｔａ—ｅｓｔｒａｄｉｏｌ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆｅｓｔｒｏｇｅｎ
氧胺治疗乳房肥大术后复发取得了良好的效果，进一步确定
ｒｅｃｅｐｔｏｒ—ａｌｐｈａ，ｂｕｔ ｎｏｔ ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｂｅｔａ，ｎａｄ ｓｔｉｍａｌａｔｅｓ ｃｅｌｌ
两种亚型在乳房肥大发病过程中的作用，可以使我们的治疗
ｇｒｏｗｔｈ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］ｌＢｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ ｃｏｍｍｕｒｌ，
更具针对性。虽然目前手术治疗效果尚可，但是手术的创伤
２００５，３３６（４）：１２２１—１２２６．
及术后并发症所带来的痛苦仍是不可避免的，如果我们可以
［７］徐鹰妮，姜军，程鸿，等．ＥＲａ和ＥＲｐ在不同类型乳腺组织的表达
在基因水平治疗乳房肥大症，必能为患者带来更大的福音。
及其意义［Ｊ］．第三军医大学报，２００７，２９（Ｉ１）：１０９３—１０９５．
［参考文献］
［收稿日期］２０１ １－１０－１６ ［修回日期］２０１２－０１一ｌ８
编辑／张惠娟
［１］Ｄａｎｃｅｙ Ａ，Ｋｈａｎ Ｍ，Ｄａｗｓｏｎ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｇｉｇａｎｔｏｍａｓｔｉａ—ａ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ
・
论著・
人正常泌尿系上皮细胞系作为组织工程化尿道种子细胞的可行性研究
范微微，吕伟，范巨峰
（首都医科大学首都附属北京朝阳医院整形外科北京１ ０００２０）
［摘要］目的：研究人正常泌尿系上皮细胞系（ＳＶ－ＩｔＵＣ一１）在传代２Ｏ代之后的性质变化，探讨将其作为组织工程化尿道研究种子
细胞的可行性。方法：对于ＳＶ－ＨＵＣ－１传代２０代的细胞进行形态观察，应用ＲＴ—ＰＣＲ法和间接免疫荧光法检测细胞标志蛋白表
达。应用Ｃｅ１１ Ｔｒａｃｋｅｒ Ｂｌｕｅ ＣＭＦ２ＨＣ，进行活细胞示踪研究 结果：对于第２０代ＳＶ－ＨＵＣ－１细胞，应用倒置相差显微镜观察生长
到其形态正常。应用ＲＴ—ＰＣＲ法和间接免疫荧光法均检测到第２０代ＳＶ－ＨＵＣ－Ｉ细胞中Ｖｉｍｅｎｔｉｎ和ｃＫ一１８的ｍＲＮＡ表达。应用研
究活细胞示踪研究，在第２０代ＳＶ－ＨＵＣ一１细胞中加入活细胞示踪剂Ｃｅ１ｌ Ｔｒａｃｋｅｒ ｌｕｅ ＣＭＦ２ＨＣ后，发现ＳＶ－ＨＵＣ一１细胞生长良
好。结论：ＳＶ—ＨＵＣ一１细胞能够正常生长传代２０代，形态正常，能够表达泌尿系上皮细胞的标志蛋白，并能以活细胞的方式进行
示踪和观察。ｓＶ—ＢＵＣ－１细胞系是适合作为尿道组织工程实验用的种子细胞。
［关键词］ＳＶ－ＨＵＣ一１；组织工程；尿道；上皮细胞系
［中图分类号］Ｑ８１ ３．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１ ００８－６４５５（２Ｏ１２）０３—０４ ３３一Ｏ３
Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｕｒｅｔｈｒａｌ Ｃｅｌｌ ａｓ Ｓｅｅｄ ｃｅｌｌ ｏｆ Ｕｒｅｔｈｒａｌ Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
ＦＡＮ Ｗｅｉ－ｗｅｉ，ＬＶ Ｗｅｉ，ＦＡＮ Ｊｕ—ｆｅｎｇ
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｌａｓｔｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｃｈａｏｙａｎｇ Ｈｏｓｐｉａｔａｌ ｏｆ Ｃａｐｉｔａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００２０，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｐｒｏｐｅｒｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ２０ｔｈ ｐａｓｓａｇｅ ｏｆ ＳＶ—ＨＵＣ一１ ｃｅｌ ｌｌｉｎｅ．Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｙ
ｏｆ ｈｕｍａｎ ｕｒｅｔｈｒａｌ ｃｅｌｌ ａｓ ｓｅｅｄ ｃｅｌｌ ｏｆ ｕｒｅｔｈｒａｌ ｔｉｓｓｕｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｗｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ ２０ｔｈ
ＳＶ—ＨＵＣ一１ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｃｅｌ１．ＲＴ—ＰＣＲ ａｎｄ ｉｎｄｉｒｅｃｔ ｉｍｍｕｎＯｈｉｓｔ。ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｄｙｅｉｎｇ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｓｉｇｎａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ．Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｋｅｒ Ｂｌｕｅ ＣＭＦ２ＨＣ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｔｒａｃｅ ｔｈｅ ｌｉｖｅ ｃｅｌｌｓ
．
Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ
基金项目：北京市科技新星计划（２００５Ｂ０４）；北京市优秀人才计划，北京市卫生系统高层次卫生技术人才培养计划（编号：２０１１—３—０１９）
通讯作者：范巨峰，博士，博士后，主任医师；首都医科大学硕士研究生导师；Ｅ－ｍａｉｌ：ｂｅｓｔｆａｎ＠１２６
．
ｃｏｍ
第一作者：范微微，在读硕士研究生，原工作单位：大庆市油田总医院烧伤整形科
中国美容医学２０１２年３月第２ｌ卷第３期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ０ｆ Ａｅｓｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｍａ ｒ＿２０１２．Ｖ０１．２１．Ｎ０．３ ４３５
ＦＡ１１０４）、高温烤箱（日本Ｓａｋｕｒａ公司，型号：ＨＥ一２１）、超声波
细胞粉碎机（宁波新芝科器研究所，型号：．ＩＶ一９６－２）。
１．３实验方法
１．３．１配制主要溶液：含１０％ＦＢＳ的Ｆ一１２Ｋ培养液，胰蛋白酶
（０．Ｏ５％）一ＥＤＴＡ（Ｏ．Ｏ２％）溶液，细胞冻存液。
１．３．２细胞培养与传代：ＳＶ－ＨＵＣ一１细胞以含１０％灭活胎牛血
清（ＦＢＳ）的Ｆ－１２Ｋ培养基在３７＂Ｃ、含５％Ｃ０ 的培养箱内培养。
每２天更换培养基，细胞生长至７０％融合后用于后继实验。连
续传２Ｏ代，取细胞用于下一步鉴定。
１．３．３细胞鉴定：将细胞裂解后提取总ＲＮＡ，逆转录后得到
ｃＤＮＡ，以波形蛋白（Ｖｉｍｅｎｔｉｎ）和角蛋白一１８（ＣＫ一１８）的引物进
行扩增，得到相应大小的片段。以间接免疫荧光染色的方法
对细胞的Ｖｉｍｅｎｔｉｎ和ｃＫ一１８进行染色，进一步证实其蛋白
的表达。
１．３．４活细胞示踪：选择Ｃｅｌ１Ｔｒａｃｋｅｒ Ｂｌｕｅ Ｃ￣Ｆ２ＨＣ（美国
英杰公司，产品编号Ｃ１２８８１）作为活细胞示踪剂，工作浓度为
１５ Ｍ，对生长至７０％融合的第２Ｏ代的ＳＶ—ＨＵＣ－１细胞进行
４０ｍｉｎ标记，然后ＰＢＳ洗脱未进入细胞的示踪剂，换培养基继
续培养４８ｈ后，以４％的甲醛固定。
２结果
２．１细胞培养：应用倒置相差显微镜观察生长至不同融合度
的第２Ｏ代ＳＶ－ＨＵＣ—ｌ细胞，可见其为形态正常的ＳＶ—ＨＵＣ一１
细胞（图１）。
２．２细胞鉴定：应用两种鉴定方法予以鉴定。应用ＲＴ—ＰＣＲ
法检测第２０代ＳＶ—ＨＵＣ一１细胞中Ｖｉｍｅｎｔｉｎ和ｃＫ一１８的ｍＲＮＡ
表达。应用间接免疫荧光法检测到第２０代ＳＶ—ＨＵＣ一１细胞中
ｃＫ—ｌ８的蛋白质表达（图２）。上述两项鉴定实验证实第２０代
ＳＶ—ＨＵＣ一１细胞中Ｖｉｍｅｎｔｉｎ和ＣＫ一１８的ｍＲＮＡ均表达，从而明
确该细胞具有的ＳＶ—ＨＵＣ一１细胞的标志蛋白表达。
２．３活细胞示踪：第２Ｏ代ＳＶ－ＨＵＣ一１细胞中加入活细胞示踪
剂Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｋｅｒ Ｂｌｕｅ ＣＭＦ２ＨＣ后，以荧光显微镜观察细胞
的生长情况，ＳＶ—ＨＵＣ—ｌ细胞生长良好（图３）。
通过以上实验，证实了ＳＶ—ＨＵＣ－１细胞能够正常生长传代２０
代，形态正常，能够表达泌尿系上皮细胞的标志蛋白，并能以
活细胞的方式进行示踪和观察。
３讨论
国内外有许多有关组织工程化尿道的研究，直接取白人体
或动物的成体膀胱黏膜上皮细胞及尿道黏膜上皮细胞等泌尿系
统上皮细胞是常用的种子细胞。卜日，也有选用表皮细胞者 。
来自泌尿系统的上皮细胞无疑是最适用于尿道组织工
程的种子细胞，但是由于直接取自人体或动物的成体泌尿系
上皮细胞在经历若干代传代之后往往其性质发生较大变化，
所以虽然个别作者报道能够在较短时间内获得大量扩增的
尿道黏膜上皮细胞用于组织工程化器官构建［１１］，但是大多数
国内外在应用直接取自人体或动物的成体细胞作为种子细
胞的进行研究时，其传代多为ｌ０代以内＿卜ｍ］。
但是，有很多实验需要大量的细胞进行研究，需要进行
大量传代而获得大量细胞；另有很多研究目的不在于种子细
胞，而是集中注意力于组织工程种子细胞与材料的复合方面
的研究，因此就需要找到一种可以反复传代而不发生变性的
尿道黏膜上皮种子细胞，这是能够保证很多实验顺利进行下
去的前提。因此有必要寻找一种能绕过成体细胞难以大量传
代的障碍，绕过种子细胞对于实验过程的干扰的方法。
如何解决这个问题呢？笔者考虑到应用ＳＶ—ＨＵＣ一１细胞
系，这种细胞来源于泌尿系上皮细胞，其特点在于能够无限
传代下去。但是多次传代后ＳＶ—ＨＵＣ一１细胞能够保持其原有
性质吗？还适用于进行实验研究吗？本实验对于第２Ｏ代
ＳＶ—ＨＵＥ一１细胞，应用倒置相差显微镜观察生长到其形态正
常。并检测了第２Ｏ代ＳＶ—ＨＵＣ－１细胞的标志蛋白表达。应用
ＲＴ—ＰＣＲ法和间接免疫荧光法均检测到第２Ｏ代ＳＶ—ＨＵＣ一１细
胞中Ｖｉｍｅｎｔｉｎ和ｃＫ一１８的ｍＲＮＡ表达。应用研究活细胞示踪
研究，在第２０代ＳＶ—ＨＵＣ一１细胞中加入活细胞示踪剂Ｃｅｌｌ
Ｔｒａｃｋｅｒ？Ｂｌｕｅ ＣＭＦ２ＨＣ后，以荧光显微镜观察细胞的生长情
况，发现ＳＶ—ＨＵＣ一１细胞生长良好。
通过以上实验，证实了ＳＶ—ＨＵＣ一１细胞能够正常生长传代
２０代，形态正常，能够表达泌尿系上皮细胞的标志蛋白，并能
以活细胞的方式进行示踪和观察。从这一角度为说，ＳＶ—ＨＵＣ一１
细胞系是适合作为尿道组织工程实验用的种子细胞。
［参考文献］
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国实用美容整形外科杂志，２００５，１６（４）：２０２—２０４．
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［３］智伟，杨志明，陈晓禾，等．犬膀胱平滑肌细胞的体外连续培养［Ｊ］．中
国修复重建外科杂志，２００８，２２（１２）：１４７６—１４８０．
［４］韩平肠志明，李秀群，等．犬膀胱移行上皮细胞的体外连续培养及生物
学特征观察叨．中国修复重建外科杂志２００７２ｌ（１ １）：１２３８—１２４２．
［５］符伟军，张秉鸿，张旭，等．尿道移行上皮细胞与生物可降解尿道支
架体外复合培养的研究［Ｊ］＿临床泌尿外科杂志，２００８，２３（６）：４６８—４７４．
［６］Ｃｉｌｅｎｔｏ ＢＧ，Ｆｒｅｅｍａｎ ＭＲ，Ｓｃｈｎｅｃｋ ＦＸ，ｅｔ ａ１．Ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ａｎｄ
ｃｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｌａｄｄｅｒ ｕｒｏｔｈｅｌｉａ ｅｘｐａｎｄｅｄ ｉｎ
ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｊ Ｕｒｏｌ，１９９４，１５２（８）：６６５—６７０．
［７］ＷＥＩ Ｘｉｎ，ＬＩ Ｄａｏ－ｂｉｎｇ，ＸＵ Ｆｅｎｇ，ＷＡＮＧ Ｙａｎ，ＺＨＵ Ｙｕ—ｃｈｕｎ，ＬＩ Ｈｏｎｇ
ａｎｄ ＷＡＮＧ Ｋｕｎ－ｊｉｅ．Ａ ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ ｔＯ ｓｉｍｕｌａｔｅ ｕｒｉｎａｒｙ ｂｌａｄｄｅｒ
ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｃｏｍｐｌｉａｎｃｅ ｆｏｒ ｂｌａｄｄｅｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｔｉｓｓｕｅ
ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ Ｍｅｄ Ｊ，２０１ １．１２４（４）：５６８—５７３．
［８］翟弘峰，李森恺，刘红，等．以Ｌ９２９细胞为滋养层的尿道黏膜上皮细
胞体外培养［Ｊ］．中国修复重建外科杂志，２００３，１７（５）：４１４—４１７．
［９］付强，徐月敏，邓晨亮，等．表皮细胞作为种子细胞构建尿道的长期
随访比较研究『Ｊ］．中国男科学杂志，２００８，３，２２（３）：１－５．
［１Ｏ］付强，邓晨亮，殷德明，等．脱细胞基质载体和表皮细胞结合构建尿
道的实验研究［Ｊ］．中华泌尿外科杂志，２００６，２７（４）：１２８—１３０．
［１ １］Ａｔａｌａ Ａ．Ｔｉｓｓｕｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｌａｄｄｅｒ［Ｊ］．Ｂｒ Ｍｅｄ Ｂｕｌｌ，
２０１ ｌ＿９７（１）：８１—１０４．
［收稿日期］２０１ １－０９－２５［修回日期］２０１２—０２—１７
编辑／张惠娟
2024年5月16日发(作者：尔安顺)
中国美容医学２０１２年３月第２１卷第３期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｅｓｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｍａｒ．２０１２．Ｖｏ１．２１．Ｎｏ．３ ４３３
都可见表达，阳性率分别为８９．４７％和１００％，正常体积乳房组
ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｊ Ｈａｓｔ Ｒｅｃｏｎｓｔｒ Ａｅｓｔｈｅｔ Ｓｕｒｇ，２００８，６ １（５）：
较肥大乳房组染色稍深，虽然肥大乳房组ＥＲ 的阳性率
４９３．
（８９．４７％）要低于正常体积乳房组（１Ｏ０％），但两组间统计学比
［２］孙家明，乔群，戚可名．肥大乳房和小乳房乳腺组织中雌激素受体的
较尚不能认为有显著性差异（Ｐ＞０．０５）。故认为ＥＲ 在乳房
表达［Ｊ］．中华整形外科杂志，２００４，２０（６）：４１６・４１８．
发育过程中可能只是起到基础抑制作用，同乳房肥大的发生
［３］Ｓｉｇｕｒｄｓｏｎ ＬＪ，Ｋｉｒｋｌａｎｄ ＳＡ．Ｂｒｅａｓｔ ｖｏｌｕｍｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ
不具有相关性，乳房肥大的发生主要应该是ＥＲ ｏ的正性作
ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ：ａｎ ａｃｃｕｒａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ ｕｓｉｎｇ ｔｗｏ ａｎｔｈｒｏｐｏｍｏｒｐｈｉｃ
用。过去有研究显示，乳腺增生病和乳腺纤维腺瘤中也有ＥＲ
ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｈａｓｔ Ｒｅｃｏｎｓ￣Ｓｕｒｇ，２００６，Ｉ１８（２）：３１３－３２０．
表达的升高，但是这些疾病的临床表现又完全不同于乳房肥
［４］张芾男，滕利，杨锴，等．青春期乳房肥大症乳腺组织中雌激素受体
的表达［Ｊ］．中国美容医学，２００７，１６（２）：１５６—１５８．
大症，其发病机制同乳房肥大有着怎样的差别，目前尚无人
［５］Ｂａｋｅｒ ＳＢ，Ｂｕｒｋｅｙ ＢＡ，Ｔｈｏｍｔｏｎ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｊｕｖｅｎｉｌｅ ｇｉｇａｎｔｏｍａｓｔｉａ：
研究，有待于我们在以后的实验中继续探讨。
ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｏｕｒ ｃａｓｅｓ ａｎｄ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ［Ｊ］．Ａｎｎ Ｐｌａｓｔ
３．４雌激素受体亚型在肥大乳房组织中表达的研究不仅有
Ｓｕｒｇ，２００１，４６（５）：５１７—５２５．
助于肥大乳房病因的进一步深入和确定，而且也为肥大乳房
［６］Ｌｅｅ ＹＲ，Ｐａｒｋ Ｊ，Ｙｕ ＨＮ，Ｋｉｍ ＪＳ，Ｙｏｕｎ ＨＪ，Ｊｕｎｇ ＳＨ．Ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ
的治疗提供了新思路。Ｂａｋｅｒ Ｅ 等采用雌激素受体拮抗剂三苯
ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ １７ｂｅｔａ—ｅｓｔｒａｄｉｏｌ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆｅｓｔｒｏｇｅｎ
氧胺治疗乳房肥大术后复发取得了良好的效果，进一步确定
ｒｅｃｅｐｔｏｒ—ａｌｐｈａ，ｂｕｔ ｎｏｔ ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｂｅｔａ，ｎａｄ ｓｔｉｍａｌａｔｅｓ ｃｅｌｌ
两种亚型在乳房肥大发病过程中的作用，可以使我们的治疗
ｇｒｏｗｔｈ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］ｌＢｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ ｃｏｍｍｕｒｌ，
更具针对性。虽然目前手术治疗效果尚可，但是手术的创伤
２００５，３３６（４）：１２２１—１２２６．
及术后并发症所带来的痛苦仍是不可避免的，如果我们可以
［７］徐鹰妮，姜军，程鸿，等．ＥＲａ和ＥＲｐ在不同类型乳腺组织的表达
在基因水平治疗乳房肥大症，必能为患者带来更大的福音。
及其意义［Ｊ］．第三军医大学报，２００７，２９（Ｉ１）：１０９３—１０９５．
［参考文献］
［收稿日期］２０１ １－１０－１６ ［修回日期］２０１２－０１一ｌ８
编辑／张惠娟
［１］Ｄａｎｃｅｙ Ａ，Ｋｈａｎ Ｍ，Ｄａｗｓｏｎ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｇｉｇａｎｔｏｍａｓｔｉａ—ａ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ
・
论著・
人正常泌尿系上皮细胞系作为组织工程化尿道种子细胞的可行性研究
范微微，吕伟，范巨峰
（首都医科大学首都附属北京朝阳医院整形外科北京１ ０００２０）
［摘要］目的：研究人正常泌尿系上皮细胞系（ＳＶ－ＩｔＵＣ一１）在传代２Ｏ代之后的性质变化，探讨将其作为组织工程化尿道研究种子
细胞的可行性。方法：对于ＳＶ－ＨＵＣ－１传代２０代的细胞进行形态观察，应用ＲＴ—ＰＣＲ法和间接免疫荧光法检测细胞标志蛋白表
达。应用Ｃｅ１１ Ｔｒａｃｋｅｒ Ｂｌｕｅ ＣＭＦ２ＨＣ，进行活细胞示踪研究 结果：对于第２０代ＳＶ－ＨＵＣ－１细胞，应用倒置相差显微镜观察生长
到其形态正常。应用ＲＴ—ＰＣＲ法和间接免疫荧光法均检测到第２０代ＳＶ－ＨＵＣ－Ｉ细胞中Ｖｉｍｅｎｔｉｎ和ｃＫ一１８的ｍＲＮＡ表达。应用研
究活细胞示踪研究，在第２０代ＳＶ－ＨＵＣ一１细胞中加入活细胞示踪剂Ｃｅ１ｌ Ｔｒａｃｋｅｒ ｌｕｅ ＣＭＦ２ＨＣ后，发现ＳＶ－ＨＵＣ一１细胞生长良
好。结论：ＳＶ—ＨＵＣ一１细胞能够正常生长传代２０代，形态正常，能够表达泌尿系上皮细胞的标志蛋白，并能以活细胞的方式进行
示踪和观察。ｓＶ—ＢＵＣ－１细胞系是适合作为尿道组织工程实验用的种子细胞。
［关键词］ＳＶ－ＨＵＣ一１；组织工程；尿道；上皮细胞系
［中图分类号］Ｑ８１ ３．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１ ００８－６４５５（２Ｏ１２）０３—０４ ３３一Ｏ３
Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｕｒｅｔｈｒａｌ Ｃｅｌｌ ａｓ Ｓｅｅｄ ｃｅｌｌ ｏｆ Ｕｒｅｔｈｒａｌ Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
ＦＡＮ Ｗｅｉ－ｗｅｉ，ＬＶ Ｗｅｉ，ＦＡＮ Ｊｕ—ｆｅｎｇ
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｌａｓｔｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｃｈａｏｙａｎｇ Ｈｏｓｐｉａｔａｌ ｏｆ Ｃａｐｉｔａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００２０，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｐｒｏｐｅｒｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ２０ｔｈ ｐａｓｓａｇｅ ｏｆ ＳＶ—ＨＵＣ一１ ｃｅｌ ｌｌｉｎｅ．Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｙ
ｏｆ ｈｕｍａｎ ｕｒｅｔｈｒａｌ ｃｅｌｌ ａｓ ｓｅｅｄ ｃｅｌｌ ｏｆ ｕｒｅｔｈｒａｌ ｔｉｓｓｕｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｗｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ ２０ｔｈ
ＳＶ—ＨＵＣ一１ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｃｅｌ１．ＲＴ—ＰＣＲ ａｎｄ ｉｎｄｉｒｅｃｔ ｉｍｍｕｎＯｈｉｓｔ。ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｄｙｅｉｎｇ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｓｉｇｎａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ．Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｋｅｒ Ｂｌｕｅ ＣＭＦ２ＨＣ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｔｒａｃｅ ｔｈｅ ｌｉｖｅ ｃｅｌｌｓ
．
Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ
基金项目：北京市科技新星计划（２００５Ｂ０４）；北京市优秀人才计划，北京市卫生系统高层次卫生技术人才培养计划（编号：２０１１—３—０１９）
通讯作者：范巨峰，博士，博士后，主任医师；首都医科大学硕士研究生导师；Ｅ－ｍａｉｌ：ｂｅｓｔｆａｎ＠１２６
．
ｃｏｍ
第一作者：范微微，在读硕士研究生，原工作单位：大庆市油田总医院烧伤整形科
中国美容医学２０１２年３月第２ｌ卷第３期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ０ｆ Ａｅｓｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｍａ ｒ＿２０１２．Ｖ０１．２１．Ｎ０．３ ４３５
ＦＡ１１０４）、高温烤箱（日本Ｓａｋｕｒａ公司，型号：ＨＥ一２１）、超声波
细胞粉碎机（宁波新芝科器研究所，型号：．ＩＶ一９６－２）。
１．３实验方法
１．３．１配制主要溶液：含１０％ＦＢＳ的Ｆ一１２Ｋ培养液，胰蛋白酶
（０．Ｏ５％）一ＥＤＴＡ（Ｏ．Ｏ２％）溶液，细胞冻存液。
１．３．２细胞培养与传代：ＳＶ－ＨＵＣ一１细胞以含１０％灭活胎牛血
清（ＦＢＳ）的Ｆ－１２Ｋ培养基在３７＂Ｃ、含５％Ｃ０ 的培养箱内培养。
每２天更换培养基，细胞生长至７０％融合后用于后继实验。连
续传２Ｏ代，取细胞用于下一步鉴定。
１．３．３细胞鉴定：将细胞裂解后提取总ＲＮＡ，逆转录后得到
ｃＤＮＡ，以波形蛋白（Ｖｉｍｅｎｔｉｎ）和角蛋白一１８（ＣＫ一１８）的引物进
行扩增，得到相应大小的片段。以间接免疫荧光染色的方法
对细胞的Ｖｉｍｅｎｔｉｎ和ｃＫ一１８进行染色，进一步证实其蛋白
的表达。
１．３．４活细胞示踪：选择Ｃｅｌ１Ｔｒａｃｋｅｒ Ｂｌｕｅ Ｃ￣Ｆ２ＨＣ（美国
英杰公司，产品编号Ｃ１２８８１）作为活细胞示踪剂，工作浓度为
１５ Ｍ，对生长至７０％融合的第２Ｏ代的ＳＶ—ＨＵＣ－１细胞进行
４０ｍｉｎ标记，然后ＰＢＳ洗脱未进入细胞的示踪剂，换培养基继
续培养４８ｈ后，以４％的甲醛固定。
２结果
２．１细胞培养：应用倒置相差显微镜观察生长至不同融合度
的第２Ｏ代ＳＶ－ＨＵＣ—ｌ细胞，可见其为形态正常的ＳＶ—ＨＵＣ一１
细胞（图１）。
２．２细胞鉴定：应用两种鉴定方法予以鉴定。应用ＲＴ—ＰＣＲ
法检测第２０代ＳＶ—ＨＵＣ一１细胞中Ｖｉｍｅｎｔｉｎ和ｃＫ一１８的ｍＲＮＡ
表达。应用间接免疫荧光法检测到第２０代ＳＶ—ＨＵＣ一１细胞中
ｃＫ—ｌ８的蛋白质表达（图２）。上述两项鉴定实验证实第２０代
ＳＶ—ＨＵＣ一１细胞中Ｖｉｍｅｎｔｉｎ和ＣＫ一１８的ｍＲＮＡ均表达，从而明
确该细胞具有的ＳＶ—ＨＵＣ一１细胞的标志蛋白表达。
２．３活细胞示踪：第２Ｏ代ＳＶ－ＨＵＣ一１细胞中加入活细胞示踪
剂Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｋｅｒ Ｂｌｕｅ ＣＭＦ２ＨＣ后，以荧光显微镜观察细胞
的生长情况，ＳＶ—ＨＵＣ—ｌ细胞生长良好（图３）。
通过以上实验，证实了ＳＶ—ＨＵＣ－１细胞能够正常生长传代２０
代，形态正常，能够表达泌尿系上皮细胞的标志蛋白，并能以
活细胞的方式进行示踪和观察。
３讨论
国内外有许多有关组织工程化尿道的研究，直接取白人体
或动物的成体膀胱黏膜上皮细胞及尿道黏膜上皮细胞等泌尿系
统上皮细胞是常用的种子细胞。卜日，也有选用表皮细胞者 。
来自泌尿系统的上皮细胞无疑是最适用于尿道组织工
程的种子细胞，但是由于直接取自人体或动物的成体泌尿系
上皮细胞在经历若干代传代之后往往其性质发生较大变化，
所以虽然个别作者报道能够在较短时间内获得大量扩增的
尿道黏膜上皮细胞用于组织工程化器官构建［１１］，但是大多数
国内外在应用直接取自人体或动物的成体细胞作为种子细
胞的进行研究时，其传代多为ｌ０代以内＿卜ｍ］。
但是，有很多实验需要大量的细胞进行研究，需要进行
大量传代而获得大量细胞；另有很多研究目的不在于种子细
胞，而是集中注意力于组织工程种子细胞与材料的复合方面
的研究，因此就需要找到一种可以反复传代而不发生变性的
尿道黏膜上皮种子细胞，这是能够保证很多实验顺利进行下
去的前提。因此有必要寻找一种能绕过成体细胞难以大量传
代的障碍，绕过种子细胞对于实验过程的干扰的方法。
如何解决这个问题呢？笔者考虑到应用ＳＶ—ＨＵＣ一１细胞
系，这种细胞来源于泌尿系上皮细胞，其特点在于能够无限
传代下去。但是多次传代后ＳＶ—ＨＵＣ一１细胞能够保持其原有
性质吗？还适用于进行实验研究吗？本实验对于第２Ｏ代
ＳＶ—ＨＵＥ一１细胞，应用倒置相差显微镜观察生长到其形态正
常。并检测了第２Ｏ代ＳＶ—ＨＵＣ－１细胞的标志蛋白表达。应用
ＲＴ—ＰＣＲ法和间接免疫荧光法均检测到第２Ｏ代ＳＶ—ＨＵＣ一１细
胞中Ｖｉｍｅｎｔｉｎ和ｃＫ一１８的ｍＲＮＡ表达。应用研究活细胞示踪
研究，在第２０代ＳＶ—ＨＵＣ一１细胞中加入活细胞示踪剂Ｃｅｌｌ
Ｔｒａｃｋｅｒ？Ｂｌｕｅ ＣＭＦ２ＨＣ后，以荧光显微镜观察细胞的生长情
况，发现ＳＶ—ＨＵＣ一１细胞生长良好。
通过以上实验，证实了ＳＶ—ＨＵＣ一１细胞能够正常生长传代
２０代，形态正常，能够表达泌尿系上皮细胞的标志蛋白，并能
以活细胞的方式进行示踪和观察。从这一角度为说，ＳＶ—ＨＵＣ一１
细胞系是适合作为尿道组织工程实验用的种子细胞。
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［收稿日期］２０１ １－０９－２５［修回日期］２０１２—０２—１７
编辑／张惠娟