2024年8月2日发(作者：楼典)

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乌拉甘草有效成分对人体４ 种肿瘤细

胞增殖与凋亡的影响

（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）

作者：马淼 周旭莉 户元林 肖辉 李学禹

【摘要】 目的测定乌拉甘草提取物对人体４ 种肿瘤细胞的抑

制效果。方法应用ＭＴＴ 法测定甘草水提物（甘草酸）与醇提物（总

黄酮）对宫颈癌细胞株（Ｈｅｌａ）、乳腺癌细胞株（Ｂｃａｐ －３

７）、胃癌细胞株（ＭＧＣ －８０３）以及肝癌细胞株（Ｂｅｌ －

７４０４）增殖的抑制作用；运用Ｈｏｃｈｅｓｔ ３３２５８ 荧光

染色剂测试其诱导细胞凋亡的生物学效应。结果甘草酸的抑瘤效果表

现出浓度依赖性，与浓度呈正相关关系。高浓度甘草酸（１ ０００ μ

ｇ／ｍｌ）对Ｂｃａｐ －３７，Ｈｅｌａ，ＭＧＣ －８０３ 的增

殖均有较强的抑制作用，其抑制率分别为７６．３７％，７９．７１％，

７１．０６％，对Ｂｅｌ －７４０４ 细胞增殖的抑制作用较差，抑

制率仅为２４．２９％。在一定浓度范围内（２００ ～１ ０００ μ

ｇ／ｍｌ），其对４ 种肿瘤细胞增殖的抑制率与样本浓度大小呈负相

关关系，２００ μｇ／ｍｌ 剂量的甘草黄酮抑制肿瘤细胞增殖的效

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果最佳，其对Ｂｃａｐ －３７，Ｈｅｌａ，Ｂｅｌ －７４０４，Ｍ

ＧＣ －８０３ 等４ 种肿瘤细胞增殖的抑制率分别为７９．５５％，

７９．９８％，６７．９１％以及３７．８６％。甘草酸、甘草黄酮

均能有效诱导这４ 种肿瘤细胞发生凋亡。结论甘草酸和甘草黄酮诱

导细胞凋亡是其显著抑制肿瘤细胞增殖的重要途径。

【关键词】 乌拉甘草 甘草酸 酮 抗肿瘤 细胞凋亡

Abstract:ObjectiveＡｎｔｉ －ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ

ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｈｉｎ ａｎｄ ｔｏｔ

ａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ

Glycyrrhiza uralensis Ｆｉｓｃｈ ｏｎ ｆｏｕｒ ｋｉｎｄｓ ｏ

ｆ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ （ｃｅｒｖｉｘ ｔｕｍ

ｏｒ ｃｅｌｌ：Ｈｅｌａ， ｂｒｅａｓｔ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ：

Ｂｃａｐ －３７， ｓｔｏｍａｃｈ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ：ＭＧＣ

－８０３ ａｎｄ ｈｅｐａｔｏｍａ ｃｅｌｌ：Ｂｅｌ －７４０

４） ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ．MethodsＭＴＴ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔ

ｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ａｎｔｉ －ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ

ｅｆｆｅｃｔ， ａｎｄ Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８ ｗａｓ ｕｓ

ｅｄ ｔｏ ｔｅｓｔ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ －ｉｎｄｕｃｉ

ｎｇ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ．ResultsＩｔ ｓ

ｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａｎｔｉ －ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ

ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ ｗａｓ ｃｏｎｃ

ｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ， ｈｉｇｈｅｒ ｃｏｎ

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ｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ （１ ００

０ μｇ／ｍｌ） ｈａｄ ｏｂｖｉｏｕｓ ａｎｔｉ －ｔｕｍｏｒ

ｅｆｆｅｃｔ， ｗｉｔｈｉｎ ｃｅｒｔａｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒ

ａｔｉｏｎ ｏｆ （２００ ～１ ０００ μｇ／ｍｌ）， ｉｎｈｉｂ

ｉｔｏry ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｗａ

ｓ ａｌｓｏ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ，

ｔｈｅ ｌｏｗｅｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ （２００ μｇ／

ｍｌ） ｗａｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏry

ｅｆｆｅｃｔ， ｉｔｓ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｒａｔｅｓ ｏｎ

Ｂｃａｐ －３７， Ｈｅｌａ， Ｂｅｌ －７４０４，ＭＧＣ －８

０３ ｗｅｒｅ ７９．５５％，７９．９８％，６７．９１％ ａｎ

ｄ ３７．８６％ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ConclusionＢｏｔｈ

ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ

ｈａｖｅ ｓｔｒｏｎｇｅｒ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ －ｉｎｄｕｃｉ

ｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｆｏｕｒ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｔ

ｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ．

Key words:Glycyrrhiza uralensis； Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉ

ｎ； Ｆｌａｖｏｎｅｓ； Ａｎｔｉ －ｔｕｍｏｒ； Ａｐｏｐｔｏ

ｓｉｓ

乌拉甘草Glycyrrhiza uralensis Ｆｉｓｃｈ 为豆科甘草

属多年生草本植物［１］ ，是《中国药典》中收录的药用甘草之一，

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其性平味甘，具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和

诸药之功效［２］ 。其有效成分主要为甘草酸类和甘草黄酮类物质。

最近研究表明甘草酸还具有抑制肺癌细胞增殖的作用［３ ～５］ 。

本研究以人宫颈癌细胞株（ Ｈｅｌａ）、人乳腺癌细胞株（Ｂｃａｐ

－３７）、人胃癌细胞株（ＭＧＣ －８０３）以及人肝癌细胞株（Ｂ

ｅｌ －７４０４）４ 种肿瘤细胞作为研究对象，通过体外实验研究

甘草有效成分的抗肿瘤活性及其诱导细胞凋亡的效果，为甘草提取物

抗肿瘤实验的研究以及甘草新药的开发提供理论依据。

1 器材与方法

１．１ 提取物的制备

１．１．１ 甘草酸的制备乌拉甘草的根茎采自石河子大学甘草

资源圃，８０℃烘干至恒重后粉碎成粉末，过４０ 目筛。准确称取

１．０ｇ 样品干粉，加１０ ｍｌ 蒸馏水，于室温条件下放置４８

ｈ，１２ ０００ ｒ／ｍｉｎ 离心１０ ｍｉｎ，取５００ μｌ 上

清液加５００ μｌ 甲醇混匀，１２ ０００ ｒ／ｍｉｎ 离心１０

ｍｉｎ，取上清液，用孔径为０．２２ μｍ 的微孔滤膜过滤，ＨＰ

ＬＣ 法测定甘草酸含量［６］。

１．１．２ 甘草黄酮的制备准确称取１．０ ｇ 样品粉末，用

２５０ ｍｌ无水乙醇加５ 滴浓盐酸为提取剂在索氏提取器中于９

５℃的水浴加热条件下提取６ ｈ，浓缩至２５ ｍｌ，冷却至室温后

补足溶剂至刻度，用孔径０．２２ μｍ 的微孔滤膜过滤，用Ｆｏｌ

ｉｎ －酚试剂法测定总黄酮含量［６］。

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１．2 细胞株人宫颈癌细胞株（Ｈｅｌａ）、人乳腺癌细胞株（Ｂ

ｃａｐ －３７），人胃癌细胞株（ＭＧＣ －８０３），人肝癌细胞株

（Ｂｅｌ －７４０４），均由中国科学院上海细胞生物研究所细胞库

提供。

１．３ 设备及试剂

１．３．1 仪器ＨＰＬＣ 分析仪（ｗａｔｅｒｓ）、紫外可见

分光光度仪（上海棱光）、ＣＯ２ 培养箱（美国Ｆｏｒｍａ）、∑９

６０ 自动酶标仪（Ｍｅｔｅｒｔｅｃｈ）、荧光显微镜（Ｏｌｙｍｐ

ｕｓ ＢＸ －５１）、超净工作台（上海净化设备厂）、血球记数板（上

海医用光学仪器厂）、倒置显微镜（重庆）、超速离心机。

１．３．2 试剂ＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ） 、小牛血清

（杭州四季青公司）、胰蛋白酶（Ｓｉｇｍａ） 、二甲基亚砜（分析

纯）、甲醇（色谱纯）、四噻唑蓝（ＭＴＴ）、顺铂（ＤＤＰ，江苏豪

森药业股份有限公司）、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８ 染色试剂盒（碧

云天生物技术研究所）。

１．４ 方法及观察指标

１．４．1 细胞培养细胞用含１０％灭活小牛血清的ＲＰＭＩ

１６４０ 培养基，置于３７℃，５％ＣＯ２ 孵箱中培养。实验用细

胞均处于对数生长期，常规苔酚蓝计数活细胞大于９５％。

１．４．2 体外抗肿瘤实验体外抗肿瘤实验分５ 个浓

度（１００ ～１ ０００ μｇ／ｍｌ） 、阴性对照（含同一细胞密

度的培养液）、空白对照。对数生长期细胞（细胞密度为２ ×１０５ 个

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／ｍｌ） １００ μｌ／孔接种于９６ 孔板，３７℃饱和湿度，５％

ＣＯ２ 条件下培养６ ｈ，待细胞均已贴壁，加入１００ μｌ 不同

浓度的受试物，各设５ 个复孔。在４８ ｈ取出９６ 孔板，倒置显

微镜下观察后，每孔加ＭＴＴ 溶液（５ ｍｇ／ｍｌ）２０ μｌ ，

３７℃继续孵育４ ｈ，终止培养。小心吸弃孔内培养上清液。每孔

加入１５０ μｌ ＤＭＳＯ，振荡１０ ｍｉｎ，在酶联免疫检测仪上

测定各孔光吸收OD 值（A ＝５７０ ｎｍ），记录结果。

抑制率（％） ＝（１ －给药组A ５７０ ／细胞对照组

A ５７０ ）×１００％

１．４．３ 细胞凋亡率实验细胞凋亡实验在同一浓度下进行（甘

草酸１ ０００ μｇ／ｍｌ，黄酮２００ μｇ／ｍｌ），实验设阴性对

照（含同一细胞密度的培养液）、阳性对照（２００ μｇ／ｍｌ ＤＤ

Ｐ）、空白对照。取普通、洁净盖玻片于７０％ 乙醇中浸泡１０ ｍ

ｉｎ，０．９％ ＮａＣｌ 溶液洗涤3遍，再用细胞培养液洗涤一遍。

将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为７０％ ～９０％

满。加入样品，继续培养４８ｈ，吸尽培养液，加入０．５ ｍｌ 固

定液，固定１０ ｍｉｎ。去固定液，用０．９％ ＮａＣｌ 洗两遍，

３ ｍｉｎ／次，吸尽液体。加入０．５ ｍｌ Ｈｏｅｃｈｓｔ３３

２５８ 染色液，染色５ ｍｉｎ。用０．９％ＮａＣｌ 洗两遍，３ ｍ

ｉｎ／次。滴１滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖

玻片。荧光显微镜下（Ｅｘ３５０ ｎｍ，Ｅｍ４６０ ｎｍ）随机选

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取１０ 个视野拍照后计数。凋亡率（%）＝凋亡细胞／（视野总细

胞数） ×１００％。

１．５ 统计学处理实验所得所有数据均经ＳＰＳＳ １２．０

软件处理并对处理组间进行单因素方差分析，P＜０．０５ 时表示

存在显著性差异。

2 结果

２．１ 甘草酸体外抗肿瘤实验结果光镜下观察到，未经任何处

理的肿瘤细胞接种４８ ｈ 后，细胞约占孔底面积的９０％ ～９

８％。高剂量甘草酸处理肿瘤细胞４８ ｈ 时，细胞数量少，间距大，

多数细胞体积固缩变小、失去原有肿瘤细胞形态而略呈圆形、椭圆形，

说明对肿瘤细胞的生长与增殖具有显著的抑制作用。结果见表１。

表1 甘草酸对4种肿瘤细胞增殖的抑制效应（略）

从表１ 可见甘草酸的抑瘤效果表现出浓度依赖性，与浓度呈正

相关关系。高浓度甘草酸（１ ０００ μｇ／ｍｌ）对Ｂｃａｐ －３

７，Ｈｅｌａ，ＭＧＣ －８０３ 的增殖均有较强的抑制作用， 其

抑制率分别为７６．３７％，７９．７１％，７１．０６％，对Ｂｅ

ｌ －７４０４ 细胞增殖的抑制作用较差，抑制率仅为２４．２９％。

２．２ 甘草黄酮体外抗肿瘤实验结果(见表２)。从表２ 中可

得知，甘草黄酮处理肿瘤细胞４８ ｈ 后，在一定浓度范围内（２０

０ ～１ ０００ μｇ／ｍｌ），其对４ 种肿瘤细胞的抑制率与样本浓

度大小呈负相关关系，即样本浓度越低，对肿瘤细胞的抑制率越高，

２００ μｇ／ｍｌ 剂量的甘草黄酮抑制肿瘤细胞增殖的效果最佳，

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其对Ｂｃａｐ －３７，Ｈｅｌａ，Ｂｅｌ －７４０４，ＭＧＣ －

８０３ 等４ 种肿瘤细胞增殖的抑制率分别为７９．５５％，７９．９

８％，６７．９１％以及３７．８６％；在极低浓度时（１００ μ

ｇ／ｍｌ 的剂量），甘草黄酮对这４ 种肿瘤细胞生长均无明显抑制

作用。

表2 甘草黄酮对4种肿瘤细胞增殖的抑制效应（略）

2.3 细胞凋亡实验从图１ ～３ 中可以看到，４ 种肿瘤细胞经

荧光染色后，正常细胞的细胞核呈弥散均匀状，凋亡细胞的细胞核由

于凋亡致使细胞核固缩成团，在荧光下呈致密浓染或碎块状，颜色较

正常细胞更深更亮。甘草活性成分诱导ＢＣＡＰ 细胞凋亡的实验结

果见表３。

表3 不同处理对4种肿瘤细胞凋亡的影响（略）

本研究中我们以临床常用肿瘤治疗药物顺铂做阳性对照，从结

果中我们可以看出与阴性对照组相比甘草黄酮与甘草酸均具有极显

著的诱导４ 种肿瘤细胞凋亡的生物学效应（P＜０．０１），甘草黄

酮能很好的诱导人乳腺癌细胞（Ｂｃａｐ －３７）、人宫颈癌细胞（Ｈ

ｅｌａ）以及人肝癌细胞（Ｂｅｌ －７４０４）的凋亡，其效果均

优于等剂量的顺铂；而对胃癌细胞凋亡的诱导效果不及顺铂。高浓度

（１ ０００ μｇ／ｍｌ）的甘草酸只对人宫颈癌细胞（Ｈｅｌａ）

的诱导凋亡效应与２００ μｇ／ｍｌ 的顺铂相当，对其余细胞的诱

导凋亡效果均不及顺铂。

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图1 阴性对照组（×400）（略）

图2 阳性对照组（×400）（略）

图3 样品处理组（×400）（略）

3 讨论

细胞凋亡是一种与细胞坏死具有不同形态及生化特征，且

受基因调控的主动性细胞死亡。与诱导细胞坏死相比，通过诱导细胞

凋亡杀死癌细胞不会引起机体强烈的炎症反应［７］ 。因此，通过

诱导细胞凋亡来杀伤和清除肿瘤细胞，已经成为一种筛选抗癌药的快

速有效的方法。为了探讨甘草活性成分甘草酸、甘草黄酮在抗肿瘤作

用中的潜在治疗价值，实验中笔者以人宫颈癌细胞（Ｈｅｌａ）、人

乳腺癌细胞（Ｂｃａｐ －３７）、人胃癌细胞（ＭＧＣ －８０３）、

人肝癌细胞（Ｂｅｌ －７４０４）为研究对象，以顺铂作为阳性对

照（铂类药物具有较强的抗肿瘤活性［８］），观察甘草酸、甘草黄酮

对这４种肿瘤细胞的增殖抑制及其诱导凋亡作用。结果显示甘草黄酮

类化合物对人宫颈癌细胞（Ｈｅｌａ）、乳腺癌细胞（Ｂｃａｐ －３

７）以及肝癌细胞（Ｂｅｌ －７４０４） 的增殖均具有显著的抑制

及诱导细胞凋亡的效果；甘草酸只在高浓度条件下才对人胃癌细胞

（ＭＧＣ －８０３）显示出较强的抑制增殖作用，其对胃癌细胞（Ｍ

ＧＣ －８０３）的诱导凋亡效应不佳（不及顺铂），这与以往的研究

结果是一致的［7］。综上所述，甘草酸、甘草黄酮抑制这４ 种肿瘤

细胞增殖与诱导其细胞凋亡的结果是相一致的；因此，甘草酸和甘草

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黄酮诱导细胞凋亡是其显著抑制肿瘤细胞增殖的重要途径。鉴于甘草

黄酮类化合物的抑瘤效果优于甘草酸，所以在进行甘草抗癌药物筛选

时，应优先考虑甘草黄酮类物质。

【参考文献】

［1］ 中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志，

４２ 卷２ 分册［Ｍ］．北京：科学出版社，１９９８：１６７．

［2］ 国家药典委员会．中国药典，Ⅰ部［Ｓ］．北京：化

学工业出版社，２００５：５９．

［3］ Ｈｕａｎｇ Ｗｅｉ， Ｈｕａｎｇ Ｊｉ －ｑｕｎ，

Ｚｈａｎｇ Ｄｏｎｇ －ｆａｎｇ， ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏ

ｆ Ｒｅｔｉｎｏｉｃ Ａｃｉｄ， Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ ａｎ

ｄ １８β－Ｇｌｙｃｙｒｒｈｅｔｉｎｉｃ Ａｃｉｄ ｏｎ Ｐｒｏ

ｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎｔｉ

－ｉｎｖａｓｉｏｎ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ Ｃ

ｅｌｌｓ ［Ｊ］．ＣｈｉｎａＴｕｍｏｒ （中国肿瘤），２００３，

１２（１１）：６６５．

［4］ 谢 彦，徐淑永，曾和平．甘草属植物中三萜类化合

物研究概述［Ｊ］．广州化工，２００４，３２（１）：１．

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［5］ 季宇彬，姜 薇，范玉玲，等．甘草黄酮的研究进展

［Ｊ］．中草药，２００４，３５（９）：５．

［6］ 周旭莉，马 淼．中国乌拉甘草的道地性研究．中国

科协２００５ 年学术年会论文集［Ｃ］．北京：中国环境科学出版社，

２００５：７６５．

［7］ 马 靖，彭文烈，梁 东，等．甘草提取物诱导胃癌

ＭＧＣ －８０３ 细胞凋亡的初步研究［Ｊ］．中国中西医结合杂志，

２０００，２０（１２）：９２８．

［8］ 田 莉，高晓黎．甘草的抗肿瘤作用［Ｊ］．西北药

学杂志，２００４，１９（３）：１３３．

2024年8月2日发(作者：楼典)

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乌拉甘草有效成分对人体４ 种肿瘤细

胞增殖与凋亡的影响

（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）

作者：马淼 周旭莉 户元林 肖辉 李学禹

【摘要】 目的测定乌拉甘草提取物对人体４ 种肿瘤细胞的抑

制效果。方法应用ＭＴＴ 法测定甘草水提物（甘草酸）与醇提物（总

黄酮）对宫颈癌细胞株（Ｈｅｌａ）、乳腺癌细胞株（Ｂｃａｐ －３

７）、胃癌细胞株（ＭＧＣ －８０３）以及肝癌细胞株（Ｂｅｌ －

７４０４）增殖的抑制作用；运用Ｈｏｃｈｅｓｔ ３３２５８ 荧光

染色剂测试其诱导细胞凋亡的生物学效应。结果甘草酸的抑瘤效果表

现出浓度依赖性，与浓度呈正相关关系。高浓度甘草酸（１ ０００ μ

ｇ／ｍｌ）对Ｂｃａｐ －３７，Ｈｅｌａ，ＭＧＣ －８０３ 的增

殖均有较强的抑制作用，其抑制率分别为７６．３７％，７９．７１％，

７１．０６％，对Ｂｅｌ －７４０４ 细胞增殖的抑制作用较差，抑

制率仅为２４．２９％。在一定浓度范围内（２００ ～１ ０００ μ

ｇ／ｍｌ），其对４ 种肿瘤细胞增殖的抑制率与样本浓度大小呈负相

关关系，２００ μｇ／ｍｌ 剂量的甘草黄酮抑制肿瘤细胞增殖的效

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果最佳，其对Ｂｃａｐ －３７，Ｈｅｌａ，Ｂｅｌ －７４０４，Ｍ

ＧＣ －８０３ 等４ 种肿瘤细胞增殖的抑制率分别为７９．５５％，

７９．９８％，６７．９１％以及３７．８６％。甘草酸、甘草黄酮

均能有效诱导这４ 种肿瘤细胞发生凋亡。结论甘草酸和甘草黄酮诱

导细胞凋亡是其显著抑制肿瘤细胞增殖的重要途径。

【关键词】 乌拉甘草 甘草酸 酮 抗肿瘤 细胞凋亡

Abstract:ObjectiveＡｎｔｉ －ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ

ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｈｉｎ ａｎｄ ｔｏｔ

ａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ

Glycyrrhiza uralensis Ｆｉｓｃｈ ｏｎ ｆｏｕｒ ｋｉｎｄｓ ｏ

ｆ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ （ｃｅｒｖｉｘ ｔｕｍ

ｏｒ ｃｅｌｌ：Ｈｅｌａ， ｂｒｅａｓｔ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ：

Ｂｃａｐ －３７， ｓｔｏｍａｃｈ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ：ＭＧＣ

－８０３ ａｎｄ ｈｅｐａｔｏｍａ ｃｅｌｌ：Ｂｅｌ －７４０

４） ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ．MethodsＭＴＴ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔ

ｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ａｎｔｉ －ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ

ｅｆｆｅｃｔ， ａｎｄ Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８ ｗａｓ ｕｓ

ｅｄ ｔｏ ｔｅｓｔ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ －ｉｎｄｕｃｉ

ｎｇ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ．ResultsＩｔ ｓ

ｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａｎｔｉ －ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ

ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ ｗａｓ ｃｏｎｃ

ｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ， ｈｉｇｈｅｒ ｃｏｎ

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ｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ （１ ００

０ μｇ／ｍｌ） ｈａｄ ｏｂｖｉｏｕｓ ａｎｔｉ －ｔｕｍｏｒ

ｅｆｆｅｃｔ， ｗｉｔｈｉｎ ｃｅｒｔａｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒ

ａｔｉｏｎ ｏｆ （２００ ～１ ０００ μｇ／ｍｌ）， ｉｎｈｉｂ

ｉｔｏry ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｗａ

ｓ ａｌｓｏ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ，

ｔｈｅ ｌｏｗｅｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ （２００ μｇ／

ｍｌ） ｗａｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏry

ｅｆｆｅｃｔ， ｉｔｓ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｒａｔｅｓ ｏｎ

Ｂｃａｐ －３７， Ｈｅｌａ， Ｂｅｌ －７４０４，ＭＧＣ －８

０３ ｗｅｒｅ ７９．５５％，７９．９８％，６７．９１％ ａｎ

ｄ ３７．８６％ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ConclusionＢｏｔｈ

ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ

ｈａｖｅ ｓｔｒｏｎｇｅｒ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ －ｉｎｄｕｃｉ

ｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｆｏｕｒ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｔ

ｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ．

Key words:Glycyrrhiza uralensis； Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉ

ｎ； Ｆｌａｖｏｎｅｓ； Ａｎｔｉ －ｔｕｍｏｒ； Ａｐｏｐｔｏ

ｓｉｓ

乌拉甘草Glycyrrhiza uralensis Ｆｉｓｃｈ 为豆科甘草

属多年生草本植物［１］ ，是《中国药典》中收录的药用甘草之一，

DOC格式论文，方便您的复制修改删减

其性平味甘，具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和

诸药之功效［２］ 。其有效成分主要为甘草酸类和甘草黄酮类物质。

最近研究表明甘草酸还具有抑制肺癌细胞增殖的作用［３ ～５］ 。

本研究以人宫颈癌细胞株（ Ｈｅｌａ）、人乳腺癌细胞株（Ｂｃａｐ

－３７）、人胃癌细胞株（ＭＧＣ －８０３）以及人肝癌细胞株（Ｂ

ｅｌ －７４０４）４ 种肿瘤细胞作为研究对象，通过体外实验研究

甘草有效成分的抗肿瘤活性及其诱导细胞凋亡的效果，为甘草提取物

抗肿瘤实验的研究以及甘草新药的开发提供理论依据。

1 器材与方法

１．１ 提取物的制备

１．１．１ 甘草酸的制备乌拉甘草的根茎采自石河子大学甘草

资源圃，８０℃烘干至恒重后粉碎成粉末，过４０ 目筛。准确称取

１．０ｇ 样品干粉，加１０ ｍｌ 蒸馏水，于室温条件下放置４８

ｈ，１２ ０００ ｒ／ｍｉｎ 离心１０ ｍｉｎ，取５００ μｌ 上

清液加５００ μｌ 甲醇混匀，１２ ０００ ｒ／ｍｉｎ 离心１０

ｍｉｎ，取上清液，用孔径为０．２２ μｍ 的微孔滤膜过滤，ＨＰ

ＬＣ 法测定甘草酸含量［６］。

１．１．２ 甘草黄酮的制备准确称取１．０ ｇ 样品粉末，用

２５０ ｍｌ无水乙醇加５ 滴浓盐酸为提取剂在索氏提取器中于９

５℃的水浴加热条件下提取６ ｈ，浓缩至２５ ｍｌ，冷却至室温后

补足溶剂至刻度，用孔径０．２２ μｍ 的微孔滤膜过滤，用Ｆｏｌ

ｉｎ －酚试剂法测定总黄酮含量［６］。

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１．2 细胞株人宫颈癌细胞株（Ｈｅｌａ）、人乳腺癌细胞株（Ｂ

ｃａｐ －３７），人胃癌细胞株（ＭＧＣ －８０３），人肝癌细胞株

（Ｂｅｌ －７４０４），均由中国科学院上海细胞生物研究所细胞库

提供。

１．３ 设备及试剂

１．３．1 仪器ＨＰＬＣ 分析仪（ｗａｔｅｒｓ）、紫外可见

分光光度仪（上海棱光）、ＣＯ２ 培养箱（美国Ｆｏｒｍａ）、∑９

６０ 自动酶标仪（Ｍｅｔｅｒｔｅｃｈ）、荧光显微镜（Ｏｌｙｍｐ

ｕｓ ＢＸ －５１）、超净工作台（上海净化设备厂）、血球记数板（上

海医用光学仪器厂）、倒置显微镜（重庆）、超速离心机。

１．３．2 试剂ＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ） 、小牛血清

（杭州四季青公司）、胰蛋白酶（Ｓｉｇｍａ） 、二甲基亚砜（分析

纯）、甲醇（色谱纯）、四噻唑蓝（ＭＴＴ）、顺铂（ＤＤＰ，江苏豪

森药业股份有限公司）、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８ 染色试剂盒（碧

云天生物技术研究所）。

１．４ 方法及观察指标

１．４．1 细胞培养细胞用含１０％灭活小牛血清的ＲＰＭＩ

１６４０ 培养基，置于３７℃，５％ＣＯ２ 孵箱中培养。实验用细

胞均处于对数生长期，常规苔酚蓝计数活细胞大于９５％。

１．４．2 体外抗肿瘤实验体外抗肿瘤实验分５ 个浓

度（１００ ～１ ０００ μｇ／ｍｌ） 、阴性对照（含同一细胞密

度的培养液）、空白对照。对数生长期细胞（细胞密度为２ ×１０５ 个

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／ｍｌ） １００ μｌ／孔接种于９６ 孔板，３７℃饱和湿度，５％

ＣＯ２ 条件下培养６ ｈ，待细胞均已贴壁，加入１００ μｌ 不同

浓度的受试物，各设５ 个复孔。在４８ ｈ取出９６ 孔板，倒置显

微镜下观察后，每孔加ＭＴＴ 溶液（５ ｍｇ／ｍｌ）２０ μｌ ，

３７℃继续孵育４ ｈ，终止培养。小心吸弃孔内培养上清液。每孔

加入１５０ μｌ ＤＭＳＯ，振荡１０ ｍｉｎ，在酶联免疫检测仪上

测定各孔光吸收OD 值（A ＝５７０ ｎｍ），记录结果。

抑制率（％） ＝（１ －给药组A ５７０ ／细胞对照组

A ５７０ ）×１００％

１．４．３ 细胞凋亡率实验细胞凋亡实验在同一浓度下进行（甘

草酸１ ０００ μｇ／ｍｌ，黄酮２００ μｇ／ｍｌ），实验设阴性对

照（含同一细胞密度的培养液）、阳性对照（２００ μｇ／ｍｌ ＤＤ

Ｐ）、空白对照。取普通、洁净盖玻片于７０％ 乙醇中浸泡１０ ｍ

ｉｎ，０．９％ ＮａＣｌ 溶液洗涤3遍，再用细胞培养液洗涤一遍。

将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为７０％ ～９０％

满。加入样品，继续培养４８ｈ，吸尽培养液，加入０．５ ｍｌ 固

定液，固定１０ ｍｉｎ。去固定液，用０．９％ ＮａＣｌ 洗两遍，

３ ｍｉｎ／次，吸尽液体。加入０．５ ｍｌ Ｈｏｅｃｈｓｔ３３

２５８ 染色液，染色５ ｍｉｎ。用０．９％ＮａＣｌ 洗两遍，３ ｍ

ｉｎ／次。滴１滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖

玻片。荧光显微镜下（Ｅｘ３５０ ｎｍ，Ｅｍ４６０ ｎｍ）随机选

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取１０ 个视野拍照后计数。凋亡率（%）＝凋亡细胞／（视野总细

胞数） ×１００％。

１．５ 统计学处理实验所得所有数据均经ＳＰＳＳ １２．０

软件处理并对处理组间进行单因素方差分析，P＜０．０５ 时表示

存在显著性差异。

2 结果

２．１ 甘草酸体外抗肿瘤实验结果光镜下观察到，未经任何处

理的肿瘤细胞接种４８ ｈ 后，细胞约占孔底面积的９０％ ～９

８％。高剂量甘草酸处理肿瘤细胞４８ ｈ 时，细胞数量少，间距大，

多数细胞体积固缩变小、失去原有肿瘤细胞形态而略呈圆形、椭圆形，

说明对肿瘤细胞的生长与增殖具有显著的抑制作用。结果见表１。

表1 甘草酸对4种肿瘤细胞增殖的抑制效应（略）

从表１ 可见甘草酸的抑瘤效果表现出浓度依赖性，与浓度呈正

相关关系。高浓度甘草酸（１ ０００ μｇ／ｍｌ）对Ｂｃａｐ －３

７，Ｈｅｌａ，ＭＧＣ －８０３ 的增殖均有较强的抑制作用， 其

抑制率分别为７６．３７％，７９．７１％，７１．０６％，对Ｂｅ

ｌ －７４０４ 细胞增殖的抑制作用较差，抑制率仅为２４．２９％。

２．２ 甘草黄酮体外抗肿瘤实验结果(见表２)。从表２ 中可

得知，甘草黄酮处理肿瘤细胞４８ ｈ 后，在一定浓度范围内（２０

０ ～１ ０００ μｇ／ｍｌ），其对４ 种肿瘤细胞的抑制率与样本浓

度大小呈负相关关系，即样本浓度越低，对肿瘤细胞的抑制率越高，

２００ μｇ／ｍｌ 剂量的甘草黄酮抑制肿瘤细胞增殖的效果最佳，

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其对Ｂｃａｐ －３７，Ｈｅｌａ，Ｂｅｌ －７４０４，ＭＧＣ －

８０３ 等４ 种肿瘤细胞增殖的抑制率分别为７９．５５％，７９．９

８％，６７．９１％以及３７．８６％；在极低浓度时（１００ μ

ｇ／ｍｌ 的剂量），甘草黄酮对这４ 种肿瘤细胞生长均无明显抑制

作用。

表2 甘草黄酮对4种肿瘤细胞增殖的抑制效应（略）

2.3 细胞凋亡实验从图１ ～３ 中可以看到，４ 种肿瘤细胞经

荧光染色后，正常细胞的细胞核呈弥散均匀状，凋亡细胞的细胞核由

于凋亡致使细胞核固缩成团，在荧光下呈致密浓染或碎块状，颜色较

正常细胞更深更亮。甘草活性成分诱导ＢＣＡＰ 细胞凋亡的实验结

果见表３。

表3 不同处理对4种肿瘤细胞凋亡的影响（略）

本研究中我们以临床常用肿瘤治疗药物顺铂做阳性对照，从结

果中我们可以看出与阴性对照组相比甘草黄酮与甘草酸均具有极显

著的诱导４ 种肿瘤细胞凋亡的生物学效应（P＜０．０１），甘草黄

酮能很好的诱导人乳腺癌细胞（Ｂｃａｐ －３７）、人宫颈癌细胞（Ｈ

ｅｌａ）以及人肝癌细胞（Ｂｅｌ －７４０４）的凋亡，其效果均

优于等剂量的顺铂；而对胃癌细胞凋亡的诱导效果不及顺铂。高浓度

（１ ０００ μｇ／ｍｌ）的甘草酸只对人宫颈癌细胞（Ｈｅｌａ）

的诱导凋亡效应与２００ μｇ／ｍｌ 的顺铂相当，对其余细胞的诱

导凋亡效果均不及顺铂。

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图1 阴性对照组（×400）（略）

图2 阳性对照组（×400）（略）

图3 样品处理组（×400）（略）

3 讨论

细胞凋亡是一种与细胞坏死具有不同形态及生化特征，且

受基因调控的主动性细胞死亡。与诱导细胞坏死相比，通过诱导细胞

凋亡杀死癌细胞不会引起机体强烈的炎症反应［７］ 。因此，通过

诱导细胞凋亡来杀伤和清除肿瘤细胞，已经成为一种筛选抗癌药的快

速有效的方法。为了探讨甘草活性成分甘草酸、甘草黄酮在抗肿瘤作

用中的潜在治疗价值，实验中笔者以人宫颈癌细胞（Ｈｅｌａ）、人

乳腺癌细胞（Ｂｃａｐ －３７）、人胃癌细胞（ＭＧＣ －８０３）、

人肝癌细胞（Ｂｅｌ －７４０４）为研究对象，以顺铂作为阳性对

照（铂类药物具有较强的抗肿瘤活性［８］），观察甘草酸、甘草黄酮

对这４种肿瘤细胞的增殖抑制及其诱导凋亡作用。结果显示甘草黄酮

类化合物对人宫颈癌细胞（Ｈｅｌａ）、乳腺癌细胞（Ｂｃａｐ －３

７）以及肝癌细胞（Ｂｅｌ －７４０４） 的增殖均具有显著的抑制

及诱导细胞凋亡的效果；甘草酸只在高浓度条件下才对人胃癌细胞

（ＭＧＣ －８０３）显示出较强的抑制增殖作用，其对胃癌细胞（Ｍ

ＧＣ －８０３）的诱导凋亡效应不佳（不及顺铂），这与以往的研究

结果是一致的［7］。综上所述，甘草酸、甘草黄酮抑制这４ 种肿瘤

细胞增殖与诱导其细胞凋亡的结果是相一致的；因此，甘草酸和甘草

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黄酮诱导细胞凋亡是其显著抑制肿瘤细胞增殖的重要途径。鉴于甘草

黄酮类化合物的抑瘤效果优于甘草酸，所以在进行甘草抗癌药物筛选

时，应优先考虑甘草黄酮类物质。

【参考文献】

［1］ 中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志，

４２ 卷２ 分册［Ｍ］．北京：科学出版社，１９９８：１６７．

［2］ 国家药典委员会．中国药典，Ⅰ部［Ｓ］．北京：化

学工业出版社，２００５：５９．

［3］ Ｈｕａｎｇ Ｗｅｉ， Ｈｕａｎｇ Ｊｉ －ｑｕｎ，

Ｚｈａｎｇ Ｄｏｎｇ －ｆａｎｇ， ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏ

ｆ Ｒｅｔｉｎｏｉｃ Ａｃｉｄ， Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ ａｎ

ｄ １８β－Ｇｌｙｃｙｒｒｈｅｔｉｎｉｃ Ａｃｉｄ ｏｎ Ｐｒｏ

ｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎｔｉ

－ｉｎｖａｓｉｏｎ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ Ｃ

ｅｌｌｓ ［Ｊ］．ＣｈｉｎａＴｕｍｏｒ （中国肿瘤），２００３，

１２（１１）：６６５．

［4］ 谢 彦，徐淑永，曾和平．甘草属植物中三萜类化合

物研究概述［Ｊ］．广州化工，２００４，３２（１）：１．

DOC格式论文，方便您的复制修改删减

［5］ 季宇彬，姜 薇，范玉玲，等．甘草黄酮的研究进展

［Ｊ］．中草药，２００４，３５（９）：５．

［6］ 周旭莉，马 淼．中国乌拉甘草的道地性研究．中国

科协２００５ 年学术年会论文集［Ｃ］．北京：中国环境科学出版社，

２００５：７６５．

［7］ 马 靖，彭文烈，梁 东，等．甘草提取物诱导胃癌

ＭＧＣ －８０３ 细胞凋亡的初步研究［Ｊ］．中国中西医结合杂志，

２０００，２０（１２）：９２８．

［8］ 田 莉，高晓黎．甘草的抗肿瘤作用［Ｊ］．西北药

学杂志，２００４，１９（３）：１３３．