碧云天pCMV-jGCaMP7c高对比度钙离子荧光探针说明书-USB迷|专注于互联网分享

2024年9月9日发(作者：平衍)

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pCMV-jGCaMP7c (高对比度钙离子荧光探针)

产品编号

D2863-1µg

D2863-100µg

产品名称

pCMV-jGCaMP7c (高对比度钙离子荧光探针)

包装

1µg

100µg

产品简介：

 pCMV-jGCaMP7系列质粒(jGCaMP7b/jGCaMP7c/jGCaMP7f/jGCaMP7s)是用于钙离子(Ca

)荧光检测的哺乳动物细胞表达质

粒，表达的是经过突变和优化并适用于细胞或组织中钙离子荧光检测的M13-GFP-CaM融合蛋白。M13-GFP-CaM融合蛋白这

个钙离子探针(calcium probe)中，环状排列的绿色荧光蛋白(circularly permuted green fluorescent protein, cpGFP)一端和钙调蛋

白(calmodulin, CaM)融合表达，另一端与可以和钙调蛋白CaM相互作用的肌球蛋白轻链激酶M13 (也称RS20)肽链融合表达。

这样当钙离子结合钙调蛋白时，可以改变钙调蛋白的构象，同时也会影响和钙调蛋白相互作用的M13的构象，钙调蛋白和

M13的构象改变最终导致GFP的构象改变，从而影响其荧光的强弱，最终实现对于钙离子浓度变化的检测。

pRSET A Tag M13 Linker1 cpGFP Linker2 CaM

图1. GCaMP7系列蛋白结构图。其中pRSET A Tag中含有6X His tag。

 碧云天构建的pCMV-jGCaMP7系列质粒(jGCaMP7b/jGCaMP7c/jGCaMP7f/jGCaMP7s)是最新一代基因编码的钙离子探针系

列，适用于常见细胞的细胞内钙离子水平变化检测，并且特别适合用于监测特定条件下神经元中的钙离子水平的变化。

 jGCaMP7系列的四个融合蛋白与GCaMP6系列相比，各有其突出特点：高亮度钙离子荧光探针jGCaMP7b (brighter baseline

fluorescence)有更亮的本底荧光，并且灵敏度可达到GCaMP6s的3倍，未结合钙离子时的荧光强度比GCaMP6s增强50%；高

对比度钙离子荧光探针jGCaMP7c (high contrast with low baseline fluorescence)有高对比度低和更低的背景荧光，并且灵敏度

是GCaMP6s的2.7倍，对比度显著增强；快速响应型钙离子荧光探针jGCaMP7f (fast kinetics)具有快速动力学特点，反应速率

是GCaMP6f的5倍和GCaMP6s的3倍，更加适合检测钙离子的动态变化；高灵敏度钙离子荧光探针jGCaMP7s (sensitive and

slow) 具有高灵敏度但响应速度相对较慢的特点，灵敏度可达GCaMP6s的5倍以上，并且响应速率也比GCaMP6s快。

 pCMV-jGCaMP7系列质粒是在针对其M13-GFP-CaM融合蛋白中肽链相互作用的界面区域进行突变筛选并优化而得到的。四

个融合蛋白对应的突变氨基酸序列参考表1。

表1：jGCaMP7突变位点

M13 Linker1 cpGFP Linker2 CaM

jGCaMP7s A52V A317L

jGCaMP7f H78K A317L R381T T383S G392R

jGCaMP7b H78K L302P A317L M374Y

jGCaMP7c L59Q E60P H78K M378G K379S T383S T412N

 jGCamP7c中的突变主要发生在Linker1(L59Q/E60P)、cpGFP(H78K)和CaM(M378G/K379S/T383S/T412N)上。pCMV-jGCaMP7c

质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达，该质粒为卡那霉素抗性。

 pCMV- jGCaMP7c质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide

Position

1-602

CMV promoter

T3 promoter and T3 primer binding site

jGCaMP7c

T7 promoter and T7 primer binding site

SV40 polyA signal

f1 origin of ss-DNA replication

bla promoter

SV40 promoter

Neomycin/kanamycin resistance ORF

HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal

pUC origin

620-639

693-2045

2107-2128

2140-2523

2661-2965

2990-3114

3134-3427

3507-4298

4299-4757

4886-5553

 pCMV- jGCaMP7c质粒(5605bp)的图谱如下：

 pCMV-jGCaMP7c的多克隆位点的详细图谱如下：

SacII NotI BamHI jGCaMP7c

0651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCTCTAGC CCGGGCGGAT CCATGGGTTC

CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGAGATCG GGCCCGCCTA GGTACCCAAG

0701 TCATCATCAT CATCATCATG GTATGGCTAG CATGACTGGT GGACAGCAAA

CAAGTTCCAC GCGTACCTCC CGAGGCACTT GCCGGTGATG AAGCTCTAGC

0751 TGGGTCGGGA TCTGTACGAC GATGACGATA AGGATCTCGC CACCATGGTC

ACCCAGCCCT AGACATGCTG CTACTGCTAT TCCTAGAGCG GTGGTACCAG

0801 GACTCATCAC GTCGTAAGTG GAATAAGACA GGTCACGCAG TCAGAGCTAT

CTGAGTAGTG CAGCATTCAC CTTATTCTGT CCAGTGCGTC AGTCTCGATA

0851 AGGTCGGCTG AGCTCACAGC CTAACGTCTA TATCAAGGCC GACAAGCAGA

TCCAGCCGAC TCGAGTGTCG GATTGCAGAT ATAGTTCCGG CTGTTCGTCT

0901 AGAACGGCAT CAAGGCGAAC TTCAAGATCC GCCACAACAT CGAGGACGGC

TCTTGCCGTA GTTCCGCTTG AAGTTCTAGG CGGTGTTGTA GCTCCTGCCG

0951 GGCGTGCAGC TCGCCTACCA CTACCAGCAG AACACCCCCA TCGGCGACGG

CCGCACGTCG AGCGGATGGT GATGGTCGTC TTGTGGGGGT AGCCGCTGCC

1001 CCCCGTGCTG CTGCCCGACA ACCACTACCT GAGCGTGCAG TCCAAACTTT

GGGGCACGAC GACGGGCTGT TGGTGATGGA CTCGCACGTC AGGTTTGAAA

1051 CGAAAGACCC CAACGAGAAG CGCGATCACA TGGTCCTGCT GGAGTTCGTG

GCTTTCTGGG GTTGCTCTTC GCGCTAGTGT ACCAGGACGA CCTCAAGCAC

1101 ACCGCCGCCG GGATCACTCT CGGCATGGAC GAGCTGTACA AGGGCGGTAC

TGGCGGCGGC CCTAGTGAGA GCCGTACCTG CTCGACATGT TCCCGCCATG

1151 CGGAGGGAGC ATGGTGAGCA AGGGCGAGGA GCTGTTCACC GGGGTGGTGC

GCCTCCCTCG TACCACTCGT TCCCGCTCCT CGACAAGTGG CCCCACCACG

1201 CCATCCTGGT CGAGCTGGAC GGCGACGTAA ACGGCCACAA GTTCAGCGTG

GGTAGGACCA GCTCGACCTG CCGCTGCATT TGCCGGTGTT CAAGTCGCAC

1251 TCCGGCGAGG GTGAGGGCGA TGCCACCTAC GGCAAGCTGA CCCTGAAGTT

AGGCCGCTCC CACTCCCGCT ACGGTGGATG CCGTTCGACT GGGACTTCAA

1301 CATCTGCACC ACCGGCAAGC TGCCCGTGCC CTGGCCCACC CTCGTGACCA

GTAGACGTGG TGGCCGTTCG ACGGGCACGG GACCGGGTGG GAGCACTGGT

2 / 5 D2863

pCMV-jGCaMP7c (高对比度钙离子荧光探针)

400-1683301/800-8283301 碧云天/Beyotime

1351 CCCTGACCTA CGGCGTGCAG TGCTTCAGCC GCTACCCCGA CCACATGAAG

ACGTCCTTAA GCTATAGCAG CTGTCTAGAG AGCTCAGATC TTGATCACCC

1401 CAGCACGACT TCTTCAAGTC CGCCATGCCC GAAGGCTACA TCCAGGAGCG

GTCGTGCTGA AGAAGTTCAG GCGGTACGGG CTTCCGATGT AGGTCCTCGC

1451 CACCATCTTC TTCAAGGACG ACGGCAACTA CAAGACCCGC GCCGAGGTGA

GTGGTAGAAG AAGTTCCTGC TGCCGTTGAT GTTCTGGGCG CGGCTCCACT

1501 AGTTCGAGGG CGACACCCTG GTGAACCGCA TCGAGCTGAA GGGCATCGAC

TCAAGCTCCC GCTGTGGGAC CACTTGGCGT AGCTCGACTT CCCGTAGCTG

1551 TTCAAGGAGG ACGGCAACAT CCTGGGGCAC AAGCTGGAGT ACAACCTTCC

AAGTTCCTCC TGCCGTTGTA GGACCCCGTG TTCGACCTCA TGTTGGAAGG

1601 TGACCAACTG ACTGAAGAGC AGATCGCAGA ATTTAAAGAG GCTTTCTCCC

ACTGGTTGAC TGACTTCTCG TCTAGCGTCT TAAATTTCTC CGAAAGAGGG

1651 TATTTGACAA GGACGGGGAT GGGACAATAA CAACCAAGGA GCTGGGGACG

ATAAACTGTT CCTGCCCCTA CCCTGTTATT GTTGGTTCCT CGACCCCTGC

1701 GTGATGCGTT CTCTGGGGCA GAACCCCACA GAAGCAGAGC TGCAGGACAT

CACTACGCAA GAGACCCCGT CTTGGGGTGT CTTCGTCTCG ACGTCCTGTA

1751 GATCAATGAA GTAGATGCCG ACGGTGACGG CACAATCGAC TTCCCTGAGT

CTAGTTACTT CATCTACGGC TGCCACTGCC GTGTTAGCTG AAGGGACTCA

1801 TCCTGACAAT GATGGCAAGA AAAGGGAGCT ACAGGGACAG CGAAGAAGAA

AGGACTGTTA CTACCGTTCT TTTCCCTCGA TGTCCCTGTC GCTTCTTCTT

1851 ATTAGAGAAG CGTTCGGTGT GTTTGATAAG GATGGCAATG GCTACATCAG

TAATCTCTTC GCAAGCCACA CAAACTATTC CTACCGTTAC CGATGTAGTC

1901 TGCAGCAGAG CTTCGCCACG TGATGAACAA CCTTGGAGAG AAGTTAACAG

ACGTCGTCTC GAAGCGGTGC ACTACTTGTT GGAACCTCTC TTCAATTGTC

1951 ATGAAGAGGT TGATGAAATG ATCAGGGAAG CAGACATCGA TGGGGATGGT

TACTTCTCCA ACTACTTTAC TAGTCCCTTC GTCTGTAGCT ACCCCTACCA

XbaI

2001 CAGGTAAACT ACGAAGAGTT TGTACAAATG ATGACAGCGA AGTGATCTAG

GTCCATTTGA TGCTTCTCAA ACATGTTTAC TACTGTCGCT TCACTAGATC

SpeI A p a I

2051 AACTAGTGGG CCCGGTACCT TAATTAATTA AGGTACCAGG TAAGTGTACC

TTGATCACCC GGGCCATGGA ATTAATTAAT TCCATGGTCC ATTCACATGG

 pCMV-jGCaMP7c中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-jGCaMP7b)包括：

AclI AfeI AflII AgeI AhdI AscI

BaeI BbsI BbvCI BglII BsiWI BsmBI

BssHII BstEII BstZ17I EcoNI EcoRI EcoRV

FseI HindIII NruI PaeR7I PflMI PmeI

PshAI PspXI SbfI ScaI SgrAI SwaI

AclI AfeI AflII AgeI AhdI AscI

 pCMV-jGCaMP7c中的单酶切位点（Restriction enzymes that cut pCMV-jGCaMP7b once）包括：

799 PciI A`CATG,T

AccI GT`MK,AC

2062 PflFI GACN`N,NGTC

ApaI G,GGCC`C

5239 PluTI G,GCGC`C

ApaLI G`TGCA,C

680 PmlI CAC|GTG

AvaI C`YCGR,G

687 PspOMI G`GGCC,C

BamHI G`GATC,C

735 PstI C,TGCA`G

BcgI NN` (N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN

858 PvuI CG,AT`CG

BlpI GC`TNAGC

810 RsrII CG`GWC,CG

BmgBI CAC|GTC

1029 SacII CC,GC`GG

Bpu10I CC`TNA,GC

4624 SalI G`TCGA,C

BsaI GGTCTCN`NNNN,

2687 SapI GCTCTTCN`NNN,

BsaXI ,NNN` (N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN`

碧云天/Beyotime 400-1683301/800-8283301

AsiSI

BspEI

Esp3I

PpuMI

XcmI

AsiSI

5553

3735

3638

1919

2058

1744

2140

4151

662

798

1609

D2863

pCMV-jGCaMP7b (高亮度钙离子荧光探针)

3 / 5

680 SfiI GGCCN,NNN`NGGCC 3410

BsoBI C`YCGR,G

1609 SfoI GGC|GCC 3636

BspQI GCTCTTCN`NNN,

CCC|GGG 682

CspCI ,NN` (N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN`

382 SmaI

2753 SnaBI TAC|GTA 342

DraIII CAC,NNN`GTG

3634 SpeI A`CTAG,T 2052

KasI G`GCGC,C

2837 SrfI GCCC|GGGC 682

MfeI C`AATT,G

2523 StuI AGG|CCT 3456

MluI A`CGCG,T

3717 TspMI C`CCGG,G 680

MscI TGG|CCA

3635 Tth111I GACN`N,NGTC 3753

NarI GG`CG,CC

240 XbaI T`CTAG,A 2046

NdeI CA`TA,TG

668 XmaI C`CCGG,G

NotI GC`GGCC,GC 680

 pCMV-jGCaMP7c的全序列信息请参考碧云天的网站上该质粒的信息。

pCMV-jGCaMP7c质粒转染Hela细胞12h后，于培养基中加入Ionomycin (2μM)后150秒内的荧光变化效果请参考图2本产品网

站上的视频。

图2. pCMV-jGCaMP7c质粒转染Hela细胞12h后2μM Ionomycin处理前后的荧光变化效果图。pCMV-jGCaMP7c质粒转染培养

在六孔板中的Hela细胞12h后，先用PBS洗涤细胞2-3次，加入1ml DMEM，选择适当视野，在荧光显微镜下拍摄视频。开始

拍摄5-10秒后，加入1ml含有4μM Ionomycin的新鲜DMEM培养液(最终浓度为2μM Ionomycin)，继续拍摄视频约2-3分钟。图

中可见加入Ionomycin之前很细胞的荧光比较弱，加入Ionomycin后细胞的荧光逐渐变强，时间较长后荧光又会逐渐变弱。A.

未加Ionomycin；B. 加入Ionomycin 30s；C：加入Ionomycin 60s；D：加入Ionomycin 120s。

包装清单：

产品编号

D2863-1µg

D2863-100µg

—

产品名称

pCMV-jGCaMP7c (高对比度钙离子荧光探针)

说明书

包装

1µg

100µg

1份

保存条件：

-20ºC保存。

注意事项：

 本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

1. 首次使用1µg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提

获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。

2. 100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl，共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。

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