2024年9月26日发(作者：郏高原)

第２８卷第４期　

齐齐哈尔大学学报　

Ｖｏ１．２８．Ｎｏ．４　

２０１２年７月　

Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｑｉｑｉｈａｒ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　

Ｊｕｌｙ，２０１　２　

羟基喜树碱联合丝裂霉素　

诱导人白血病Ｋ５６２细胞凋亡　

陈琳，邵淑丽，武广慧，张伟伟　

（齐齐哈尔大学生命科学与农林学院，黑龙江齐齐哈尔１６１００６）　

摘要：观察羟基喜树碱与丝裂霉索联合应用对人白血病细胞Ｋ５６２的作用效果，并探讨其机制。不同浓度羟基喜　

树碱与丝裂霉素单独及联合作用于人白血病细胞Ｋ５６２后，应用台盼蓝拒染法检测细胞生长抑制率，计算合用指　

数（ｃＩ），流式细胞仪（ＦＣＭ）检测Ｋ５６２细胞凋亡率，吖啶橙（ＡＯ）荧光染色和透射电镜观察凋亡形态学变化。　

结果表明：单独应用时羟基喜树碱和丝裂霉素的Ｉｃ　分别是８￣ｔｇ／ｍＬ和１２．５￣ｇ／ｍＬ，联合应用时Ｉｃ，。下降为４　Ｉｌｇ／ｍＬ　

ＨＣＰＴ）和３．６￣ｔｇ，／ｍＬ（ＭＭＣ），ＣＩ＝０．７８，为协同效应。羟基喜树碱与丝裂霉素单独及联合应用均可诱导Ｋ５６２细胞　

凋亡。２种药物联合应用时的凋亡率高于各自单独用药。羟基喜树碱与丝裂霉素联合应用可以通过共同诱导细胞　

凋亡，协同抑制人白血病细胞生长。　

关键词：羟基喜树碱；丝裂霉素；Ｋ５６２细胞　

中图分类号：Ｒ７３—３６　２　文献标志码：Ａ　文章编号：１００７—９８４Ｘ（２０１２）０４—００３８—０５　

羟基喜树碱（Ｈｙｄｒｏｘｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ，ＨＣＰＴ）是从喜树的皮、果实中提取得到的一类色氨酸一萜烯生物　

碱类抗癌药物Ⅲ。丝裂霉素（ＭＭＣ）是一种抗瘤谱广、杀伤力强的化疗药物，具有非特异作用于肿瘤细胞　

增殖各个时期的特点犯　，是良好的抗肿瘤药物，不仅能直接作用于肿瘤细胞核中的ＤＮＡ，起抑制或杀伤肿　

瘤的作用，而且能提高肿瘤细胞的免疫原性，增强机体对其的杀伤活性ｐ　。　

在肿瘤的综合治疗中，药物治疗占有重要地位，在治疗过程中为了达到更好的治疗效果，往往同时使　

用一些药物。因此，联合用药在抗肿瘤过程中占有重要的地位，它可以使用几种作用机制不同的药物共同　

诱导细胞凋亡，减少了只用一种较高浓度药物诱导细胞凋亡对机体的损害作用Ｈ　。。本研究将羟基喜树碱和　

丝裂霉素联合应用，观察其对人白血病Ｋ５６２细胞的作用效果，并探讨起作用机制。　

１材料和方法　

１．１　材料　

人慢ｉ生粒细胞性白血病细胞Ｋ５６２，来源于上海生工生物生化细胞所。　

１＿２药品和试剂　

丝裂霉素，浙江海正药业；ＲＰＭＩ１６４０培养基干粉，ＨｙＣｌｏｎｅ；优级胎牛血清，上海生工；Ｈｅｐｅｓ，上海　

生工；吖啶橙、Ｔｒｉｓ饱和酚，北京鼎国；Ｔｒｉｚｏｌ，上海生工。　

１．３方法　

１．３．１细胞培养和传代　

细胞培养于含１０％优级胎牛血清的ＲＰＭＩ１６４０完全培养基中，培养条件为３７℃，体积分数５％ＣＯ　和饱　

和湿度。每３　５ｄ传代一次，取对数生长期的细胞进行试验，接种密度为５万个／ｍＬ。．　

１．３．２台盼蓝拒染法检测药物联合应用的效果　

取对数生长期的Ｋ５６２细胞，实验共分４组：（１）对照组：不加任何药物；（２）羟基喜树碱组：羟　

收稿日期：２０１１－０３—１６　

基金项目：黑龙江省自然科学基金项目（Ｃ２００６２４）；黑龙江省教育厅科学技术项目（１１５１１４４７，１２５１１６１１）　

作者简介：陈琳（１９８５一），女，江苏泰兴人，在读硕士研究生，主要从事分子细胞生物学方面研究，ｓｈｓｈ１３２＠１６３．ｃｏｒｎ。　

第４期　羟基喜树碱联合丝裂霉素诱导人白血病Ｋ５６２细胞凋亡　・３９・　

基喜树碱终浓度分别是２．５，５，７．５，１０，ｌ２．５，１５．ｇ／ｍＬ；（３）丝裂霉素组：５，１０，１５，２０，２５，３０．ｇ／ｍＬ；　

（４）联合用药组：同时加入羟基喜树碱和丝裂霉素，终浓度分别为８．ｇ／ｍＬ（ＨＣＰＴ）＋６．２５．ｇ／ｍＬ（ＭＭＣ），　

８￣ｇ／ｍＬ（ＨＣＰＴ）＋３．１２５．ｇ／ｍＬ（ＭＭＣ），４．ｇ／ｍＬ（ＨＣＰＴ）＋１２．５．ｇ／ｍＬ（ＭＭＣ），２．ｇ／ｍＬ（ＨＣＰＴ）＋１２．５．ｇ／ｍＬ　

（ＭＭＣ），４．ｇ／ｍＬ（ＨＣＰＴ）＋６．２５．ｇ／ｍＬ（ＭＭＣ），４．￣ｍＬ（ＨＣＰＴ）＋３．１２５　ｐ＃ｍＬ（ＭＭＣ），２　ｇ／ｍＬ（ＨＣＰＴ）　

＋６．２５　ｍＬ（ＭＭＣ），２．ｇ／ｍＬ（ＨＣＰＴ）＋３．１２５．ｇ／ｍＬ（ＭＭＣ　ｏ培养４８ｈ后，台盼蓝拒染法计算活细胞数，　

每组实验重复３次，计算细胞抑制率＝［（对照组活细胞数一实验组活细胞数）／ｘ￣照组活细胞数］Ｘ　１００％。绘　

制细胞增殖抑制曲线，测定药物半数抑制浓度（ＩＣ如），计算合用指数（ｃＩ　ｏ　ＣＩ＝（联合用药时羟基喜树碱　

的Ｉｃ　单独用药时羟基喜树碱的Ｉｃ　。）＋（联合用药时丝裂霉素的Ｉｃ　。／单独用药时丝裂霉素的Ｉｃ∞ｏ　ＣＩ＝Ｉ　

表明相加作用，ＣＩ＜ｌ表明协同作用，ＣＩ＞Ｉ表明拮抗作用。　

１．３．３羟基喜树碱与丝裂霉素对Ｋ５６２细胞形态的观察　

收集对照组和羟基喜树碱组、丝裂霉素组、联合用药组处理的４８　ｈ的Ｋ５６２细胞，普通生物显微镜下　

观察并拍照，吖啶橙染色后荧光显微镜下观察细胞形态，常规制作电镜标本，透射电镜观察、拍照。　

１．３．４　ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳技术检测细胞凋亡　

收集对照组和羟基喜树碱组、丝裂霉素组、联合用药组处理４８　ｈ的Ｋ５６２细胞，提取ＤＮＡ，１．５％琼脂　

糖凝胶电泳ｌ　ｈ，紫外灯下观察拍照。　

１．３．５　流式细胞仪分析Ｋ５６２细胞周期及凋亡情况　

分别收集培养４８　ｈ的所有Ｋ５６２细胞，常规流式细胞仪检测前处理，碘化丙啶染色，上流式细胞仪检　

测（汞激发波长为４８８ｎｍ）。　

１．３．６　实验数据的统计学处理　

采用ＳＰＳＳ　１６．０软件进行统计分析。数据用均数　±标准差ｓ（ｘ　４－　）表示，进行方差分析。　

２结果　

２．１　台盼蓝拒染法检测药物联合应用的效果　

单独应用羟基喜树碱和丝裂霉素时Ｉｃ　。分　

别为８　ｍＬ和１２．５．ｇ／ｍＬ，如表ｌ和图１所　

表１曲线拟合结果　

示。　

２种药联合作用时Ｋ５６２细胞的Ｉｃ　。为４　

．ｇ／ｍＥ（ＨＣＰＴ）＋３．６　ｇ，ｍＬ（ＭＭＣ），女口图２所　

示。根据公式计算ＣＩ＝０．７８＜１，表明２种药联　

合起协同作用。　

８０　

．　

５　１０　ｌ５　２０　２５　３０　２５　５　７　１ｏ　１２５　１５　

０　

丝裂霉素药物浓度，　ｇ・ｍＬ　羟基喜树碱药物浓度，　ｍＬ　

羟基喜树碱＋丝裂霉素药物浓度／Ｐｇ・ｍＬ　

图１丝裂霉素、羟基喜树碱作用４８ｈ的细胞增殖抑制曲线　

图２丝裂霉素、羟基喜树碱联合作用４８ｈ的细胞增殖抑制曲线　

２－２细胞形态学观察　

２．２．１　羟基喜树碱、丝裂霉素单用及联合应用时Ｋ５６２细胞形态的影响　

未加药处理的Ｋ５６２细胞呈圆形，大小均一，核大而明显，细胞壁光滑，折光性好如图３中的Ａ。凋　

亡的细胞体积变小，细胞膜出芽，出现凋亡小体如图３中的Ａ、Ｂ、ｃ，坏死细胞细胞膜破裂，内容物释放　

到培养基中。　

・

４２・　齐齐哈尔大学学报　２０１２正　

在病人耐受的前提下，应适量提高浓度，以增加化疗效果。这些结论为肿瘤化疗药物应用提供理论依据，　

为临床上羟基喜树碱与丝裂霉素联合用于白血病Ｋ５６２细胞的化疗并提高化疗疗效提供一种可能。但由于　

各种肿瘤细胞的特ｌ生不尽相同，羟基喜树碱与丝裂霉素联用对其它肿瘤细胞是否会产生本实验的效果，亦　

有待进一步探讨。　

参考文献　

【１］陈菲，王瑜梅．羟基喜树碱对人乳腺癌ＭＣＦ一７细胞增殖及凋亡的影ｎｌｉ［ｊ］．中国医药导报，２０１１，８（１Ｏ）：１７～１９．　

［２杨娟，周玲玲，袁冬平，等．联用莪术油和丝裂霉素对肝肿瘤细胞株ＳＭＭＣ一７７２１的作用研究［２］Ｊ］．安徽医药，２００９，１３（１　１）：　

１３２７－１３２８．　

［３】Ｓｉｎｇｈ　Ｇ，Ｓｉｎｈａ　Ｎ．Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ｍｅｄｉａｔｉｎｇ　ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ　Ｃ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｔｅｒａｔｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ａｎｄ　

ｍｅｔｈｏｄｓ，２０１０，２０（４）：１９０—１９６．　

［４】Ｋａｕｆｍａｎｎ　Ｓ　Ｈ．Ｅａｒｎｓｈａｗ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｂｙ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．Ｅｘｐ　Ｃｅｌｌ　Ｒｅｓ，２０００，２５６：４２－４９．　

［５】范景景．抗肿瘤药物联合用药作用进展［Ｊ］．城市建设，２００９（３５）：１６４—１６５．　

Ｔｈｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｌｅｕｋｅｍｉｃ　Ｋ５６２　ｃｅｌｌｓ　ａｃｔｅｄ　ｂｙ　ＨＣＰＴ　ａｎｄ　ＭＭＣ　

ＣＨＥＮ　Ｌｉｎ，ＳＨＡＯ　Ｓｈｕ－ｌｉ，　ＷＵ　Ｇｕａｎｇ＇ｈｕｉ，ＺＨＡＮＧ　Ｗｅｉ－ｗｅｉ　

（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆＬｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　ａｎｄ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｑｉｑｉｈａｒ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｉｌｏｎｇｉｉａｎｇ　Ｑｉｑｉｈａｒ　１６１００６，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔ０　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｈｙｄｒｏｘｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎｅ（ＨＣＰＴ）ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ　ｏｎ　ｈｕｍａｎ　ｌｅｕｋｅｍｉｃ　Ｋ５６２　

ｃｅｌｌｓ．ａｎｄ　ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｔｈａｔ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ａｆｔｅｒ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＭＭＣ、ＨＣ　ａｎｄ　ｂｏｔｈ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｆｏｒ　

ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｔｒｙｐａｎ　ｂｌｕｅ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　Ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｃｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ａｎｄ　ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ　ＣＩ，　

ｌｆｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ（ＦＣＭ）ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｒａｔｅ　ｏｆ　Ｋ５６２　ｃｅｌｌｓ，ｍｏｑ）ｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｔ‘ｔｈｅ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　

Ｋ５６２　ｃｅ１ｌｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ＡＯ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｕｎｄｅｒ　ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ　ａｎｄ　ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ　ｅｌｅｃｔｒｏｎ　

ｍｉｃｒｏｓｅｏｐｅ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕ］ｔｓ　ｓｈｏｗ。ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｄｒｕｇｓ，ＣＩ　ｉＳ　０．７８　ｏｒｆ　ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ．ＭＭＣ、ＨＣＰＴ　

ａｎｄ　ｂｏｔｈ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ａｌｌ　ｃａｎ　ｉｎｄｕｃｅ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　Ｋ５６２　ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｒａｔｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｄｒｕｇｓ　ｗａｓ　

ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｆｏｒ　ａｌｏｎｅ．Ｔｈｅ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＨＣＰＴ　ａｎｄ　ＭＭＣ　ｃａｎ　ｉｎｄｕｃｅ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．ａｎｄ　ｈａｄ　ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ　ｉＭｆｉｂｉｔｏｎ　

ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｌｅｕｋｅｍｉｃ　Ｋ５６２　ｃｅｌｌｓ．　

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｈｙｄｒｏｘｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎｅ；ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ；Ｋ５６２　ｃｅｉｌｓ　

2024年9月26日发(作者：郏高原)

第２８卷第４期　

齐齐哈尔大学学报　

Ｖｏ１．２８．Ｎｏ．４　

２０１２年７月　

Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｑｉｑｉｈａｒ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　

Ｊｕｌｙ，２０１　２　

羟基喜树碱联合丝裂霉素　

诱导人白血病Ｋ５６２细胞凋亡　

陈琳，邵淑丽，武广慧，张伟伟　

（齐齐哈尔大学生命科学与农林学院，黑龙江齐齐哈尔１６１００６）　

摘要：观察羟基喜树碱与丝裂霉索联合应用对人白血病细胞Ｋ５６２的作用效果，并探讨其机制。不同浓度羟基喜　

树碱与丝裂霉素单独及联合作用于人白血病细胞Ｋ５６２后，应用台盼蓝拒染法检测细胞生长抑制率，计算合用指　

数（ｃＩ），流式细胞仪（ＦＣＭ）检测Ｋ５６２细胞凋亡率，吖啶橙（ＡＯ）荧光染色和透射电镜观察凋亡形态学变化。　

结果表明：单独应用时羟基喜树碱和丝裂霉素的Ｉｃ　分别是８￣ｔｇ／ｍＬ和１２．５￣ｇ／ｍＬ，联合应用时Ｉｃ，。下降为４　Ｉｌｇ／ｍＬ　

ＨＣＰＴ）和３．６￣ｔｇ，／ｍＬ（ＭＭＣ），ＣＩ＝０．７８，为协同效应。羟基喜树碱与丝裂霉素单独及联合应用均可诱导Ｋ５６２细胞　

凋亡。２种药物联合应用时的凋亡率高于各自单独用药。羟基喜树碱与丝裂霉素联合应用可以通过共同诱导细胞　

凋亡，协同抑制人白血病细胞生长。　

关键词：羟基喜树碱；丝裂霉素；Ｋ５６２细胞　

中图分类号：Ｒ７３—３６　２　文献标志码：Ａ　文章编号：１００７—９８４Ｘ（２０１２）０４—００３８—０５　

羟基喜树碱（Ｈｙｄｒｏｘｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ，ＨＣＰＴ）是从喜树的皮、果实中提取得到的一类色氨酸一萜烯生物　

碱类抗癌药物Ⅲ。丝裂霉素（ＭＭＣ）是一种抗瘤谱广、杀伤力强的化疗药物，具有非特异作用于肿瘤细胞　

增殖各个时期的特点犯　，是良好的抗肿瘤药物，不仅能直接作用于肿瘤细胞核中的ＤＮＡ，起抑制或杀伤肿　

瘤的作用，而且能提高肿瘤细胞的免疫原性，增强机体对其的杀伤活性ｐ　。　

在肿瘤的综合治疗中，药物治疗占有重要地位，在治疗过程中为了达到更好的治疗效果，往往同时使　

用一些药物。因此，联合用药在抗肿瘤过程中占有重要的地位，它可以使用几种作用机制不同的药物共同　

诱导细胞凋亡，减少了只用一种较高浓度药物诱导细胞凋亡对机体的损害作用Ｈ　。。本研究将羟基喜树碱和　

丝裂霉素联合应用，观察其对人白血病Ｋ５６２细胞的作用效果，并探讨起作用机制。　

１材料和方法　

１．１　材料　

人慢ｉ生粒细胞性白血病细胞Ｋ５６２，来源于上海生工生物生化细胞所。　

１＿２药品和试剂　

丝裂霉素，浙江海正药业；ＲＰＭＩ１６４０培养基干粉，ＨｙＣｌｏｎｅ；优级胎牛血清，上海生工；Ｈｅｐｅｓ，上海　

生工；吖啶橙、Ｔｒｉｓ饱和酚，北京鼎国；Ｔｒｉｚｏｌ，上海生工。　

１．３方法　

１．３．１细胞培养和传代　

细胞培养于含１０％优级胎牛血清的ＲＰＭＩ１６４０完全培养基中，培养条件为３７℃，体积分数５％ＣＯ　和饱　

和湿度。每３　５ｄ传代一次，取对数生长期的细胞进行试验，接种密度为５万个／ｍＬ。．　

１．３．２台盼蓝拒染法检测药物联合应用的效果　

取对数生长期的Ｋ５６２细胞，实验共分４组：（１）对照组：不加任何药物；（２）羟基喜树碱组：羟　

收稿日期：２０１１－０３—１６　

基金项目：黑龙江省自然科学基金项目（Ｃ２００６２４）；黑龙江省教育厅科学技术项目（１１５１１４４７，１２５１１６１１）　

作者简介：陈琳（１９８５一），女，江苏泰兴人，在读硕士研究生，主要从事分子细胞生物学方面研究，ｓｈｓｈ１３２＠１６３．ｃｏｒｎ。　

第４期　羟基喜树碱联合丝裂霉素诱导人白血病Ｋ５６２细胞凋亡　・３９・　

基喜树碱终浓度分别是２．５，５，７．５，１０，ｌ２．５，１５．ｇ／ｍＬ；（３）丝裂霉素组：５，１０，１５，２０，２５，３０．ｇ／ｍＬ；　

（４）联合用药组：同时加入羟基喜树碱和丝裂霉素，终浓度分别为８．ｇ／ｍＬ（ＨＣＰＴ）＋６．２５．ｇ／ｍＬ（ＭＭＣ），　

８￣ｇ／ｍＬ（ＨＣＰＴ）＋３．１２５．ｇ／ｍＬ（ＭＭＣ），４．ｇ／ｍＬ（ＨＣＰＴ）＋１２．５．ｇ／ｍＬ（ＭＭＣ），２．ｇ／ｍＬ（ＨＣＰＴ）＋１２．５．ｇ／ｍＬ　

（ＭＭＣ），４．ｇ／ｍＬ（ＨＣＰＴ）＋６．２５．ｇ／ｍＬ（ＭＭＣ），４．￣ｍＬ（ＨＣＰＴ）＋３．１２５　ｐ＃ｍＬ（ＭＭＣ），２　ｇ／ｍＬ（ＨＣＰＴ）　

＋６．２５　ｍＬ（ＭＭＣ），２．ｇ／ｍＬ（ＨＣＰＴ）＋３．１２５．ｇ／ｍＬ（ＭＭＣ　ｏ培养４８ｈ后，台盼蓝拒染法计算活细胞数，　

每组实验重复３次，计算细胞抑制率＝［（对照组活细胞数一实验组活细胞数）／ｘ￣照组活细胞数］Ｘ　１００％。绘　

制细胞增殖抑制曲线，测定药物半数抑制浓度（ＩＣ如），计算合用指数（ｃＩ　ｏ　ＣＩ＝（联合用药时羟基喜树碱　

的Ｉｃ　单独用药时羟基喜树碱的Ｉｃ　。）＋（联合用药时丝裂霉素的Ｉｃ　。／单独用药时丝裂霉素的Ｉｃ∞ｏ　ＣＩ＝Ｉ　

表明相加作用，ＣＩ＜ｌ表明协同作用，ＣＩ＞Ｉ表明拮抗作用。　

１．３．３羟基喜树碱与丝裂霉素对Ｋ５６２细胞形态的观察　

收集对照组和羟基喜树碱组、丝裂霉素组、联合用药组处理的４８　ｈ的Ｋ５６２细胞，普通生物显微镜下　

观察并拍照，吖啶橙染色后荧光显微镜下观察细胞形态，常规制作电镜标本，透射电镜观察、拍照。　

１．３．４　ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳技术检测细胞凋亡　

收集对照组和羟基喜树碱组、丝裂霉素组、联合用药组处理４８　ｈ的Ｋ５６２细胞，提取ＤＮＡ，１．５％琼脂　

糖凝胶电泳ｌ　ｈ，紫外灯下观察拍照。　

１．３．５　流式细胞仪分析Ｋ５６２细胞周期及凋亡情况　

分别收集培养４８　ｈ的所有Ｋ５６２细胞，常规流式细胞仪检测前处理，碘化丙啶染色，上流式细胞仪检　

测（汞激发波长为４８８ｎｍ）。　

１．３．６　实验数据的统计学处理　

采用ＳＰＳＳ　１６．０软件进行统计分析。数据用均数　±标准差ｓ（ｘ　４－　）表示，进行方差分析。　

２结果　

２．１　台盼蓝拒染法检测药物联合应用的效果　

单独应用羟基喜树碱和丝裂霉素时Ｉｃ　。分　

别为８　ｍＬ和１２．５．ｇ／ｍＬ，如表ｌ和图１所　

表１曲线拟合结果　

示。　

２种药联合作用时Ｋ５６２细胞的Ｉｃ　。为４　

．ｇ／ｍＥ（ＨＣＰＴ）＋３．６　ｇ，ｍＬ（ＭＭＣ），女口图２所　

示。根据公式计算ＣＩ＝０．７８＜１，表明２种药联　

合起协同作用。　

８０　

．　

５　１０　ｌ５　２０　２５　３０　２５　５　７　１ｏ　１２５　１５　

０　

丝裂霉素药物浓度，　ｇ・ｍＬ　羟基喜树碱药物浓度，　ｍＬ　

羟基喜树碱＋丝裂霉素药物浓度／Ｐｇ・ｍＬ　

图１丝裂霉素、羟基喜树碱作用４８ｈ的细胞增殖抑制曲线　

图２丝裂霉素、羟基喜树碱联合作用４８ｈ的细胞增殖抑制曲线　

２－２细胞形态学观察　

２．２．１　羟基喜树碱、丝裂霉素单用及联合应用时Ｋ５６２细胞形态的影响　

未加药处理的Ｋ５６２细胞呈圆形，大小均一，核大而明显，细胞壁光滑，折光性好如图３中的Ａ。凋　

亡的细胞体积变小，细胞膜出芽，出现凋亡小体如图３中的Ａ、Ｂ、ｃ，坏死细胞细胞膜破裂，内容物释放　

到培养基中。　

・

４２・　齐齐哈尔大学学报　２０１２正　

在病人耐受的前提下，应适量提高浓度，以增加化疗效果。这些结论为肿瘤化疗药物应用提供理论依据，　

为临床上羟基喜树碱与丝裂霉素联合用于白血病Ｋ５６２细胞的化疗并提高化疗疗效提供一种可能。但由于　

各种肿瘤细胞的特ｌ生不尽相同，羟基喜树碱与丝裂霉素联用对其它肿瘤细胞是否会产生本实验的效果，亦　

有待进一步探讨。　

参考文献　

【１］陈菲，王瑜梅．羟基喜树碱对人乳腺癌ＭＣＦ一７细胞增殖及凋亡的影ｎｌｉ［ｊ］．中国医药导报，２０１１，８（１Ｏ）：１７～１９．　

［２杨娟，周玲玲，袁冬平，等．联用莪术油和丝裂霉素对肝肿瘤细胞株ＳＭＭＣ一７７２１的作用研究［２］Ｊ］．安徽医药，２００９，１３（１　１）：　

１３２７－１３２８．　

［３】Ｓｉｎｇｈ　Ｇ，Ｓｉｎｈａ　Ｎ．Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ｍｅｄｉａｔｉｎｇ　ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ　Ｃ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｔｅｒａｔｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ａｎｄ　

ｍｅｔｈｏｄｓ，２０１０，２０（４）：１９０—１９６．　

［４】Ｋａｕｆｍａｎｎ　Ｓ　Ｈ．Ｅａｒｎｓｈａｗ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｂｙ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．Ｅｘｐ　Ｃｅｌｌ　Ｒｅｓ，２０００，２５６：４２－４９．　

［５】范景景．抗肿瘤药物联合用药作用进展［Ｊ］．城市建设，２００９（３５）：１６４—１６５．　

Ｔｈｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｌｅｕｋｅｍｉｃ　Ｋ５６２　ｃｅｌｌｓ　ａｃｔｅｄ　ｂｙ　ＨＣＰＴ　ａｎｄ　ＭＭＣ　

ＣＨＥＮ　Ｌｉｎ，ＳＨＡＯ　Ｓｈｕ－ｌｉ，　ＷＵ　Ｇｕａｎｇ＇ｈｕｉ，ＺＨＡＮＧ　Ｗｅｉ－ｗｅｉ　

（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆＬｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　ａｎｄ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｑｉｑｉｈａｒ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｉｌｏｎｇｉｉａｎｇ　Ｑｉｑｉｈａｒ　１６１００６，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔ０　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｈｙｄｒｏｘｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎｅ（ＨＣＰＴ）ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ　ｏｎ　ｈｕｍａｎ　ｌｅｕｋｅｍｉｃ　Ｋ５６２　

ｃｅｌｌｓ．ａｎｄ　ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｔｈａｔ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ａｆｔｅｒ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＭＭＣ、ＨＣ　ａｎｄ　ｂｏｔｈ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｆｏｒ　

ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｔｒｙｐａｎ　ｂｌｕｅ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　Ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｃｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ａｎｄ　ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ　ＣＩ，　

ｌｆｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ（ＦＣＭ）ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｒａｔｅ　ｏｆ　Ｋ５６２　ｃｅｌｌｓ，ｍｏｑ）ｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｔ‘ｔｈｅ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　

Ｋ５６２　ｃｅ１ｌｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ＡＯ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｕｎｄｅｒ　ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ　ａｎｄ　ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ　ｅｌｅｃｔｒｏｎ　

ｍｉｃｒｏｓｅｏｐｅ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕ］ｔｓ　ｓｈｏｗ。ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｄｒｕｇｓ，ＣＩ　ｉＳ　０．７８　ｏｒｆ　ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ．ＭＭＣ、ＨＣＰＴ　

ａｎｄ　ｂｏｔｈ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ａｌｌ　ｃａｎ　ｉｎｄｕｃｅ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　Ｋ５６２　ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｒａｔｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｄｒｕｇｓ　ｗａｓ　

ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｆｏｒ　ａｌｏｎｅ．Ｔｈｅ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＨＣＰＴ　ａｎｄ　ＭＭＣ　ｃａｎ　ｉｎｄｕｃｅ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．ａｎｄ　ｈａｄ　ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ　ｉＭｆｉｂｉｔｏｎ　

ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｌｅｕｋｅｍｉｃ　Ｋ５６２　ｃｅｌｌｓ．　

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｈｙｄｒｏｘｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎｅ；ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ；Ｋ５６２　ｃｅｉｌｓ