2024年9月17日发(作者：蒯香旋)
中国药物与『临床２０１０年２月第１Ｏ卷第２期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｒｅｍｅｄｉｅｓ＆Ｃｌｉｎｉｃｓ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０１０，Ｖｏ１．１０，Ｎｏ．２
・
１７ｌ ・
长（９６ ｈ），ＨＧＦ促进细胞增殖，但高糖诱导细胞死亡作用明显
ｔｏｒ／Ｍｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ａｎｄ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｔｉｅ ｓｔｒｏｍａｌ
加强：ＨＧＦ组细胞增殖及ｃ—ｍｅｔ ｍＲＮＡ的表达明显高于高糖
ｃｅｌｌ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｖｉａ ａｕｔｏｃｒｉｎｅ ａｎｄ ｐａｒａｃｒｉｎｅ ｐａｔｈｗａｙｓ． Ｃｌｉｎ Ｅｎ－
组，但低于低糖组。我们研究发现高糖环境下ＨＧＦ仍明显促
ｄｏｃｆｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ，２００４，８９（２）：８２３—８３２．
进细胞增殖及上调ｃ—ｍｅｔ ｍＲＮＡ的表达，内皮细胞的增殖可
４ Ｔｓｃｈｏｅｐｅ Ｄ，Ｒｏｅｓｅｎ Ｐ，Ｓｃｈｗｉｐｐｅｒｔ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｅｓ：
加速损伤血管内皮的修复且抑制平滑细胞的迁移，因而临床
ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｈｅｍｏｓｔａｔｉｃ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ． Ｓｅｍｉｎ
可应用ＨＧＦ抑制或延缓动脉粥样硬化及促进新生血管形成。
Ｔｈｒｏｍｂ Ｈｅｍｏｓｔ，１９９３，１９（２）：１２２—１２８．
另外Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ等［９３对患有严重的肢体缺血性疾病患者给予
５ Ｎａｋａｇａｍｉ Ｈ，Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ Ｒ，Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｏｓｈ
ＨＧＦ质粒ＤＮＡ治疗，认为肌肉注射ＨＧＦ质粒ＤＮＡ治疗是
ｆａｃｔｏｒ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｔｈｒｏｕｇｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｘ
ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｃｙｔｏｓｏｌ ｔｏ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，
安全、有效并且能够获的成功的治疗方法。但我们同时观察
２００２，５１（８）：２６０４－２６１１．
到，作用９６ ｈ，ＨＧＦ组细胞增殖及ｃ—ｍｅｔ ｍＲＮＡ的表达明显
６ Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ Ｒ，Ｎａｋａｍｕｒａ Ｓ，Ｎａｋａｍｕｒａ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ ｒｏｌｅ ｏｆ ａｎ
低于低糖组，因而在临床应用ＨＧＦ时，应首先将血糖控制在
ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ—ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ｏｎ
正常范围内。
ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｄａｍａｇｅ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，１９９７，４６（１）：
糖尿病患者应用外源性ＨＧＦ。通过上调ｃ～ｍｅｔ ｍＲＮＡ的
ｌ３８—１４２．
表达并与之结合而促进血管内皮细胞增殖、迁移和新生血管
７ Ｎａｋａｇａｍｉ Ｈ，Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ Ｒ，Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｍｉｔｏｇｅｎｉｃ ａｎｄ ａｎｔｉ－
形成，抑制其凋亡，在内皮细胞的凋亡与增殖之间的平衡中
ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｅｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｔｈｒｏｕｇｈ ＥＲＫ，
发挥重要作用，维持血管内皮细胞功能；抑制动脉粥样硬化，
ＳＴＡＴ３，ａｎｄ ａｋｔ ｉｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，２００１，３７（２）：
减少糖尿病患者心脑血管的并发症。并且ＨＧＦ促进胰岛Ｂ
５８１－５８６．
细胞分裂、增殖，改善其功能：而且可能是胰岛Ｂ细胞正常生
８ Ｒａｈｍａｎ Ｓ，Ｐａｔｅｌ Ｙ，Ｍｕｒｒａｙ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｎｏｖｅｌ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃ－
理功能的调控因子 ］。另外近几年应用ＨＧＦ转基因治疗证明
ｔｏｒ（ＨＧＦ）ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎｓ ｏｎ ｆｉｂｒｏｎｅｅｔｉｎ ａｎｄ ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ ｃｏｏｒ—
是安全、有效的并且获得了成功。随着对ＨＧＦ的进一步研究
ｄｉｎａｔｅ ａ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ａｎｄ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｍｅｔ—ｉｎｔｅｇｒｉｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ
和基因工程技术的进一步发展，ＨＧＦ在糖尿病及其心血管并
ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．ＢＭＣ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，２００５，６（１）：８．
９ Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ Ｒ，Ａｏｋｉ Ｍ，Ｈａｓｈｉｙａ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｓａｆｅｔｙ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｌｉｎｉ－
发症的治疗中有着良好的临床应用前景。
ｃａ１ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｕｓｉｎｇ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｔｏ ｔｒｅａｔ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ
参考文献
ａｒｔｅｒｉａｌ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００４，４４（２）：２０３—２０９．
１ Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ Ｒ，Ａｏｋｉ Ｍ，Ｈａｓｈｉｙａ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ
１０ Ｒｅｄｄｙ Ｖ，Ｈｕｈ ＣＧ，Ｔｈｏｒｇｅｉｒｓｓｏｎ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｔａｃｔ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｖｉａ ｔｈｅ
ｕｓｉｎｇ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ（ＨＧＦ）．Ｊ Ｃｕｒｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ，２００４，４
ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ（ＨＧＦ）ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｃ－Ｍｅｔ，ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ
（２）：１９９—２０６．
ｎｏｒｍａｌ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ａｎｄ ｂｅｔａ ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ： ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ
２ Ｖｅｒｏｎｉｑｕｅ Ｎ，Ｓａａｄｌａ Ｆ，Ｊｏｓｅｅ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｉｃ ｍｙｏｆｉｂｒｏｂ－
ｋｎｏｃｋ ｏｕｔ ｏｆ ｃ—Ｍｅｔ ｉｎ ｔｈｅ ｂｅｔａ ｃｅｌ１．Ｊ Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２００３，５２（Ｓｕｐｐｌ
ｌａｓｔｓ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ：ｅｃｉ－
１）：３８４．
ｄｅｎｃｅ ｆｍ’ａ ｒｏｌｅ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９７，２６
（收稿日期：２００９—０９—１４）
（６）：１４５８—１４６６．
３ Ｙｏｓｈｉｄａ Ｓ，Ｈａｒａｄａ Ｔ，Ｍｉｔｓｕｎａｒｉ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃ一
瑞芬太尼预处理对大鼠脑缺血再灌注后
神经细胞凋亡及Ｂｃｌ一２ Ｂａｘ表达的影响
贾丽玲曹定睿张维智李岩
动物实验研究表明，瑞芬太尼预处理可模拟缺血预处理效
及Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ表达的影响，探讨其对脑Ｉ／Ｒ损伤的保护机制。
果，诱导脑缺血耐受的产生。但瑞芬太尼能否通过影响脑Ｉ／Ｒ
１材料与方法
后神经细胞凋亡途径而起到脑保护作用，尚不清楚。作者利
１．１实验材料：动物：健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠（山西医科大学实
用不完全脑缺血再灌注损伤模型。采用免疫组织化学方法及
验动物中心提供）５４只，鼠龄３￣４个月，体质量２００～２５０ ｇ。药
末端脱氧核苷酸转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记法
物：瑞芬太尼，批号０８０７０３，湖北宜昌人福药业有限责任公司
（ＴＵＮＥＬ）法，观察瑞芬太尼预处理对脑Ｉ／Ｒ大鼠神经细胞凋亡
生产。试剂：ｔｕｎｅｌ试剂盒，Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ兔抗鼠多克隆抗体，通用
作者单位：０３０００１太原，山西医科大学第一医院麻醉科
型二步法免疫组织化学检测试剂盒（ＰＶ６００１），二氨基联苯胺
通信作者：曹定睿，Ｅｍａｉｌ：ｃｄｒ１２８＠１２６．ｃｏｒｎ
（ＤＡＢ）显色试剂盒，均为北京中杉金桥生物技术有限公司产
・
１７２・ 中国药物与临床２０１０年２月第１０卷第２期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｒｅｍｅｄｉｅｓ＆Ｃｌｉｎｉｃｓ
Ｆｅｂｒｕａｎｒ ２０１０，Ｖｏ１．ＩＯ，Ｎｏ．２
．
品。
免疫组织化学染色和细胞凋亡检测。ＨＥ染色切片在高倍（×
１．２动物分组及给药方法：Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠５４只，随机分为
假手术（Ｓｈａｍ）组、缺血再灌注（ＩＲ）组、瑞芬太尼预处理（Ｒｅｍ）
组，每组ｌ８只。各组根据不同时间点又分为缺血３０ ｍｉｎ再灌
４００）光镜下观察。免疫组织化学石蜡切片常规脱蜡，水化，滴
加Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ一抗后，按试剂盒说明书常规ＳＡＢＣ法对切片
标本进行染色，ＤＡＢ显色，蒸馏水洗、脱水、透明、封片。光镜
注６、１２、２４ ｈ组，每组各６只大鼠。动物模型制备前，Ｒｅｍ组输
入瑞芬太尼（３次５ ｍｉｎ输注期，输注速率１．２ ｇ・ｍｉｎ一・ｋｇ～，容
积１ ｍｌ／５ ｒａｉｎ，预处理过程共３０ ｍｉｎ）。ＩＲ组动物接受生理盐
水输注，容积、速率及方案与Ｒｅｍ组相同，Ｓｈａｍ组除不结扎
下观察，细胞质呈均匀黄染或棕黄色颗粒样为染色阳性．阴性
对照用ＰＢＳ代替一抗，余步同上，将己染好的切片在４００倍
视野下于海马ＣＡ１区随机选择不重叠的５个视野，利用
ＭＩＡＳ－－２０００图像分析系统（四川川大智胜软件股份有限公
颈总动脉外．其余同ＩＲ组。
司）分析阳性区域平均光密度（Ａ）值，取其平均值，其中Ａ值
１．３动物模型制备及实验方法：所有大鼠术前禁食，自由饮 高表明阳性产物表达多。ＴＵＮＥＬ法检测细胞凋亡具体操作按
水，以３％戊巴比妥钠３０ ｍｇ／ｋｇ腹腔注射施行麻醉。大鼠被麻
试剂盒说明书进行，细胞核呈棕黄色为阳性细胞，每例标本的
醉后，固定于鼠台上，解剖游离股静脉，股静脉置管并给予肝
切片于海马ＣＡ１区随机选取５个４００倍视野，计算出平均每
素抗凝，接微量泵以备输入瑞芬太尼或生理盐水，３０ ａｒｉｎ预
１００个细胞中的凋亡细胞数，并以百分数表示作为凋亡指数
处理后，Ｒｅｉｎ组、ＩＲ组大鼠均用两动脉阻断法建立大鼠不完 （ＡＩ），取其平均值。
全脑缺血再灌注模型。即动物麻醉后取颈正中切口．暴露两
１．５统计学处理：应用ＳＰＳＳ１ ３．０统计软件进行统计分析．计
侧颈总动脉，停止麻醉药至动物清醒，血管夹立即夹闭双侧 量资料以ｘ＋ｓ表示，组间比较采用单因素方差分析．以Ｐ＜Ｏ．０５
颈总动脉，３０ ａｒｉｎ后撤夹恢复血流，缝合皮肤，正常饲养。模
为差异有统计学意义。
型成功的标准是：阻断双侧颈总动脉血流后．动物立即出现
２结 果
心跳加快，呼吸幅度加深，肢体痉挛，在１０ ｓ至１ ｍｉｎ内昏
２．１ ＨＥ染色观察：海马ＣＡ１区神经元形态学和数目观察：
迷，血流复通后，动物分别在５～１０ ｍｉｎ苏醒，不合上述标准者
Ｓｈａｍ组：细胞形态正常；ＩＲ组：脑组织稀疏，细胞结构消失，
剔除。
细胞坏死崩解，细胞核周缩明显，核深染；Ｒｅｍ组损伤程度较
１－４标本制备及指标检测：实验动物在Ｉ／Ｒ后各时间点经 轻。
１０％水合氯醛（６００ ｍｇ／ｋｇ）深度麻醉，迅速打开胸腔，暴露心
２．２ Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ蛋自在海马ＣＡＩ区表达的Ａ值：与Ｓｈａｍ组
脏，剪开右心房，于心尖部剪开左心室，插管至主动脉，快速 比较．ＩＲ组和Ｒｅｍ组Ｂｃｌ～２和Ｂａｘ表达升高．ＩＲ组Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ
注入生理盐水冲洗后，再以４％多聚甲醛灌注固定；断头取
比值降低，Ｒｅｍ组Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ比值升高（Ｐ＜Ｏ．０５）；与ＩＲ组比
脑，由视交叉平面冠状切取约４ ＩＸｌｒｔｌ组织块，以４％多聚甲醛
较，Ｒｅｍ组Ｂｃｌ一２表达，Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ比值均升高，Ｂａｘ表达降低
固定４８ ｈ。常规脱水、透明、石蜡包埋，作连续冠状切片（厚４～
（Ｐ＜０．０５），见表１。
６ ｍ），相邻切片分别作苏木素一伊红（ＨＥ）染色，Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ
表ｌ ３组大鼠脑Ｉ／Ｒ不同时点海马ＣＡＩ区Ｂｃｌ一２ Ｂａｘ表达水平及Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ比值的比较（；虹）
组别只数 Ｂｃｌ一２ Ｂａｘ Ｂｅｌ一２／Ｂａｘ比值
６ ｈ １２ ｈ ２４ ｈ ６ ｈ ｌ２ ｈ ２４ ｈ ６ ｈ ｌ２ ｈ ２４ ｈ
注：与ｓｈａｍ组比较， Ｏ．０５；与ＩＲ组比较，ｂＰ＜０．０５
２．３海马ＣＡＩ区神经细胞ＡＩ：与Ｓｈａｍ组比较，ＩＲ组和Ｒｅｉｎ 脑Ｉ／Ｒ后神经元损伤机制是多种因素相互交叉、相互关
组神经细胞ＡＩ升高（Ｐ＜０．０５）；与ＩＲ组比较，Ｒｅｉｎ组神经细胞
联的级联反应过程。近年大量研究表明，细胞凋亡与脑Ｉ／Ｒ损
ＡＩ降低（Ｐ＜０．０５），与６、１２ ｈ时点比较，ＩＲ组和Ｒｅｍ组再灌注 伤有密切关系…。
２４ ｈ时神经细胞ＡＩ最高（ ０．０５），见表２。
自１ ９９０年Ｋｉｔａｇａｗａ等发现缺血预处理可诱导脑缺血耐
表２ ３组大鼠脑Ｉ／Ｒ不同时点
受而保护脑缺血损伤以来。药物预处理逐渐成为脑保护研究
海马ＣＡＩ区神经细胞ＡＩ的比较（％）（ｘ＋ｓ）
的热点。
瑞芬太尼是哌啶衍生物，已被广泛应用于临床麻醉。既
往有关阿片类药物对Ｉ／Ｒ损伤的研究结果表明： ，Ｋ，８受体
均参与减轻Ｉ／Ｒ损伤的保护机制＿２＿。而阿片剂的各型受体如
Ｋ，８和 受体广泛分布于整个中枢神经系统。有研究表明瑞
注：与ｓｈａｍ组比较 Ｏ．０５；与ＩＲ组比较 ：０．０５；卜ｊ ６ ｈ时比较
芬太尼预处理对脑Ｉ／Ｒ损伤有保护作用，以０．６ ｐＬｇ・ｍｉｎ ・ｋｇ
Ｐ＜Ｏ．０５：与１２ ｈ时比较 （Ｏ．０５
速率输注瑞芬太尼预处理可明显缩小大鼠脑梗死容积，改善
３讨 论
大鼠神经行为学症状，减轻脑Ｉ／Ｒ损伤。文献［３］在瑞芬太尼
中国药物与临床２０１０年２月第１０卷第２期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｒｅｍｅｄｉｅｓ＆Ｃｌｉｎｉｃｓ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ Ｑ Ｑ， ！． Ｑ！
・
１７３ ・
预处理对大鼠心肌保护作用的研究显示６ Ｉｘｇ・ｍｉｎ ・ｋｇ 输注
上调Ｂｃｌ一２表达及抑制Ｂａｘ表达有关。瑞芬太尼是阿片受体
速率下心肌保护作用达到高峰。我们在实验中保留大鼠自主
激动剂，阿片类药物在激活阿片受体后，通过与其相联的Ｇ
呼吸．结合预实验．为避免导致大鼠呼吸和循环严重抑制，乃
蛋白影响细胞内的信号转导，最终减轻了细胞内钙超载，从
至死亡，作者最终选取１．２ ｇ・ｍｉｎ ・ｋｇ 作为瑞芬太尼输注 而上调Ｂｃｌ一２表达及抑制Ｂａｘ的表达，最终减轻了细胞凋亡
速率。
的发生。瑞芬太尼对抗神经细胞凋亡从而发挥脑保护的作
Ｂｃｌ一２家族蛋白在神经元凋亡的调控过程中具有重要作
用．可能与提高Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ的比值有关。
用．其抗凋亡蛋白成员和促凋亡蛋白成员之间的协同作用共
参考文献
同决定细胞是否进入凋亡程序 。本研究结果表明，与Ｓｈａｍ
１ Ｓｈｉｇｅｎｏ Ｔ，Ｙａｎｍｓｋｉ Ｙ，Ｋａｔｏ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｌａｙｅｄ ｎｅｕ－
组比较，ＩＲ组脑组织Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ表达及神经细胞ＡＩ均升高，
ｒｏｎａｌ ｄｅａｔｈ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ，１９９０，
Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ比值降低，提示脑Ｉ／Ｒ损伤可诱发神经细胞凋亡，
１２０（１）：１１７．
与Ｂａｘ表达上调，Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ比值降低有关。凋亡一经启动，各
２ Ｚｈａｎｇ Ｙ，Ｉｒｗｉｎ ＭＧ，Ｗｏｎｇ ＴＭ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｍｉｆｅｎｔａｎｉｌ ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎ－
相关基因（包括抗凋亡基因和凋亡基因）转录均增加，其可能
ｉｎｇ ｃｏｎｆｅｒｓ ｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｖｉａ ｃａｒｄｉａｃ ｋａｐｐａ—ａｎｄ ｄｅｈａ－ｏｐｉｏｉｄ
机制为Ｉ／Ｒ可加重脑组织原有的缺血性损伤，引起能量衰竭
ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ，２００５，１０２：３７１－３７８．
和酸中毒，产生大量自由基、兴奋性氨基酸．ＮＯ聚集，并引起
３ 张野，陈志武．瑞芬太尼预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的
影响．中华麻醉学杂志，２００５，２５（５）：４４９—４５２．
离子自稳机制破坏导致细胞内钙超载，最终引起某些原癌基
４ Ｈｕ ＸＬ，Ｏｌｓｓｏｎ Ｔ，Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ ＴＭ，ｅｔ ａ１．Ｄｙｎａｍｉｃ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｔｈｅ
因的表达．诱导凋亡发生。
ａｎｔｉ—ａｎｄ ｐｒｏ－ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ｂｃｌ—ｗ，Ｂｃｌ－２，ａｎｄ Ｂａｘ ｗｉｔｈ
本研究结果表明，与ＩＲ组比较，Ｒｅｉｎ组神经细胞ＡＩ降
Ｓｍａｃ／Ｄｉａｂｌｏ ｍｉｔｏｅｈｏｎｄｒｉａｌ ｒｅｌｅａｓｅ ａｆｔｅｒ ｐｈｏｔｏｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ ｒｉｎｇ
低，神经细胞Ｂｃｌ一２表达上调，Ｂａｘ表达下调，Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ比值
ｓｔｒｏｋｅ ｒａｔｓ．Ｅｕｒ Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２００４，２０（５）：１１７７—１１８８．
升高，提示瑞芬太尼可抑制脑Ｉ／Ｒ时神经细胞凋亡．其机制与
（收稿日期：２００９—０９—０９）
胆红素对被动吸烟大鼠
支气管上皮细胞表达ＩＣＡＭ一１的影响
李胜文赵卉魏东光方东升吴红霞宋满景
支气管上皮细胞通过表达细胞间黏附分子介导中性粒
性甲醛溶液中浸泡固定２４ ｈ，于右肺下叶垂直于支气管走行
细胞向炎症气道聚集参与熳性气道炎症。胆红素是一种有效 取材，常规石蜡包埋，５ Ｉｘｍ连续切片，用于苏木素一伊红染色
的抗氧化剂。研究证实，胆红素对急性肺损伤的肺组织有较 及免疫组织化学检测。
好的保护作用，本研究旨在观察胆红素对被动吸烟大鼠支气 １．３荧光免疫组织化学法检测支气管上皮细胞ＩＣＡＭ一１表
管上皮细胞表达ＩＣＡＭ一１的影响
达：用链霉素一亲和素一生物素复合物（ＳＡＢＣ）一异硫氰酸荧光
１材料和方法
素（ＦＩＴＣ）免疫荧光染色法，一抗为兔抗鼠多克隆抗体。微波
１．１实验分组与模型制备：健康Ｗｉｓｔａｒ大鼠２４只，雌雄不
抗原修复，磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）代替一抗作为阴性对照。荧光
限，体质量１５０～２００ ｇ，按随机数字表随机分为对照组、模型 显微镜下，１０个低倍视野，半定量分级计分观察，荧光阴性为
组、胆红素干预组，每组８只。参照文献ｆ１ １描述的方法制作 ０级计０分，可见明确荧光为１级计２分。明亮荧光为２级计
大鼠实验性被动吸烟装置，模型组、胆红素干预组大鼠每日 ４分，耀眼荧光为３级计６分。
被动吸烟１０支，每周被动吸烟６ ｄ，连续６个月 胆红素干预 １．４支气管肺泡灌洗及白细胞介素（ＩＬ）一８检测：３组动物于
组大鼠每周用胆红素２０ ｍｇ／ｋｇ灌胃，连续６ ｄ；对照组大鼠于 第６个月末以２％的戊巴比妥钠５０ ｍｇ／ｋｇ腹腔麻醉．腹主动
每周用等量生理盐水灌胃。３组动物自由饮食饮水，于６个月
脉放血处死，在环状软骨下方剪开气管，插管，经气管插管缓
末处死动物，取材检测。
慢注入５ｍｌ无菌生理盐水，再回抽液体，进行支气管肺泡灌
１．２组织学标本的制作：大鼠右肺经右主支气管插管 经插
洗，共２次。将回收的支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）（回收率７０％
管缓慢注入５￣６ ｍ１中性甲醛内固定．３０ ｍｉｎ后置入１Ｏ％中
～
８Ｏ％）以１５００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ａｒｉｎ，取上清保存于一７Ｏ℃．用于
作者单位：０３００１２太原，山西省人民医院呼吸科（李胜文、魏东
ＩＬ一８检测。
光、方东升、吴红霞）；山西医科大学第二医院呼吸科（赵卉、宋满景）
１．５统计学处理：采用ＳＰＳＳ １０．０软件，多组均数问比较用方
通信作者：赵卉
差分析，两两比较用ｑ检验。Ｐ＜Ｏ．０５为差异有统计学意义。
2024年9月17日发(作者：蒯香旋)
中国药物与『临床２０１０年２月第１Ｏ卷第２期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｒｅｍｅｄｉｅｓ＆Ｃｌｉｎｉｃｓ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０１０，Ｖｏ１．１０，Ｎｏ．２
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１７ｌ ・
长（９６ ｈ），ＨＧＦ促进细胞增殖，但高糖诱导细胞死亡作用明显
ｔｏｒ／Ｍｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ａｎｄ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｔｉｅ ｓｔｒｏｍａｌ
加强：ＨＧＦ组细胞增殖及ｃ—ｍｅｔ ｍＲＮＡ的表达明显高于高糖
ｃｅｌｌ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｖｉａ ａｕｔｏｃｒｉｎｅ ａｎｄ ｐａｒａｃｒｉｎｅ ｐａｔｈｗａｙｓ． Ｃｌｉｎ Ｅｎ－
组，但低于低糖组。我们研究发现高糖环境下ＨＧＦ仍明显促
ｄｏｃｆｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ，２００４，８９（２）：８２３—８３２．
进细胞增殖及上调ｃ—ｍｅｔ ｍＲＮＡ的表达，内皮细胞的增殖可
４ Ｔｓｃｈｏｅｐｅ Ｄ，Ｒｏｅｓｅｎ Ｐ，Ｓｃｈｗｉｐｐｅｒｔ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｅｓ：
加速损伤血管内皮的修复且抑制平滑细胞的迁移，因而临床
ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｈｅｍｏｓｔａｔｉｃ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ． Ｓｅｍｉｎ
可应用ＨＧＦ抑制或延缓动脉粥样硬化及促进新生血管形成。
Ｔｈｒｏｍｂ Ｈｅｍｏｓｔ，１９９３，１９（２）：１２２—１２８．
另外Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ等［９３对患有严重的肢体缺血性疾病患者给予
５ Ｎａｋａｇａｍｉ Ｈ，Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ Ｒ，Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｏｓｈ
ＨＧＦ质粒ＤＮＡ治疗，认为肌肉注射ＨＧＦ质粒ＤＮＡ治疗是
ｆａｃｔｏｒ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｔｈｒｏｕｇｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｘ
ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｃｙｔｏｓｏｌ ｔｏ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，
安全、有效并且能够获的成功的治疗方法。但我们同时观察
２００２，５１（８）：２６０４－２６１１．
到，作用９６ ｈ，ＨＧＦ组细胞增殖及ｃ—ｍｅｔ ｍＲＮＡ的表达明显
６ Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ Ｒ，Ｎａｋａｍｕｒａ Ｓ，Ｎａｋａｍｕｒａ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ ｒｏｌｅ ｏｆ ａｎ
低于低糖组，因而在临床应用ＨＧＦ时，应首先将血糖控制在
ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ—ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ｏｎ
正常范围内。
ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｄａｍａｇｅ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，１９９７，４６（１）：
糖尿病患者应用外源性ＨＧＦ。通过上调ｃ～ｍｅｔ ｍＲＮＡ的
ｌ３８—１４２．
表达并与之结合而促进血管内皮细胞增殖、迁移和新生血管
７ Ｎａｋａｇａｍｉ Ｈ，Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ Ｒ，Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｍｉｔｏｇｅｎｉｃ ａｎｄ ａｎｔｉ－
形成，抑制其凋亡，在内皮细胞的凋亡与增殖之间的平衡中
ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｅｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｔｈｒｏｕｇｈ ＥＲＫ，
发挥重要作用，维持血管内皮细胞功能；抑制动脉粥样硬化，
ＳＴＡＴ３，ａｎｄ ａｋｔ ｉｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，２００１，３７（２）：
减少糖尿病患者心脑血管的并发症。并且ＨＧＦ促进胰岛Ｂ
５８１－５８６．
细胞分裂、增殖，改善其功能：而且可能是胰岛Ｂ细胞正常生
８ Ｒａｈｍａｎ Ｓ，Ｐａｔｅｌ Ｙ，Ｍｕｒｒａｙ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｎｏｖｅｌ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃ－
理功能的调控因子 ］。另外近几年应用ＨＧＦ转基因治疗证明
ｔｏｒ（ＨＧＦ）ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎｓ ｏｎ ｆｉｂｒｏｎｅｅｔｉｎ ａｎｄ ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ ｃｏｏｒ—
是安全、有效的并且获得了成功。随着对ＨＧＦ的进一步研究
ｄｉｎａｔｅ ａ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ａｎｄ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｍｅｔ—ｉｎｔｅｇｒｉｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ
和基因工程技术的进一步发展，ＨＧＦ在糖尿病及其心血管并
ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．ＢＭＣ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，２００５，６（１）：８．
９ Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ Ｒ，Ａｏｋｉ Ｍ，Ｈａｓｈｉｙａ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｓａｆｅｔｙ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｌｉｎｉ－
发症的治疗中有着良好的临床应用前景。
ｃａ１ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｕｓｉｎｇ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｔｏ ｔｒｅａｔ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ
参考文献
ａｒｔｅｒｉａｌ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００４，４４（２）：２０３—２０９．
１ Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ Ｒ，Ａｏｋｉ Ｍ，Ｈａｓｈｉｙａ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ
１０ Ｒｅｄｄｙ Ｖ，Ｈｕｈ ＣＧ，Ｔｈｏｒｇｅｉｒｓｓｏｎ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｔａｃｔ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｖｉａ ｔｈｅ
ｕｓｉｎｇ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ（ＨＧＦ）．Ｊ Ｃｕｒｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ，２００４，４
ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ（ＨＧＦ）ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｃ－Ｍｅｔ，ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ
（２）：１９９—２０６．
ｎｏｒｍａｌ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ａｎｄ ｂｅｔａ ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ： ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ
２ Ｖｅｒｏｎｉｑｕｅ Ｎ，Ｓａａｄｌａ Ｆ，Ｊｏｓｅｅ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｉｃ ｍｙｏｆｉｂｒｏｂ－
ｋｎｏｃｋ ｏｕｔ ｏｆ ｃ—Ｍｅｔ ｉｎ ｔｈｅ ｂｅｔａ ｃｅｌ１．Ｊ Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２００３，５２（Ｓｕｐｐｌ
ｌａｓｔｓ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌ：ｅｃｉ－
１）：３８４．
ｄｅｎｃｅ ｆｍ’ａ ｒｏｌｅ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９７，２６
（收稿日期：２００９—０９—１４）
（６）：１４５８—１４６６．
３ Ｙｏｓｈｉｄａ Ｓ，Ｈａｒａｄａ Ｔ，Ｍｉｔｓｕｎａｒｉ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃ一
瑞芬太尼预处理对大鼠脑缺血再灌注后
神经细胞凋亡及Ｂｃｌ一２ Ｂａｘ表达的影响
贾丽玲曹定睿张维智李岩
动物实验研究表明，瑞芬太尼预处理可模拟缺血预处理效
及Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ表达的影响，探讨其对脑Ｉ／Ｒ损伤的保护机制。
果，诱导脑缺血耐受的产生。但瑞芬太尼能否通过影响脑Ｉ／Ｒ
１材料与方法
后神经细胞凋亡途径而起到脑保护作用，尚不清楚。作者利
１．１实验材料：动物：健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠（山西医科大学实
用不完全脑缺血再灌注损伤模型。采用免疫组织化学方法及
验动物中心提供）５４只，鼠龄３￣４个月，体质量２００～２５０ ｇ。药
末端脱氧核苷酸转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记法
物：瑞芬太尼，批号０８０７０３，湖北宜昌人福药业有限责任公司
（ＴＵＮＥＬ）法，观察瑞芬太尼预处理对脑Ｉ／Ｒ大鼠神经细胞凋亡
生产。试剂：ｔｕｎｅｌ试剂盒，Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ兔抗鼠多克隆抗体，通用
作者单位：０３０００１太原，山西医科大学第一医院麻醉科
型二步法免疫组织化学检测试剂盒（ＰＶ６００１），二氨基联苯胺
通信作者：曹定睿，Ｅｍａｉｌ：ｃｄｒ１２８＠１２６．ｃｏｒｎ
（ＤＡＢ）显色试剂盒，均为北京中杉金桥生物技术有限公司产
・
１７２・ 中国药物与临床２０１０年２月第１０卷第２期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｒｅｍｅｄｉｅｓ＆Ｃｌｉｎｉｃｓ
Ｆｅｂｒｕａｎｒ ２０１０，Ｖｏ１．ＩＯ，Ｎｏ．２
．
品。
免疫组织化学染色和细胞凋亡检测。ＨＥ染色切片在高倍（×
１．２动物分组及给药方法：Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠５４只，随机分为
假手术（Ｓｈａｍ）组、缺血再灌注（ＩＲ）组、瑞芬太尼预处理（Ｒｅｍ）
组，每组ｌ８只。各组根据不同时间点又分为缺血３０ ｍｉｎ再灌
４００）光镜下观察。免疫组织化学石蜡切片常规脱蜡，水化，滴
加Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ一抗后，按试剂盒说明书常规ＳＡＢＣ法对切片
标本进行染色，ＤＡＢ显色，蒸馏水洗、脱水、透明、封片。光镜
注６、１２、２４ ｈ组，每组各６只大鼠。动物模型制备前，Ｒｅｍ组输
入瑞芬太尼（３次５ ｍｉｎ输注期，输注速率１．２ ｇ・ｍｉｎ一・ｋｇ～，容
积１ ｍｌ／５ ｒａｉｎ，预处理过程共３０ ｍｉｎ）。ＩＲ组动物接受生理盐
水输注，容积、速率及方案与Ｒｅｍ组相同，Ｓｈａｍ组除不结扎
下观察，细胞质呈均匀黄染或棕黄色颗粒样为染色阳性．阴性
对照用ＰＢＳ代替一抗，余步同上，将己染好的切片在４００倍
视野下于海马ＣＡ１区随机选择不重叠的５个视野，利用
ＭＩＡＳ－－２０００图像分析系统（四川川大智胜软件股份有限公
颈总动脉外．其余同ＩＲ组。
司）分析阳性区域平均光密度（Ａ）值，取其平均值，其中Ａ值
１．３动物模型制备及实验方法：所有大鼠术前禁食，自由饮 高表明阳性产物表达多。ＴＵＮＥＬ法检测细胞凋亡具体操作按
水，以３％戊巴比妥钠３０ ｍｇ／ｋｇ腹腔注射施行麻醉。大鼠被麻
试剂盒说明书进行，细胞核呈棕黄色为阳性细胞，每例标本的
醉后，固定于鼠台上，解剖游离股静脉，股静脉置管并给予肝
切片于海马ＣＡ１区随机选取５个４００倍视野，计算出平均每
素抗凝，接微量泵以备输入瑞芬太尼或生理盐水，３０ ａｒｉｎ预
１００个细胞中的凋亡细胞数，并以百分数表示作为凋亡指数
处理后，Ｒｅｉｎ组、ＩＲ组大鼠均用两动脉阻断法建立大鼠不完 （ＡＩ），取其平均值。
全脑缺血再灌注模型。即动物麻醉后取颈正中切口．暴露两
１．５统计学处理：应用ＳＰＳＳ１ ３．０统计软件进行统计分析．计
侧颈总动脉，停止麻醉药至动物清醒，血管夹立即夹闭双侧 量资料以ｘ＋ｓ表示，组间比较采用单因素方差分析．以Ｐ＜Ｏ．０５
颈总动脉，３０ ａｒｉｎ后撤夹恢复血流，缝合皮肤，正常饲养。模
为差异有统计学意义。
型成功的标准是：阻断双侧颈总动脉血流后．动物立即出现
２结 果
心跳加快，呼吸幅度加深，肢体痉挛，在１０ ｓ至１ ｍｉｎ内昏
２．１ ＨＥ染色观察：海马ＣＡ１区神经元形态学和数目观察：
迷，血流复通后，动物分别在５～１０ ｍｉｎ苏醒，不合上述标准者
Ｓｈａｍ组：细胞形态正常；ＩＲ组：脑组织稀疏，细胞结构消失，
剔除。
细胞坏死崩解，细胞核周缩明显，核深染；Ｒｅｍ组损伤程度较
１－４标本制备及指标检测：实验动物在Ｉ／Ｒ后各时间点经 轻。
１０％水合氯醛（６００ ｍｇ／ｋｇ）深度麻醉，迅速打开胸腔，暴露心
２．２ Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ蛋自在海马ＣＡＩ区表达的Ａ值：与Ｓｈａｍ组
脏，剪开右心房，于心尖部剪开左心室，插管至主动脉，快速 比较．ＩＲ组和Ｒｅｍ组Ｂｃｌ～２和Ｂａｘ表达升高．ＩＲ组Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ
注入生理盐水冲洗后，再以４％多聚甲醛灌注固定；断头取
比值降低，Ｒｅｍ组Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ比值升高（Ｐ＜Ｏ．０５）；与ＩＲ组比
脑，由视交叉平面冠状切取约４ ＩＸｌｒｔｌ组织块，以４％多聚甲醛
较，Ｒｅｍ组Ｂｃｌ一２表达，Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ比值均升高，Ｂａｘ表达降低
固定４８ ｈ。常规脱水、透明、石蜡包埋，作连续冠状切片（厚４～
（Ｐ＜０．０５），见表１。
６ ｍ），相邻切片分别作苏木素一伊红（ＨＥ）染色，Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ
表ｌ ３组大鼠脑Ｉ／Ｒ不同时点海马ＣＡＩ区Ｂｃｌ一２ Ｂａｘ表达水平及Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ比值的比较（；虹）
组别只数 Ｂｃｌ一２ Ｂａｘ Ｂｅｌ一２／Ｂａｘ比值
６ ｈ １２ ｈ ２４ ｈ ６ ｈ ｌ２ ｈ ２４ ｈ ６ ｈ ｌ２ ｈ ２４ ｈ
注：与ｓｈａｍ组比较， Ｏ．０５；与ＩＲ组比较，ｂＰ＜０．０５
２．３海马ＣＡＩ区神经细胞ＡＩ：与Ｓｈａｍ组比较，ＩＲ组和Ｒｅｉｎ 脑Ｉ／Ｒ后神经元损伤机制是多种因素相互交叉、相互关
组神经细胞ＡＩ升高（Ｐ＜０．０５）；与ＩＲ组比较，Ｒｅｉｎ组神经细胞
联的级联反应过程。近年大量研究表明，细胞凋亡与脑Ｉ／Ｒ损
ＡＩ降低（Ｐ＜０．０５），与６、１２ ｈ时点比较，ＩＲ组和Ｒｅｍ组再灌注 伤有密切关系…。
２４ ｈ时神经细胞ＡＩ最高（ ０．０５），见表２。
自１ ９９０年Ｋｉｔａｇａｗａ等发现缺血预处理可诱导脑缺血耐
表２ ３组大鼠脑Ｉ／Ｒ不同时点
受而保护脑缺血损伤以来。药物预处理逐渐成为脑保护研究
海马ＣＡＩ区神经细胞ＡＩ的比较（％）（ｘ＋ｓ）
的热点。
瑞芬太尼是哌啶衍生物，已被广泛应用于临床麻醉。既
往有关阿片类药物对Ｉ／Ｒ损伤的研究结果表明： ，Ｋ，８受体
均参与减轻Ｉ／Ｒ损伤的保护机制＿２＿。而阿片剂的各型受体如
Ｋ，８和 受体广泛分布于整个中枢神经系统。有研究表明瑞
注：与ｓｈａｍ组比较 Ｏ．０５；与ＩＲ组比较 ：０．０５；卜ｊ ６ ｈ时比较
芬太尼预处理对脑Ｉ／Ｒ损伤有保护作用，以０．６ ｐＬｇ・ｍｉｎ ・ｋｇ
Ｐ＜Ｏ．０５：与１２ ｈ时比较 （Ｏ．０５
速率输注瑞芬太尼预处理可明显缩小大鼠脑梗死容积，改善
３讨 论
大鼠神经行为学症状，减轻脑Ｉ／Ｒ损伤。文献［３］在瑞芬太尼
中国药物与临床２０１０年２月第１０卷第２期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｒｅｍｅｄｉｅｓ＆Ｃｌｉｎｉｃｓ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ Ｑ Ｑ， ！． Ｑ！
・
１７３ ・
预处理对大鼠心肌保护作用的研究显示６ Ｉｘｇ・ｍｉｎ ・ｋｇ 输注
上调Ｂｃｌ一２表达及抑制Ｂａｘ表达有关。瑞芬太尼是阿片受体
速率下心肌保护作用达到高峰。我们在实验中保留大鼠自主
激动剂，阿片类药物在激活阿片受体后，通过与其相联的Ｇ
呼吸．结合预实验．为避免导致大鼠呼吸和循环严重抑制，乃
蛋白影响细胞内的信号转导，最终减轻了细胞内钙超载，从
至死亡，作者最终选取１．２ ｇ・ｍｉｎ ・ｋｇ 作为瑞芬太尼输注 而上调Ｂｃｌ一２表达及抑制Ｂａｘ的表达，最终减轻了细胞凋亡
速率。
的发生。瑞芬太尼对抗神经细胞凋亡从而发挥脑保护的作
Ｂｃｌ一２家族蛋白在神经元凋亡的调控过程中具有重要作
用．可能与提高Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ的比值有关。
用．其抗凋亡蛋白成员和促凋亡蛋白成员之间的协同作用共
参考文献
同决定细胞是否进入凋亡程序 。本研究结果表明，与Ｓｈａｍ
１ Ｓｈｉｇｅｎｏ Ｔ，Ｙａｎｍｓｋｉ Ｙ，Ｋａｔｏ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｌａｙｅｄ ｎｅｕ－
组比较，ＩＲ组脑组织Ｂｃｌ一２、Ｂａｘ表达及神经细胞ＡＩ均升高，
ｒｏｎａｌ ｄｅａｔｈ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ，１９９０，
Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ比值降低，提示脑Ｉ／Ｒ损伤可诱发神经细胞凋亡，
１２０（１）：１１７．
与Ｂａｘ表达上调，Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ比值降低有关。凋亡一经启动，各
２ Ｚｈａｎｇ Ｙ，Ｉｒｗｉｎ ＭＧ，Ｗｏｎｇ ＴＭ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｍｉｆｅｎｔａｎｉｌ ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎ－
相关基因（包括抗凋亡基因和凋亡基因）转录均增加，其可能
ｉｎｇ ｃｏｎｆｅｒｓ ｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｖｉａ ｃａｒｄｉａｃ ｋａｐｐａ—ａｎｄ ｄｅｈａ－ｏｐｉｏｉｄ
机制为Ｉ／Ｒ可加重脑组织原有的缺血性损伤，引起能量衰竭
ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ，２００５，１０２：３７１－３７８．
和酸中毒，产生大量自由基、兴奋性氨基酸．ＮＯ聚集，并引起
３ 张野，陈志武．瑞芬太尼预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的
影响．中华麻醉学杂志，２００５，２５（５）：４４９—４５２．
离子自稳机制破坏导致细胞内钙超载，最终引起某些原癌基
４ Ｈｕ ＸＬ，Ｏｌｓｓｏｎ Ｔ，Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ ＴＭ，ｅｔ ａ１．Ｄｙｎａｍｉｃ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｔｈｅ
因的表达．诱导凋亡发生。
ａｎｔｉ—ａｎｄ ｐｒｏ－ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ｂｃｌ—ｗ，Ｂｃｌ－２，ａｎｄ Ｂａｘ ｗｉｔｈ
本研究结果表明，与ＩＲ组比较，Ｒｅｉｎ组神经细胞ＡＩ降
Ｓｍａｃ／Ｄｉａｂｌｏ ｍｉｔｏｅｈｏｎｄｒｉａｌ ｒｅｌｅａｓｅ ａｆｔｅｒ ｐｈｏｔｏｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ ｒｉｎｇ
低，神经细胞Ｂｃｌ一２表达上调，Ｂａｘ表达下调，Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ比值
ｓｔｒｏｋｅ ｒａｔｓ．Ｅｕｒ Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２００４，２０（５）：１１７７—１１８８．
升高，提示瑞芬太尼可抑制脑Ｉ／Ｒ时神经细胞凋亡．其机制与
（收稿日期：２００９—０９—０９）
胆红素对被动吸烟大鼠
支气管上皮细胞表达ＩＣＡＭ一１的影响
李胜文赵卉魏东光方东升吴红霞宋满景
支气管上皮细胞通过表达细胞间黏附分子介导中性粒
性甲醛溶液中浸泡固定２４ ｈ，于右肺下叶垂直于支气管走行
细胞向炎症气道聚集参与熳性气道炎症。胆红素是一种有效 取材，常规石蜡包埋，５ Ｉｘｍ连续切片，用于苏木素一伊红染色
的抗氧化剂。研究证实，胆红素对急性肺损伤的肺组织有较 及免疫组织化学检测。
好的保护作用，本研究旨在观察胆红素对被动吸烟大鼠支气 １．３荧光免疫组织化学法检测支气管上皮细胞ＩＣＡＭ一１表
管上皮细胞表达ＩＣＡＭ一１的影响
达：用链霉素一亲和素一生物素复合物（ＳＡＢＣ）一异硫氰酸荧光
１材料和方法
素（ＦＩＴＣ）免疫荧光染色法，一抗为兔抗鼠多克隆抗体。微波
１．１实验分组与模型制备：健康Ｗｉｓｔａｒ大鼠２４只，雌雄不
抗原修复，磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）代替一抗作为阴性对照。荧光
限，体质量１５０～２００ ｇ，按随机数字表随机分为对照组、模型 显微镜下，１０个低倍视野，半定量分级计分观察，荧光阴性为
组、胆红素干预组，每组８只。参照文献ｆ１ １描述的方法制作 ０级计０分，可见明确荧光为１级计２分。明亮荧光为２级计
大鼠实验性被动吸烟装置，模型组、胆红素干预组大鼠每日 ４分，耀眼荧光为３级计６分。
被动吸烟１０支，每周被动吸烟６ ｄ，连续６个月 胆红素干预 １．４支气管肺泡灌洗及白细胞介素（ＩＬ）一８检测：３组动物于
组大鼠每周用胆红素２０ ｍｇ／ｋｇ灌胃，连续６ ｄ；对照组大鼠于 第６个月末以２％的戊巴比妥钠５０ ｍｇ／ｋｇ腹腔麻醉．腹主动
每周用等量生理盐水灌胃。３组动物自由饮食饮水，于６个月
脉放血处死，在环状软骨下方剪开气管，插管，经气管插管缓
末处死动物，取材检测。
慢注入５ｍｌ无菌生理盐水，再回抽液体，进行支气管肺泡灌
１．２组织学标本的制作：大鼠右肺经右主支气管插管 经插
洗，共２次。将回收的支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）（回收率７０％
管缓慢注入５￣６ ｍ１中性甲醛内固定．３０ ｍｉｎ后置入１Ｏ％中
～
８Ｏ％）以１５００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ａｒｉｎ，取上清保存于一７Ｏ℃．用于
作者单位：０３００１２太原，山西省人民医院呼吸科（李胜文、魏东
ＩＬ一８检测。
光、方东升、吴红霞）；山西医科大学第二医院呼吸科（赵卉、宋满景）
１．５统计学处理：采用ＳＰＳＳ １０．０软件，多组均数问比较用方
通信作者：赵卉
差分析，两两比较用ｑ检验。Ｐ＜Ｏ．０５为差异有统计学意义。