大肠杆菌不同SOD调控序列红色荧光蛋白报告基因载体的构建及功能鉴定

2024年5月18日发(作者：用从蕾)

第４２卷第ｉ期　

２０Ｉ２年１月　

温州医学院学报　

ＶＯ１．４２　ＮＯ．１　

Ｊａｎ．２０ｌ２　

Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｗｅｎｚｈｏｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　

潮　

大肠杆菌不同ＳＯＤ调控序列红色荧光蛋白　

报告基因载体的构建及功能鉴定　

翁丛丛　，方益民　，黄润巧　，林冬冬　，张洪勤。，施孟如。　

（温州医学院，浙江温州３２５０３５，１．生物系；２．生物学教学中心）　

［摘要］目的：通过将大肠杆菌ＢＬ２１中ＭｎＳＯＤ、ＦｅＳＯＤ以及Ｃｕ／ＺｎＳＯＤ调控序列（包括启动子，一３　５１８一　

＋１５　ｂｐ）与红色荧光蛋白（ＲＦＰ）连接，构建成含ＳＯＤ调控序列的红色荧光蛋白报告基因，用以研究不同　

ＳＯＤ启动子对ＲＦＰ的调控作用。方法：采用重组ＰＣＲ技术，分别构建以ＭｎＳＯＤ、ＦｅＳＯＤ、Ｃｕ／ＺｎＳＯＤ启动子驱　

动的ＲＦＰ报告基因载体，并将构建的融合基因通过Ｔ克隆转化入大肠杆菌，通过不同浓度ｃｄ。　作用，分别　

诱导ＲＦＰ表达。结果：正确构建了三种ＳＯＤ—ＲＦＰ融合基因，重组ＰＣＲ结果与测序结果完全一致；该报告基　

因在室温静息状态下，红色荧光有微弱表达，经ｃｄ　诱导后，红色荧光亮度明显增强，其中ＭｎＳＯＤ调控序　

列驱动的ＲＦＰ表达最为明显。结论：该报告基因载体的成功构建，为研究ＳＯＤ的基因表达调控机制和研制　

检测环境中污染物的微生物传感器提供了重要基础和工具。　

［关键词］　超氧化物歧化酶；调控序列；重组ＰＣＲ；红色荧光蛋白；基因，报告；大肠杆菌　

［中图分类号］Ｑ７８［文献标志码］Ａ［文章编号］　１０００—２１３８（２０１２）Ｏ１—００４８—０５　

Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｄ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｒｅｐｏｒｔｅｒ　ｇｅｎｅ　ｖｅｃｔｏｒ　

ｄｒｉｖｅｎ　ｂｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ＳＯＤ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｉｎ　Ｅ．ｃｏｌｉ　

Ｒｕｎｑｉａｏ．ＬＩＮ　Ｄｏｎｇｄｏｎｇ．ＺＨＡＮＧ　Ｈｏｎｇｑｉｎ。Ｓｉｌｌ　Ｍｅｎｇｒｕ．　

ｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｗｅｎｚｈｏｕ。３２５０３５　

ＷＥＮＧ　Ｃｏｎｇｃｏｎｇ　．ＦＡＮＧ　Ｙｉｍｉｎ．ＨＵＡＮＧ　

＊Ｂｉｏｌｏｇｙ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｗｅｎｚｈｏｕ　Ｍｅｄｉ－　

Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ　ｒｅｄ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ（ＲＦＰ）ｒｅｐｏｒｔｅｒ　ｇｅｎｅ　ｖｅｃｔｏｒｓ　

ｄｒｉｖｅｎ　ｂｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ＳＯＤ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｉｎ　Ｆ．ｃｏｌｉ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｆｕｓｉｎｇ　ＭｎＳＯＤ，ＦｅＳＯＤ，Ｃｕ／ＺｎＳＯＤ　

ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎｄ　ＲＦＰ　ｇｅｎｅ　ｉｎ　ＢＬ２１　Ｆ．ｃｏｌｉ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｒｅｄ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ（ＲＦＰ）　

ｒｅｐｏｒｔｅｒ　ｇｅｎｅ　ａｎｄ　ＭｎＳＯＤ，ＦｅＳＯＤ，Ｃｕ／ＺｎＳＯＤ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｗｅｒｅ　ｆｕｓｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　

ＰＣＲ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｔｈｅ　ＳＯＤ・ＲＦＰ　ｇｅｎｅｓ　ｃｏｎｎｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｐＭＤ１８－Ｔ　ｐｌａｓｍｉｄ　ｗｅｒｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒｅｄ　ｉｎｔｏ　

Ｆ．ｃｏｌ１．Ｔｈｅ　ＲＦＰ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ａｆｔｅｒ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　Ｃｄ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．　

Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｒｅｅ　ＳＯＤ—ＲＦＰ　ｆｕｓｉｏｎ　ｇｅｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｒｒｅｃｔｌｙ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ．　ｗｈｉｃｈ　ｗｅｒｅ　ｐｒｏｖｅｄ　ｂｙ　ＤＮＡ　

ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ；ｔｈｅ　ｒｅｐｏｒｔｅｒ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ａ　ｌｉｔｔｌｅ　ｏｆ　ｒｅｄ　ｆｌｏｕｒｅｓｅｃｅｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅｓｔｉｎｇ　

ｓｔａｔｅ　ａｔ　ｒｏｏｍ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｂｕｔ　ｍｏｒｅ　ｒｅｄ　ｆｌｏｕｒｅｓｅｃｅｎｔ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ　ｗａｓ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ａｆｔｅｒ　

Ｃｄ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ＳＯＤＡ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ　ＲＦＰ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｄｒｉｙｅｎ．　

Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｒｅｄ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｒｅｐｏｒｔｅｒ　ｇｅｎｅ　ｖｅｔｏｒｓ　ｄｒｉｖｅｎ　ｂｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ＳＯＤ　

ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｉｎ　Ｅ．ｃｏｌｉ　ｈａｖｅ　ｂｅｅｎ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ　ｗｉｔｈ　ａ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　

ｔｏ　Ｃｄ　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ．Ｔｈｉｓ　ｓｙｓｔｅｍ　ｐｒｏｖｉｄｅｓ　ａｎ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｂａｓｉｓ　ａｎｄ　ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ　ｔｏｏｌ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　

ｆｕｒｔｈｅｒ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ＳＯＤ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　

ｓｅｎｓｏｔ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａ１　ｐｏｉｌｕｔａｎｔｓ．　

ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｄｉｓｍｕｔａｓｅ；ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ；ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ＰＣＲ；ｒｅｄ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　

ｐｒｏｔｅｉｎ：ｒｅｐｏｒｔｅｒ　ｇｅｎｅ：Ｆ．ｃｏｌｉ　

当处于极端温度、重金属等环境中，生物体氧　

自由基产生过多或对氧自由基清除能力下降，氧自　

由基的过程主要包括超氧化物岐化酶（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　

ｄｉｓｍｕｔａｓｅ，ＳＯＤ）将氧自由基通过歧化反应转变为Ｈ…０，　

由基通过链式自由基反应损伤细胞。机体清除氧自　

收稿日期：２０１　１—０５－０　３　

作者简介：翁丛丛（１　９　８　８一），女，浙江瑞安人，本科生。　

指导老师：施孟如，实验师，Ｅｍａｉｌ：ｄｒｅａｍｌｉｋｅＯ０７＠ｌ６３．ｃｏｍ。　

一

随后过氧化氢酶（ＣＡＴ）将Ｈ２０。转变为０　，和Ｈ２０Ｉ　。ＳＯＤ　

是一种广泛存在于生物体中的金属酶，根据其所结　

合的金属离子的不同，可分为ＭｎＳＯＤ（ＳＯＤＡ）、ＦｅＳＯＤ　

（ＳＯＤＢ）、Ｃｕ／ＺｎＳＯＤ（ＳＯＤＣ）三种类型　。段学军等　

４８—　

第４２卷　翁丛丛，等：大肠杆菌不同ＳＯＤ调控序列红色荧光蛋白报告基因载体的构建及功能鉴定　第１期　

Ｌ５１的研究表明，机体总ＳＯＤ活性会随着重金属的刺　

（德国ＥＰＰＥＮＧＥＲＦ，ＡＧ），Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ　５４１５高速冷　

激而增加，然而具体是哪一种ＳＯＤ起主导作用尚未　冻离心机（德国，ＥＰＰＥＮＤＯＲＦ），ＲＦ一５３０ＩＰＣ荧光分　

能阐明。因此，本实验应用重组ＰＣＲ技术，分别构　光光度计（ＳＨＩＭＡＤＺＵ），ＦＶＩＯ００激光共聚焦显微镜　

建以ＳＯＤＡ、ＳＯＤＢ、ＳＯＤＣ启动子驱动的红色荧光蛋白　

（Ｏｌｙｍｐｕｓ），柱式琼脂糖凝胶ＤＮＡ回收试剂盒（中国　

（ＲＦＰ）报告基因载体，经不同浓度ｃｄ。　刺激，诱导　

捷瑞生物工程有限公司），ＴａＤＮＡ连接酶（５　Ｕ／Ｌ）（宝　

ＲＦＰ基因表达，通过检测ＲＦＰ荧光强度变化，从而　

生物工程有限公司），ＤＮＡ　ｌａｄｄｅｒ（中国捷瑞生物　

研究不同ＳＯＤ启动子在ｃｄ。　诱导下对ＲＦＰ的调控作　

工程有限公司），ｐＭＤ１８一Ｔ克隆试剂盒（宝生物工程　

用。　

有限公司）。　

１．２方法　

１材料和方法　

１．２．１　ＰＣＲ引物：表１中的十个引物为自行设计，　

１．１材料　

根据ＧｅｎＢａｎｋ里大肠杆菌ＢＬ２１（ＮＣ　０１２９７１）的ＳＯＤＡ、　

１．１．１　ＲＦＰ报告基因和菌种：含ＲＦＰ基因的大肠杆　

ＳＯＤＢ、ＳＯＤＣ基因调控序列，及浙江大学惠赠的ＲＦＰ　

菌ＢＬ２１由浙江大学惠赠。　基因，用Ｐｒｉｍｅｒ　Ｐｒｅｍｉｅｒ　５．０软件完成引物设计，　

Ｉ．１．２主要仪器及试剂：Ｔａｎｏｎ－１６００Ｒ凝胶成像　

引物由上海捷瑞公司合成（见表Ｉ）。　

分析仪（上海天能科技有限公司），ＰＣＲ梯度扩增仪　

表１　ＰＣＲ引物及条件　

１．２．２　ＳＯＤＡ、ＳＯＤＢ、ＳＯＤＣ以及相应重叠区域的ＲＦＰ　将上述ＰＣＲ产物ＳＯＤＡ、ＳＯＤＢ、ＳＯＤＣ和相应ＲＦＰ纯化　

基因的扩增：挑取一个含ＲＦＰ基因质粒的大肠杆菌　

回收后等摩尔混合，作为扩增的模板，分别以ＳＯＤＡ—　

ＢＬ２１菌落到１Ｏ０　ｍＬ　ｄｄＨ。０中悬浮混匀，１００。Ｃ沸　

ＲＦＰ一１　Ｌ和ＳＯＤ—ＲＦＰ一４Ｒ，ＳＯＤＢ—ＲＦＰ一１　Ｌ和ＳＯＤ—ＲＦＰ一４Ｒ，　

水浴１０　ｒａｉｎ，冰浴３　ｍｉｎ，１２　０００　ｒ／ｍｉｎ离心５　ｍｉｎ，　

ＳＯＤＣ—ＲＦＰ一１Ｌ和ＳＯＤ—ＲＦＰ一４Ｒ为引物，反应体系和条件　

取上清液为ＤＮＡ模板，以引物ＳＯＡ—ＲＦＰ一１Ｌ和ＳＯＤＡ—　

均和前面的相同。ＰＣＲ产物于１％琼脂糖凝胶中电泳，　

ＲＦＰ一２Ｒ用于扩增ＳＯＤＡ，ＳＯＤＡ—ＲＦＰ一３Ｌ和ＳＯＤ—ＲＦＰ一４Ｒ　按ＤＮＡ胶回收纯化试剂盒操作说明进行ＰＣＲ产物的　

用于扩增ＲＦＰ；ＳＯＤＢ．ＲＦＰ一１　Ｌ和ＳＯＤＢ—ＲＦＰ．２Ｒ用于扩　

纯化。所得产物即：ＳＯＤＡ．ＲＦＰ、ＳＯＤＢ—ＲＦＰ、ＳＯＤＣ—ＲＦＰ　

增ＳＯＤＢ，ＳＯＤＢ—ＲＦＰ一３Ｌ和ＳＯＤ．ＲＦＰ一４Ｒ用于扩增ＲＦＰ；　

融合基因。　

ＳＯＤＣ．ＲＦＰ一１　Ｌ和ＳＯＤＣ．ＲＦＰ一２Ｒ用于扩增ＳＯＤＣ，ＳＯＤＣ—　１．２．４重组产物与ｐＭＤ１８一Ｔ载体的连接及转化：以　

ＲＦＰ一３Ｌ和ＳＯＤ—ＲＦＰ．４Ｒ用于扩增ＲＦＰ。ＰＣＲ反应体系：　ＳＯＤ—ＲＦＰ的融合基因为Ｃｏｎｔｒ０ｌ　ｉｎｓｅｒｔ，参照　

共３０　Ｌ，１０×Ｂｕｆｆｅｒ　３　Ｌ，ＥＸ　Ｔａｑ酶１　ｕ（０．２　

ＴａＫａＲａ　ＤＭＤＩ８一Ｔ　Ｓｉｍｐｌｅ　Ｖｅｃｔｏｒ的使用说明书进　

Ｌ），ｄＮＴＰ（Ｍｇ。　）１　Ｌ，模板ＤＮＡ　２　Ｌ，ｄｄＨ　０　２２　

行。将连接产物转入ＢＬ２１感受态细胞。　

Ｌ，引物Ｒ　１　Ｌ，引物Ｌ　１　Ｌ。ＰＣＲ反应条件：　１．２．５　ＳＯＤ－ＲＦＰ重组子的筛选、鉴定：菌落ＰＣＲ鉴　

９４。Ｃ　５　ｍｉｎ：９４。Ｃ　４０　Ｓ，５５。Ｃ　４０　Ｓ，７２。Ｃ　２　

定：单个菌落的转化子在２００　ｍＬ　ＬＢ液体培养基中　

ｍｉｎ，扩增３５个循环；最后７２。Ｃ　２０　ｍｉｎ。ＰＣＲ产　

振荡培养１　ｈ，然后直接进行ＰＣＲ，琼脂糖凝胶电泳　

物于１％琼脂糖凝胶中电泳。按ＤＮＡ胶回收纯化试剂　

检测。低温诱导鉴定：挑取菌落ＰＣＲ阳性的白色菌　

盒操作说明进行ＰＣＲ产物的纯化。　落，用接种针点种至加入Ａｍｐ的普通ＬＢ平板中，３７　

１．２．３　ＳＯＤ调控序列和报告基因ＲＦＰ的连接：分别　

。Ｃ恒温培养过夜，放入４。Ｃ冰箱中低温诱导，观察　

一

４９—　

第４２卷　温州医学院学报　第１期　

荧光强度均明显增加，表明其总ＳＯＤ变化趋势与段　

学军等１５］的研究结果相符。本实验证实，ＳＯＤ＃￣性的　

变化主要是由ＳＯＤＡ的表达变化引起的，ＳＯＤＡ作为　

调控序列对后续报告基因的调控作用更加明显。该　

报告基因载体的成功构建，为研究ＳＯＤ的基因表达　

调控机制提供重要的基础和工具。　

目前，环境污染物的测定主要有理化分析方法　

和生物学方法ｌ１　］。利用ＳＯＤ启动子的这种诱导性表　

达性能，通过对红色荧光强度的检测，我们能够把　

构建的报告基因载体转入大肠杆菌作为检测水体环　

境中刺激因子的微生物传感器，对重金属、可溶性　

究ｌＪ１．安全与环境学报，２００５，５（２）：５０—５３．　

［６】　Ｚｉｋｉｃ　ＲＶ，Ｓｔａｉｎ　Ａ，Ｓａｉｃｉｃ　ＺＳ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｓｕｐｅｒｏｘｉｅ　

ｄｉｓｍｕｔａｓｅ，ｃａｔａｌａｓｅ　ａｎｄ　ａｓｃｏｒｂｉｃ　ａｃｉｄ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｉｖｅｒ　ｏｆ　

ｇｏｌｄｆｉｓｈ（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ　ａｕｒａｔｕｓ　ｇｉｂｅｌｉｏ　Ｂｌｏｃｈ）ｅｘｐｏｓｅｄ　ｔｏ　ｃａｄｍｉｕｍ　

…．ＰｈｙｓｉｏｌＲｅｓ，ｌ９９６，４５（６）：４７９—４８１．　

【７　Ｊ　Ｃａｃｅｒｅｓａ　Ｌ　Ｈｅａ　Ｎａｉｄｕ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｐｙｒｉｆｏｓ　

ａｎｄ　ＴＣＰ　ａｌｏｎｅ　ａｎｄ　ｉｎ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｔｏ　Ｄａｐｈｎｉａ　ｃａｒｉｎａｔａ：Ｔｈｅ　

ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｎａｔｕｒａｌ　ｗａｔｅｒ［ＪＪ．Ｗａ—　

ｔｅｒ　Ｒｅｓ，２００７，４１（１９）：４４９７—４５０３．　

【８】　Ｚａｉｄｉ　ＢＲ，Ｈｉｎｋｅｙ　ＬＭ，ＲｏｄｒｉＧｕｅｚ　ＮＲ，ｅｔ　ａ１．Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ　

ｏｆ　ｔｏｘｉｃ　ｃｈｅｍｉｃａｌｓ　ｉｎ　Ｇｕａｙａｎｉｌｌａ　Ｂａｙ，Ｐｕｅｒｔｏ　Ｒｉｃｏ［Ｊ］．Ｍａｒ　

Ｐｏｌｌｕｔ　Ｂｕｌｌ，２００３，４６（４）：４１　８－４２３．　

［９］　Ｅｒｉｋｓｓｏｎｅ　Ｅ，Ｂａｕｎ　Ａ，Ｓｃｈｏｌｅｓ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ｓｔｏｒｍｗａｔｅｒ　

有机物等污染物进行初筛。由于实验材料价廉易得，　

不需要昂贵的仪器设备和复杂的实验手段，简单快　

速，易操作，成本低，更易在欠发达地区或基层检　

测机构进行。　

ｐｒｉｏｒｉｔｙ　ｐｏｌｌｕｔａｎｔｓ：ａ　Ｅｕｒｏｐｅａｎ　ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ［Ｊ】．Ｓｃｉ　Ｔｏｔａｌ　

Ｅｎｖｉｒｏｎ，２００７，３８３（１—３）：４ｌ一５１．　

［１０】Ｆａｔｔａ　Ｄ，Ｍｉｃｈａｅｌ　Ｃ，Ｍｉｃｈａｅｌｉｄｏｕ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ，ｖｏｌａｔｉｌｅ　

ａｎｄ　ｓｅｍｉｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｒｇａｎｉｃ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｎｌａｎｄ　ｓｕｒｆａｃｅ　

ｗａｔｅｒｓ　ｏｆ　Ｃｙｐｒｕｓ［Ｊ］．Ｄｅｓａｌｉｎａｔｉｏｎ，２００７，２１５（１—３）：２２３—２３６．　

［１　１】Ｂａｉｒｄ　ＧＳ，Ｚａｃｈａｒｉａｓ　ＤＡ，Ｔｓｉｅｎ　ＲＹ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ，　

参考文献：　

［ｉ］　田春美，钟秋平．超氧化物歧化酶的现状研究进展…．中罔热　

带医学，２００５，５（８）：１７３０—１７３２．　

【２］　

陈淮扬，刘望荑．从超氧化物歧化酶的分布与结构看其分子进　

ａｎｄ　ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＤｓＲｅｄ，ａ　ｒｅｄ　ｌｕｏｒｆｅｓｃｅｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｆｒｏｍ　

ｃｏｒａｌ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ．２０００．９７（２２）：１ｌ９８４一ｌｌ９８９．　

［１　２】Ｃｈａｌｆｉｅ　Ｍ，Ｔｕ　Ｙ，Ｅｕｓｋ　ｉｒｃｈｅｎ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ｇｒｅｅｎ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｐｒｏ—　

ｔｅｉｎ　ａｓ　ａ　ｍａｋｅｒ　ｆｏｒ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１　９９４，２６３　

（５　１４８）：８０２—８０５．　

［１　３］Ｈｅｉｍ　Ｒ，Ｃｕｂｉｔｔ　ＡＢ，Ｔｓｉｅｎ　ＲＹ．Ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｇｒｅｅｎ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　

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化叭生物化学与生物物理进展，１９９６，２３（５）：４０８—４１２．　

ｅｌ　ＲＮ，Ｓｉｎｇｈ　Ｎ，Ｓｈｕｋｌａ　ＫＫ，ｅｔ　ａ１．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　

［３】　

Ｐａｔ

ｂｉｏｍｉｍｅｔｉｃ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｃｕ（ＩＩ）一Ｃｕ（ＩＩ）ａｎｄ　Ｃｕ（ＩＩ）一Ｚｎ（ＩＩ）　

ｂｉｎｕｃｌｅａｒ　ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ：ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｍｏｄｅｌｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｏｆ　

【１４］王皓，康现江，王琦，等．重组ＰＣＲ技术研究进展和应用ｌＪｌ＿中　

生物Ｔ程杂志，２００７，５（２７）：３５５—３６３．　

【１５］Ｒｅｎ　Ｓ，Ａｓｓｅｓｓｉｎｇ　ｗａｓｔｅｗａｔｅｒ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｔｏ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｓｌｕｄｇｅ：ｒｅ—　

ｃｅｎｔ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｅｎｖｉｒｏｎ　Ｉｎｔ，２００４，３０　

ｆ８１：１　ｌ５１—１　ｌ６４．　

Ｃｕ—Ｚｎ　ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｄｉｓｍｕｔａｓｅ［Ｊ］．Ｊ　Ｉｎｏｒｇ　Ｂｉｏｃｈｅｍ，２００５，９９（２）：　

６５　ｌ一６６３．　

ｅｆａｎ　ＩＬ，Ｉｒｗｉｎ　Ｆ．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｄｉｓｍｕｔａｓｅ　ｏｎ　

［４】　

Ｓｔ

Ｈ，Ｏ，ｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｆｒｅｅ　Ｒａｄｉｃ　Ｂｉｏｌ　Ｍｅｄ，２００７，４２（１０）：１４６４一　

ｌ４６９．　

【５］　

段学军，闵航．稻田土壤细菌对重金属镉的氧化应激反应研　

（本文编辑：１一敏娇）　

一

５２一　