2024年6月1日发(作者：邬白玉)

山东医药２０１８年第５８卷第１０期　

·

基础研究·　

癫痫大鼠海马组织髓鞘相关蛋白　

ＭＢＰ、ＭＡＧ表达变化及意义　

李世容　，王龙　，刘蕊　，李玫　，瞿浩　，顾然　，胡晓　

（１贵州省人民医院，贵阳５５０００２；２皖北煤电集团总医院）　

摘要：目的观察癫痫大鼠海马组织髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ）、髓鞘相关糖蛋白（ＭＡＧ

）表达，探讨其在癫痫发病　

．

中的作用。方法　将４０只大鼠随机分成正常组（正常大鼠）、假手术组（仅安装电极不诱发癫痫）、实验１组（诱发　

癫痫后３　ｈ，急性惊厥发作期）和实验２组（诱发癫痫后自发性反复发作３０　ｄ，慢性惊厥发作期）。采用ＨＥ染色观　

察海马组织的病理生理学情况，ＲＴ—ｑＰＣＲ法检测各组ＭＢＰ、ＭＡＧ　ｍＲＮＡ表达情况，Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ法检测ＭＢＰ、　

ＭＡＧ蛋白表达水平。结果ＨＥ染色显示，实验组海马ＣＡ１区锥体细胞排列较整齐紧密，神经细胞层次变少，染　

色较淡，数量减少，排列紊乱、稀疏；部分神经细胞核深染、固缩，呈杆状或三角形，核仁不明显，细胞周围间隙增大。　

假手术组、实验１组、实验２组大鼠海马组织ＭＢＰ、ＭＡＧｍＲＮＡ及其蛋白表达均较正常组降低，实验１组、实验２组　

均较假手术组降低，实验２组较实验１组降低（ＪＰ均＜０．０５）。结论　癫痫大鼠急性惊厥发作期和慢性惊厥发作期　

的海马组织ＭＢＰ、ＭＡＧ表达均降低，二者可能在癫痫发生发展中起重要作用。　

关键词：癫痫；髓鞘碱性蛋白；髓鞘相关糖蛋白；少突胶质细胞；海马　

ｃｌｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－２６６Ｘ．２０１８．１０．００８　

．　

．　

中图分类号：Ｒ７４２．１　文献标志码：Ａ　文章编号：１００２—２６６Ｘ（２０１８）１０－００２９－０４　

癫痫是神经系统常见疾病，我国约有１　０００万　

癫痫患者，其中约３０％为难治性癫痫¨Ｊ。研究显　

示，脱髓鞘或脱髓鞘再生障碍在癫痫的发病中具有　

ＳＯ　Ｐｌｕｓ、ＲＴ逆转录试剂盒、ＳＹＢＲ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘｔｕｒｅ试剂盒　

（大连ＴａＫａＲａ公司）。　　．

１．２动物分组与模型制备　采用随机数字表法将　

大鼠分成正常组、实验１组、实验２组、假手术组各　

关键作用。我们的前期研究显示，由少突胶质细胞　

（ＯＬ）产生的髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ）和髓鞘相关糖蛋　

白（ＭＡＧ）介导的脱髓鞘或髓鞘再生障碍与癫痫发　

作存在一定相关性ｌ２ｊ。但前期研究仅局限于癫痫　

发病后一个时间点的观察　而对髓鞘相关蛋白在癫　

痫发作不同时期的具体表达情况未进行深入研究。　

我们以癫痫大鼠模型为研究对象，探讨髓鞘相关蛋　

白ＭＢＰ、ＭＡＧ在癫痫发作不同时期的变化情况，以　

１０只。正常组正常饲养。实验１组、实验２组大鼠　

腹腔注射１０％水合氯醛麻醉，固定于大鼠脑立体定　

位仪，暴露颅骨及前囟。根据Ｋｏｎｉｇ图谱确定大鼠　

右侧杏仁核位置，于前囟后３．０　ｍｍ右侧旁开４．８　

ｍｍ颅骨表面下８．８　ｍｍ处插入电极固定。术后恢　

复１周，采用生物多媒体计算机刺激记录系统刺激　

杏仁核行杏仁核点燃实验。刺激参数：细电流、串刺　

期为临床诊疗提供理论依据。　

１材料与方法　

１．１材料ＳＰＦ级健康雄性１２周龄ｓＤ大鼠４０只，　

激、波宽１　ｍＳ，频率６０　Ｈｚ，持续时间１　Ｓ，强度０．４５０　

ｍＡ，１次／ｄ。每次电刺激停止时立即观察大鼠痫性　

行为，采用视频监控记录大鼠自发性反复癫痫发作　

情况。按Ｒａｃｉｎｅ分级方法　进行行为学评价。１　

级：面部阵挛，包括动须，咀嚼等；２级：１级发作行为　

加节律性点头；３级：２级行为加前肢阵挛；４级：３级　

行为加后肢站立；５级：４级行为加摔倒。４级及以　

上为成功诱发癫痫。实验１组、实验２组各７只成　

体质量２００－２２０　ｇ，购自贵州医科大学动物实验中心。　

在温度控制室内饲养大鼠，昼夜各１２　ｈ，自由进食、水。　

ＢＬ．４２０Ｓ型生物多媒体计算机刺激记录系统（成都泰盟　

科技有限公司），微型颅骨钻、大鼠脑立体定位仪６８５０５　

（深圳瑞沃德生命科技有限公司），双极漆包镍铬电极　

（直径０．１　ｈｉｍ、尖距０．０２５　ｍ／ｎ，上海鼎皋公司）。ＲＮＡｉ－　

基金项目：国家自然科学基金青年项目（８１４０１０８３）；贵州省科技厅攻　

关项目（黔科合ｓＹ字．２０１２－３１４３号）。　

通信作者：胡晓（Ｅ－ｍａｉｌ：ｎａｔａｓａｎ５２０＠１６３．ｃｏｒｎ）　

功诱发癫痫。假手术组仅安装电极不刺激杏仁核诱　

发癫痫。　

１．３干预方法实验１组和实验２组诱发癫痫后　

２９　

均不再给予刺激。实验１组以诱发癫痫后至３　ｈ作　

山东医药２０１８年第５８卷第１０期　

为癫痫急性惊厥发作期；实验２组以诱发癫痫后至　

３０　ｄ作为癫痫慢性惊厥发作期，观察大鼠自发性反　

复癫痫发作情况。假手术组仅安装电极不诱发癫　

痫。正常组正常饲养，不进行干预。　

１．４标本采集正常组在正常饲养７　ｄ，假手术组　

在安装电极术后７　ｄ，实验１组在诱发癫痫后３　ｈ，实　

验２组在诱发自发性反复癫痫发作后３０　ｄ分别断　

头处死。用咬骨钳咬合并逐渐暴露双侧大脑半球，　

快速取下大脑组织置于冰块上，用眼科镊子分离出　

新月形海马组织。一部分海马组织用于病理ＨＥ染　

色及ＭＢＰ、ＭＡＧ　ｍＲＮＡ表达检测；另一部分一８０℃　

分３～５层，胞核圆形或椭圆形，染色较淡，染色质均　

匀，核膜边界清晰，核仁圆且明显。假手术组海马　

ＣＡ１区锥体细胞排列整齐，层次清晰，分布均匀，神　

经细胞数目多、外形规则；细胞层可分３～５层，胞核　

圆形或椭圆形，染色较淡，染色质均匀，核膜边界清　

晰，核仁圆且明显。实验１组海马ＣＡ１区锥体细胞　

排列较整齐紧密，胞核圆形或椭圆形，染色较淡，染　

色质均匀，核膜边界清晰，核仁圆且明显。实验２组　

海马ＣＡ１区神经细胞层次变少，数量减少，排列紊　

乱、稀疏；部分神经细胞核深染、固缩，呈杆状或三角　

形，核仁不明显，细胞周围间隙增大。　

２．２各组海马组织ＭＢＰ、ＭＡＧ　ｍＲＮＡ表达水平比　

保存，用于ＭＢＰ、ＭＡＧ蛋白表达检测。　

１．５海马组织ＭＢＰ、ＭＡＧ　ｍＲＮＡ表达检测采用　

较假手术组、实验１组、实验２组脑海马组织　

ＲＴ—ｑＰＣＲ法。先用ＲＮＡｉｓｏ　Ｐｌｕｓ提取新鲜海马组织　

样本总ＲＮＡ，用ＲＴ逆转录试剂盒逆转录为ｃＤＮＡ。　

用ＳＹＢＲ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘｔｕｒｅ试剂盒进行ＲＴ．ｑＰＣＲ实验。　

ＭＢＰ、ＭＡＧ　ｍＲＮＡ表达均较正常组降低（Ｐ均＜　

０．０５）；实验１、２组较假手术组降低（Ｐ均＜０．０５），　

实验２组较实验１组降低（Ｐ均＜０．０５）。见表１。　

表１各组ＭＢＰ、ＭＡＧ　ｍＲＮＡ表达水平比较（　±　）　

以Ｂ—ａｃｔｉｎ作为内参，设计并合成引物。引物序列：　

ＭＢＰ上游５　一ＣＣＣＡＴＦＧＧＴＧＣＡＣＡＣＴＡＡＣＣＴＣ．３　，下　

游５　－ＣＧＡＣＴＩ＇ＧＡＴＹＣＡＧＣＧＡＣＡＧＧＡ．３　；ＭＡＧ上游　

５　一ＧＣＧＧＣＴＡＣＡＡＣＣＡＧＴＡＣＡＣＣＴＴＣ－３　，下游５　一　

ＣＡＣＣＡＴＧＣＡＧＣＴＧＡＣＣＴＣＴＡＣＩＴＣ一３　；Ｂ．ａｃｔｉｎ上游　

５　．ＣＴＧＣＣＣＴＧＧＣＴＣＣＴＡ．．３，下游５　ＧＡＣＴＣＡＴＣＧ—　

ＴＡＣＴＣＣＴＧＣ　ｒ丌’ＧＣＴＧ．．３。扩增条件：９５℃预变性３０　

注：与正常组比较，　Ｐ＜０．０５；与假手术组比较，　Ｐ＜０．０５；与　

实验１组比较，　Ｐ＜０．０５。　

Ｓ，９５　ｏＣ变性１０　ｓ，５８　ｏＣ退火１５　Ｓ，７２　ｏＣ延伸１０　Ｓ，共　

４ｏ个循环；７２　ｏＣ延伸１０　ｍｉｎ。读取基因扩增的ｃｔ　

值，采用２　

达量。　

２．３各组海马组织ＭＢＰ、ＭＡＧ蛋白表达比较假　

手术组、实验１组、实验２组脑海马组织ＭＢＰ、ＭＡＧ　

蛋白表达均较正常组降低（Ｐ均＜０．０５）；实验１、２　

法计算ＭＢＰ、ＭＡＧ　ｍＲＮＡ的相对表　

组较假手术组降低（Ｐ均＜０．０５），实验２组较实验　

１组降低（Ｐ均＜０．０５）。见表２。　

表２各组ＭＢＰ、ＭＡＧ蛋白表达比较（ｘ±　）　

１．６　海马组织ＭＢＰ、ＭＡＧ蛋白表达检测　采用　

Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ法。将海马组织从一８０℃冰箱取出，　

迅速研磨成粉末。加入细胞裂解液提取细胞总蛋白，　

采用ＢＣＡ法测定蛋白浓度。蛋白上样于制好的ＳＤＳ—　

ＰＡＧＥ上，电泳后转移至ＰＶＤＦ膜。５％脱脂奶粉．ＴＢＳＴ　

封闭１　ｈ后，加入一抗（１：１　０００稀释）４℃孵育过夜。洗　

膜，加入辣根过氧化物酶（ＨｆｕＰ）标记的山羊抗兔ＩｇＧ　

二抗（１：５　０００稀释），室温孵育１　ｈ。１ＢＳＴ漂洗后Ｏｄｙｓ—　

ｓｅｙ红外成像仪扫描ＰＶＤＦ膜。采用的Ｉｍａｇｅ　Ｊ和　

注：与正常组比较，　Ｐ＜０．０５；与假手术组比较，　Ｐ＜０．０５；与　

实验１组比较，　Ｐ＜０．０５。　

３讨论　

ＩＰＰ６．０软件对电泳条带进行灰度值分析。　

１．７统计学方法采用ＳＰＳＳ１３．０统计软件。计量　

癫痫是大脑神经元反复、无规律发作、同步异常　

放电导致脑功能紊乱的神经系统疾病，具有诊断困　

难、病情反复、治疗效果较差等特点，严重影响患者　

生活质量并增加患者及家庭经济负担。目前普遍认　

资料以　±　表示，多组间均数比较采用方差分析，　

方差不齐时，选用非参数秩和检验，组间两两比较采　

用秩和检验。Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。　

２　结果　

为，脱髓鞘或髓鞘再生障碍在癫痫发病中发挥关键　

作用。研究发现，当髓鞘基因突变大鼠行为出现震　

颤和癫痫时，其脑电监测可同时出现癫痫样放　

２．１　海马组织病理生理变化正常组海马ＣＡ１区　

锥体细胞呈多层排列，结构清晰，细胞排列整齐紧　

密、分布均匀，神经细胞数目多、外形规则；细胞层可　

３０　

电　，病理学可见脑组织有髓神经纤维的数量及直　

径减少，故认为髓神经纤维的变化可导致异常放电，　

山东医药２０１８年第５８卷第ｌＯ期　

从而诱发癫痫　。ＯＬ作为中枢神经系统（ＣＮＳ）神　性惊厥发作期这两个时段癫痫发作时海马组织变化　

经元髓鞘形成细胞，其成熟分化是中枢髓鞘形成的　

观察，旨在进一步阐述癫痫发作病程中髓鞘蛋白表　

关键，ＯＬ分化异常严重影响ＯＬ正常功能，导致髓　达的动态变化过程，最终找到与癫痫发作机制及髓　

鞘脱失及有髓鞘神经纤维减少影响电传导，从而诱　鞘损害程度相适应的标志物。本研究结果显示，与　

发癫痫。反复癫痫发作易产生惊厥性损伤，如得不　

正常组比较，各组ＭＢＰ、ＭＡＧ　ｍＲＮＡ及蛋白表达均　

到及时修复和控制，可形成局部病灶进一步加重癫　

降低，说明癫痫的发病可使髓鞘相关蛋白基因明显　

痫发作，提示ＯＬ分化异常与癫痫发作密切相关＿６　Ｊ。　减少，从而抑制ＭＢＰ、ＭＡＧ蛋白的合成，进一步支持　

Ｒｅｅｖｅｓ等　证实，癫痫患者脑组织中髓鞘相关蛋白　癫痫的发生的确与髓鞘脱失有关。实验组与假手术　

表达降低与髓鞘脱失相关，且癫痫发作后存在ＯＬ　

组相比也出现上述变化趋势，说明仅安装电极不会　

增生及中枢神经髓鞘脱失等病理变化，认为ＯＬ在　引发癫痫发作，而刺激可以诱发及加重癫痫发作频　

癫痫病理过程中发挥重要作用。因此，ＯＬ分化异常　

率。文献＿ｌ叫报道，癫痫患者及癫痫大鼠模型脑组织　

及髓鞘损伤与癫痫发作相关性值得关注。　中ＭＢＰ　ｍＲＮＡ表达均明显降低；而另一研究　则　

ＯＬ分泌抑制性蛋白ＭＢＰ、ＭＡＧ。ＭＢＰ是ＣＮＳ　

显示在癫痫大鼠中ＭＡＧ蛋白表达降低，ＭＡＧ　

髓鞘含量最丰富的蛋白质之一，约占髓鞘蛋白总量　ｍＲＮＡ及ＭＢＰ蛋白没有明显变化。本研究结果与　

的１／３，位于髓鞘浆膜面。其与髓鞘膜带负电荷的　

其不一致，其原因可能与癫痫发作病程及病情严重　

磷脂相互作用后紧密黏附结合，具有维持髓鞘结构　程度不一致有关，且ＭＢＰ贯穿于ＯＬ发育成熟的全　

和功能稳定、神经传导绝缘和快速传导作用，并在　过程，而ＭＡＧ主要在成熟阶段表达。实验１组与实　

ＯＬ髓鞘形成和分化成熟过程中扮演重要角色＿８ｊ。　

验２组比较也有上述表达降低的现象出现，表明髓　

研究　’加　表明，ＭＢＰ在脑损伤、脱髓鞘疾病、缺血性　鞘损伤贯穿于癫痫发生的整个过程；且当病程迁延　

脑血管病、神经退行性疾病及慢性神经性疼痛疾病　时，脱髓鞘程度愈发严重。但两者在癫痫发作过程　

中广泛存在，可作为ＣＮＳ相关性损伤标志物。但癫　中髓鞘蛋白表达的调控机制，ＯＬ分化异常及相关基　

痫发作后不同时期，脑组织中髓鞘相关蛋白的表达　

因的差异性表达在癫痫中的具体作用机制还需要进　

动态变化未见文献报道。ＭＡＧ是首先被发现的抑　

一

步研究证实。　

制髓鞘生长的蛋白，位于直接和轴突相接触的髓鞘　

综上所述，癫痫发作大鼠脑海马组织内可出现　

膜最里层，介导胶质细胞与轴突及外周神经系统的　明显脱髓鞘反应，即表现为ＯＬ产生的ＭＢＰ及ＭＡＧ　

施万细胞的相互作用参与髓鞘的形成，维持正常髓　

蛋白表达下调，且病程越长，脱髓鞘反应越严重。这　

鞘化的神经纤维稳态、存活及降解，从而使脑内点对　

可能是脑内导致神经纤维过度异常放电的原因之　

点神经冲动稳定快速的传导¨　。ＭＡＧ也是髓鞘来　

一

，

从而加重癫痫的发作。．　

源的神经生长抑制因子的主要成分。在神经系统发　参考文献：　

育的不同阶段，ＭＡＧ显示不同的功能，发育期促进　

［１］Ｄｅ　Ｂｏｅｒ　ＨＭ，Ｍｕｔａ　Ｍ，Ｓａｎｄｅｒ　ＪＷ．Ｔｈｅ　ｇｌｏｂａｌ　ｂｕ￣ｅｎ　ａｎｄ　ｓｔｉｇｍａ　

轴突生长，成熟期抑制轴突生长　。ＭＢＰ　ｍＲＮＡ主　

ｏｆ　ｅｐｉｌｅｐｓｙ［Ｊ］．Ｅｐｉｌｅｐｓｙ　Ｂｅｈａｖ，２００８，１２（４）：５４０－５４６．　

要是转运ＭＢＰ蛋白与其相应受体结合信号，介导细　

［２］Ｈｕ　Ｘ，Ｗａｎｇ　ＪＹ，Ｇｕ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｏｃｃｔｎ＇－　

ｒｅｎｃｅ　ｏｆ　ｉｎｔｒａｃｔａｂｌｅ　ｅｐｉｌｅｐｓｙ　ｗｉｔｈ　ｇｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｍｙｅｌｉｎ　ｓｈｅａｔｈ—ａｎ　

胞质膜与轴突建立联系，参与髓鞘形成过程　。　

ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｒｅｖ　Ｍｅｄ　Ｐｈａｒｍａｅｏｌ　Ｓｃｉ，２０１６，２０　

ＭＡＧ　ｍＲＮＡ编码ＭＡＧ蛋白，ＭＡＧ　ｍＲＮＡ是髓鞘形　

（２１）：４５１６－４５２４．　

成过程中最早出现的髓鞘特异性基因¨　，这些丰富　

［３］王乃东，赵永波，陈英辉，等．低频脑深部电刺激对大鼠杏仁核　

的蛋白质参与了轴突与神经胶质细胞相互连接和髓　

点燃的抑制作用及其相关机制探讨［Ｊ］．中华物理医学与康复　

鞘形成，促进神经再生。　

杂志，２００７，２９（５）：２９６－２９９．　

我们的前期研究　表明，癫痫患者致癫痫灶组　

［４］毛诗贤，冯亚梅，楚兰，等．杏仁核点燃癫痫大鼠模型海马组织　

突触囊泡蛋白２Ａ的表达变化［Ｊ］．中风与神经疾病杂志，　

织内ＭＢＰ阳性纤维明显减少，反映成熟的ＯＬ功能　

２０１２，２９（１１）：１００８—１０１１．　

障碍，但研究仅限于一个时期内髓鞘蛋白的表达情　

［３］周浩，刘烨，梁锦平，等．母子隔离应激增加幼鼠海马ＣＡ１区锥　

况。癫痫海马组织病变表现为ＣＡ１区神经细胞层　

体神经元的兴奋性［Ｊ］．第三军医大学学报，２０１０，３２（１３）：　

次变少，数量减少，排列紊乱、稀疏，部分神经细胞核　

１４４２．１４４５．　

深染、固缩，呈杆状或三角形，核仁不明显，细胞周围　

［４］Ｅｇｕｉｂａｒ　ＪＲ，Ｃｏｒｔ６ｓ　Ｍｄｅｌ　Ｃ．Ｔｈｅ　ｍｙｅｌｉｎ　ｍｕｔａｎｔ　ｔａｉｅｐ　ａｓ　ａ　ｍｏｄｅｌ　

ｆｏｒ　ａｂｓｃｅｎｃｅ　ｃｒｉｓｉｓ［Ｊ］．Ｇａｃ　Ｍｅｄ　Ｍｅｘ，２０１０，１４６（１）：１１－１８．　

间隙增大，上述表现在病程越长及发作更严重程度　

［５］Ｙｅ　Ｙ，Ｘｉｏｎｇ　Ｊ，Ｈｕ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ａｌｔｅｒｅｄ　ｈｉｐｐｏｅａｍｐａｌ　ｍｙｅｌｉｎａｔｅｄ　ｆｉｂｅｒ　

时更为明显。本研究增加了对急性惊厥发作期及慢　

ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ　ｉｎ　ａ　ｌｉｔｈｉｕｍ—ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｔｅｍｐｏｒａｌ　ｌｏｂｅ　ｅｐｉｌｅｐｓｙ：ａ　

３１　

山东医药２０１８年第５８卷第１０期　

黑果枸杞原花青素对小鼠衰老皮肤抗氧化作用　

及凋亡相关蛋白的影响　

罗文娟，冶娟。马文宇，郭砚，陶丛敏　

（青海大学附属医院，西宁８１０００１）　

摘要：目的　探讨黑果枸杞原花青素（ＰＣ）对Ｄ一半乳糖联合紫外线（ＵＶ）辐射后小鼠皮肤氧化应激指标及凋　

亡相关蛋白的影响。方法　将５０只小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、维生素Ｅ组、Ｐｃ低剂量组、Ｐｃ高剂量　

组各ｌ０只。．除正常对照组，其余各组每日颈背部皮下注射５％Ｄ一半乳糖１０　ｍＬ／ｋｇ，隔日进行ＵＶ辐照，连续４０　ｄ，　

建立小鼠皮肤衰老模型。从开始注射Ｄ．半乳糖后第１１天起，维生素Ｅ组给予维生素Ｅ　５０　ｍｇ／ｋｇ、ＰＣ低剂量组、高　

剂量组分别给予黑果枸杞Ｐｃ　５０、１００　ｒａｇ／ｋｇ灌胃，正常对照组、模型对照组给予等体积生理盐水灌胃，连续３０　ｄ。　

完成造模后，取小鼠颈背部皮肤，检测皮肤含水量；将皮肤组织匀浆，离心取上清液，采用酶生化法检测超氧化物歧　

化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ—ＰＸ）活力和丙二醛（ＭＤＡ）、羟脯氨酸（Ｈｙｐ）水平，ＥＬＩＳＡ法检测半胱氨酸　

蛋白酶－９（ｃａｓｐａｓｅ－９）、ｃａｓｐａｓｅ－３水平。结果与正常对照组比较，模型对照组皮肤组织上清液中ＳＯＤ、ＧＳＨ—ＰＸ活　

力和Ｈｙｐ水平降低，ＭＤＡ、ｃａｓｐａｓｅ一３、ｃａｓｐａｓｅ－９水平升高（Ｐ均＜０．０５）；与模型对照组比较，维生素Ｅ组、Ｐｃ低剂量　

组、Ｐｃ高剂量组皮肤组织上清液中ＳＯＤ、ＧＳＨ—ＰＸ活力和Ｈｙｐ水平升高，ＭＤＡ、ｃａｓｐａｓｅ一３、ｃａｓｐａｓｅ－９水平降低（尸均　

＜０．０５）；且ＰＣ低、高剂量组指标变化大于维生素Ｅ组（Ｐ均＜０．０５）。结论　黑果枸杞Ｐｃ能够抑制ｕＶ照射联合　

皮下注射。Ｄ一半乳糖对小鼠皮肤的氧化损伤，并下调ｃａｓｐａｓｅ一３、ｃａｓｐａｓｅ－９表达，抑制细胞凋亡，延缓皮肤衰老。　

关键词：皮肤衰老；黑果枸杞原花青素；氧化损伤；半胱氨酸蛋白酶一９；半胱氨酸蛋白酶一３　

ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－２６６Ｘ．２０１８．１０．００９　

中图分类号：Ｒ８２８．５　文献标志码：Ａ　文章编号：１００２－２６６Ｘ（２０１８）１０－００３２－０４　

黑果枸杞为茄科枸杞属，为传统名贵药材，主要　

基金项目：青海省应用基础研究计划项目（２０１６一ＺＪ－７９２）。　

长于我国柴达木盆地一带和欧洲中亚地带，具有降　

通信作者：马文宇（Ｅ—ｍａｉｌ：ｍａｗｅｎｙｕ７３０１２６＠１６３．ｃｏｎ）　

ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　ｓｔｅｒｅｏｌｄｇｉｃａｌ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ，　［Ｊ］．ＥＸｐｅｒｔ　Ｒｅｖ　Ｎｅｕｍｔｈｅｒ，２０１６，１６（９）：１１１１－１１１９．　

２０１３，１５２２（７）：７６—８７．　’　

［１２］Ｒｏｓｏｃｈｏｗｉｃｚ　ＴＷ，Ｗｒｏｔｅｋ　Ｓ，Ｋｏｚａｋ　Ｗ．Ａｘｏｎａｌ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｉｎｈｉｂ—　

［６］Ｗａｎｇ　Ｔ，Ｊｉａ　Ｌ，Ｌｖ　Ｂ，ｅｔａ１．Ｈｕｍａｎ　ｅｒｍｉｎ（ｈＥｒｍｉｎ），ａ　ｎｅｗ　ｏｌｉ—　ｉｔｏｒｓ：ｅｍｅｒｇｉｎｇ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｏｐｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｎｅｕｒｏｌ　Ｂｅｌｇ，２０１５，　

ｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｅｐｉｌｅｐｔｉｃ　ｓｅｉ—　

ｌ１５（４）：５２７－５３２．　

ｚｕｒｅ［Ｊ］．Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ，２０１１，１３６７（１３６７）：７７—８４．　

［１３］Ｌａｕｒｓｅｎ　ＬＳ，Ｃｈａｎ　ＣＷ，Ｆｆｒｅｎｃｈ—Ｃｏｎｓｔａｎｔ　Ｃ．Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｙｅｌｉｎ　

［７］Ｒｅｅｖｅｓ　Ｃ，Ｔａｃｈｒｏｕｎｔ　Ｍ，Ｔｈｏｍａｓ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｍｂｉｎｅｄ　Ｅｘ　ｒｉｖｅ　９．　

ｂａｓｉｃ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｍＲＮＡ　ｉｎ　ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅｓ　ｉｓ　ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｉｎｔｅｇｒｉｎ　ａｃ－　

４Ｔ　ＭＲＩ　ａｎｄ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｔｕｄｙ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ａｎｄ　

ｔｉｖａｆｉｏｎ　ａｎｄ　ｈｎＲＮＰ－Ｋ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌ，２０１１，１９２（５）：７９７－８１１．　

ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｎｅｏｃｏｒｔｉｃａｌ　ｒｅｓｅｃｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｆｏｃａｌ　ｅｐｉｌｅｐｓｙ［Ｊ］．Ｂｒａｉｎ　

［１４］Ｐａｉｖａｌａｉｎｅｎ　Ｓ，Ｈｅａｐｅ　ＡＭ．Ｍｙｅｌｉｎ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　ａｎｄ　

Ｐａｔｈｏｌ，２０１６，２６（３）：３１９－３３３．　．　

ｇａｌａｃｔｏｓｙｌｅｅｒｅｂｒｏｓｉｄｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　Ｓｃｈｗａｎｎ　ｃｅｌｌｓ　ｄｕｒｉｎｇ　ｍｙｅｌｉｎａ—　

Ｌ８］袁平，胡晓，王建怡．少突胶质细胞在癫痫中的研究进展［Ｊ］，　ｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｃｅｌｌ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２００７，３５（３）：４３６－４４６．　

中华神经医学杂志，２０１３，１２（６）：６４６－６４８．　

［１５］袁平，胡晓，王俊，等．难治性癫痫致痫灶中少突胶质细胞改变　

［９］Ｃｈｅｎｇ　ＰＦ，Ｒｅｎ　ＹＦ．Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ　ａｔ－Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ　ｍｏｄｕｌａｔｅ　ｍＴＯＲ　ｓｉｇ—　

的观察研究［Ｊ］．中国神经免疫学和神经病学杂志，２０１３，２０　

ｎａｔｉｎｇ　ｔｏ　ｒｅｇｕｌａｔｅ　ｗｈｉｔｅ　ｍａｔｔｅｒ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｌｅｓｉｏｎｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　

（６）：４００－４０４．　

ｃｈｒｏｎｉｃ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｈｙｐｏｐｅｒｆｕｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ　Ｒｅｓ，２０１６，４１　［１６］齐振波，王修楠，王斐，等．慢性癫痫与抑郁共病大鼠脑白质中　

（１２）：３２７２－３２７７．　

髓鞘碱性蛋白ＭＢＰ的表达变化［Ｊ］．医学研究杂志，２０１４，４３　

［１０］Ｈｏｎｇ　Ｓ，Ｒｅｍａｄｅ　ＡＧ，Ｓｈｉｙｒａｅｖ　ＳＡ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｃｉｐｒｏｃａｌ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　

（７）：７９—８３．　

ｂｅｔｗｅｅｎ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｔｙｐｅ　１　ｍａｔｉｒｘ　ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｌｇｅｓｉｃ　

［１７］Ｓｈｉｎ　Ｄ，Ｌｉｎ　ＳＴ，Ｆｕ　ＹＨ，ｅｔ　ａ１．Ｖｅｒｙ　ｌａｒｇｅ　Ｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ—Ｃｏｕｐｌｅｄ　ｒｅ—　

ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｏｆ　ｍｙｅｌｉｎ　ｂａｓｉｃ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｏｎｔｉｒｂｕｔｅｓ　ｔｏ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ　

ｃｅｐｔｏｒ　１　ｒｅｇｕｌａｔｅｓ　ｍｙｅｌｉｎ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｖｉａ　Ｇａｓ／ＧｃＬｑ－ｍｅ—　

ｐａｉｎ［Ｊ］．Ｂｒａｉｎ　Ｂｅｈａｖ　Ｉｍｍｕｎ，２０１７，６０：２８２－２９２．　

ｄｉａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅｓ　Ａ／Ｃ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　Ｕ　Ｓ　Ａ，２０１３，　

［１１］Ｖａｌｌａｔ　ＪＭ，Ｍａｇｙ　Ｌ，Ｃｉｒｏｎ　Ｊ，ｅｔ　ａｔ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｏｐｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｍａｎ－　１１０（４７）：１９１０１—１９１０６．　（收稿日期：２０１７－０８－０８）　

ａｇｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ａｎｔｉ—ＭＡＧ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　

３２　

2024年6月1日发(作者：邬白玉)

山东医药２０１８年第５８卷第１０期　

·

基础研究·　

癫痫大鼠海马组织髓鞘相关蛋白　

ＭＢＰ、ＭＡＧ表达变化及意义　

李世容　，王龙　，刘蕊　，李玫　，瞿浩　，顾然　，胡晓　

（１贵州省人民医院，贵阳５５０００２；２皖北煤电集团总医院）　

摘要：目的观察癫痫大鼠海马组织髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ）、髓鞘相关糖蛋白（ＭＡＧ

）表达，探讨其在癫痫发病　

．

中的作用。方法　将４０只大鼠随机分成正常组（正常大鼠）、假手术组（仅安装电极不诱发癫痫）、实验１组（诱发　

癫痫后３　ｈ，急性惊厥发作期）和实验２组（诱发癫痫后自发性反复发作３０　ｄ，慢性惊厥发作期）。采用ＨＥ染色观　

察海马组织的病理生理学情况，ＲＴ—ｑＰＣＲ法检测各组ＭＢＰ、ＭＡＧ　ｍＲＮＡ表达情况，Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ法检测ＭＢＰ、　

ＭＡＧ蛋白表达水平。结果ＨＥ染色显示，实验组海马ＣＡ１区锥体细胞排列较整齐紧密，神经细胞层次变少，染　

色较淡，数量减少，排列紊乱、稀疏；部分神经细胞核深染、固缩，呈杆状或三角形，核仁不明显，细胞周围间隙增大。　

假手术组、实验１组、实验２组大鼠海马组织ＭＢＰ、ＭＡＧｍＲＮＡ及其蛋白表达均较正常组降低，实验１组、实验２组　

均较假手术组降低，实验２组较实验１组降低（ＪＰ均＜０．０５）。结论　癫痫大鼠急性惊厥发作期和慢性惊厥发作期　

的海马组织ＭＢＰ、ＭＡＧ表达均降低，二者可能在癫痫发生发展中起重要作用。　

关键词：癫痫；髓鞘碱性蛋白；髓鞘相关糖蛋白；少突胶质细胞；海马　

ｃｌｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－２６６Ｘ．２０１８．１０．００８　

．　

．　

中图分类号：Ｒ７４２．１　文献标志码：Ａ　文章编号：１００２—２６６Ｘ（２０１８）１０－００２９－０４　

癫痫是神经系统常见疾病，我国约有１　０００万　

癫痫患者，其中约３０％为难治性癫痫¨Ｊ。研究显　

示，脱髓鞘或脱髓鞘再生障碍在癫痫的发病中具有　

ＳＯ　Ｐｌｕｓ、ＲＴ逆转录试剂盒、ＳＹＢＲ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘｔｕｒｅ试剂盒　

（大连ＴａＫａＲａ公司）。　　．

１．２动物分组与模型制备　采用随机数字表法将　

大鼠分成正常组、实验１组、实验２组、假手术组各　

关键作用。我们的前期研究显示，由少突胶质细胞　

（ＯＬ）产生的髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ）和髓鞘相关糖蛋　

白（ＭＡＧ）介导的脱髓鞘或髓鞘再生障碍与癫痫发　

作存在一定相关性ｌ２ｊ。但前期研究仅局限于癫痫　

发病后一个时间点的观察　而对髓鞘相关蛋白在癫　

痫发作不同时期的具体表达情况未进行深入研究。　

我们以癫痫大鼠模型为研究对象，探讨髓鞘相关蛋　

白ＭＢＰ、ＭＡＧ在癫痫发作不同时期的变化情况，以　

１０只。正常组正常饲养。实验１组、实验２组大鼠　

腹腔注射１０％水合氯醛麻醉，固定于大鼠脑立体定　

位仪，暴露颅骨及前囟。根据Ｋｏｎｉｇ图谱确定大鼠　

右侧杏仁核位置，于前囟后３．０　ｍｍ右侧旁开４．８　

ｍｍ颅骨表面下８．８　ｍｍ处插入电极固定。术后恢　

复１周，采用生物多媒体计算机刺激记录系统刺激　

杏仁核行杏仁核点燃实验。刺激参数：细电流、串刺　

期为临床诊疗提供理论依据。　

１材料与方法　

１．１材料ＳＰＦ级健康雄性１２周龄ｓＤ大鼠４０只，　

激、波宽１　ｍＳ，频率６０　Ｈｚ，持续时间１　Ｓ，强度０．４５０　

ｍＡ，１次／ｄ。每次电刺激停止时立即观察大鼠痫性　

行为，采用视频监控记录大鼠自发性反复癫痫发作　

情况。按Ｒａｃｉｎｅ分级方法　进行行为学评价。１　

级：面部阵挛，包括动须，咀嚼等；２级：１级发作行为　

加节律性点头；３级：２级行为加前肢阵挛；４级：３级　

行为加后肢站立；５级：４级行为加摔倒。４级及以　

上为成功诱发癫痫。实验１组、实验２组各７只成　

体质量２００－２２０　ｇ，购自贵州医科大学动物实验中心。　

在温度控制室内饲养大鼠，昼夜各１２　ｈ，自由进食、水。　

ＢＬ．４２０Ｓ型生物多媒体计算机刺激记录系统（成都泰盟　

科技有限公司），微型颅骨钻、大鼠脑立体定位仪６８５０５　

（深圳瑞沃德生命科技有限公司），双极漆包镍铬电极　

（直径０．１　ｈｉｍ、尖距０．０２５　ｍ／ｎ，上海鼎皋公司）。ＲＮＡｉ－　

基金项目：国家自然科学基金青年项目（８１４０１０８３）；贵州省科技厅攻　

关项目（黔科合ｓＹ字．２０１２－３１４３号）。　

通信作者：胡晓（Ｅ－ｍａｉｌ：ｎａｔａｓａｎ５２０＠１６３．ｃｏｒｎ）　

功诱发癫痫。假手术组仅安装电极不刺激杏仁核诱　

发癫痫。　

１．３干预方法实验１组和实验２组诱发癫痫后　

２９　

均不再给予刺激。实验１组以诱发癫痫后至３　ｈ作　

山东医药２０１８年第５８卷第１０期　

为癫痫急性惊厥发作期；实验２组以诱发癫痫后至　

３０　ｄ作为癫痫慢性惊厥发作期，观察大鼠自发性反　

复癫痫发作情况。假手术组仅安装电极不诱发癫　

痫。正常组正常饲养，不进行干预。　

１．４标本采集正常组在正常饲养７　ｄ，假手术组　

在安装电极术后７　ｄ，实验１组在诱发癫痫后３　ｈ，实　

验２组在诱发自发性反复癫痫发作后３０　ｄ分别断　

头处死。用咬骨钳咬合并逐渐暴露双侧大脑半球，　

快速取下大脑组织置于冰块上，用眼科镊子分离出　

新月形海马组织。一部分海马组织用于病理ＨＥ染　

色及ＭＢＰ、ＭＡＧ　ｍＲＮＡ表达检测；另一部分一８０℃　

分３～５层，胞核圆形或椭圆形，染色较淡，染色质均　

匀，核膜边界清晰，核仁圆且明显。假手术组海马　

ＣＡ１区锥体细胞排列整齐，层次清晰，分布均匀，神　

经细胞数目多、外形规则；细胞层可分３～５层，胞核　

圆形或椭圆形，染色较淡，染色质均匀，核膜边界清　

晰，核仁圆且明显。实验１组海马ＣＡ１区锥体细胞　

排列较整齐紧密，胞核圆形或椭圆形，染色较淡，染　

色质均匀，核膜边界清晰，核仁圆且明显。实验２组　

海马ＣＡ１区神经细胞层次变少，数量减少，排列紊　

乱、稀疏；部分神经细胞核深染、固缩，呈杆状或三角　

形，核仁不明显，细胞周围间隙增大。　

２．２各组海马组织ＭＢＰ、ＭＡＧ　ｍＲＮＡ表达水平比　

保存，用于ＭＢＰ、ＭＡＧ蛋白表达检测。　

１．５海马组织ＭＢＰ、ＭＡＧ　ｍＲＮＡ表达检测采用　

较假手术组、实验１组、实验２组脑海马组织　

ＲＴ—ｑＰＣＲ法。先用ＲＮＡｉｓｏ　Ｐｌｕｓ提取新鲜海马组织　

样本总ＲＮＡ，用ＲＴ逆转录试剂盒逆转录为ｃＤＮＡ。　

用ＳＹＢＲ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘｔｕｒｅ试剂盒进行ＲＴ．ｑＰＣＲ实验。　

ＭＢＰ、ＭＡＧ　ｍＲＮＡ表达均较正常组降低（Ｐ均＜　

０．０５）；实验１、２组较假手术组降低（Ｐ均＜０．０５），　

实验２组较实验１组降低（Ｐ均＜０．０５）。见表１。　

表１各组ＭＢＰ、ＭＡＧ　ｍＲＮＡ表达水平比较（　±　）　

以Ｂ—ａｃｔｉｎ作为内参，设计并合成引物。引物序列：　

ＭＢＰ上游５　一ＣＣＣＡＴＦＧＧＴＧＣＡＣＡＣＴＡＡＣＣＴＣ．３　，下　

游５　－ＣＧＡＣＴＩ＇ＧＡＴＹＣＡＧＣＧＡＣＡＧＧＡ．３　；ＭＡＧ上游　

５　一ＧＣＧＧＣＴＡＣＡＡＣＣＡＧＴＡＣＡＣＣＴＴＣ－３　，下游５　一　

ＣＡＣＣＡＴＧＣＡＧＣＴＧＡＣＣＴＣＴＡＣＩＴＣ一３　；Ｂ．ａｃｔｉｎ上游　

５　．ＣＴＧＣＣＣＴＧＧＣＴＣＣＴＡ．．３，下游５　ＧＡＣＴＣＡＴＣＧ—　

ＴＡＣＴＣＣＴＧＣ　ｒ丌’ＧＣＴＧ．．３。扩增条件：９５℃预变性３０　

注：与正常组比较，　Ｐ＜０．０５；与假手术组比较，　Ｐ＜０．０５；与　

实验１组比较，　Ｐ＜０．０５。　

Ｓ，９５　ｏＣ变性１０　ｓ，５８　ｏＣ退火１５　Ｓ，７２　ｏＣ延伸１０　Ｓ，共　

４ｏ个循环；７２　ｏＣ延伸１０　ｍｉｎ。读取基因扩增的ｃｔ　

值，采用２　

达量。　

２．３各组海马组织ＭＢＰ、ＭＡＧ蛋白表达比较假　

手术组、实验１组、实验２组脑海马组织ＭＢＰ、ＭＡＧ　

蛋白表达均较正常组降低（Ｐ均＜０．０５）；实验１、２　

法计算ＭＢＰ、ＭＡＧ　ｍＲＮＡ的相对表　

组较假手术组降低（Ｐ均＜０．０５），实验２组较实验　

１组降低（Ｐ均＜０．０５）。见表２。　

表２各组ＭＢＰ、ＭＡＧ蛋白表达比较（ｘ±　）　

１．６　海马组织ＭＢＰ、ＭＡＧ蛋白表达检测　采用　

Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ法。将海马组织从一８０℃冰箱取出，　

迅速研磨成粉末。加入细胞裂解液提取细胞总蛋白，　

采用ＢＣＡ法测定蛋白浓度。蛋白上样于制好的ＳＤＳ—　

ＰＡＧＥ上，电泳后转移至ＰＶＤＦ膜。５％脱脂奶粉．ＴＢＳＴ　

封闭１　ｈ后，加入一抗（１：１　０００稀释）４℃孵育过夜。洗　

膜，加入辣根过氧化物酶（ＨｆｕＰ）标记的山羊抗兔ＩｇＧ　

二抗（１：５　０００稀释），室温孵育１　ｈ。１ＢＳＴ漂洗后Ｏｄｙｓ—　

ｓｅｙ红外成像仪扫描ＰＶＤＦ膜。采用的Ｉｍａｇｅ　Ｊ和　

注：与正常组比较，　Ｐ＜０．０５；与假手术组比较，　Ｐ＜０．０５；与　

实验１组比较，　Ｐ＜０．０５。　

３讨论　

ＩＰＰ６．０软件对电泳条带进行灰度值分析。　

１．７统计学方法采用ＳＰＳＳ１３．０统计软件。计量　

癫痫是大脑神经元反复、无规律发作、同步异常　

放电导致脑功能紊乱的神经系统疾病，具有诊断困　

难、病情反复、治疗效果较差等特点，严重影响患者　

生活质量并增加患者及家庭经济负担。目前普遍认　

资料以　±　表示，多组间均数比较采用方差分析，　

方差不齐时，选用非参数秩和检验，组间两两比较采　

用秩和检验。Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。　

２　结果　

为，脱髓鞘或髓鞘再生障碍在癫痫发病中发挥关键　

作用。研究发现，当髓鞘基因突变大鼠行为出现震　

颤和癫痫时，其脑电监测可同时出现癫痫样放　

２．１　海马组织病理生理变化正常组海马ＣＡ１区　

锥体细胞呈多层排列，结构清晰，细胞排列整齐紧　

密、分布均匀，神经细胞数目多、外形规则；细胞层可　

３０　

电　，病理学可见脑组织有髓神经纤维的数量及直　

径减少，故认为髓神经纤维的变化可导致异常放电，　

山东医药２０１８年第５８卷第ｌＯ期　

从而诱发癫痫　。ＯＬ作为中枢神经系统（ＣＮＳ）神　性惊厥发作期这两个时段癫痫发作时海马组织变化　

经元髓鞘形成细胞，其成熟分化是中枢髓鞘形成的　

观察，旨在进一步阐述癫痫发作病程中髓鞘蛋白表　

关键，ＯＬ分化异常严重影响ＯＬ正常功能，导致髓　达的动态变化过程，最终找到与癫痫发作机制及髓　

鞘脱失及有髓鞘神经纤维减少影响电传导，从而诱　鞘损害程度相适应的标志物。本研究结果显示，与　

发癫痫。反复癫痫发作易产生惊厥性损伤，如得不　

正常组比较，各组ＭＢＰ、ＭＡＧ　ｍＲＮＡ及蛋白表达均　

到及时修复和控制，可形成局部病灶进一步加重癫　

降低，说明癫痫的发病可使髓鞘相关蛋白基因明显　

痫发作，提示ＯＬ分化异常与癫痫发作密切相关＿６　Ｊ。　减少，从而抑制ＭＢＰ、ＭＡＧ蛋白的合成，进一步支持　

Ｒｅｅｖｅｓ等　证实，癫痫患者脑组织中髓鞘相关蛋白　癫痫的发生的确与髓鞘脱失有关。实验组与假手术　

表达降低与髓鞘脱失相关，且癫痫发作后存在ＯＬ　

组相比也出现上述变化趋势，说明仅安装电极不会　

增生及中枢神经髓鞘脱失等病理变化，认为ＯＬ在　引发癫痫发作，而刺激可以诱发及加重癫痫发作频　

癫痫病理过程中发挥重要作用。因此，ＯＬ分化异常　

率。文献＿ｌ叫报道，癫痫患者及癫痫大鼠模型脑组织　

及髓鞘损伤与癫痫发作相关性值得关注。　中ＭＢＰ　ｍＲＮＡ表达均明显降低；而另一研究　则　

ＯＬ分泌抑制性蛋白ＭＢＰ、ＭＡＧ。ＭＢＰ是ＣＮＳ　

显示在癫痫大鼠中ＭＡＧ蛋白表达降低，ＭＡＧ　

髓鞘含量最丰富的蛋白质之一，约占髓鞘蛋白总量　ｍＲＮＡ及ＭＢＰ蛋白没有明显变化。本研究结果与　

的１／３，位于髓鞘浆膜面。其与髓鞘膜带负电荷的　

其不一致，其原因可能与癫痫发作病程及病情严重　

磷脂相互作用后紧密黏附结合，具有维持髓鞘结构　程度不一致有关，且ＭＢＰ贯穿于ＯＬ发育成熟的全　

和功能稳定、神经传导绝缘和快速传导作用，并在　过程，而ＭＡＧ主要在成熟阶段表达。实验１组与实　

ＯＬ髓鞘形成和分化成熟过程中扮演重要角色＿８ｊ。　

验２组比较也有上述表达降低的现象出现，表明髓　

研究　’加　表明，ＭＢＰ在脑损伤、脱髓鞘疾病、缺血性　鞘损伤贯穿于癫痫发生的整个过程；且当病程迁延　

脑血管病、神经退行性疾病及慢性神经性疼痛疾病　时，脱髓鞘程度愈发严重。但两者在癫痫发作过程　

中广泛存在，可作为ＣＮＳ相关性损伤标志物。但癫　中髓鞘蛋白表达的调控机制，ＯＬ分化异常及相关基　

痫发作后不同时期，脑组织中髓鞘相关蛋白的表达　

因的差异性表达在癫痫中的具体作用机制还需要进　

动态变化未见文献报道。ＭＡＧ是首先被发现的抑　

一

步研究证实。　

制髓鞘生长的蛋白，位于直接和轴突相接触的髓鞘　

综上所述，癫痫发作大鼠脑海马组织内可出现　

膜最里层，介导胶质细胞与轴突及外周神经系统的　明显脱髓鞘反应，即表现为ＯＬ产生的ＭＢＰ及ＭＡＧ　

施万细胞的相互作用参与髓鞘的形成，维持正常髓　

蛋白表达下调，且病程越长，脱髓鞘反应越严重。这　

鞘化的神经纤维稳态、存活及降解，从而使脑内点对　

可能是脑内导致神经纤维过度异常放电的原因之　

点神经冲动稳定快速的传导¨　。ＭＡＧ也是髓鞘来　

一

，

从而加重癫痫的发作。．　

源的神经生长抑制因子的主要成分。在神经系统发　参考文献：　

育的不同阶段，ＭＡＧ显示不同的功能，发育期促进　

［１］Ｄｅ　Ｂｏｅｒ　ＨＭ，Ｍｕｔａ　Ｍ，Ｓａｎｄｅｒ　ＪＷ．Ｔｈｅ　ｇｌｏｂａｌ　ｂｕ￣ｅｎ　ａｎｄ　ｓｔｉｇｍａ　

轴突生长，成熟期抑制轴突生长　。ＭＢＰ　ｍＲＮＡ主　

ｏｆ　ｅｐｉｌｅｐｓｙ［Ｊ］．Ｅｐｉｌｅｐｓｙ　Ｂｅｈａｖ，２００８，１２（４）：５４０－５４６．　

要是转运ＭＢＰ蛋白与其相应受体结合信号，介导细　

［２］Ｈｕ　Ｘ，Ｗａｎｇ　ＪＹ，Ｇｕ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｏｃｃｔｎ＇－　

ｒｅｎｃｅ　ｏｆ　ｉｎｔｒａｃｔａｂｌｅ　ｅｐｉｌｅｐｓｙ　ｗｉｔｈ　ｇｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｍｙｅｌｉｎ　ｓｈｅａｔｈ—ａｎ　

胞质膜与轴突建立联系，参与髓鞘形成过程　。　

ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｒｅｖ　Ｍｅｄ　Ｐｈａｒｍａｅｏｌ　Ｓｃｉ，２０１６，２０　

ＭＡＧ　ｍＲＮＡ编码ＭＡＧ蛋白，ＭＡＧ　ｍＲＮＡ是髓鞘形　

（２１）：４５１６－４５２４．　

成过程中最早出现的髓鞘特异性基因¨　，这些丰富　

［３］王乃东，赵永波，陈英辉，等．低频脑深部电刺激对大鼠杏仁核　

的蛋白质参与了轴突与神经胶质细胞相互连接和髓　

点燃的抑制作用及其相关机制探讨［Ｊ］．中华物理医学与康复　

鞘形成，促进神经再生。　

杂志，２００７，２９（５）：２９６－２９９．　

我们的前期研究　表明，癫痫患者致癫痫灶组　

［４］毛诗贤，冯亚梅，楚兰，等．杏仁核点燃癫痫大鼠模型海马组织　

突触囊泡蛋白２Ａ的表达变化［Ｊ］．中风与神经疾病杂志，　

织内ＭＢＰ阳性纤维明显减少，反映成熟的ＯＬ功能　

２０１２，２９（１１）：１００８—１０１１．　

障碍，但研究仅限于一个时期内髓鞘蛋白的表达情　

［３］周浩，刘烨，梁锦平，等．母子隔离应激增加幼鼠海马ＣＡ１区锥　

况。癫痫海马组织病变表现为ＣＡ１区神经细胞层　

体神经元的兴奋性［Ｊ］．第三军医大学学报，２０１０，３２（１３）：　

次变少，数量减少，排列紊乱、稀疏，部分神经细胞核　

１４４２．１４４５．　

深染、固缩，呈杆状或三角形，核仁不明显，细胞周围　

［４］Ｅｇｕｉｂａｒ　ＪＲ，Ｃｏｒｔ６ｓ　Ｍｄｅｌ　Ｃ．Ｔｈｅ　ｍｙｅｌｉｎ　ｍｕｔａｎｔ　ｔａｉｅｐ　ａｓ　ａ　ｍｏｄｅｌ　

ｆｏｒ　ａｂｓｃｅｎｃｅ　ｃｒｉｓｉｓ［Ｊ］．Ｇａｃ　Ｍｅｄ　Ｍｅｘ，２０１０，１４６（１）：１１－１８．　

间隙增大，上述表现在病程越长及发作更严重程度　

［５］Ｙｅ　Ｙ，Ｘｉｏｎｇ　Ｊ，Ｈｕ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ａｌｔｅｒｅｄ　ｈｉｐｐｏｅａｍｐａｌ　ｍｙｅｌｉｎａｔｅｄ　ｆｉｂｅｒ　

时更为明显。本研究增加了对急性惊厥发作期及慢　

ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ　ｉｎ　ａ　ｌｉｔｈｉｕｍ—ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｔｅｍｐｏｒａｌ　ｌｏｂｅ　ｅｐｉｌｅｐｓｙ：ａ　

３１　

山东医药２０１８年第５８卷第１０期　

黑果枸杞原花青素对小鼠衰老皮肤抗氧化作用　

及凋亡相关蛋白的影响　

罗文娟，冶娟。马文宇，郭砚，陶丛敏　

（青海大学附属医院，西宁８１０００１）　

摘要：目的　探讨黑果枸杞原花青素（ＰＣ）对Ｄ一半乳糖联合紫外线（ＵＶ）辐射后小鼠皮肤氧化应激指标及凋　

亡相关蛋白的影响。方法　将５０只小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、维生素Ｅ组、Ｐｃ低剂量组、Ｐｃ高剂量　

组各ｌ０只。．除正常对照组，其余各组每日颈背部皮下注射５％Ｄ一半乳糖１０　ｍＬ／ｋｇ，隔日进行ＵＶ辐照，连续４０　ｄ，　

建立小鼠皮肤衰老模型。从开始注射Ｄ．半乳糖后第１１天起，维生素Ｅ组给予维生素Ｅ　５０　ｍｇ／ｋｇ、ＰＣ低剂量组、高　

剂量组分别给予黑果枸杞Ｐｃ　５０、１００　ｒａｇ／ｋｇ灌胃，正常对照组、模型对照组给予等体积生理盐水灌胃，连续３０　ｄ。　

完成造模后，取小鼠颈背部皮肤，检测皮肤含水量；将皮肤组织匀浆，离心取上清液，采用酶生化法检测超氧化物歧　

化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ—ＰＸ）活力和丙二醛（ＭＤＡ）、羟脯氨酸（Ｈｙｐ）水平，ＥＬＩＳＡ法检测半胱氨酸　

蛋白酶－９（ｃａｓｐａｓｅ－９）、ｃａｓｐａｓｅ－３水平。结果与正常对照组比较，模型对照组皮肤组织上清液中ＳＯＤ、ＧＳＨ—ＰＸ活　

力和Ｈｙｐ水平降低，ＭＤＡ、ｃａｓｐａｓｅ一３、ｃａｓｐａｓｅ－９水平升高（Ｐ均＜０．０５）；与模型对照组比较，维生素Ｅ组、Ｐｃ低剂量　

组、Ｐｃ高剂量组皮肤组织上清液中ＳＯＤ、ＧＳＨ—ＰＸ活力和Ｈｙｐ水平升高，ＭＤＡ、ｃａｓｐａｓｅ一３、ｃａｓｐａｓｅ－９水平降低（尸均　

＜０．０５）；且ＰＣ低、高剂量组指标变化大于维生素Ｅ组（Ｐ均＜０．０５）。结论　黑果枸杞Ｐｃ能够抑制ｕＶ照射联合　

皮下注射。Ｄ一半乳糖对小鼠皮肤的氧化损伤，并下调ｃａｓｐａｓｅ一３、ｃａｓｐａｓｅ－９表达，抑制细胞凋亡，延缓皮肤衰老。　

关键词：皮肤衰老；黑果枸杞原花青素；氧化损伤；半胱氨酸蛋白酶一９；半胱氨酸蛋白酶一３　

ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－２６６Ｘ．２０１８．１０．００９　

中图分类号：Ｒ８２８．５　文献标志码：Ａ　文章编号：１００２－２６６Ｘ（２０１８）１０－００３２－０４　

黑果枸杞为茄科枸杞属，为传统名贵药材，主要　

基金项目：青海省应用基础研究计划项目（２０１６一ＺＪ－７９２）。　

长于我国柴达木盆地一带和欧洲中亚地带，具有降　

通信作者：马文宇（Ｅ—ｍａｉｌ：ｍａｗｅｎｙｕ７３０１２６＠１６３．ｃｏｎ）　

ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　ｓｔｅｒｅｏｌｄｇｉｃａｌ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ，　［Ｊ］．ＥＸｐｅｒｔ　Ｒｅｖ　Ｎｅｕｍｔｈｅｒ，２０１６，１６（９）：１１１１－１１１９．　

２０１３，１５２２（７）：７６—８７．　’　

［１２］Ｒｏｓｏｃｈｏｗｉｃｚ　ＴＷ，Ｗｒｏｔｅｋ　Ｓ，Ｋｏｚａｋ　Ｗ．Ａｘｏｎａｌ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｉｎｈｉｂ—　

［６］Ｗａｎｇ　Ｔ，Ｊｉａ　Ｌ，Ｌｖ　Ｂ，ｅｔａ１．Ｈｕｍａｎ　ｅｒｍｉｎ（ｈＥｒｍｉｎ），ａ　ｎｅｗ　ｏｌｉ—　ｉｔｏｒｓ：ｅｍｅｒｇｉｎｇ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｏｐｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｎｅｕｒｏｌ　Ｂｅｌｇ，２０１５，　

ｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｅｐｉｌｅｐｔｉｃ　ｓｅｉ—　

ｌ１５（４）：５２７－５３２．　

ｚｕｒｅ［Ｊ］．Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ，２０１１，１３６７（１３６７）：７７—８４．　

［１３］Ｌａｕｒｓｅｎ　ＬＳ，Ｃｈａｎ　ＣＷ，Ｆｆｒｅｎｃｈ—Ｃｏｎｓｔａｎｔ　Ｃ．Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｙｅｌｉｎ　

［７］Ｒｅｅｖｅｓ　Ｃ，Ｔａｃｈｒｏｕｎｔ　Ｍ，Ｔｈｏｍａｓ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｍｂｉｎｅｄ　Ｅｘ　ｒｉｖｅ　９．　

ｂａｓｉｃ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｍＲＮＡ　ｉｎ　ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅｓ　ｉｓ　ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｉｎｔｅｇｒｉｎ　ａｃ－　

４Ｔ　ＭＲＩ　ａｎｄ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｔｕｄｙ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ａｎｄ　

ｔｉｖａｆｉｏｎ　ａｎｄ　ｈｎＲＮＰ－Ｋ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌ，２０１１，１９２（５）：７９７－８１１．　

ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｎｅｏｃｏｒｔｉｃａｌ　ｒｅｓｅｃｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｆｏｃａｌ　ｅｐｉｌｅｐｓｙ［Ｊ］．Ｂｒａｉｎ　

［１４］Ｐａｉｖａｌａｉｎｅｎ　Ｓ，Ｈｅａｐｅ　ＡＭ．Ｍｙｅｌｉｎ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　ａｎｄ　

Ｐａｔｈｏｌ，２０１６，２６（３）：３１９－３３３．　．　

ｇａｌａｃｔｏｓｙｌｅｅｒｅｂｒｏｓｉｄｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　Ｓｃｈｗａｎｎ　ｃｅｌｌｓ　ｄｕｒｉｎｇ　ｍｙｅｌｉｎａ—　

Ｌ８］袁平，胡晓，王建怡．少突胶质细胞在癫痫中的研究进展［Ｊ］，　ｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｃｅｌｌ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２００７，３５（３）：４３６－４４６．　

中华神经医学杂志，２０１３，１２（６）：６４６－６４８．　

［１５］袁平，胡晓，王俊，等．难治性癫痫致痫灶中少突胶质细胞改变　

［９］Ｃｈｅｎｇ　ＰＦ，Ｒｅｎ　ＹＦ．Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ　ａｔ－Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ　ｍｏｄｕｌａｔｅ　ｍＴＯＲ　ｓｉｇ—　

的观察研究［Ｊ］．中国神经免疫学和神经病学杂志，２０１３，２０　

ｎａｔｉｎｇ　ｔｏ　ｒｅｇｕｌａｔｅ　ｗｈｉｔｅ　ｍａｔｔｅｒ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｌｅｓｉｏｎｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　

（６）：４００－４０４．　

ｃｈｒｏｎｉｃ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｈｙｐｏｐｅｒｆｕｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ　Ｒｅｓ，２０１６，４１　［１６］齐振波，王修楠，王斐，等．慢性癫痫与抑郁共病大鼠脑白质中　

（１２）：３２７２－３２７７．　

髓鞘碱性蛋白ＭＢＰ的表达变化［Ｊ］．医学研究杂志，２０１４，４３　

［１０］Ｈｏｎｇ　Ｓ，Ｒｅｍａｄｅ　ＡＧ，Ｓｈｉｙｒａｅｖ　ＳＡ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｃｉｐｒｏｃａｌ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　

（７）：７９—８３．　

ｂｅｔｗｅｅｎ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｔｙｐｅ　１　ｍａｔｉｒｘ　ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｌｇｅｓｉｃ　

［１７］Ｓｈｉｎ　Ｄ，Ｌｉｎ　ＳＴ，Ｆｕ　ＹＨ，ｅｔ　ａ１．Ｖｅｒｙ　ｌａｒｇｅ　Ｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ—Ｃｏｕｐｌｅｄ　ｒｅ—　

ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｏｆ　ｍｙｅｌｉｎ　ｂａｓｉｃ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｏｎｔｉｒｂｕｔｅｓ　ｔｏ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ　

ｃｅｐｔｏｒ　１　ｒｅｇｕｌａｔｅｓ　ｍｙｅｌｉｎ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｖｉａ　Ｇａｓ／ＧｃＬｑ－ｍｅ—　

ｐａｉｎ［Ｊ］．Ｂｒａｉｎ　Ｂｅｈａｖ　Ｉｍｍｕｎ，２０１７，６０：２８２－２９２．　

ｄｉａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅｓ　Ａ／Ｃ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　Ｕ　Ｓ　Ａ，２０１３，　

［１１］Ｖａｌｌａｔ　ＪＭ，Ｍａｇｙ　Ｌ，Ｃｉｒｏｎ　Ｊ，ｅｔ　ａｔ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｏｐｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｍａｎ－　１１０（４７）：１９１０１—１９１０６．　（收稿日期：２０１７－０８－０８）　

ａｇｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ａｎｔｉ—ＭＡＧ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　

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