2024年5月31日发(作者：线兴发)
观察大鼠脑神经元c-Fos蛋白表达的方法
实验46 观察大鼠脑神经元c-Fos蛋白表达的方法
【目的要求】
1. 学会用免疫组织化学技术显示脑神经元中c-Fos蛋白表达的方法。
2. 了解脑内神经元c-Fos蛋白表达的特点。
【基本原理】
c-Fos蛋白是即刻早期基因c-fos转录翻译的产物，是一种核内磷酸化蛋白。基础状
态下，c-Fos蛋白在中枢神经系统的水平非常低，然而各种应激状态下，c-Fos蛋白的表
达能够被瞬时快速地诱导。中枢神经系统内c-Fos蛋白的表达依赖于应激源的内在特性、
强度和持续时间。由于c-Fos蛋白的诱导表达能在很大程度上反映应激诱导的神经元活动
情况，故其常被作为神经元激活的标志，并广泛用于示踪特定条件下的神经功能通路。实
验中应用免疫学抗体与抗原特异性结合的原理识别c-Fos蛋白，并通过与抗体相联接的酶
催化底物改变颜色使之显示出来，从而对其进行定位和半定量研究。大鼠不同脑区c-Fos
蛋白的表达程度反映了神经元激活的空间模式。
【材料与器械】
大白鼠、常用手术器械、冰冻切片机、显微镜、24孔或48孔培养板或称量瓶
(25×30)、移液器(10 μL、100 μL、200 μL、1000 μL)、移液器枪头(10 μL、200 μL、
1000 μL)、滴管、粘片剂处理的载玻片、盖玻片、小毛笔、染色缸、2%戊巴比妥钠、0.1
mol/L磷酸盐缓冲液(PB，pH7.4)、0.01 mol/L磷酸盐缓冲生理盐水(PBS，pH7.4)、4,
多聚甲醛(0.1 mol/L PB配制)、20%蔗糖(0.1 mol/L PB配制)、防冻液(丙三醇:乙二
醇:PBS = 2:3:5)、OCT包埋剂、3%过氧化氢/甲醇溶液、10%正常羊血清或牛血清白蛋
白、30%Triton X-100、兔抗大鼠c-Fos抗体、生物素化羊抗兔IgG、链亲和素辣根过氧
化物酶复合物、DAB显色液、Mayer’s苏木精染液、梯度酒精(75%、95%、100%)、
二甲苯、中性树胶。 【实验步骤】
1. 麻醉大鼠
2%戊巴比妥钠(100 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠。
2. 脑组织的固定及脱水处理
左心室穿刺至主动脉升部，先灌流0.01 mol/L PBS约200 mL，快速冲洗血液，随
后灌注冷的4,多聚甲醛约400 mL，先快后慢，持续约1 h。
取脑后，将其置于4%多聚甲醛(4?)后固定4,6 h，或储存过夜。然后将脑组织置于
20%蔗糖(4?)中脱水，至脑沉底。若要较长时间保存脑组织，脱水后，放入防冻
液中，存于-20?冰箱。
2024年5月31日发(作者：线兴发)
观察大鼠脑神经元c-Fos蛋白表达的方法
实验46 观察大鼠脑神经元c-Fos蛋白表达的方法
【目的要求】
1. 学会用免疫组织化学技术显示脑神经元中c-Fos蛋白表达的方法。
2. 了解脑内神经元c-Fos蛋白表达的特点。
【基本原理】
c-Fos蛋白是即刻早期基因c-fos转录翻译的产物，是一种核内磷酸化蛋白。基础状
态下，c-Fos蛋白在中枢神经系统的水平非常低，然而各种应激状态下，c-Fos蛋白的表
达能够被瞬时快速地诱导。中枢神经系统内c-Fos蛋白的表达依赖于应激源的内在特性、
强度和持续时间。由于c-Fos蛋白的诱导表达能在很大程度上反映应激诱导的神经元活动
情况，故其常被作为神经元激活的标志，并广泛用于示踪特定条件下的神经功能通路。实
验中应用免疫学抗体与抗原特异性结合的原理识别c-Fos蛋白，并通过与抗体相联接的酶
催化底物改变颜色使之显示出来，从而对其进行定位和半定量研究。大鼠不同脑区c-Fos
蛋白的表达程度反映了神经元激活的空间模式。
【材料与器械】
大白鼠、常用手术器械、冰冻切片机、显微镜、24孔或48孔培养板或称量瓶
(25×30)、移液器(10 μL、100 μL、200 μL、1000 μL)、移液器枪头(10 μL、200 μL、
1000 μL)、滴管、粘片剂处理的载玻片、盖玻片、小毛笔、染色缸、2%戊巴比妥钠、0.1
mol/L磷酸盐缓冲液(PB，pH7.4)、0.01 mol/L磷酸盐缓冲生理盐水(PBS，pH7.4)、4,
多聚甲醛(0.1 mol/L PB配制)、20%蔗糖(0.1 mol/L PB配制)、防冻液(丙三醇:乙二
醇:PBS = 2:3:5)、OCT包埋剂、3%过氧化氢/甲醇溶液、10%正常羊血清或牛血清白蛋
白、30%Triton X-100、兔抗大鼠c-Fos抗体、生物素化羊抗兔IgG、链亲和素辣根过氧
化物酶复合物、DAB显色液、Mayer’s苏木精染液、梯度酒精(75%、95%、100%)、
二甲苯、中性树胶。 【实验步骤】
1. 麻醉大鼠
2%戊巴比妥钠(100 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠。
2. 脑组织的固定及脱水处理
左心室穿刺至主动脉升部，先灌流0.01 mol/L PBS约200 mL，快速冲洗血液，随
后灌注冷的4,多聚甲醛约400 mL，先快后慢，持续约1 h。
取脑后，将其置于4%多聚甲醛(4?)后固定4,6 h，或储存过夜。然后将脑组织置于
20%蔗糖(4?)中脱水，至脑沉底。若要较长时间保存脑组织，脱水后，放入防冻
液中，存于-20?冰箱。