2024年5月19日发(作者：矫黎昕)

昆明医科大学学报2012，（12）：33～35

JournalofKunmingMedicalUniversity

CN53-1221

/

R

Ｎｏｖａ１的两种抗体的免疫印迹实验的比较

李华玲，陈文飞，焦红梅，申丽

（扬州大学医学院，江苏扬州225001）

［摘要］目的探讨两个不同公司的同一种抗体神经－肿瘤腹侧抗原（Ｎｏｖａ１）在大鼠脑组织中的表达，比较

其异同．方法采用免疫组织化学法（ＩＨＣ）和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ（ＷＢ）进行检测．结果ＩＨＣ显示Ｎｏｖａ１在大脑中

这两种抗体的分布广泛，在神经细胞的轴突或树突中都有表达；ＷＢ显示在５５ｋＤａ处都有很清晰的条带．结论

表达清晰，既可以用于ＩＨＣ，也可以用于ＷＢ实验．

［关键词］大鼠脑组织；Ｎｏｖａ１；不同抗体；免疫印迹实验

［中图分类号］Ｒ４４６．６［文献标识码］Ａ［文章编号］１００３－４７０６（２０１２）１２－００３３－０３

ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＩｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇｏｆＮｏｖａ１ｗｉｔｈＴｗｏＤｉｆｆｅｒｅｎｔ

ＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓｉｎＲａｔＢｒａｉｎ

ＬＩＨｕａ－ｌｉｎｇ，ＣＨＥＮＷｅｎ－ｆｅｉ，ＪＩＡＯＨｏｎｇ－ｍｅｉ，ＳＨＥＮＬｉ

（MedicalcollegeofYangzhouUniversity，YangzhouJiangsu２２５００１，China）

［Abstract］ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮｅｕｒｏ－ｏｎｃｏｌｏｇｉｃａｌｖｅｎｔｒａｌａｎｔｉｇｅｎ１（Ｎｏｖａ１，

ｎｅｕｒｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｓｐｌｉｃｉｎｇｆａｃｔｏｒ）ｉｎｒａｔｂｒａｉｎｗｉｔｈｔｗｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｍｐａｎｙ．Ｍｅｔｈｏｄ

Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（ＩＨＣ）ａｎｄＷｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ（ＷＢ）ｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮｏｖａ１．

ＲｅｓｕｌｔｓＮｏｖａ１ｗａｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄａｌｍｏｓｔｉｎｔｈｅｗｈｏｌｅｂｒａｉｎ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｉｎｄｅｎｄｒｉｔｅｓａｎｄａｘｏｎｓ．ＷＢｓｈｏｗｅｄｃｌｅａｒｌｙ

ｂａｎｄｓａｔ５５ｋＤａ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＯｕｒｄａｔａｓｕｇｇｅｓｔｔｈａｔｔｗｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｃａｎｂｅｕｓｅｄｉｎＩＨＣａｎｄＷＢｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｗｉｔｈ

ｓａｍｅｑｕａｌｉｔｙ．

［Keywords］Ｒａｔｂｒａｉｎ；Ｎｏｖａ１；Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｎｔｉｂｏｄｙ；Ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ

在做分子生物学的实验室，都要用到抗体，但

大家常常会有一个困惑，哪个公司的抗体好用呢

［１－４］

．生产抗体的国内外公司都很多，选择到好的

抗体，就可以出结果，但即使是同一个公司的不

同抗体质量也是有差异的，因此，本实验用了两

个不同公司的一种抗体进行检测，Ｎｏｖａ－１（神

经－肿瘤腹侧抗原，Ｎｏｕｒｏ－ＯｎｃｏｌｏｇｉｃａｌＶｅｎｔｒａｌ

Ａｎｔｉｇｅｎ１），并做了免疫组化和Ｗｅｓｔｅｒｎ实验，以供

参考．

实验用健康清洁级雄性Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠，

由扬州大学医学院实验动物中心提供，体质量

２５０～３００ｇ．

1.2主要试剂

Ｎｏｖａ１多克隆抗体（Ｓｉｇｍａ公司，

ＨＰＡ００４１５５），Ｎｏｖａ１多克隆抗体（Ｌｉｆｅｓｐａｎ公司，

ＬＳ－Ｂ３０８５）；免疫组化亲和素－生物素－过氧化物

酶（ＡＢＣ）试剂盒、３，３－二氨基联苯胺（ＤＡＢ）

显色试剂盒、辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠抗

体（中杉金桥生物技术公司）．ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ

ＥＣＬＲｅａｇｅｎｔ（ＧＥＨｅａｌｔｈ公司．裂解液（４％ＳＤＳ，

０．１６ＭＴｒｉｓ，１０％甘油，蛋白酶抑制剂（ｃｏｃｋｔａｉｌ）

需新鲜配制．

1.3方法

1材料与方法

1.1实验动物

［基金项目］国家自然科学基金资助项目（８１１００８６２，３１１００６５２）

［作者简介］李华玲（１９７１～），女，江苏扬州市人，医学博士，讲师，主要从事缺氧的分子机制研究工作．

34

昆明医科大学学报

第３３卷

1.3.1大鼠脑组织切片制备大鼠麻醉，预冷的

０．９％氯化钠注射液２５０ｍＬ快速灌注升主动脉，

４℃４％多聚甲醛溶液２００ｍＬ固定，断头取脑，置

４％多聚甲醛溶液２周左右，石蜡包埋、切片（厚

）．５μｍ

1.3.2Ｎｏｖａ１免疫组化检测ＬＳＡＢ法免疫组化染

色，具体步骤：切片滴加３％过氧化氢溶液，室温

孵育１０ｍｉｎ；微波抗原修复２０ｍｉｎ；滴加正常山羊

血清，室温孵育２０ｍｉｎ；滴加Ｎｏｖａ１抗体（抗体浓

度１：１０００），４℃孵育过夜；滴加生物素标记的第

二抗体，３７℃孵育６０ｍｉｎ；滴加链亲和素－过氧

化物酶溶液，３７℃孵育３０ｍｉｎ．上述各步骤后，

用０．１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ洗３次，每次５ｍｉｎ．用新鲜配制

的ＤＡＢ显色３～５ｍｉｎ，显微镜下观察，阳性细胞

呈棕黄色颗粒，常规脱水、透明，最后封片．阴

性对照组以ＰＢＳ代替一抗，其余步骤相同．

1.3.3Ｎｏｖａ１Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测大鼠脑组织

裂解后，提取蛋白质并测定浓度，取５０μｇ样品经

１０％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分离，并转移到硝酸纤维膜上，

用５０ｇ／ＬＰＢＳ脱脂奶粉封闭，以所检测蛋白为一

抗，以辣根过氧化物酶标记的为二抗，ＥＣＬ显

色．

2结果

2.1Ｎｏｖａ１免疫组化染色结果

由图１可见，Ｎｏｖａ１在皮层细胞的胞浆和胞核

都表达，甚至在轴突或树突中表达，Ｌｉｆｅｓｐａｎ公司

的抗体（图１Ａ）略微比Ｓｉｇｍａ公司的抗体（图

１Ｂ）的表达要深一些，但形态学特征都是一致

的．

2.2Ｎｏｖａ１Ｗｅｓｔｒｎ－ｂｌｏｔ结果

另外，用大鼠的全脑组织提取了蛋白质，并同

时用两种抗体做了Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ，结果如图２，在

５５ｋＤａ处都有很清晰的条带．

Ａ

图1Ｎｏｖａ１在皮层的表达

Ｆｉｇ．1ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮｏｖａ１ｉｎｓｔｒｉａｔｕｍｃｏｒｔｅｘ

Ａ：Ｌｉｆｅｓｐａｎ公司抗体（１：５００）；Ｂ：Ｓｉｇｍａ公司抗体（１：５００）．

Ｂ

3讨论

笔者采用大鼠的脑组织，分别用免疫组化法

和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ法比较了两个不同公司的抗体．

ＩＨＣ的结果显示Ｎｏｖａ－１在大鼠脑部分布广泛，尤

其是在皮层、海马和丘脑区的神经细胞中的表达

最为丰富，两个抗体没有明显的区别，也显示出

了一致的结果，在树突或轴突中都有表达．同时

在全脑组织中检测了Ｎｏｖａ－１的蛋白质表达量，表

达基本一致，说明Ｎｏｖａ－１确实是脑部特异性的蛋

白质．

有研究报道，Ｎｏｖａ－１是神经特异性的剪接因

子．Ｎｏｖａ是神经副肿瘤性眼阵挛共济失调症

图2Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示Ｎｏｖａ１在正常大鼠脑组织

的表达

Ｆｉｇ．2ＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｓｈｏｗｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮｏｖａ１

ｉｎｎｏｒｍａｌｒａｔｂｒａｉｎｕｓｉｎｇｔｈｅａｎｔｉ－Ｎｏｖａ１

Ａ：Ｌｉｆｅｓｐａｎ公司抗体（１：１０００）；

Ｂ：Ｓｉｇｍａ公司抗体（１：１０００）．

第12期

李华玲，等．Ｎｏｖａ１的两种抗体的免疫印迹实验的比较

35

（ｐａｒａｎｅｏｐｌａｓｔｉｃｏｐｓｏｃｌｏｎｕｓｍｙｏｃｌｏｎｕｓａｔａｘｉａ，ＰＯＭＡ）

患者血清中一种抗体的抗原

［５］

，ＰＯＭＡ抗血清与

Ｎｏｖａ蛋白结合而闭掉它的ＲＮＡ结合位点可能是导

致这种疾病的直接因素．Ｎｏｖａ是发现最早、同时

也是目前在已知的神经系统特异分布的ＲＮＡ结合

蛋白中功能研究最为清楚的，调控了与神经突触

功能密切相关的一组基因

［６］

．霍华德休斯医学院

（ＨＨＭＩ）研究人员ＲｏｂｅｒｔＢ．Ｄａｒｎｅｌｌ等绘制出了图

谱

［７］

，描述了Ｎｏｖａ蛋白活性的规律．近日，Ｄａｒｎｅｌ

实验室报道，Ｎｏｖａ与它的ＲＮＡ靶标（ＧｌｙＲα２）

共同位于轴突中

［８］

，这更进一步证实了本实验，

Ｎｏｖａ－１的剪接作用在神经突起部位也有．

另外，常常有疑惑的一个问题是：一种抗体

是否可同时做几种实验．如果能做ＷＢ是否可做

ＩＨＣ、及ＩＣＣ如果能做ＩＨＣ是否可做ＩＣＣ，等等．

虽然，Ｓｉｇｍａ公司的网站上只介绍了Ｎｏｖａ－１的抗

体是用于做免疫组化实验，未显示能否用于ＷＢ，

笔者的实验结果也显示了清晰的条带．总之，本

研究选用的这两种抗体表达清晰．

［参考文献］

［１］官兵，周晓军．淋巴瘤病理诊断常用免疫组化抗体的

选择策略［Ｊ］．临床与实验病理学杂志，２０１１，２７（１）：

１－９．

［２］陈耀祖，张娟，王旻．用于抗体／抗体片段表达的系统

及其高表达策略［Ｊ］．中国生物工程杂志，２０１１，３１

（９）：７６－８１．

［３］王增强，张桂云，蒋岩，等．三种ＨＩＶ抗体确证试剂盒检

测早期感染的比较［Ｊ］．中华预防医学杂志，２０１１，４５

（５）：４３０－４３４．

［４］周小鸽．淋巴瘤病理诊断中的抗体选择［Ｊ］．诊断病

理学杂志，２０１０，（１）：４－６．

［５］ＢＵＣＫＡＮＯＶＩＣＨＲＪＹＹＹ，ＤＡＲＮＥＬＬＲＢ．Ｔｈｅｏｎｃｏ－

ｎｅｕｒａｌａｎｔｉｇｅｎＮｏｖ－１ｉｓａｎｅｕｒｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃＲＮＡ－ｂｉｎｄｉｎｇ

ｐｒｏｔｅｉｎ，ｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｗｈｉｃｈｉｓｉｎｈｉｂｉｔｅｄｂｙｐａｒａｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ

ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ［Ｊ］．ＪＮｅｕｒｏｓｃｉ，１９９６，１６：１１１４－１１２２．

［６］ＵＬＥＪＵＡ，ＳＰＥＮＣＥＲＪＷＡ，ＨＵＪＳＣＭ，ｅｔａｌ．Ｎｏｖａｒ－

ｅｇｕｌａｔｅｓｂｒａｉｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｓｐｌｉｃｉｎｇｔｏｓｈａｐｅｔｈｅｓｙｎａｐｓｅ［Ｊ］．

ＮａｔＧｅｎｅｔ，２００５，３７：８４４－８５２．

［７］ＵＬＥＪＳＧ，ＭＥＬＥＡＲＭ，ＷＡＮＧＸＴＢ，ｅｔａｌ．ＡｎＲＮＡ

ｍａｐｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇＮｏｖａ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｓｐｌｉｃｉｎｇｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．

Ｎａｔｕｒｅ，２００６，４４４：５８０－５８６．

［８］ＲＡＣＣＡＣＧＡ，ＥＯＭＴＵＪ，ＴＲＩＬＬＥＲＡＤＲＢ．Ｔｈｅ

ｎｅｕｒｏｎａｌｓｐｌｉｃｉｎｇｆａｃｔｏｒｎｏｖａｃｏ－ｌｏｃａｌｉｚｅｓｗｉｔｈｔａｒｇｅｔＲＮＡｓ

ｉｎｔｈｅｄｅｎｄｒｉｔｅ［Ｊ］．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎｎｅｕｒａｌｃｉｒｃｕｉｔｓ，２０１０，４：５．

（２０１２－０９－１９收稿）

2024年5月19日发(作者：矫黎昕)

昆明医科大学学报2012，（12）：33～35

JournalofKunmingMedicalUniversity

CN53-1221

/

R

Ｎｏｖａ１的两种抗体的免疫印迹实验的比较

李华玲，陈文飞，焦红梅，申丽

（扬州大学医学院，江苏扬州225001）

［摘要］目的探讨两个不同公司的同一种抗体神经－肿瘤腹侧抗原（Ｎｏｖａ１）在大鼠脑组织中的表达，比较

其异同．方法采用免疫组织化学法（ＩＨＣ）和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ（ＷＢ）进行检测．结果ＩＨＣ显示Ｎｏｖａ１在大脑中

这两种抗体的分布广泛，在神经细胞的轴突或树突中都有表达；ＷＢ显示在５５ｋＤａ处都有很清晰的条带．结论

表达清晰，既可以用于ＩＨＣ，也可以用于ＷＢ实验．

［关键词］大鼠脑组织；Ｎｏｖａ１；不同抗体；免疫印迹实验

［中图分类号］Ｒ４４６．６［文献标识码］Ａ［文章编号］１００３－４７０６（２０１２）１２－００３３－０３

ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＩｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇｏｆＮｏｖａ１ｗｉｔｈＴｗｏＤｉｆｆｅｒｅｎｔ

ＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓｉｎＲａｔＢｒａｉｎ

ＬＩＨｕａ－ｌｉｎｇ，ＣＨＥＮＷｅｎ－ｆｅｉ，ＪＩＡＯＨｏｎｇ－ｍｅｉ，ＳＨＥＮＬｉ

（MedicalcollegeofYangzhouUniversity，YangzhouJiangsu２２５００１，China）

［Abstract］ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮｅｕｒｏ－ｏｎｃｏｌｏｇｉｃａｌｖｅｎｔｒａｌａｎｔｉｇｅｎ１（Ｎｏｖａ１，

ｎｅｕｒｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｓｐｌｉｃｉｎｇｆａｃｔｏｒ）ｉｎｒａｔｂｒａｉｎｗｉｔｈｔｗｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｍｐａｎｙ．Ｍｅｔｈｏｄ

Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（ＩＨＣ）ａｎｄＷｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ（ＷＢ）ｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮｏｖａ１．

ＲｅｓｕｌｔｓＮｏｖａ１ｗａｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄａｌｍｏｓｔｉｎｔｈｅｗｈｏｌｅｂｒａｉｎ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｉｎｄｅｎｄｒｉｔｅｓａｎｄａｘｏｎｓ．ＷＢｓｈｏｗｅｄｃｌｅａｒｌｙ

ｂａｎｄｓａｔ５５ｋＤａ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＯｕｒｄａｔａｓｕｇｇｅｓｔｔｈａｔｔｗｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｃａｎｂｅｕｓｅｄｉｎＩＨＣａｎｄＷＢｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｗｉｔｈ

ｓａｍｅｑｕａｌｉｔｙ．

［Keywords］Ｒａｔｂｒａｉｎ；Ｎｏｖａ１；Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｎｔｉｂｏｄｙ；Ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ

在做分子生物学的实验室，都要用到抗体，但

大家常常会有一个困惑，哪个公司的抗体好用呢

［１－４］

．生产抗体的国内外公司都很多，选择到好的

抗体，就可以出结果，但即使是同一个公司的不

同抗体质量也是有差异的，因此，本实验用了两

个不同公司的一种抗体进行检测，Ｎｏｖａ－１（神

经－肿瘤腹侧抗原，Ｎｏｕｒｏ－ＯｎｃｏｌｏｇｉｃａｌＶｅｎｔｒａｌ

Ａｎｔｉｇｅｎ１），并做了免疫组化和Ｗｅｓｔｅｒｎ实验，以供

参考．

实验用健康清洁级雄性Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠，

由扬州大学医学院实验动物中心提供，体质量

２５０～３００ｇ．

1.2主要试剂

Ｎｏｖａ１多克隆抗体（Ｓｉｇｍａ公司，

ＨＰＡ００４１５５），Ｎｏｖａ１多克隆抗体（Ｌｉｆｅｓｐａｎ公司，

ＬＳ－Ｂ３０８５）；免疫组化亲和素－生物素－过氧化物

酶（ＡＢＣ）试剂盒、３，３－二氨基联苯胺（ＤＡＢ）

显色试剂盒、辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠抗

体（中杉金桥生物技术公司）．ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ

ＥＣＬＲｅａｇｅｎｔ（ＧＥＨｅａｌｔｈ公司．裂解液（４％ＳＤＳ，

０．１６ＭＴｒｉｓ，１０％甘油，蛋白酶抑制剂（ｃｏｃｋｔａｉｌ）

需新鲜配制．

1.3方法

1材料与方法

1.1实验动物

［基金项目］国家自然科学基金资助项目（８１１００８６２，３１１００６５２）

［作者简介］李华玲（１９７１～），女，江苏扬州市人，医学博士，讲师，主要从事缺氧的分子机制研究工作．

34

昆明医科大学学报

第３３卷

1.3.1大鼠脑组织切片制备大鼠麻醉，预冷的

０．９％氯化钠注射液２５０ｍＬ快速灌注升主动脉，

４℃４％多聚甲醛溶液２００ｍＬ固定，断头取脑，置

４％多聚甲醛溶液２周左右，石蜡包埋、切片（厚

）．５μｍ

1.3.2Ｎｏｖａ１免疫组化检测ＬＳＡＢ法免疫组化染

色，具体步骤：切片滴加３％过氧化氢溶液，室温

孵育１０ｍｉｎ；微波抗原修复２０ｍｉｎ；滴加正常山羊

血清，室温孵育２０ｍｉｎ；滴加Ｎｏｖａ１抗体（抗体浓

度１：１０００），４℃孵育过夜；滴加生物素标记的第

二抗体，３７℃孵育６０ｍｉｎ；滴加链亲和素－过氧

化物酶溶液，３７℃孵育３０ｍｉｎ．上述各步骤后，

用０．１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ洗３次，每次５ｍｉｎ．用新鲜配制

的ＤＡＢ显色３～５ｍｉｎ，显微镜下观察，阳性细胞

呈棕黄色颗粒，常规脱水、透明，最后封片．阴

性对照组以ＰＢＳ代替一抗，其余步骤相同．

1.3.3Ｎｏｖａ１Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测大鼠脑组织

裂解后，提取蛋白质并测定浓度，取５０μｇ样品经

１０％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分离，并转移到硝酸纤维膜上，

用５０ｇ／ＬＰＢＳ脱脂奶粉封闭，以所检测蛋白为一

抗，以辣根过氧化物酶标记的为二抗，ＥＣＬ显

色．

2结果

2.1Ｎｏｖａ１免疫组化染色结果

由图１可见，Ｎｏｖａ１在皮层细胞的胞浆和胞核

都表达，甚至在轴突或树突中表达，Ｌｉｆｅｓｐａｎ公司

的抗体（图１Ａ）略微比Ｓｉｇｍａ公司的抗体（图

１Ｂ）的表达要深一些，但形态学特征都是一致

的．

2.2Ｎｏｖａ１Ｗｅｓｔｒｎ－ｂｌｏｔ结果

另外，用大鼠的全脑组织提取了蛋白质，并同

时用两种抗体做了Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ，结果如图２，在

５５ｋＤａ处都有很清晰的条带．

Ａ

图1Ｎｏｖａ１在皮层的表达

Ｆｉｇ．1ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮｏｖａ１ｉｎｓｔｒｉａｔｕｍｃｏｒｔｅｘ

Ａ：Ｌｉｆｅｓｐａｎ公司抗体（１：５００）；Ｂ：Ｓｉｇｍａ公司抗体（１：５００）．

Ｂ

3讨论

笔者采用大鼠的脑组织，分别用免疫组化法

和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ法比较了两个不同公司的抗体．

ＩＨＣ的结果显示Ｎｏｖａ－１在大鼠脑部分布广泛，尤

其是在皮层、海马和丘脑区的神经细胞中的表达

最为丰富，两个抗体没有明显的区别，也显示出

了一致的结果，在树突或轴突中都有表达．同时

在全脑组织中检测了Ｎｏｖａ－１的蛋白质表达量，表

达基本一致，说明Ｎｏｖａ－１确实是脑部特异性的蛋

白质．

有研究报道，Ｎｏｖａ－１是神经特异性的剪接因

子．Ｎｏｖａ是神经副肿瘤性眼阵挛共济失调症

图2Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示Ｎｏｖａ１在正常大鼠脑组织

的表达

Ｆｉｇ．2ＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｓｈｏｗｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮｏｖａ１

ｉｎｎｏｒｍａｌｒａｔｂｒａｉｎｕｓｉｎｇｔｈｅａｎｔｉ－Ｎｏｖａ１

Ａ：Ｌｉｆｅｓｐａｎ公司抗体（１：１０００）；

Ｂ：Ｓｉｇｍａ公司抗体（１：１０００）．

第12期

李华玲，等．Ｎｏｖａ１的两种抗体的免疫印迹实验的比较

35

（ｐａｒａｎｅｏｐｌａｓｔｉｃｏｐｓｏｃｌｏｎｕｓｍｙｏｃｌｏｎｕｓａｔａｘｉａ，ＰＯＭＡ）

患者血清中一种抗体的抗原

［５］

，ＰＯＭＡ抗血清与

Ｎｏｖａ蛋白结合而闭掉它的ＲＮＡ结合位点可能是导

致这种疾病的直接因素．Ｎｏｖａ是发现最早、同时

也是目前在已知的神经系统特异分布的ＲＮＡ结合

蛋白中功能研究最为清楚的，调控了与神经突触

功能密切相关的一组基因

［６］

．霍华德休斯医学院

（ＨＨＭＩ）研究人员ＲｏｂｅｒｔＢ．Ｄａｒｎｅｌｌ等绘制出了图

谱

［７］

，描述了Ｎｏｖａ蛋白活性的规律．近日，Ｄａｒｎｅｌ

实验室报道，Ｎｏｖａ与它的ＲＮＡ靶标（ＧｌｙＲα２）

共同位于轴突中

［８］

，这更进一步证实了本实验，

Ｎｏｖａ－１的剪接作用在神经突起部位也有．

另外，常常有疑惑的一个问题是：一种抗体

是否可同时做几种实验．如果能做ＷＢ是否可做

ＩＨＣ、及ＩＣＣ如果能做ＩＨＣ是否可做ＩＣＣ，等等．

虽然，Ｓｉｇｍａ公司的网站上只介绍了Ｎｏｖａ－１的抗

体是用于做免疫组化实验，未显示能否用于ＷＢ，

笔者的实验结果也显示了清晰的条带．总之，本

研究选用的这两种抗体表达清晰．

［参考文献］

［１］官兵，周晓军．淋巴瘤病理诊断常用免疫组化抗体的

选择策略［Ｊ］．临床与实验病理学杂志，２０１１，２７（１）：

１－９．

［２］陈耀祖，张娟，王旻．用于抗体／抗体片段表达的系统

及其高表达策略［Ｊ］．中国生物工程杂志，２０１１，３１

（９）：７６－８１．

［３］王增强，张桂云，蒋岩，等．三种ＨＩＶ抗体确证试剂盒检

测早期感染的比较［Ｊ］．中华预防医学杂志，２０１１，４５

（５）：４３０－４３４．

［４］周小鸽．淋巴瘤病理诊断中的抗体选择［Ｊ］．诊断病

理学杂志，２０１０，（１）：４－６．

［５］ＢＵＣＫＡＮＯＶＩＣＨＲＪＹＹＹ，ＤＡＲＮＥＬＬＲＢ．Ｔｈｅｏｎｃｏ－

ｎｅｕｒａｌａｎｔｉｇｅｎＮｏｖ－１ｉｓａｎｅｕｒｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃＲＮＡ－ｂｉｎｄｉｎｇ

ｐｒｏｔｅｉｎ，ｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｗｈｉｃｈｉｓｉｎｈｉｂｉｔｅｄｂｙｐａｒａｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ

ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ［Ｊ］．ＪＮｅｕｒｏｓｃｉ，１９９６，１６：１１１４－１１２２．

［６］ＵＬＥＪＵＡ，ＳＰＥＮＣＥＲＪＷＡ，ＨＵＪＳＣＭ，ｅｔａｌ．Ｎｏｖａｒ－

ｅｇｕｌａｔｅｓｂｒａｉｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｓｐｌｉｃｉｎｇｔｏｓｈａｐｅｔｈｅｓｙｎａｐｓｅ［Ｊ］．

ＮａｔＧｅｎｅｔ，２００５，３７：８４４－８５２．

［７］ＵＬＥＪＳＧ，ＭＥＬＥＡＲＭ，ＷＡＮＧＸＴＢ，ｅｔａｌ．ＡｎＲＮＡ

ｍａｐｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇＮｏｖａ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｓｐｌｉｃｉｎｇｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．

Ｎａｔｕｒｅ，２００６，４４４：５８０－５８６．

［８］ＲＡＣＣＡＣＧＡ，ＥＯＭＴＵＪ，ＴＲＩＬＬＥＲＡＤＲＢ．Ｔｈｅ

ｎｅｕｒｏｎａｌｓｐｌｉｃｉｎｇｆａｃｔｏｒｎｏｖａｃｏ－ｌｏｃａｌｉｚｅｓｗｉｔｈｔａｒｇｅｔＲＮＡｓ

ｉｎｔｈｅｄｅｎｄｒｉｔｅ［Ｊ］．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎｎｅｕｒａｌｃｉｒｃｕｉｔｓ，２０１０，４：５．

（２０１２－０９－１９收稿）