产胞外多糖的乳酸菌的简便筛选与鉴定-USB迷|专注于互联网分享

2024年6月13日发(作者：西门寄蓉)

圈田

产胞外多糖的乳酸菌的简便筛选与鉴定”

田丰伟１，丁虎生１，丁纳１，赵建新１，张灏１’２，陈

卫１

１（江南大学食品学院，江苏无锡，２１４１２２）２（江南大学食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡，２１４１２２）

摘

要

乳酸菌胞外多糖具有优良的功能性质。根据产胞外多糖乳酸菌的性质，开发了茵落拉丝法作为产胞外

多糖乳酸菌的简便初筛方法。以分离菌落在ＭＲｓ筛选培养基上的拉丝长度为初筛指标，以胞外多糖产量（硫

酸一苯酚法）为复筛指标，从自然发酵酸乳和自然发酵蔬菜中分离得到了３株胞外多糖产量较高的乳酸菌，经

ＡＰＩ细菌鉴定系统鉴定，分别被鉴定为短乳杆菌ＢＴ０８９８、植物乳杆菌ＮＹＣ３０和鼠李糖乳杆菌ＹＨＯＣｌ３７。

关键词乳酸菌，胞外多糖，筛选，鉴定，菌落拉丝

乳酸菌胞外多糖（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ

ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，

鉴于具有重要的食品工业应用价值和重要的生

文中根据产胞外多糖乳酸菌的性质，首次建立并

第一作者：硕士，讲师（陈卫为责任作者）。

国家高技术研究发展（８６３）计划；浙江省重大科技攻关（招标）项

目（２００６Ｃ１２０９５）

收稿日期ｔ２００７一ｌｏ一１６，改回日期：２００７—１２—２５

１材料和方法

１．１材料

１．１．１样品来源、化学试剂与培养基

待分离含乳酸菌样品为自然发酵牛乳和发酵蔬

菜，所有样品采样后４８ｈ内在Ｏ℃下送至实验室进行

分析。

脱脂乳粉购自光明乳业股份有限公司；ＡＰｌ５０

ＣＨ和ＡＰＩ

５０

ＣＨＬ试剂盒购自梅里埃（中国）有限

公司；其他试剂为国产常规生化纯和分析纯试剂。

ＭＲＳ培养基‘１２１，购自德国Ｍｅｒｃｋ公司；ＭＲＳ筛

选培养基（ＭＲ孓ｓ）：将ＭＲＳ培养基原始配方中的

２０．Ｏ

ｇ葡萄糖改为５．ｏｇ，并加５０．Ｏｇ蔗糖，其他组

分不变，不加琼脂为ＭＲＳ筛选液体培养基。Ｅ１１ｉｋｅｒ

琼脂培养基、Ｍ１７培养基等按照文献配制或购买自

Ｄｉｆｃｏ公司㈨。

１．１．２仪器设备

ＴＷ一２０精密水浴槽，德国Ｊｕｌａｂｏ公司；Ｕｎｉｖｅｒ—

ｓａｌ一３２Ｒ型冷冻式离心机，德国Ａｎｄｒｅａｓ

Ｈｅｔｔｉｃｈ

Ｇｍ—

ｂＨ＆Ｃｏ

ＫＧ公司；ＵＶ２ｌｏｏ紫外分光光度计，尤尼

柯（上海）仪器有限公司；电子天平，德国Ｍｅｔｔｌｅｒ－Ｔｏ—

ｌｅｄｏ

ＧｍｂＨ公司；微型旋涡混合仪，上海沪西分析仪

器厂；超净工作台，苏州安泰空气技术有限公司；生化

培养箱，南京实验仪器厂；高压蒸汽灭菌锅，上海华线

医用核子仪器有限公司；ｐＨ计，Ｍｅｔｔｌｅｒ－Ｔ０１ｅｄｏ

Ｇｍ—

ＰＭＢ５—２２３２—５摄影显微镜，麦克

奥迪实业集团有限公司；其他为实验室常规仪器设

１．２实验方法

１．２．１

样品中乳酸茵的分离

采用浇注平板分离法：利用Ｏ．１％无菌蛋白胨水

垫塑雯蔓塑鲞蔓圣塑ｆ星蔓丝塑！Ｉ

１５

ＥＰＳ）是乳酸菌在生长代谢过程中形成的位于细胞壁

外的粘液多糖或荚膜多糖，属于微生物胞外多糖的一

种。乳酸菌胞外多糖对于发酵乳制品形成良好的质

构特征起着十分重要的作用，由于乳酸菌ＥＰＳ作为

生物高分子的特性而能够改善产品的流变学特性，增

强产品的稳定性和持水能力，赋予产品良好的口感和

风味［１￣３］。此外研究发现，乳酸菌胞外多糖还具有突

出的生理功能，如抗肿瘤、调理肠道、免疫调节、抗致

突变、细胞保护和降低血清胆固醇等Ｈ’５］。

理活性，近年来产胞外多糖乳酸菌受到极大的关注，

关于功能性产胞外多糖乳酸菌的开发及其在发酵乳

制品中的应用成为国内外学者研究开发的热点，人们

尝试多种方法筛选开发产胞外多糖的乳酸菌，并对产

物胞外多糖的结构、理化与功能性质和分子遗传等开

展研究［６￣９］。国内对产胞外多糖乳酸菌的筛选和功

能性质进行了一些研究，取得了一定的研究结果。但

是研究深度尚不够，菌种筛选的范围十分有限，有的

产胞外多糖菌株来源于国外发酵剂商品，在产品应用

中可能会受到国外知识产权的限制［１“１１］。

采用了１种简便有效的产胞外多糖乳酸菌的初筛方

法，结合利用硫酸一苯酚法作为复筛方法，从自然发酵

乳制品和自然发酵蔬菜中分离筛选得到３株拥有自

主知识产权的产胞外多糖的乳酸菌，并对菌种进行鉴

定，为功能性产胞外多糖乳酸茵的开发和应用奠定基

础。

ｂＨ公司；Ｍｏｔｉｃ

备。

对样品进行１０倍梯度稀释，选择合适的稀释度，分别

取１

ｍＬ稀释样品，分别浇注于ＭＲＳ培养基、Ｅｌｌｉｋｅｒ

培养基和Ｍ１７培养基，在适宜条件下培养，用于样品

中乳酸菌的分离［１

１．２．２

鲁

、

奎

分离菌株的分离和保存

蠢

棺

将１．２．１得到的菌落在相应的平板培养基上划

线纯化得到纯培养物，进行革兰氏染色，接触酶实验。

纯化菌株在ＭＲＳ斜面上４℃短期保存，置于３０％

（Ｗ／Ｗ）无菌甘油中在一７０℃超低温冰箱中长期保

存‘１

益

图１硫酸一苯酚法测定胞外多糖含量的标准曲线

１．２．３利用茵落拉丝法初步筛选产胞外多糖的乳酸菌

的ＡＰＩ细菌鉴定系统进行，将纯菌株在ＭＲＳ琼脂培

养基上３７℃微厌氧培养４８ｈ，用无菌棉拭子收集细

菌，在ＡＰＩ

５０

将分离纯化菌株在ＭＲｓ筛选培养基上进行划线分

离，在２５℃厌氧培养４８

ｈ，观察并记录菌落特征。用无

菌牙签接触菌落，轻轻地向外拉，然后在２ｓ内垂直离开

以在培养基表面形成连续的拉丝，重复操作５—６个菌

落，每个菌落平行做２次，测量菌落拉丝的最大长度

（伽ｎ），结果以“平均值士标准方差”表示。

１．２．４乳酸茵胞外多糖的提取

将１．２．３得到的菌株接种于筛选ＭＲＳ液体培

养基中，３０℃发酵２４ｈ，取１０ｍＬ培养物，沸水浴１０

ｍｉｎ，冷却至室温，加质量分数为８０％的三氯乙酸至

终浓度为４％，４℃静置过夜，１２ｏｏｏｇ离心２０ｍｉｎ，轻

倾上清液于透析袋中，对流水透析２４ｈ，再对双蒸水

透析３６ｈ，４次换水，定容，待用。

１．２．５硫酸－苯酚法测定乳酸茵胞外多糖（ＥＰＳ）的含量

将１．２．４得到的胞外多糖样品用Ｄｕｂｏｉｓ推荐的

硫酸一苯酚法［１５］测定，用葡萄糖做标准曲线（如图１），

从曲线上求得ＥＰＳ的含量。以空白培养基为对照，

扣除背景干扰。’

１．２。６·显微镜观察产胞外多糖乳酸茵细茵形态

对分离菌株进行革兰氏染色，用Ｍｏｔｉｃ

ＰＭＢ５—

２２３２—５摄影显微镜观察细胞形态。

１．２．７产胞外多糖乳酸茵的鉴定

产胞外多糖乳酸菌的鉴定采用法国梅里埃公司

ＣＨ试剂条凹槽中加ＡＰＩ

５０

ＣＨＬ培

养基并接种，用石蜡油封好，３７℃培养２４～２８

ｈ，记

录菌株对碳水化合物的发酵结果，将其输入梅里埃公

司的鉴定软件ＡＰＩ

２

ＬＡＢ

Ｐｌｕｓ进行鉴定。

结果与讨论

２．１乳酸菌的初步分离

从酸乳和泡菜样品中，利用ＭＲＳ固体培养基、

Ｅ１１ｉｋｅｒ固体培养基和Ｍ１７固体培养基分离得到了

２４４个分离株。经过菌落形态、革兰氏染色、接触酶

实验排除了３株革兰氏阴性细菌，２株接触酶阳性细

菌和４株酵母，得到２３５株乳酸菌分离株。

２．２利用平板菌落拉丝初步筛选产胞外多糖的乳酸

菌

将２３５株乳酸菌在ＭＲＳ筛选培养基上进行划

线分离，观察菌落特征。乳酸菌在ＭＲＳ筛选培养基

上有３种不同的菌落表型，分别为粘丝菌落（如图２Ａ

和图２Ｂ）、粘液菌落（如图２Ｃ）和非粘菌落（图略）。

作为生物高分子，胞外多糖能够使菌落具有较大的粘

度，在外力作用下呈现出拉丝状，因此可以根据这一

特性来对产胞外多糖乳酸菌进行初筛。在２３５株乳

酸菌中有２８％表现出粘丝状的特征。

图２

ＭＲＳ筛选培养基上的粘丝状茵落（Ａ和Ｂ）和粘液状菌落（Ｃ）

１６

Ｉ至Ｑ塑∑鱼！：丝型Ｑ：Ｑ！鱼！！璺曼２

不同菌株在ＭＲＳ筛选培养基上的菌落拉丝长

度如表１。从表１可以看出，当培养温度为４５℃时，

外观的温度为２５℃，与文献中粘性胞外多糖产生温

度较低的报道是一致的。

ｍｍ

２５℃培养

３０．６士３．８

１１．７士１．１

ＮＤ

大部分乳酸菌不再具有粘丝特征，适宜菌落产生粘丝

表ｌ

部分分离菌株在Ｍ骼筛选培养基上的粘丝长度

菌株序号

１

２

３

７

３２

３５

３６

４１

２５℃培养

３３．８士Ｚ．９

２７．６士２．４

２３．３士２．６

３１．７士１．４

４２．１士２．９

２３．０士１．６

ＮＤ

４５℃培养

Ｇ＋Ｒ一

Ｇ一

Ｇ＋Ｒ一

菌株序号

４２

５ｌ

４５℃培养

Ｇ＋Ｒ一

ＮＤ

１２９

１７９’

１８３

２０３

２３７

Ｇ＋Ｒ一

３３．Ｏ±１．０

４０．４士２．２

５３．３士１．３

Ｇ＋Ｒ一

ＮＤ

３５．Ｏ士３。Ｏ

２５．０士４．Ｏ

４３．Ｏ±６．Ｚ

Ｇ＋Ｒ一一

注：Ｒ一，无粘丝性；Ｇ＋，有生长；Ｇ一，无生长｝ＮＤ，未测定。

２．３初筛选菌种胞外多糖产量的考察

将利用菌落拉丝法初筛得到的菌株接种于筛选

ＭＲＳ液体培养基中在３０℃发酵２４

ｈ，取１０

ｍＬ培养

物，沸水浴１０ｍｉｎ，冷却至室温，加质量分数为８０％

的三氯乙酸至终浓度为４％，４℃静置过夜，１２

ｏｏｏ

ｇ

离心２０ｍｉｎ，轻倾上清液于透析袋中，对流水透析２４

ｈ，再对双蒸水透析３６ｈ，４次换水，定容，用硫酸一苯

酚法测定多糖含量，实验结果如表２所示。

表２部分分离菌株产胞外多糖的水平

序号

１

２

３

４

７

８

１３

１４

１７

１８

２１

２４

２６

３０

３１

３２

３４

编号ＥＰＳ／ｍｇ·Ｌ一１

ＭＣＴＮ４

ＭＣＭｌｌ

ＭＣＭｌ２

ＶＭ０６

ＬＣ—Ｔ

ＬＣ—Ｒ

５８．３０士４．２０

２９．Ｏ士Ｏ．９１

３５．８０士１．７４

６．０１士４．２

３８．７１士２．０４

２６．９９士Ｏ．０８

１６．１０士２．０７

９３．３３士２．０１

４２．１２士Ｏ．９１

９．０８士１．１６

３０．９４士０．３０

１．２２士Ｏ．２２

９．６５士０．８９

５２．１６士０．２６

２８．４１士０．９９

１４１．３２士１．８６

２１．７１±０．０３

序号

３５

３６

３９

４０

４１

４２

４５

４９

５１

编号

ＲＲｌ８

ＥＰＳ／ｍｇ·Ｌ一１

１８．６２士２．１３

１１．７０士Ｏ．７２

９．８９士０．９１

２７．１９士Ｏ．２７

９６．６９士０．４４

８０．０２士０．３４

７．７７士Ｏ．６１

８．５７士Ｏ．０８

６７．１５士０．１９

１６．６５士Ｏ．０１

２４．８３士１．０１

５．６７士０．３５

１９．９６士Ｏ．１４

８．１３士Ｏ．０７

３４．２５士３．４５

２３．６１±２．２７

４９．３８士１．０３

序号

７８

８０

８Ｚ

９８

１１３

１２９

１６０

１７９

１８３

１８６

１８７

２００

２０３

２３５

２３６

２３７

编号

ＭＶｌ００

ＶＭ０７

ＭＳＳ０１

ＢＭＴｌ

ＬＰＰ０１

ＥＰｓ／ｍｇ·Ｌ～１

３４．４１士２．０４

７１．３１土Ｏ．０７

０

Ｏ

ＲＲｌ２２

ＥＢｌ６

ＥＣＲｌ９

ＭＣＴＮ６

ＭＣＭｌＯ

Ｕ‘

Ｌ２４

ＲＲｌ２

ＬＰＰ６３

ＮＤ

２５．８３士０．７９

５２．３７士Ｏ．９２

８７．３６士０．８８

４９．５０士Ｏ．３７

１３．４６士Ｏ．０８

３．８５士０．７９

ＮＤ

ＢＭＴ５

ＳＭ２

ＬＣ—ＭＳ

ＳＭ５

ＶＳｌＯ

ＬＬＣｌＯ

ＳＶＳｌｌ

ＣＭＴｌ３

Ｍ７

Ｍ６

５２

５８

６０

６１

６３

７１

７２

７４

ＭＳＴ３

ＭＰＰｌｌ

ＬＰＰ６５

ＲＲｌ７

ＲＲｌ９

ＭＳＮｌ０４

ＲＲｌ２３

ＭＳＮ０４４

ＮＹＣ３０

Ｌ１０１

ＹＹ３０

ＹＨｏＣｌ３７

Ｍ９

ＲＲｌｌｌ

１２７．０士０．２９

４６．２３士Ｏ．０９

９６．６３士Ｏ．３７

１８９．９５士０．８９

Ｍ２

ＬＬＣｌｌ５

ＥＢｌ８

ＢＴ０８９８

ＲＲｌ６

注ｌ－ＮＤ，未铡足。

从表２中可以看出，在实验条件下，胞外多糖产

量较高的菌株有分离株ＢＴ０８９８、ＮＹＣ３０和

ＹＨＯＣｌ３７，产量分别为１４１．３２、１２７．ｏｏ和１８９．９５

ｍｇ／Ｌ。

ｊ

萤

一

｛Ｌ

２．４菌落拉丝初筛方法的验证

为了验证菌落拉丝方法作为产胞外多糖乳酸菌筛

选的初筛方法的可靠性，以菌落拉丝长度为横坐标，以

胞外多糖（ＥＰＳ）产量为纵坐标，考察分离乳酸菌菌株

的菌落拉丝长度和胞外多糖产量的相关性，如图３。

蛊

图３菌落拉丝长度与胞外多糖产量的相关性

从图３中可以看出，尽管有一些异常数据点，总

的来说，菌落拉丝长度与胞外多糖产量具有明显的正

！塑堡蔓丝鲞蔓ｉ塑（星蔓丝塑“１７

相关性，这表明菌落拉丝法是一种简便而有效的产胞

外多糖乳酸菌的筛选方法，可以用于产胞外多糖乳酸

菌的广泛筛选。结合表１和表２可以看出，当菌落拉

丝长度在４０ｍｍ以上时，分离菌株的产胞外多糖的

水平都比较高。将分离菌株ＹＨＯＣｌ３７接种于无菌

脱脂奶（质量分数为１２％），如图４，ＹＨＯＣｌ３７能够

赋予发酵乳良好的高粘度，也证明了菌落拉丝法作为

初筛方法的可行性。

２．５筛选菌种的微生物学鉴定

分离株ＢＴ０８９８、ＮＹＣ３０和ＹＨＯＣｌ３７的细胞形

态如图５所示，３株产胞外多糖菌株均为短杆菌。利

用法国梅里埃公司的ＡＰＩ细菌鉴定系统对３株产胞

外多糖的乳酸菌进行鉴定（碳水化合物发酵情况略），

分别鉴定为短乳杆菌（Ｌ口以。沈ｃ删“ｓ

６化讲ｓ）ＢＴ０８９８、

植物乳杆菌（Ｌ口ｃ￡ｏ沈ｃⅢ“ｓｐ如ｎ￡口似ｍ）ＮＹＣ３０和鼠

李糖乳杆菌（Ｌ口ｃｆＤ６口以Ｚｚ“ｓ

ｒ．｝ｌ口ｍ加５“５）ＹＨＯＣｌ３７。

图４

ＹＨｏＣｌ３７菌株使发酵牛乳形成良好的粘度

Ａ—Ｌ．６卵们５ＢＴ０８９８；Ｂ—Ｌ．户Ｚ口ｔｌ缸九‘ｍＮＹＣ３０ｌ

Ｃ—Ｌ．ｒ＾ｎ枷ｏ，口ｓＹＨｏＣｌ３７

Ｌ＿口ｃｔ０６口ｃｉＺＺ“ｓ

图５三株产脆外多糖菌株的细胞形态（１

０００×）

ｔｉｖｉｔｉｅ８ｏｆ

ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ

ｐｒｏｄｕｃｅｄ

Ａｎｔｉｂｉｏｔ，１９８２，３５（１２）：２

ｂｙ

ｓｐ．

３

结论

５

［Ｊ］．Ｊｐｎ

Ｊ

Ｏｄａ

７４８～２

７５４

Ｍ，Ｈａｓｅｇａｗａ

Ｈ，ＫｏｍａｔｓｕＳ，ｅｔ

ａ１．Ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ

ｐｏｌ—

ｓｐ．

根据产胞外多糖乳酸菌的性质，开发了一种产胞

ｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ

ｆｒｏｍＬ口ｃ￡Ｄ６咀ｃｉｚｚ乱ｓ

［Ｊ］．

Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ

ａｎｄ

外多糖的乳酸茵的简便初筛方法——菌落拉丝法。

该方法简便有效，不需要复杂的仪器设备和特殊的化

学试剂，适合进行广泛的菌种初筛。从自然发酵酸乳

和发酵蔬菜中分离得到了３株产胞外多糖较高的乳

酸菌，利用ＡＰＩ细菌鉴定系统分别被鉴定为短乳杆

菌、植物乳杆菌和鼠李糖乳杆菌，为功能性产胞外多

糖乳酸菌发酵剂的开发和应用奠定了良好的基础。

８

７

６

ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８３，４７（７）：１

６２３～１

６２５

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ｔｈｅ

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Ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｄｉｆｃｏ

Ｍａｎｕａｌ：Ｍａｎｕａｌ

ｏｆ

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Ｃｈｅｍ，１９５６，２８（３）：３５０～３５６

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审画ｊ蟹举办茴个植物提取物震缆会

２００８年３月２４日，中国上海，ＰＥＥＣ国际植物提取物展览会暨研讨会正式在上海发布《中国植物提取物发展状况

市场调查报告》，该报告显示，８０％以上的中国植物提取物以出口为主，出口区域分布在东南亚、欧洲和北美洲，东南亚是目前中

国植物提取主要出口市场。

ＰＥＥｃ国际植物提取物展览会暨研讨会是由中国著名的会展机构好博塔苏斯展览集团和ＫｉｎｇＬｅａｐ公司共同举办，ＰＥＥＣ

是目前中国乃至亚太地区首个大型国际性植物提取物展览会，本届展览会将于２００８年１０月１６～１８日在中国上海东亚展览馆

举办，展出面积４ｏｏｏ平方米，设国际标准展位２００余个。

植物提取物是生物医药的重要组成部分，目前被广泛应用于植物药、食品添加剂、功能性食品、日用化学品、植物源农药和

兽药等生产领域。随着２１世纪生物医药迅猛发展，在新的医学模式影响下，具备活性或功能性的植物提取物产品备受青睐在

世界范围内得到广泛认可。

《中国植物提取物发展状况市场调查报告》显示，中国植物提取物企业普遍年轻，但专业化程度非常高。其中近７０％企业

均为２００１年以后从事植物提取物业务，近５０％企业植物提取物业务占企业整体业务比例均在８０％以上。

中国植物提取物产品９０％以上供应于功能食品原料、食品补充剂原料、医药保健品原料和美容化妆品原料等市场，其中供

应医药保健领域比重较大，占３６％以上。

８０％以上的中国植物提取物企业产品以出口为主，出口区域分布在东南亚、欧洲和北美洲。中国植物提取物企业普遍认

为，同行竞争激烈和缺少国外相关技术是中国植物提取物市场发展的主要困难。但企业对植物提取物产业市场容量逐渐扩大

抱有信心，目前需求主要是市场潜力开发及市场更加规范。

世界植物提取物市场的增长速度已经高于世界药品市场的增长速度，世界植物提取物市场发展速度约为２０％，全球年销

售植物提取物达到６５亿美元。１９９５年之前，我国植物提取物的出口额从未超过５ｏｏＯ万美元，而２００７年，我国植物提取物出

口额达到４．８亿美元。

ＰＥＥｃ国际植物提取物展览会暨研讨会作为中国及亚太地区首个大型国际性植物提取物展览会，展商来自全球植物提取

物技术最顶级的品牌企业，汇聚全球最新的植物提取物技术。展会积累了强势行业资源和品牌基因，堪称中国及亚太地区最具

规模和品牌影响力的全球领行者齐聚的国际植物提取物行业盛会。更多信息，请访问ＰＥＥＣ官方网站：ｗｗｗ．ｃｈｉｍｐｅｅｃ．ｃｏｍ

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１９

产胞外多糖的乳酸菌的简便筛选与鉴定

作者：

作者单位：

田丰伟，丁虎生，丁纳，赵建新，张灏，陈卫， Tian Fengwei， Ding Husheng，

Ding Na， Zhao Jianxin， Zhang Hao， Chen Wei

田丰伟,丁虎生,丁纳,赵建新,陈卫,Tian Fengwei,Ding Husheng,Ding Na,Zhao

Jianxin,Chen Wei(江南大学食品学院,江苏无锡,214122)，张灏,Zhang Hao(江南大学食品

学院,江苏无锡,214122;江南大学食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡,214122)

食品与发酵工业

FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES

2008，34(3)

2次

刊名：

英文刊名：

年，卷(期)：

被引用次数：

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Exopolysaccharide production and texture-promoting abilities of

mixed-strain starter cultures in yogurt production 1997(10)

Vuyst F

Exopolysaccharide-producing Streptococcus thermophilus strains as

functional starter cultures in the production of fermented milks 2003(08)

Applications of exopolysaccharides in the dairy industry 2001(09)

ra u S

Physiological activities of polysaccharide produced by Lactobacillus sp

1982(12)

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Anti-tumor polysaccharide from Lactobacillus sp 1983(07)

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A simplemet hod for the screening of lactic acid bacteria for the

production of exopolysaccharides in liquid media 1997(05)

P m A G

Comparative study of different methodologies to determine the

exopolysaccharide produced by kefir grains in milk and whey 2003(01)

-Madiedo los Reyes-Gavilan C G

Invited review:Methods for the screening,isolation,and

characterization of exopolysaccharides produced by lactic acid bacteria 2005(03)

ont ul pawat S

Exopolysaccharide producing laerie acid bacteria strains from

traditional thai fermented foods:isolation,identification and exopolysaccharide characterization

1999(2-3)

10.刘丽波.李春.孟祥晨

1株高产EPS嗜热链球菌的筛选及培养条件优化[期刊论文]

中国食品学报 2007(03)

11.潘道东.吴玲

高产胞外多糖(EPS)乳酸菌菌株的筛选与鉴定[期刊论文]

食品科学 2007(03)

Man J M E

A medium for the cultivation of lactobacilli 1960

Diagnostic Systems

Difco Mannal:Manual of Microbiological Culture Media 2003

14.凌代文.东秀珠

乳酸细菌分类鉴定及实验方法 1999

K on J K

Colorimetric method for determination of sugars and related

substances 1956(03)

1.期刊论文

王迎华.曹郁生.陈燕.高丹丹.Wang Dandan

产胞外多糖乳酸菌筛

选及胞外多糖提取方法

-乳业科学与技术2007,30(4)

从实验室保存及市售泡菜和发酵乳中分离的乳酸菌中进行筛选,通过黏度和EPS产量的测定,筛选出一株高产EPS的乳酸菌,为实验室保存菌株干酪乳杆

菌,黏度为354.04 mPa·s,产量为731.58 mg/提取过程中,比较了Sevag法和三氯乙酸法两种除蛋白方法,8%三氯乙酸除蛋白的方法效果最好.

2.期刊论文

杨贞耐.张雪.YANG Xue

乳酸菌胞外多糖的流变学特性和分子结构修饰

-食品科学

2007,28(12)

乳酸菌胞外多糖在乳品加工中具有重要作用.在发酵过程中,胞外多糖的形成有利于改善产品的流变学特性,并赋予产品优良的感官特性和营养保健性

能.不同的乳酸菌在胞外多糖的产量、化学组成、分子量、带电情况和侧链分支等方面具有很大差异.通过对胞外多糖进行分子结构修饰,可以优化其功能

特性,并获得具有特定用途的食品改良剂.有些乳酸菌胞外多糖具有抗肿瘤和免疫调节活性,有益于人类健康;或者可能用作益生元,有益于胃肠道菌群微生

态平衡.本文着重讨论乳酸菌胞外多糖的流变学特性和多糖的分子结构修饰,探讨胞外多糖结构与功能的关系.

3.学位论文

马静

乳酸菌产生的胞外多糖及其在乳品中的应用研究

2004

该项研究旨在探索乳酸菌产胞外多糖的机理,优化其胞外多糖的发酵条件,初步应用乳酸菌产胞外多糖菌株到不同固体物含量的发酵乳生产中,为乳酸

菌胞外多糖的研究和开发工作提供参考依据.研究了嗜热链球菌ST、MY800、MYE和保加利亚乳杆菌Y-5四株乳酸菌随时间产胞外多糖的情况,结果表明

,37℃培养24h时,四株乳酸菌胞外多糖的产量最高.碳源是影响乳酸菌胞外多糖产量的显著因素,嗜热链球菌ST、MY-800、MYE和保加利亚乳杆菌Y-5分别以

葡萄糖、乳糖、半乳糖、蔗糖和果糖作为碳源时,ST、MYE和Y-5菌株的最佳碳源为果糖,MY-800菌株的最佳碳源为蔗糖;在同一碳源条件下不同乳酸菌菌株

其胞外多糖的产量相差较大.氮源试验表明,嗜热链球菌ST、MY-800、MYE和保加利亚乳杆菌Y-5分别以胰蛋白胨和鱼蛋白胨作为氮源时,ST、MY-800、

MYE菌株的最佳氮源是胰蛋白胨,Y-5菌株在以鱼蛋白胨作为氮源时胞外多糖的产量较高.碳氮比试验表明,嗜热链球菌ST、MY-800、MYE和保加利亚乳杆菌

Y-5在碳氮比分别为1:1、1:2、2:1、2:3的情况下,ST和MY-800菌株的最适碳氮比为1:2,MYE菌株的最适碳氮比为2:3,而Y-5菌株在碳氮比2:1时胞外多糖的

产量最高.应用正交试验确定了四株乳酸菌产胞外多糖的最佳条件.ST菌株胞外多糖产量的最佳条件为:培养温度为40℃,发酵时间为24h,初始pH值为

7.0,葡萄糖添加量为2％;MY-800菌株胞外多糖产量的最佳条件为:培养温度为40℃,发酵时间为16h,初始pH值为6.0,葡萄糖添加量为6%;MYE菌株胞外多糖

产量的最佳条件为:培养时间为24h,培养温度为40℃,初始pH值为6.0,葡萄糖添加量为2%;Y-5菌株胞外多糖产量的最佳条件为:培养温度为40℃,发酵时间

为16h,初始pH值为6.0,葡萄糖添加量为2%.金属离子对乳酸菌胞外多糖水解酶的影响试验表明,K<'+>和Mg<'2+>对胞外多糖水解酶的活性有促进作用,可以

降低乳酸菌胞外多糖的产量;而Cu<'2+>和Mn<'2+>这两种金属离子对胞外多糖水解酶的活性有强烈的抑制作用,可以提高乳酸菌胞外多糖的产量.研究表明

,乳酸菌胞外多糖具有较好的持水能力,以6%固体物含量的乳进行发酵,仍能生产出质地状态较好的酸奶,并长时间维持发酵乳高的活菌数和有效抑制后酸

化.

4.期刊论文

李清春.张景强.贺稚非

乳酸菌胞外多糖的研究

-电子科技大学学报2003,32(6)

分析了产胞外多糖乳酸菌的种类,同型胞外多糖和异型胞外多糖的生物合成途径与遗传调控,以及影响发酵生产的因素.总结了乳酸菌胞外多糖的分离

、纯化、纯度鉴定的方法及乳酸菌胞外多糖的重要结构单元与功能之间的相互关系.揭示出乳酸菌胞外多糖在食品、医药领域巨大的潜在应用价值.

5.期刊论文

张筠.刘宁.孟祥晨

乳酸菌胞外多糖的生物学活性

-国外医学(卫生学分册)2004,31(4)

乳酸菌胞外多糖在现代生活的许多领域发挥着重要的作用.据报道产胞外多糖的乳酸菌对人体的保健作用与其产生的胞外多糖的生物学活性密切相关

.本文主要综述了乳酸菌胞外多糖的抗肿瘤活性、免疫调节活性及调节胃肠道功能等方面的生物学活性,并介绍了其应用及展望.

6.学位论文

白丽娟

马奶酒乳酸菌胞外多糖生物合成条件的研究

2006

本项研究主要以内蒙古锡林郭勒牧区马奶酒为样品，进行了马奶酒发酵菌的活化、分离、纯化，共分离到乳酸菌41株。对分离到的乳酸菌进行胞外

多糖(EPS)高产菌株的筛选，结果筛选出1株高产的乳杆菌，对其进行形态学特征和生理生化特性的研究，确定其为米酒乳杆菌，并进行胞外多糖生物合

成能力的研究。本研究分别改变培养基的碳源、氮源、盐类以及发酵温度、时间、pH等条件，探讨其对乳酸菌胞外多糖生物合成条件的影响，确定了米

酒乳杆菌BXR-5-3的EPS的最佳生物合成条件为：初始pH6.0，发酵温度35℃，发酵时间26h；优化的培养基MRSB的组成为：蛋白胨1.5％；胰蛋白胨

1.0％；葡萄糖1.5％；乳糖1.5％；K2HPO40.2％；MnSO4·4H2O0.02％；MgSO4·7H2O0.02％；醋酸钠0.5％；酵母粉0.5％；Tween801mL/L。

乳酸菌胞外多糖(EPS)分离纯化过程是发酵液经过离心、酒精沉淀、透析、冷冻干燥得到的胞外多糖粗品，依次DEAE-52纤维素层析和SephadexG-

200凝胶层析分离得到两种组分。胞外多糖Ⅰ经纸层析和SephadexG-200等方法检查纯度，表明其为均一组分，用SephadexG-200凝胶柱层析法测得胞外多

糖Ⅰ的平均分子量为85100D。

乳酸菌EPS抑菌试验结果表明，乳酸菌EPS对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌均无明显的抑制作用。脱脂乳培养基中分别加入0.05％和

0.10％(w/w)的胞外多糖粗品，对嗜酸乳杆菌和两歧双歧杆菌的生长也无明显的促进作用。

7.会议论文

杨贞耐.Eine Huttunen

乳酸菌分泌胞外多糖的生物学基础和多糖分子结构修饰

2006

微生物可分泌多糖于细胞表面形成荚膜多糖、或分泌多糖于细胞周边培养基中形成粘液多糖.乳酸菌产胞外多糖在发酵乳的流变学特性、产品的结构

和质地以及口感等方面起到重要作用.有的胞外多糖还具有抗癌、抗溃疡、免疫调节或降胆固醇等活性.近十年来,有关乳酸菌胞外多糖生物合成的分子生

物学、生物化学、多糖的化学分析和结构特性等方面是乳品科学研究的一个热点.本文拟着重讨论乳酸菌产胞外多糖基因簇的结构和功能、多糖的生物合

成、多糖的分子结构及结构修饰.

8.期刊论文

李盛钰.曾宪鹏.杨贞耐.LI Zhen-nai

提高乳酸菌胞外多糖产量的途

径

-食品与生物技术学报2009,28(3)

乳酸菌胞外多糖(EPS)在改善发酵乳品流变学特性和质地等方面发挥重要作用,一些胞外多糖对人体健康还有促进作用,而胞外多糖的产量通常较低是

限制其广泛应用的"瓶颈"因素.作者综述了通过优化发酵条件和基因工程技术提高乳酸菌胞外多糖产量的研究进展.

9.期刊论文

刘宇.孟祥晨.LIU Xiang-chen

乳酸菌胞外多糖及其抗肿瘤活性

-中国乳品工业2008,36(1)

乳酸菌胞外多糖因为具有特殊的生理功能受到越来越多人的关注,开始在很多领域中发挥着重要的作用.在介绍乳酸菌胞外多糖调节胃肠道菌群组成

、免疫调节、抗高血压、降胆固醇等生理功能的基础上,重点介绍了有关乳酸菌胞外多糖抗肿瘤活性的相关研究,并简要分析了其可能的抗癌作用机制.

10.学位论文

刘燕

高产胞外多糖乳酸菌的筛选及培养基优化方法的研究

2009

乳酸菌胞外多糖（Lactic acid bacteria exopolysaccharide LAB EPS）是乳酸菌在生长代谢过程中分泌到细胞壁外常渗于培养基的一类多糖类化

合物，分为荚膜多糖与粘液多糖，是微生物代谢次产物，分子量多在4．0×104～6．0×106Da。LAB EPS具有增加酸乳的粘度、流变性、防止乳清析出、

增强凝乳强度、改善酸乳品质等特性，因此研究LAB EPS具有重要的理论意义和实践意义。

本课题主要以市售酸奶、泡菜为研究对象，经过乳酸菌的筛选、分离、鉴定共得到8株杆菌，4株球菌。应用形态学特征、生理生化特征以及糖发酵

试验等方法鉴定，结合《伯杰氏细菌鉴定手册》和《乳酸菌分类鉴定》，将菌株鉴定为乳杆菌属（其中德式乳杆菌保加利亚亚种（Lactobacillus

delbrueckii subsp．bulgaricus）2株，嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）3株，植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）3株；）和乳球菌

属（其中嗜热链球菌（S． thermophilus）3株，乳酸乳球菌乳脂亚种（Lc． Lactis subsp．cremoris）1株。），共2个属5个种。通过苯酚-硫酸法检

测鉴定菌株发酵液中的胞外多糖的产量，测定培养基的粘度，进一步筛选得到胞外多糖产量高的G1德式乳杆菌保加利亚亚种，对其进行培养基优化试验

。

在优化培养基时，分别对碳源、氮源、碳氮比进行单因素水平优化。其中以葡萄糖作为碳源G1菌株EPS产量最高，可达136．58mg/L，培养基粘度为

268．57mPa．s；以胰蛋白胨作为氮源时G1菌株EPS产量最高，可达140．3mg/L，培养基粘度为271．79mPa．s，；碳氮比为3：1时，胞外多糖产量最高

，可达137．24mg/L，培养基粘度为271．79mPa．s。

在单因素优化水平的基础上对影响EPS产量的培养温度、培养时间、初始pH值以及葡萄糖添加量进行四因素三水平正交实验。结果表明：培养时间为

17h、培养温度33℃，初始pH值为6．0，葡萄糖添加量为3％的发酵条件为G1菌株产胞外多糖量的最佳发酵工艺条件，EPS产量可达126．76mg/L；其中培

养温度对G1菌株胞外多糖的产量影响最大，其次为初始pH值，葡萄糖的添加量对G1菌株胞外多糖的产量影响最小。

为了避免培养温度、培养时间以及初始pH值三种主要因素的交互作用，运用响应面法进行Box-Behnken设计优化分析，优化的结果为；培养温度为

39．1℃，培养时间14．2h，初始pH值6．9，EPS产量可达154．25mg/L，优化后G1德式乳杆菌保加利亚亚种EPS产率提高17．8％。

1.刘先.康小红.孙军德

高产胞外多糖乳酸菌的筛选与初步鉴定[期刊论文]

农产品加工·学刊 2010(3)

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