2024年3月19日发(作者：符悦爱)
血管内皮细胞检验技术
一、血管性血友病因子抗原测定
血管性血友病因子抗原（von willebrand factor antigen，vWF：
Ag）测定主要用于血管性血友病的诊断与分型。
（一）检验原理
免疫火箭电泳法。在含vWF：Ag的琼脂板中加入定量的受检血浆
（抗原）后，在电场作用下，定量的抗原在含抗体的琼脂板上泳动。
在一定的时间内出现抗原抗体反应形成的火箭样沉淀线，沉淀线的高
度与抗原的浓度成正比，根据沉淀线的高度计算出血浆vWF：Ag的含
量。
（二）检验方法学
1.试剂与器材
（1）Tris巴比妥缓冲液（pH 8.8）。
（2）琼脂糖凝胶的制备：取琼脂0.9g，加Tris巴比妥缓冲液
100ml，加热至沸点，待琼脂完全溶解置50～56℃水浴。
（3）琼脂板的制备：取人血浆vWF：Ag抗血清16.5μl于50ml
烧杯中，置50～56℃水浴。取50～56℃水浴中的琼脂糖凝胶10ml加
入烧杯中（稀释600倍），充分混合后迅速倒入8cm×8cm内径的玻璃
槽内。当凝胶凝固后，除去一块玻片，打孔共10～12个，孔径为2.5mm，
间距约为5mm。
（4）标准标本制备：用Tirs巴比妥缓冲液稀释正常混合血浆，
比例为原倍∶1∶2、1∶4、1∶8、1∶16，于1、2、3、4、5孔中各
加样10μl。
（5）待检标本的制备：将患者全血用0.109mol/L枸橼酸钠作9∶
1抗凝，1500r/min离心10分钟，分离血浆，然后用Tris巴比妥缓
冲液将标本作1∶2稀释。按编号，依次加入相应的测定孔中。
2.操作方法
（1）每侧电泳槽内加Tris巴比妥缓冲液1000ml。在加抗原之
前，先将打好小孔的琼脂板置于电泳槽内，孔朝阴极，火箭方向为阳
极。用8cm宽的双层滤纸作桥，接通电源，用50V左右的电压。然后
顺序加入标准标本和受检标本。关闭电泳槽盖，调节电压至110～115V，
电流为10～14mA，电泳18小时。电泳槽温度以小于15℃为宜。
（2）电泳完毕后，取出凝胶板置生理盐水中，然后再浸入1%磷
钼酸溶液中（1g磷钼酸加蒸馏水100ml，过滤后使用）20～60分钟，
可见火箭样沉淀线，也可用氨基黑染色保存。
3.测量和计算
（1）测量：从加样孔上缘到峰顶测量火箭峰的高度。标准品的
5个读数通过回归方程得出标准曲线。
（2）计算：用上述的方法测量受检标本火箭峰高度，由标准曲
线可以求得vWF：Ag的含量，结果再乘以2（稀释倍数）。
2024年3月19日发(作者：符悦爱)
血管内皮细胞检验技术
一、血管性血友病因子抗原测定
血管性血友病因子抗原（von willebrand factor antigen，vWF：
Ag）测定主要用于血管性血友病的诊断与分型。
（一）检验原理
免疫火箭电泳法。在含vWF：Ag的琼脂板中加入定量的受检血浆
（抗原）后，在电场作用下，定量的抗原在含抗体的琼脂板上泳动。
在一定的时间内出现抗原抗体反应形成的火箭样沉淀线，沉淀线的高
度与抗原的浓度成正比，根据沉淀线的高度计算出血浆vWF：Ag的含
量。
（二）检验方法学
1.试剂与器材
（1）Tris巴比妥缓冲液（pH 8.8）。
（2）琼脂糖凝胶的制备：取琼脂0.9g，加Tris巴比妥缓冲液
100ml，加热至沸点，待琼脂完全溶解置50～56℃水浴。
（3）琼脂板的制备：取人血浆vWF：Ag抗血清16.5μl于50ml
烧杯中，置50～56℃水浴。取50～56℃水浴中的琼脂糖凝胶10ml加
入烧杯中（稀释600倍），充分混合后迅速倒入8cm×8cm内径的玻璃
槽内。当凝胶凝固后，除去一块玻片，打孔共10～12个，孔径为2.5mm，
间距约为5mm。
（4）标准标本制备：用Tirs巴比妥缓冲液稀释正常混合血浆，
比例为原倍∶1∶2、1∶4、1∶8、1∶16，于1、2、3、4、5孔中各
加样10μl。
（5）待检标本的制备：将患者全血用0.109mol/L枸橼酸钠作9∶
1抗凝，1500r/min离心10分钟，分离血浆，然后用Tris巴比妥缓
冲液将标本作1∶2稀释。按编号，依次加入相应的测定孔中。
2.操作方法
（1）每侧电泳槽内加Tris巴比妥缓冲液1000ml。在加抗原之
前，先将打好小孔的琼脂板置于电泳槽内，孔朝阴极，火箭方向为阳
极。用8cm宽的双层滤纸作桥，接通电源，用50V左右的电压。然后
顺序加入标准标本和受检标本。关闭电泳槽盖，调节电压至110～115V，
电流为10～14mA，电泳18小时。电泳槽温度以小于15℃为宜。
（2）电泳完毕后，取出凝胶板置生理盐水中，然后再浸入1%磷
钼酸溶液中（1g磷钼酸加蒸馏水100ml，过滤后使用）20～60分钟，
可见火箭样沉淀线，也可用氨基黑染色保存。
3.测量和计算
（1）测量：从加样孔上缘到峰顶测量火箭峰的高度。标准品的
5个读数通过回归方程得出标准曲线。
（2）计算：用上述的方法测量受检标本火箭峰高度，由标准曲
线可以求得vWF：Ag的含量，结果再乘以2（稀释倍数）。