2024年4月4日发(作者：通梓莹)
血涂片的制作及注意事
一． 血涂片的显微镜检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，制备厚薄
适宜，分布均匀，染色良好的血涂片是血液学检查的重要基本技术之一。 涂片法制片是显
微制片的基本方法之一。
二． 血涂片制作
取末梢血1滴，置载玻片一端，取另一边缘光滑的推片，放在血滴前面慢慢后移，接
触血滴后稍停。血液即沿推片散开，将推片与载片保持30 ～45°角，向前平稳均匀推动推
片，载片上便留下一层薄血膜。血涂片制成后，立即在空气中挥动，使其迅速干燥，以免血
细胞变形。血膜干燥后，用铅笔在血膜的一侧写上病人姓名或编号。
一张良好的血片，厚薄要适宜，头体尾要明显，细胞分布要均匀，膜的边缘要整齐，
并留有一定的空隙。
涂片时，血滴愈大，角度愈大，推片速度愈快则血膜愈厚，反之血膜愈薄。太薄的血
膜片50%的白细胞集中于边缘或尾部，血涂片过厚，细胞重叠缩小均不利于白细胞分类计
数。如果血膜分布不匀，主要是推片不整齐，用力不均匀，载片不清洁所致。
三．血涂片的质量控制
1． 血膜片的质量要求是厚薄均匀适度，低倍镜下观察全片，细胞不重叠，头尾及 两侧有
一定的空隙，血膜头部有明确的病人标志。
2． 一些体积较大的特殊细胞常在血膜的尾部出现，因此蜡笔划线时应注意保存血膜 尾部
细胞，血膜必须充分干燥，否则在染色过程中容易脱落。
3． 配制染料须用优质甲醇，稀释染液用缓冲液，因为缓冲液的pH 对细胞染色的影响很
重要。在偏酸性环境中正电荷增多，在偏碱性环境中负电荷增多，又因为细胞着色对氢离子
浓度十分敏感。如果染色偏碱，原是紫红色的中性颗粒则染成深蓝色，造成识别困难。冲洗
须用中性水，虽亦可用自来水 （但不能保持稳定）。
4． 对所用染液应进行预染试验，新配制的染液放置一段时间后其中的美蓝逐渐氧化成天
青B ，天青B 对细胞核的着色效果比美蓝好，因此，瑞氏染液放置时间越长染色效果越好，
临床上称之为成熟。判断染液成熟程度的简易方法是用正常优质血片做预染试验，先用低倍
镜观察载有染液的血片，认为着色满意后，再按照染色后冲洗顺序最后用油镜镜检，这样不
仅可了解染液的成熟程度，而且还可以选择合适的染色时间，供临床标本染色时参考。
5． 染液与缓冲液的比例要适当，以1∶2为宜。一般说来缓冲液稀释度愈大，染色 时间
愈长，细胞着色愈匀称、鲜艳。缓冲液和染液量要充足，否则染液很快蒸发，染料沉淀于细
胞上，使细胞深染而无法检查。细胞较多较厚的涂片 （如红细胞增多症） 染液应多些。细
胞较少的涂片染液应少些。
6． 染色时间与染液浓度、室温高低、细胞多少有关，染液愈淡，室温越低，细胞愈多，
所需时间越长，应适当增加染液浓度，因此必须根据情况灵活掌握。
7． 染色良好的血膜片，外观呈浅红色，红细胞呈粉红色，白细胞核呈暗紫红色， 染色质
结构能辨，粒细胞的颗粒呈固有种特异颜色。
四．注意：在日常工作中遇到特殊标本，在制片时就要特殊对待。如：1、贫血病人2、WBC
特高疑为白血病人3、腹水或胸水
白细胞分类计数方法
一．低倍镜观察：选择细胞分布均匀、染色好的部位，转油镜下计数100—200个
细胞，求出各种白细胞所占百分比。包括：中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸细胞、
嗜碱细胞。
二．细胞分布：头体部以淋巴细胞较多，尾部和两侧以中性粒、单核细胞较多，片尾部异常
大的细胞较多。一般选择体尾交界处，细胞分布均匀的地方按一定方式，有规律的移动视野。
三．发现幼稚或异常白细胞，应分类报告，包括在分类百分率中。如遇到不能确认的细胞，
应另列入分类不明一项，如实报告，并保留血片。如发现有核红细胞，应报告分类100个白
细胞所见有核红细胞数。
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一、血涂片检查步骤
1、 血涂片显微镜检查 ：首先在低倍镜下进行浏览，观察有无异常细胞和细胞分布情况。
然后，在100倍油镜下观察细胞浆内的颗粒和核分叶情况。
2、 检查从约50％的红细胞互相重叠区域开始，向红细胞完全散开的区域推移。血涂片较
薄的区域，呈羽毛状，为“血片边缘”。
3、 中性粒细胞，单核细胞和淋巴细胞分布均匀的区域为血涂片分类“可接受”区域。当白
细胞总数正常时，在血涂片尾部和边缘，每油镜视野所见的白细胞数量不超过血涂片体部的
2～3倍。
4、除某些病理情况（如慢性淋巴细胞白血病）外，破碎细胞或不能识别细胞的数量不超过
白细胞总数的2%。若破碎细胞仍能明确鉴别（如破碎的嗜酸性粒细胞）应包括在分类计数
中。在结果报告中，应设其他栏，以备填写破碎细胞或不能识别细胞，并作适当描述。
5、 计数方法 采用“城垛式”方法检查血涂片。每个明确识别的细胞必须归入下列分类中：
中性分叶核粒细胞；中性杆状核粒细胞；淋巴细胞；异型淋巴细胞；单核细胞；嗜酸性粒细
胞；嗜碱性粒细胞；其他有核细胞（除有核红细胞外）。能明确识别的破碎细胞，应恰当分
类。
6、 每张血涂片应计数200个白细胞，若样本中白细胞数量减少，应增加检查血涂片的数
量。 白细胞分类结果以百分率和绝对值表示。
7、计数所有的有核红细胞，结果以每100个白细胞计数中见到几个表示。
二、 检验人员要求和考核
1、 检验人员的要求
（1） 检验人员的经验
检验人员必须能对所有常见白细胞进行分类，并了解大多数白细胞的形态异常，包括先天性
和获得性。参与细胞形态学检查的检验人员必须进行专业培训，并具备实际工作经验。
（2） 检验人员的态度
检验人员的工作态度、动机和专心程度是关键因素。因为白细胞分类计数是一项主观性很强
的工作，影响分类计数的因素很多，有检验人员的态度、实验室环境条件和工作量等。对于
以每张血涂片计数200个白细胞的参考方法工作量来说，每天每个检验人员血涂片检验数量
约为15～25张。
三、血涂片考核
2024年4月4日发(作者：通梓莹)
血涂片的制作及注意事
一． 血涂片的显微镜检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，制备厚薄
适宜，分布均匀，染色良好的血涂片是血液学检查的重要基本技术之一。 涂片法制片是显
微制片的基本方法之一。
二． 血涂片制作
取末梢血1滴，置载玻片一端，取另一边缘光滑的推片，放在血滴前面慢慢后移，接
触血滴后稍停。血液即沿推片散开，将推片与载片保持30 ～45°角，向前平稳均匀推动推
片，载片上便留下一层薄血膜。血涂片制成后，立即在空气中挥动，使其迅速干燥，以免血
细胞变形。血膜干燥后，用铅笔在血膜的一侧写上病人姓名或编号。
一张良好的血片，厚薄要适宜，头体尾要明显，细胞分布要均匀，膜的边缘要整齐，
并留有一定的空隙。
涂片时，血滴愈大，角度愈大，推片速度愈快则血膜愈厚，反之血膜愈薄。太薄的血
膜片50%的白细胞集中于边缘或尾部，血涂片过厚，细胞重叠缩小均不利于白细胞分类计
数。如果血膜分布不匀，主要是推片不整齐，用力不均匀，载片不清洁所致。
三．血涂片的质量控制
1． 血膜片的质量要求是厚薄均匀适度，低倍镜下观察全片，细胞不重叠，头尾及 两侧有
一定的空隙，血膜头部有明确的病人标志。
2． 一些体积较大的特殊细胞常在血膜的尾部出现，因此蜡笔划线时应注意保存血膜 尾部
细胞，血膜必须充分干燥，否则在染色过程中容易脱落。
3． 配制染料须用优质甲醇，稀释染液用缓冲液，因为缓冲液的pH 对细胞染色的影响很
重要。在偏酸性环境中正电荷增多，在偏碱性环境中负电荷增多，又因为细胞着色对氢离子
浓度十分敏感。如果染色偏碱，原是紫红色的中性颗粒则染成深蓝色，造成识别困难。冲洗
须用中性水，虽亦可用自来水 （但不能保持稳定）。
4． 对所用染液应进行预染试验，新配制的染液放置一段时间后其中的美蓝逐渐氧化成天
青B ，天青B 对细胞核的着色效果比美蓝好，因此，瑞氏染液放置时间越长染色效果越好，
临床上称之为成熟。判断染液成熟程度的简易方法是用正常优质血片做预染试验，先用低倍
镜观察载有染液的血片，认为着色满意后，再按照染色后冲洗顺序最后用油镜镜检，这样不
仅可了解染液的成熟程度，而且还可以选择合适的染色时间，供临床标本染色时参考。
5． 染液与缓冲液的比例要适当，以1∶2为宜。一般说来缓冲液稀释度愈大，染色 时间
愈长，细胞着色愈匀称、鲜艳。缓冲液和染液量要充足，否则染液很快蒸发，染料沉淀于细
胞上，使细胞深染而无法检查。细胞较多较厚的涂片 （如红细胞增多症） 染液应多些。细
胞较少的涂片染液应少些。
6． 染色时间与染液浓度、室温高低、细胞多少有关，染液愈淡，室温越低，细胞愈多，
所需时间越长，应适当增加染液浓度，因此必须根据情况灵活掌握。
7． 染色良好的血膜片，外观呈浅红色，红细胞呈粉红色，白细胞核呈暗紫红色， 染色质
结构能辨，粒细胞的颗粒呈固有种特异颜色。
四．注意：在日常工作中遇到特殊标本，在制片时就要特殊对待。如：1、贫血病人2、WBC
特高疑为白血病人3、腹水或胸水
白细胞分类计数方法
一．低倍镜观察：选择细胞分布均匀、染色好的部位，转油镜下计数100—200个
细胞，求出各种白细胞所占百分比。包括：中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸细胞、
嗜碱细胞。
二．细胞分布：头体部以淋巴细胞较多，尾部和两侧以中性粒、单核细胞较多，片尾部异常
大的细胞较多。一般选择体尾交界处，细胞分布均匀的地方按一定方式，有规律的移动视野。
三．发现幼稚或异常白细胞，应分类报告，包括在分类百分率中。如遇到不能确认的细胞，
应另列入分类不明一项，如实报告，并保留血片。如发现有核红细胞，应报告分类100个白
细胞所见有核红细胞数。
网上下载：
一、血涂片检查步骤
1、 血涂片显微镜检查 ：首先在低倍镜下进行浏览，观察有无异常细胞和细胞分布情况。
然后，在100倍油镜下观察细胞浆内的颗粒和核分叶情况。
2、 检查从约50％的红细胞互相重叠区域开始，向红细胞完全散开的区域推移。血涂片较
薄的区域，呈羽毛状，为“血片边缘”。
3、 中性粒细胞，单核细胞和淋巴细胞分布均匀的区域为血涂片分类“可接受”区域。当白
细胞总数正常时，在血涂片尾部和边缘，每油镜视野所见的白细胞数量不超过血涂片体部的
2～3倍。
4、除某些病理情况（如慢性淋巴细胞白血病）外，破碎细胞或不能识别细胞的数量不超过
白细胞总数的2%。若破碎细胞仍能明确鉴别（如破碎的嗜酸性粒细胞）应包括在分类计数
中。在结果报告中，应设其他栏，以备填写破碎细胞或不能识别细胞，并作适当描述。
5、 计数方法 采用“城垛式”方法检查血涂片。每个明确识别的细胞必须归入下列分类中：
中性分叶核粒细胞；中性杆状核粒细胞；淋巴细胞；异型淋巴细胞；单核细胞；嗜酸性粒细
胞；嗜碱性粒细胞；其他有核细胞（除有核红细胞外）。能明确识别的破碎细胞，应恰当分
类。
6、 每张血涂片应计数200个白细胞，若样本中白细胞数量减少，应增加检查血涂片的数
量。 白细胞分类结果以百分率和绝对值表示。
7、计数所有的有核红细胞，结果以每100个白细胞计数中见到几个表示。
二、 检验人员要求和考核
1、 检验人员的要求
（1） 检验人员的经验
检验人员必须能对所有常见白细胞进行分类，并了解大多数白细胞的形态异常，包括先天性
和获得性。参与细胞形态学检查的检验人员必须进行专业培训，并具备实际工作经验。
（2） 检验人员的态度
检验人员的工作态度、动机和专心程度是关键因素。因为白细胞分类计数是一项主观性很强
的工作，影响分类计数的因素很多，有检验人员的态度、实验室环境条件和工作量等。对于
以每张血涂片计数200个白细胞的参考方法工作量来说，每天每个检验人员血涂片检验数量
约为15～25张。
三、血涂片考核