2024年4月6日发(作者：红怜南)
沈阳农业大学学报，２０１２—０２，４３（１）：６７－７１
ｆ
Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ａｇｒ
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏ
ｉｅｕｈｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１ ２－０２，４３（１）：６７－７ １
肥育猪背最长肌ＮＦ—ＫＢ，ＩＫＢ０【和ｐ９４蛋白表达量
与其剪切力的相关性研究
张 勇 ａ，朱宇旌ｈ，邓 科ｌｂ孙 璀ｌｂ陶 亮ｈ，崔 岩ｈ，季文彦２ ７邵彩梅
（１．沈阳农业大学ａ．畜牧兽医学院，ｂ，生物科学技术学院，沈阳１１０１６１；
２．辽宁禾丰牧业股份有限公司，沈阳１１０１６４）
摘要：研究饲粮不同蛋白水平对猪骨骼肌中ＮＦ—ＫＢ、ＩｎＢａ和ｐ９４蛋白表达量的影响，并探讨其与剪切力的相关性。试验选用９０
头约５０ｋｇ的杜洛克ｘ长白ｘ？２白ｌ一元杂交猪（公母各半，公猪去势），随机分为３个处理组，每个处理组３个重复，每个重复１０头，
分别饲喂蛋白质水平为１２％、１６％和２０％的饲粮，各饲粮能量及氨基酸模式相同，饲养５８ｄ后屠宰取样，用蛋白质免疫印迹法测
定猪背最长肌中ＮＦ—ＫＢ、ＩＫＢｃｔ和ｐ９４在骨骼肌中的蛋白含量。结果表明：饲粮蛋白水平对猪骨骼肌中ＮＦ—ＫＢ蛋白含量影响不显
著（ｐ＞０．Ｏ５），但对ＩＫＢｃ￣和ｐ９４蛋白含量和肌肉剪切力影响显著（ｐ＜０．０５），且随着饲粮蛋白水平升高，叽肉ＩＫＢａ蛋白含量呈升高
趋势，ｐ９４和ＮＦ—ＫＢ蛋白含量呈降低趋势，肌肉剪切力呈升高趋势。肌肉ＩＫＢｔｘ蛋白含量与剪切力呈＿吐：相关，ｐ９４蛋白含量与剪切
力呈负相关，ＮＦ—ＫＢ蛋白含量与剪切力不相关。
关键词：肥育猪；饲粮蛋白水平；核因子ＫＢ；抑制蛋白ＫＢｏＬ；ｐ９４；肌肉剪切力
中图分类号：￥８２８．９．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００—１７００（２０１２）０１—００６７—０５
Ｔｈｅ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ Ｂｅｔｗｅｅｎ ＮＦ－ＫＢ，ＩＫＢ０［，ａｎｄ ｐ９４ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ
Ｓｈｅａｒ Ｆｏｒｃｅ ｉｎ Ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ Ｍｕｓｃｌｅ ｉｎ Ｆｉｎｉｓｈｉｎｇ Ｐｉｇ
ＺＨＡＮＧ Ｙｏｎｇ ａ，ＺＨＵ Ｙｕ－ｊｉｎｇ ａ，ＤＥＮＧ Ｋｅ ｈ，ＳＵＮ Ｃｕｉ ｂ，ＣＵＩ ｆａｎ ｜ｌ，
ＴＡＯ Ｌｉａｎｇ ｄ＇．ＪＩ Ｗｅｎ－ｙａｎ￣ＳＨＡＯ Ｃａｉ－ｍｅｉ。
（１．ａ．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ ａｎｄ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，ｂ．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ
１ １０１６１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｗｅｌｌｈｏｐｅ Ａｇｒｉ－Ｔｅｃｈ Ｃｏ．Ｌｔｄ．Ｓｈｅｎｙａｎｇ １ １０１６４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ａｉｍｅｄ ｔｏ ｅｘａｍｉｎｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｅｔａｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｎ ＮＦ—ＫＢ，ＩＫＢｃ￣ａｎｄ ｐ９４ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ
ｍｕｓｃｌｅ ｓｈｅａｒ ｆｏｒｃｅ ｉｎ ｓｗｉｎｅ ｐｉｇ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ．Ｎｉｎｅｔｙ ｃｒｏｓｓｅｄ—ｂｒｅｄ（Ｄｕｒｏｅ￣ＬａｎｄｒａｅｅｘＹｏｒｋｓｈｍｅ）ｐｉｇｓ ｗｉｔｈ ａｎ ａｖｅｒａｇｅ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ
５０ ｋｇ，ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ａｓｓｉｇｎｅｄ ｔｏ ｔｈｒｅｅ ｄｉｅｔａｒｙ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｔｈｒｅｅ ｒｅｐｌｉｃａｔｅｓ ａｎｄ ｔｅｎ ｐｉｇｓ ｉｎ ｅａｃｈ ｐｅｎ，ａｎｄ ｆｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｅｔｓ ｏｆ
ｔｈｒｅｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌｓ（１２％，１６％ａｎｄ ２０％）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｅｎｅｒｇｙ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｐａｔｔｅｒｎ ｉｎ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｄｉｅｔｓ ｗｅｒｅ ｋｅｐｔ ｔｈｅ
ｓａｍｅ．Ｔｈｅ ｗｈｏｌｅ ｆｅｅｄｉｎｇ ｔｒｉａ１ ｌａｓｔｅｄ ｆｏｒ ５８ ｄａｙｓ．Ｔｈｅｎ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｏｍｉｅｓ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｏｆ ＮＦ—ＫＢ．ＩＫＢｏｔ ａｎｄ ｐ９４ ｉｎ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｄｉｅｔａｒｙ ｐｒ一９ｔｅｉｎ ｈａｄ ｎｏ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ
ＮＦ—ＫＢ ＞０．０５）。ｂｕｔ ｈａｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ＩＫＢ ａｎｄ ｐ９４ ｐｒｏｔｅｏｎｆｉｃｓ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｍｕｓｃｌｅ ｓｈｅａｒ ｆｏｒｃｅ ｉｎ ｓｋｅｌｅｔａｌ
ｍｕｓｃｌｅ（ｐ＜０．０５）．ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｅｒｅａｓｅ ｏｆ ｄｉｅｔ ｐｒｏｔｅｉｎ １ｅｖｅ１．ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＩＫＢｏｔ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｈｅａｒ ｆｏｒｅｅ ｉｎ １ｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ ｍｕｓｃｌｅ
ｉｎｅｒｅａｓｅｄ．ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＮＦ—ＫＢ ａｎｄ ｐ９４ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＩＫＢｃ￣ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｓｈｅａｒ
ｏｒｅｅ ｐｏｓｉｔｆｉｖｅｌｙ，ｂｕｔ ｐ９４ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｓｈｅａｒ ｆｅｒｃｅ ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ，ｗｈｉｌｅ ＮＦ—ＫＢ ｄｉｄ ｎｏｔ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｓｈｅａｒ ｆｏｒｃｅ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｆｉｎｉｓｈｉｎｇ ｐｉｇ；ｄｉｅｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌ；ＮＦ－ＫＢ；ＩＫＢｃ￣；ｐ９４；ｍｕｓｃｌｅ ｓｈｅａｒ ｆｏｒｃｅ
钙蛋白酶系统（ｃａｌｐａｉｎｓ）在肌细胞再生和细胞凋亡过程中发挥着重要的调节作用，也是动物宰后肌肉剪切
力的关键酶系。骨骼肌特异性蛋白酶ｐ９４（ｅａｌｐａｉｎ一３，ＣＡＰＮ３）是钙蛋白酶（ｃａｌｐａｉｎｓ）系统的一员，与肌肉生成和
细胞凋亡密切相关，同时也被认为参与了蛋白降解过程。核转录因子ＮＦ—ＫＢ广泛存在＝Ｆ真核生物中，是一个由
复杂的多肽亚基组成的蛋白质家族，在肌肉细胞形成、肌肉细胞再生和细胞增殖中发挥了重要作用Ｉｌｌ。Ｉｓ：Ｂ蛋白
家族是ＮＦ—ＫＢ的抑制剂，主要家族成员有ＩＫＢａ，ＩＫＢＩ３，ＩＫＢ ，Ｉｓ：Ｂｅ，ＩＫＢ∈和Ｂｃｌ一３［２１。ｐ９４一ＮＦ—ＫＢ—ＩＣＢｅｔ信号途
径被认为是肌肉降解过程中的关键酶系＿３－４１。本课题组近期研究表明，通过不同饲喂方式或改变饲粮蛋白水平
收稿日期：２０１１—１０—３１
基金项目：国家自然科学基金项目（３０９７２１１２）
作者简介：张 勇（１９７２一），男，沈阳农业大学教授，博士，从事单胃动物营养研究。
‘
６８‘ 沈 阳 农 业 大 学 学 报 第４３卷
可以改变肥育猪钙蛋白酶系统基因表达状况同时改变猪肉剪切力［５－６１，饲喂不同蛋白水平的饲粮还对肥育猪
ＮＦ—ＫＢ，ＩＫＢｏ￣和ｐ９４ｍＲＮＡ丰度有一定影响Ｉ５＿蜘，但饲喂不同蛋白水平的饲粮是否影响肌肉ｐ９４．ＮＦ—ＫＢ和ＩＫＢ
的蛋白表达量还不清楚，ＮＦ—ＫＢ—ＩＫＢｃｘ—ｐ９４信号途径是否在猪肉嫩度调控过程中发挥作用有待研究。本试验通
过饲喂肥育猪不同蛋白水平的饲粮来改变猪肉剪切力，通过蛋白质免疫印迹法检测猪骨骼肌中ｐ９４，ＮＦ—ＫＢ和
Ｉ￣：ＢｏＬ蛋白表达量，探讨ｐ９４，ＮＦ—ＫＢ和ＩＫＢｃ￣蛋白表达量与猪肉剪切力的相关性，以明确ｐ９４一ＮＦ—ＫＢ—ＩＫＢ 在
猪肉嫩度调控过程中发挥的作用
１材料与方法
１．１材料
试验动物选用杜洛克×长白×大白三元杂交猪９Ｏ头，公母各半。参照美国ＮＲＣ（１９９８）￣１Ｅ育猪的营养需要配
制３种粉状全价料，３种饲粮消化能保持相同，氨基酸模式相同，但蛋白水平不同（１２％、１６％和２０％）。饲粮配
方、营养水平见表１
表１基础饲粮的组成及营养水平（风干基础）
Ｔａｂｌｅ １ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄｉｅｔｓ（ａｉｒ－ｄｒｙ ｂａｓｉｓ）
原料
［ｎｇｒｅｄｉｅｎｔ
／％
ＣＰ １６％ ＣＰ １２％
饲粮配方Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｅｔｓ
ＣＰ ２０％ ＣＰ １６％ ＣＰ １２％
营养水平Ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｌｅｖｅｌｓ
ＣＰ ２０％
玉米Ｃｏｒｎ
豆粕Ｓｏｙｂｅａｎ Ｍｅａｌｆ ４４％１
玉米ＤＤＧＳ
５８．１２
２９．７６
６
６９．Ｏ１
１８．０２
６
８３．ｏ９
９．０３
一
消化能ＤＥ／ＭＪ・ｋｇ－’
粗蛋白质ＣＰ
钙Ｃａ
１２．９４
２０
０．６５
１２．９４
１６
０．７
１２．９４
１２
０．７
膨化大豆Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｓｏｙｂｅａｎ
石粉Ｌｉｍｅｓｔｏｎｅ
２
１ １７
２
１＿１８
２
０．９６
有效磷ＡＰ
真可消化赖氨酸ＴＤＬｙｓ
０．２８
０ Ｏ
０．３０
Ｏ．８０
０．３３
０．７８
磷酸氢钙ＣａＨＰＯ
玉米油Ｃｏｒｎ ｏｉｌ
盐ＮａＣ１
ＤＬ一蛋氨酸ＤＬ—Ｍｅｔ．
６５％赖氨酸盐酸Ｌ—Ｌｙｓ．ＨＣ１
植酸酶Ｐｈｙｔａｓｅ
０．５６
０．６７
０．２９
一
—
０．０２
０．８４
０．６７
０．４２
０．０４
０．３８
０．０２
１．２
０．６７
０．５
０．１２
０．８ｌ
０．０２
真可消化蛋氨酸ＴＤＭｅｔ
真可消化苏氨酸ＴＤＴｈｒ
真可消化色氨酸ＴＤＴｒｐ
０，３１
０．６４
Ｏ．１８
Ｏ．２８
０．５０
０．１５
０．２９
０．５０
０．０９
Ｌ一苏氨酸Ｌ—ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ
甜味剂Ｓｗｅｅｔｅｒ
预混料Ｐｒｅｍｉｘ
一
０．０２
１．４
０．Ｏｌ
０．０２
１．４
０．１６
０．０２
１，４
合计Ｔｏｔｌａ １００．Ｏ０ １００．００ １００．Ｏ０
原料成本Ｃｏｓｔ／元・ｋｇ－ ２．４０ ２．２６ ２．２３
注：每千克预混料含有：ＶＡ １３００ＩＵ；ＶＤ １５０ ＩＵ；ＶＥ ２０ｍｇ；ＶＫ３ ０．５ｒａｇ；ＶＢ１ ｌｍｇ；ＶＢ２ ２ｍｇ；ＶＢ６ ｌｍｇ；ＶＢ１２ ０，００６ｒａｇ；烟酸７．５ｒａｇ；泛酸
７ｒａｇ；叶酸０．３ｍｇ；￣０．０５ｍｇ；氯化胆碱３００ｍｇ；Ｆｅ ５０ｍｇ；Ｚｎ ５０ｍｇ；Ｃｕ ３．５ｍｇ；Ｍｎ ２．０ｍｇ；１ ０．１４ｒａｇ；Ｓｅ ０．２５ｍｇ；Ｌｙｓ ７０ｇ。
Ｎｏｔｅ：Ｐｒｏｖｉｄｅｄ ｐｅｒ ｋｉｌｏｇｒａｍ ｏｆ ｐｒｅｍｉｘ：ＶＡ １３００ＩＵ；ＶＤ １５０ ＩＵ；ＶＥ ２０ｍｇ；ＶＫ３ ０．５ｍｇ；ＶＢＩ １ｍｇ；ＶＢ２ ２ｍｇ；ＶＢ６ ｌｍｇ；ＶＢ１２ ０．００６ｒａｇ；
Ｎｉｃｏｔｉｎｉｃ ａｃｉｄ ７．５ｍｇ；Ｄ－ｐａｎｔｏｔｈｅｎｉｃ ａｃｉｄ ７ｍｇ；Ｆｏｌｉｃ ａｃｉｄ ０．３ｍｇ；Ｂｉｏｔｉｎ ０．０５ｒａｇ；Ｃｈｏｌｉｎｅ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ３００ｒａｇ；Ｆｅ ５０ｒａｇ；Ｚｎ ５０ｍｇ：Ｃｕ ３．５ｍｇ；
Ｍｎ ２．Ｏｍｇ；１ ０．１４ｍｇ；Ｓｅ ０．２５ｍｇ；Ｌｙｓ ７０ｇ．
１．２方法
选择９０头日龄、胎次、体重相近，身体健康，初始重约为５０ｋｇ杜洛克×长白×大白三元杂交猪，公母各半，公
猪去势。随机分为３个处理组，每个处理组３个重复，每个重复１０头猪，每个处理组中随机抽取９头进行采样。３
个处理组分别饲喂３种蛋白质水平的饲粮（１２％、１６％、２Ｏ％）。水泥地面圈养，自动添料器饲喂，保证试验猪自由采
食、自由饮水。保持舍内清洁，观察记录饲养期间猪的食欲、精神状况、粪便等情况。试验开始前完成驱虫、防疫、
编号等工作。预试期７ｄ，正试期５８ｄ，进行屠宰试验，取猪背最长肌样本，肌肉样本迅速用液氮冷冻，一８０￣Ｃ保存。
１．３肌肉剪切力测定
样品采集与测定按张勇等方法［７Ｉ。
１．４用蛋白质免疫印迹法测定猪背最长肌中ＮＦ—ＫＢ和ＩＫＢ０Ｉ在骨骼肌中的蛋白表达量
１．４．１ 总蛋白质的提取及蛋白质含量的测定按张勇等方法 。
第１期 张 勇等：肥育猪背最长肌ＮＦ—ＫＢ，ｂｄ３ｏｔ和ｐ９４蛋白表达量与其剪切力的相关性研究 ・６９
１．４．２蛋白质免疫印迹法将蛋白质样品（每个样品上样量约为ｌＯｌＬ）用浓缩胶Ｔ＝＝３％，分离胶Ｔ＝１２％的
ＳＤＳ一聚丙烯酰胺凝胶分离。然后在１００Ｖ电压下，电转移９０ｍｉｎ至ＮＣ膜（ＩｍＢｌｏｔｔｅｒＴＭ－ＮＣ，普利莱）上。内参抗
体为鼠单克隆抗体Ｂ—Ａｃｔｉｎ ｃ４（ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ），稀释比例为１：１０００，其二抗为山羊抗小鼠ＩｇＧ（中杉金桥），稀释比
例为１：２５００：对于ＮＦ—ＫＢ，ＩＫＢ和Ｐ９４蛋白，ＮＦＫＢ抗体为免多克隆抗体ａｂｃａｍ），稀释比例为１：１０００；ＩＫＢ抗体
为免多克隆抗体（博士德），稀释比例为１：１０００；Ｐ９４抗体为免多克隆抗体Ｃａｌｐａｉｎ ３（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ），稀释比例为１：
１０００，其二抗均为山羊抗免ＩｇＧ—ＨＲＰ（华安生物），稀释比例为１：２０００；采用ＨＲＰ—ＤＡＢ底物显色试剂盒
（ＰＡｌ０９，天根公司）检测蛋白质信号。
１．５数据统计与分析
用捷达凝胶成像系统ＪＤ８０１拍照，并进行图像处理及得出ＩＯＤ值，根据ＮＦ—ＫＢ、ＩＫＢｅ￣与Ｂ—Ａｃｔｉｎ的ＩＯＤ
值的比值得出ＮＦ—ＫＢ、ＩＫＢｃ￣在背最长肌中的相对含量。用ＳＰＳＳ１３．０软件进行ＡＮＯＶＡ分析、相关和回归分析，
结果用平均值±标准差表示。
２结果与分析
２．１不同蛋白质水平对ｐ９４。ＮＦ—ＫＢ和ｈｃＢｏ￣在骨骼肌中的蛋白表达量及肌肉剪切力的影响
不同饲粮蛋白饲喂肥育猪对其骨骼肌ｐ９４，ＮＦ—ＫＢ和ＩＫＢａ蛋白质表达的影响见图１。ｐ９４，ＮＦ—ＫＢ和ＩＫＢｅｔ
蛋白质在猪背最长肌中的相对含量及背最长肌剪切力测定结果表明（表２）：ＮＦ—ＫＢ蛋白相对表达量随蛋白水
平的升高而降低，但各个处理组间差异均不显著（ｐ＞Ｏ．０５）；ＩＫＢｏｔ蛋白相对表达量随蛋白水平的升高而升高，中
蛋白组与高、低蛋白组差异显著（ｐ＜０．０５），而高蛋白组与低蛋白组差异极显著（ｐ＜０．０１）；ｐ９４蛋白相对表达量随
蛋白水平升高而降低，且高蛋白组与低蛋白组间差异极显著（ｐ＜０．０１）；剪切力随蛋白水平的升高而升高，其中
高蛋白组与低蛋白组差异显著（ｐ＜０．０５）。
１ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ ＮＦ－ｋＢ
一
Ｌｐ
一
ＬＰ
—
ＭＰ
—
ＭＰ
—ＨＰ
—ＨＰ
—
Ｌｐ
一
—
ＭＰ
—ＨＰ
图１不同饲粮蛋白水平下ＮＦ—ＫＢ、ＩＫＢａ、ｐ９４与１３一Ａｅｔｉｎ的蛋白表达
ＬＰ．低蛋白饲粮组（ＣＰ＝１２％）；ＭＰ，中蛋白饲粮组（ＣＰ＝１６％）；ＨＰ．高蛋白饲粮组（ＣＰ＝２０％）
Ｆｉｇｕｒｅ １ Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＮＦ－ＫＢ，ＩＫＢｏ￣，ｐ９４ ａｎｄ １３－Ａｅｔｉｎ ｉｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｄｉｅｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌｓ
ＬＰ．Ｌｏｗ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌ（ｃＰ＝１２％）；ＭＰ．Ｍｏｄｅｒａｔｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌ（ＣＰ＝１６％）；ＨＰ．Ｈｉｇｈ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌ（ＣＰ＝２０％）
２．２ ＮＦ—ｗ，Ｂ，ＩＫＢａ和ｐ９４在骨骼肌中的蛋白表达量与肌肉剪切力的相关性
由表３可见，ＮＦ—ＫＢ蛋白相对表达量与剪切力呈负相关，相关系数为一０．４７４，且差异不显著（ｐ＞０．Ｏ５）；ＩＫＢｏｔ
蛋白相对表达量与剪切力呈正相关，相关系数为Ｏ．６６３，且差异极显著（ｐ＜０．０１），ＩＫＢｅ￣蛋白相对表达量越高剪
切力越高；ｐ９４蛋白相对表达量与剪切力呈负相关，相关系数一０．５１１，且差异显著（ｐ＜０．０５），ｐ９４蛋白相对表达量
越高剪切力越低。
２．３ ＮＦ—ＫＢ、ＩＫＢｏＬ和ｐ９４蛋白相对表达量三者之间的相关性
ＮＦ—ＫＢ与Ｉ￣Ｂｏｔ蛋白相对表达量差异显著（ｐ＜０．０５），相关系数为一０．４７３，两者呈负：泪关；ｐ９４与ＮＦ—ＫＢ蛋白
相对表达量的相关系数０．２９７，差异不显著（ｐ＞０．０５）；ｐ９４与ＩＫＢ蛋白相对表达量的相关系数为一０．５６６，且差异
７０‘ 沈 阳 农 业
大 学 学 报 第４３卷
表２ ＮＦ－ＫＢ和ＩＫＢｏ￣在猪背最长肌中的相对含量及背最
表３ ＮＦ－ＫＢ，ＩＫＢｏＬ和ｐ９４在骨骼肌中相对表达量与背最
长肌剪切力值
长肌剪切力的回归方程
Ｔａｂｌｅ ２ ＮＦ—－ＫＢ ａｎｄ ＩＫＢｏＬ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ
ｔｈｅ ｓｈｅａｒ ｆｏｒｃｅ ｖａｌｕｅ ｉｎ ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ ｄｏｒｓｉ ｏｆ ｐｉｇｓ
Ｔａｂｌｅ ３ Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ＮＦ－－ＫＢ，ＩＫＢｏＬ ａｎｄ
ｐ９４ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ ｄｏｒｓｉ ａｎｄ ｓｈｅａｒ ｆｏｒｃｅ
Ｐｍｔｅｉｎ ｒｅｌａｄｖｅ ｃ０ｎｔｅｎｔ ２０％ １６％ １２％
注：同行 表示差异显著 ＜０ ０５）， ｛表示差异极显著（Ｐ＜Ｏ．Ｏ１），未标表
示差异不 著 ＞Ｏ．０５）。下表同
Ｎｏｔｅ：Ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｈｌｍｎ， ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（ｐ＜Ｏ．０５１． ｉｎ—
ｄｉｃａｌｅｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ（ｐ＜０．Ｏ１）．Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ．
显著 ＜０．０５）。
表４ ＮＦ—ＫＢ，ＩＫＢ 和ｐ９４相对蛋白表达量间的相关性
Ｔａｂｌｅ ４ Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ＮＦ－ＫＢ，ＩＫＢｏ￣
ａｎｄ ｐ９４ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
３ 讨论
３．１饲粮中不同蛋白质水平对肌肉剪切力的影响
饲粮中蛋白质含量只有与猪生长所需蛋白质的
量相适应，才能获得最大的蛋白质沉积，保证瘦肉的
生长 本试验结果中随着蛋白质水平的提高肌肉的
剪切力也有提高的趋势，与ＤＡＶＥＹ等，ＧＯＥＲＬ等【
９Ｊ研究结果相一致。低蛋白质水平能提高肉的嫩度，
其原因可能是肌肉内脂肪含量的升高和低蛋白饲粮
促使体内蛋白质周转加快所致 。
３．２ ＮＦ—ＫＢ，ＩＫＢｏＬ和ｐ９４蛋白表达量对肌肉剪切力的影响
肉的嫩度主要决定于肌纤维、肌节长度、肌内脂肪和结缔组织等，肌纤维的数量在出生时就决定了，出生后
肌纤维生长只限于肌纤维长度和横切面积的增长。研究表明 ，ＮＦ—ＫＢ家族的所有成员都参与了肌肉形成。
ＮＡＤＩＮＥ．Ａ指ｍ…Ｉ，ＮＦ—ＫＢ既可以作为肌原细胞分化与增殖的催化剂，也可以作为其抑制剂；但在成熟肌肉细
胞中干扰ＮＦ—ＫＢ信号通路可以加速再生性的肌细胞生成，反过来说，这个途径负调控成熟肌细胞的分化。说明
在成熟肌细胞中，ＮＦ—ＫＢ主要作用还是调控肌细胞再生，对于肌肉嫩度并没有直接的影响。这也与试验中ＮＦ—
ＫＢ与剪切力间不存在相关性的结果相符合。
ＧＵＴＴＲ１ＤＧＥ Ｄ Ｃ研究表明旧，通过提高ＩＫＢｃ￣的表达可以抑制ＮＦｋＢ信号途径，并增加肌细胞生成素（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）
的表达及加速肌小管（ｍｙｏｔｕｂｅ）的形成。此外．研究发现ｌｌ３。４＝Ｉ，很多抑制剂可以阻碍分化或最少使ＮＦ—ＫＢ失活，
从而阻碍细胞融合和骨骼肌特异性蛋白ｐ９４的表达。也有研究证明ｐ９４通过调节核因子１ＫＢ（ｘ而与控制细胞
凋亡问存在关联［１５－１６１。本试验中ＩＫＢｃ￣蛋白表达量之所以与剪切力呈一定的相关性，可能是与骨骼肌特异性蛋
白ｐ９４的表达有关。骨骼肌特异性蛋白ｐ９４作为钙蛋白酶（ｃａｌｐａｉｎｓ）家族的一员有可能参与或是调控了蛋白质
降解过程，且有研究Ｉ１７－］８１发现，ｃａｌｐａｉｎ首先水解的是Ｎ２线（Ｎ２１ｉｎｅ）。而ｐ９４与Ｎ２线的组分之一肌联蛋白紧密
结合在一起。通过本试验的结果来看，ｐ９４蛋白相对表达含量降低的同时肌肉剪切力升高，且相关性显著，说明
ｐ９４应当是参与了蛋白降解过程。前期研究中的ｐ９４ｍＲＮＡ丰度呈现的规律与本试验蛋白表达量检测结果不一
致，可能是因为ｐ９４ｍＲＮＡ在转录后所表达的原蛋白必须经过激活后才能表达活性 ，这点也与国外的一些研
究相同Ｉ】９Ｉ。
３．３饲粮中不同蛋白质水平对ＮＦ—ＫＢ。ＩＫＢｏ￣和ｐ９４蛋白表达量的影响
试验中饲粮中不同蛋白质水平对ＩＫＢ（ｘ的蛋白表达差异显著，且蛋白水平上升ＩＫＢｃ￣蛋白表达量升高。而
ｐ９４与ＮＦ～ＫＢ的蛋白表达均降低。其分子机理可能与ｐ９４有关，目前尚未见到这方而的报道．．而ＩＫＢ 作为
ＮＦ－ＫＢ的抑制剂，ＩＫＢｃ￣蛋白表达量的提高必定会抑制ＮＦ—ＫＢ的表达，但ｈ＜Ｂｃ￣并不是ＮＦ—ＫＢ唯一的的抑制
第１期 张 勇等：肥育猪背最长肌ＮＦ—ＫＢ，ＩＫＢｏｔ和ｐ９４蛋白表达量与其剪切力的相关性研究 ・７１・
剂，这也解释了试验中两者蛋白表达量相关系数不高的情况，同样，也解释了试验中ＮＦ。－ＫＢ蛋白表达量与饲粮
中蛋白质水平之间差异不显著的情况。ｐ９４与肌肉剪切力和ＩＫＢｃ￣的蛋白相对表达含量呈负相关，说明ｐ９４蛋
白相对表达量的升高可以抑制ＩＫＢｃ￣的表达同时降低肌肉剪切力。ＳＯＲＩＭＡＣＨＩ于２０００年也曾在试验中指出
［２ｏｌ
，
ｐ９４可以降解ＩＫＢｃｔ从而使ＮＦ—ＫＢ转移进入核内，这与本试验结果也正好相符。
参考文献：
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ｐｒｏｆｏｕｎｄ ｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＩＫＢｃｄＮＦ－ＫＢ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｌｉｍｂ－ｇｉｒｄｌｅ ｍｕｓｃｕｌａｒ ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ ｔｙｐｅ ２Ａ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｍｅｄ，１９９９，５：５０３—５１ １．
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［１７１ ＨＥＮＫ Ｌ ＧＲＡＮＺＩＥＲ，ＳＩＥＧＦＲＩＥＤ ＬＡＢＥＩＴ．Ｔｈｅ Ｇｉａｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｉｔｉｎ：Ａ ｍａｊｏｒ ｐｌａｙｅｒ ｉｎ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｍｅｃｈａｎｉｃｓ，ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，ａｎｄ
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［２０１ ＳＯＲＩＭＡＣＨＩ Ｈ，ＯＮＯ Ｙ，ＳＵＺＵＫＩ Ｋ．Ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ－ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｃａｌｐａｉｎ．ｐ９４．ａｎｄ ｃｏｎｎｅｃｔｉｎ／ｔｉｔｉｎ：Ｔｈｅｉｒ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ
ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｔｏ ｌｉｍｂ—ｇｉｒｄｌｅ ｍｕｓｃｕｌａｒ ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ ｔｙｐｅ ２Ａ［Ｊ］．Ｂｉｏｌ，２０００，４８ １：３８３—３９５．
［责任编辑王娟】
2024年4月6日发(作者：红怜南)
沈阳农业大学学报，２０１２—０２，４３（１）：６７－７１
ｆ
Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ａｇｒ
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏ
ｉｅｕｈｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１ ２－０２，４３（１）：６７－７ １
肥育猪背最长肌ＮＦ—ＫＢ，ＩＫＢ０【和ｐ９４蛋白表达量
与其剪切力的相关性研究
张 勇 ａ，朱宇旌ｈ，邓 科ｌｂ孙 璀ｌｂ陶 亮ｈ，崔 岩ｈ，季文彦２ ７邵彩梅
（１．沈阳农业大学ａ．畜牧兽医学院，ｂ，生物科学技术学院，沈阳１１０１６１；
２．辽宁禾丰牧业股份有限公司，沈阳１１０１６４）
摘要：研究饲粮不同蛋白水平对猪骨骼肌中ＮＦ—ＫＢ、ＩｎＢａ和ｐ９４蛋白表达量的影响，并探讨其与剪切力的相关性。试验选用９０
头约５０ｋｇ的杜洛克ｘ长白ｘ？２白ｌ一元杂交猪（公母各半，公猪去势），随机分为３个处理组，每个处理组３个重复，每个重复１０头，
分别饲喂蛋白质水平为１２％、１６％和２０％的饲粮，各饲粮能量及氨基酸模式相同，饲养５８ｄ后屠宰取样，用蛋白质免疫印迹法测
定猪背最长肌中ＮＦ—ＫＢ、ＩＫＢｃｔ和ｐ９４在骨骼肌中的蛋白含量。结果表明：饲粮蛋白水平对猪骨骼肌中ＮＦ—ＫＢ蛋白含量影响不显
著（ｐ＞０．Ｏ５），但对ＩＫＢｃ￣和ｐ９４蛋白含量和肌肉剪切力影响显著（ｐ＜０．０５），且随着饲粮蛋白水平升高，叽肉ＩＫＢａ蛋白含量呈升高
趋势，ｐ９４和ＮＦ—ＫＢ蛋白含量呈降低趋势，肌肉剪切力呈升高趋势。肌肉ＩＫＢｔｘ蛋白含量与剪切力呈＿吐：相关，ｐ９４蛋白含量与剪切
力呈负相关，ＮＦ—ＫＢ蛋白含量与剪切力不相关。
关键词：肥育猪；饲粮蛋白水平；核因子ＫＢ；抑制蛋白ＫＢｏＬ；ｐ９４；肌肉剪切力
中图分类号：￥８２８．９．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００—１７００（２０１２）０１—００６７—０５
Ｔｈｅ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ Ｂｅｔｗｅｅｎ ＮＦ－ＫＢ，ＩＫＢ０［，ａｎｄ ｐ９４ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ
Ｓｈｅａｒ Ｆｏｒｃｅ ｉｎ Ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ Ｍｕｓｃｌｅ ｉｎ Ｆｉｎｉｓｈｉｎｇ Ｐｉｇ
ＺＨＡＮＧ Ｙｏｎｇ ａ，ＺＨＵ Ｙｕ－ｊｉｎｇ ａ，ＤＥＮＧ Ｋｅ ｈ，ＳＵＮ Ｃｕｉ ｂ，ＣＵＩ ｆａｎ ｜ｌ，
ＴＡＯ Ｌｉａｎｇ ｄ＇．ＪＩ Ｗｅｎ－ｙａｎ￣ＳＨＡＯ Ｃａｉ－ｍｅｉ。
（１．ａ．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ ａｎｄ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，ｂ．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ
１ １０１６１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｗｅｌｌｈｏｐｅ Ａｇｒｉ－Ｔｅｃｈ Ｃｏ．Ｌｔｄ．Ｓｈｅｎｙａｎｇ １ １０１６４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ａｉｍｅｄ ｔｏ ｅｘａｍｉｎｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｅｔａｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｎ ＮＦ—ＫＢ，ＩＫＢｃ￣ａｎｄ ｐ９４ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ
ｍｕｓｃｌｅ ｓｈｅａｒ ｆｏｒｃｅ ｉｎ ｓｗｉｎｅ ｐｉｇ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ．Ｎｉｎｅｔｙ ｃｒｏｓｓｅｄ—ｂｒｅｄ（Ｄｕｒｏｅ￣ＬａｎｄｒａｅｅｘＹｏｒｋｓｈｍｅ）ｐｉｇｓ ｗｉｔｈ ａｎ ａｖｅｒａｇｅ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ
５０ ｋｇ，ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ａｓｓｉｇｎｅｄ ｔｏ ｔｈｒｅｅ ｄｉｅｔａｒｙ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｔｈｒｅｅ ｒｅｐｌｉｃａｔｅｓ ａｎｄ ｔｅｎ ｐｉｇｓ ｉｎ ｅａｃｈ ｐｅｎ，ａｎｄ ｆｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｅｔｓ ｏｆ
ｔｈｒｅｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌｓ（１２％，１６％ａｎｄ ２０％）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｅｎｅｒｇｙ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｐａｔｔｅｒｎ ｉｎ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｄｉｅｔｓ ｗｅｒｅ ｋｅｐｔ ｔｈｅ
ｓａｍｅ．Ｔｈｅ ｗｈｏｌｅ ｆｅｅｄｉｎｇ ｔｒｉａ１ ｌａｓｔｅｄ ｆｏｒ ５８ ｄａｙｓ．Ｔｈｅｎ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｏｍｉｅｓ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｏｆ ＮＦ—ＫＢ．ＩＫＢｏｔ ａｎｄ ｐ９４ ｉｎ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｄｉｅｔａｒｙ ｐｒ一９ｔｅｉｎ ｈａｄ ｎｏ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ
ＮＦ—ＫＢ ＞０．０５）。ｂｕｔ ｈａｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ＩＫＢ ａｎｄ ｐ９４ ｐｒｏｔｅｏｎｆｉｃｓ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｍｕｓｃｌｅ ｓｈｅａｒ ｆｏｒｃｅ ｉｎ ｓｋｅｌｅｔａｌ
ｍｕｓｃｌｅ（ｐ＜０．０５）．ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｅｒｅａｓｅ ｏｆ ｄｉｅｔ ｐｒｏｔｅｉｎ １ｅｖｅ１．ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＩＫＢｏｔ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｈｅａｒ ｆｏｒｅｅ ｉｎ １ｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ ｍｕｓｃｌｅ
ｉｎｅｒｅａｓｅｄ．ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＮＦ—ＫＢ ａｎｄ ｐ９４ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＩＫＢｃ￣ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｓｈｅａｒ
ｏｒｅｅ ｐｏｓｉｔｆｉｖｅｌｙ，ｂｕｔ ｐ９４ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｓｈｅａｒ ｆｅｒｃｅ ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ，ｗｈｉｌｅ ＮＦ—ＫＢ ｄｉｄ ｎｏｔ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｓｈｅａｒ ｆｏｒｃｅ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｆｉｎｉｓｈｉｎｇ ｐｉｇ；ｄｉｅｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌ；ＮＦ－ＫＢ；ＩＫＢｃ￣；ｐ９４；ｍｕｓｃｌｅ ｓｈｅａｒ ｆｏｒｃｅ
钙蛋白酶系统（ｃａｌｐａｉｎｓ）在肌细胞再生和细胞凋亡过程中发挥着重要的调节作用，也是动物宰后肌肉剪切
力的关键酶系。骨骼肌特异性蛋白酶ｐ９４（ｅａｌｐａｉｎ一３，ＣＡＰＮ３）是钙蛋白酶（ｃａｌｐａｉｎｓ）系统的一员，与肌肉生成和
细胞凋亡密切相关，同时也被认为参与了蛋白降解过程。核转录因子ＮＦ—ＫＢ广泛存在＝Ｆ真核生物中，是一个由
复杂的多肽亚基组成的蛋白质家族，在肌肉细胞形成、肌肉细胞再生和细胞增殖中发挥了重要作用Ｉｌｌ。Ｉｓ：Ｂ蛋白
家族是ＮＦ—ＫＢ的抑制剂，主要家族成员有ＩＫＢａ，ＩＫＢＩ３，ＩＫＢ ，Ｉｓ：Ｂｅ，ＩＫＢ∈和Ｂｃｌ一３［２１。ｐ９４一ＮＦ—ＫＢ—ＩＣＢｅｔ信号途
径被认为是肌肉降解过程中的关键酶系＿３－４１。本课题组近期研究表明，通过不同饲喂方式或改变饲粮蛋白水平
收稿日期：２０１１—１０—３１
基金项目：国家自然科学基金项目（３０９７２１１２）
作者简介：张 勇（１９７２一），男，沈阳农业大学教授，博士，从事单胃动物营养研究。
‘
６８‘ 沈 阳 农 业 大 学 学 报 第４３卷
可以改变肥育猪钙蛋白酶系统基因表达状况同时改变猪肉剪切力［５－６１，饲喂不同蛋白水平的饲粮还对肥育猪
ＮＦ—ＫＢ，ＩＫＢｏ￣和ｐ９４ｍＲＮＡ丰度有一定影响Ｉ５＿蜘，但饲喂不同蛋白水平的饲粮是否影响肌肉ｐ９４．ＮＦ—ＫＢ和ＩＫＢ
的蛋白表达量还不清楚，ＮＦ—ＫＢ—ＩＫＢｃｘ—ｐ９４信号途径是否在猪肉嫩度调控过程中发挥作用有待研究。本试验通
过饲喂肥育猪不同蛋白水平的饲粮来改变猪肉剪切力，通过蛋白质免疫印迹法检测猪骨骼肌中ｐ９４，ＮＦ—ＫＢ和
Ｉ￣：ＢｏＬ蛋白表达量，探讨ｐ９４，ＮＦ—ＫＢ和ＩＫＢｃ￣蛋白表达量与猪肉剪切力的相关性，以明确ｐ９４一ＮＦ—ＫＢ—ＩＫＢ 在
猪肉嫩度调控过程中发挥的作用
１材料与方法
１．１材料
试验动物选用杜洛克×长白×大白三元杂交猪９Ｏ头，公母各半。参照美国ＮＲＣ（１９９８）￣１Ｅ育猪的营养需要配
制３种粉状全价料，３种饲粮消化能保持相同，氨基酸模式相同，但蛋白水平不同（１２％、１６％和２０％）。饲粮配
方、营养水平见表１
表１基础饲粮的组成及营养水平（风干基础）
Ｔａｂｌｅ １ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄｉｅｔｓ（ａｉｒ－ｄｒｙ ｂａｓｉｓ）
原料
［ｎｇｒｅｄｉｅｎｔ
／％
ＣＰ １６％ ＣＰ １２％
饲粮配方Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｅｔｓ
ＣＰ ２０％ ＣＰ １６％ ＣＰ １２％
营养水平Ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｌｅｖｅｌｓ
ＣＰ ２０％
玉米Ｃｏｒｎ
豆粕Ｓｏｙｂｅａｎ Ｍｅａｌｆ ４４％１
玉米ＤＤＧＳ
５８．１２
２９．７６
６
６９．Ｏ１
１８．０２
６
８３．ｏ９
９．０３
一
消化能ＤＥ／ＭＪ・ｋｇ－’
粗蛋白质ＣＰ
钙Ｃａ
１２．９４
２０
０．６５
１２．９４
１６
０．７
１２．９４
１２
０．７
膨化大豆Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｓｏｙｂｅａｎ
石粉Ｌｉｍｅｓｔｏｎｅ
２
１ １７
２
１＿１８
２
０．９６
有效磷ＡＰ
真可消化赖氨酸ＴＤＬｙｓ
０．２８
０ Ｏ
０．３０
Ｏ．８０
０．３３
０．７８
磷酸氢钙ＣａＨＰＯ
玉米油Ｃｏｒｎ ｏｉｌ
盐ＮａＣ１
ＤＬ一蛋氨酸ＤＬ—Ｍｅｔ．
６５％赖氨酸盐酸Ｌ—Ｌｙｓ．ＨＣ１
植酸酶Ｐｈｙｔａｓｅ
０．５６
０．６７
０．２９
一
—
０．０２
０．８４
０．６７
０．４２
０．０４
０．３８
０．０２
１．２
０．６７
０．５
０．１２
０．８ｌ
０．０２
真可消化蛋氨酸ＴＤＭｅｔ
真可消化苏氨酸ＴＤＴｈｒ
真可消化色氨酸ＴＤＴｒｐ
０，３１
０．６４
Ｏ．１８
Ｏ．２８
０．５０
０．１５
０．２９
０．５０
０．０９
Ｌ一苏氨酸Ｌ—ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ
甜味剂Ｓｗｅｅｔｅｒ
预混料Ｐｒｅｍｉｘ
一
０．０２
１．４
０．Ｏｌ
０．０２
１．４
０．１６
０．０２
１，４
合计Ｔｏｔｌａ １００．Ｏ０ １００．００ １００．Ｏ０
原料成本Ｃｏｓｔ／元・ｋｇ－ ２．４０ ２．２６ ２．２３
注：每千克预混料含有：ＶＡ １３００ＩＵ；ＶＤ １５０ ＩＵ；ＶＥ ２０ｍｇ；ＶＫ３ ０．５ｒａｇ；ＶＢ１ ｌｍｇ；ＶＢ２ ２ｍｇ；ＶＢ６ ｌｍｇ；ＶＢ１２ ０，００６ｒａｇ；烟酸７．５ｒａｇ；泛酸
７ｒａｇ；叶酸０．３ｍｇ；￣０．０５ｍｇ；氯化胆碱３００ｍｇ；Ｆｅ ５０ｍｇ；Ｚｎ ５０ｍｇ；Ｃｕ ３．５ｍｇ；Ｍｎ ２．０ｍｇ；１ ０．１４ｒａｇ；Ｓｅ ０．２５ｍｇ；Ｌｙｓ ７０ｇ。
Ｎｏｔｅ：Ｐｒｏｖｉｄｅｄ ｐｅｒ ｋｉｌｏｇｒａｍ ｏｆ ｐｒｅｍｉｘ：ＶＡ １３００ＩＵ；ＶＤ １５０ ＩＵ；ＶＥ ２０ｍｇ；ＶＫ３ ０．５ｍｇ；ＶＢＩ １ｍｇ；ＶＢ２ ２ｍｇ；ＶＢ６ ｌｍｇ；ＶＢ１２ ０．００６ｒａｇ；
Ｎｉｃｏｔｉｎｉｃ ａｃｉｄ ７．５ｍｇ；Ｄ－ｐａｎｔｏｔｈｅｎｉｃ ａｃｉｄ ７ｍｇ；Ｆｏｌｉｃ ａｃｉｄ ０．３ｍｇ；Ｂｉｏｔｉｎ ０．０５ｒａｇ；Ｃｈｏｌｉｎｅ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ３００ｒａｇ；Ｆｅ ５０ｒａｇ；Ｚｎ ５０ｍｇ：Ｃｕ ３．５ｍｇ；
Ｍｎ ２．Ｏｍｇ；１ ０．１４ｍｇ；Ｓｅ ０．２５ｍｇ；Ｌｙｓ ７０ｇ．
１．２方法
选择９０头日龄、胎次、体重相近，身体健康，初始重约为５０ｋｇ杜洛克×长白×大白三元杂交猪，公母各半，公
猪去势。随机分为３个处理组，每个处理组３个重复，每个重复１０头猪，每个处理组中随机抽取９头进行采样。３
个处理组分别饲喂３种蛋白质水平的饲粮（１２％、１６％、２Ｏ％）。水泥地面圈养，自动添料器饲喂，保证试验猪自由采
食、自由饮水。保持舍内清洁，观察记录饲养期间猪的食欲、精神状况、粪便等情况。试验开始前完成驱虫、防疫、
编号等工作。预试期７ｄ，正试期５８ｄ，进行屠宰试验，取猪背最长肌样本，肌肉样本迅速用液氮冷冻，一８０￣Ｃ保存。
１．３肌肉剪切力测定
样品采集与测定按张勇等方法［７Ｉ。
１．４用蛋白质免疫印迹法测定猪背最长肌中ＮＦ—ＫＢ和ＩＫＢ０Ｉ在骨骼肌中的蛋白表达量
１．４．１ 总蛋白质的提取及蛋白质含量的测定按张勇等方法 。
第１期 张 勇等：肥育猪背最长肌ＮＦ—ＫＢ，ｂｄ３ｏｔ和ｐ９４蛋白表达量与其剪切力的相关性研究 ・６９
１．４．２蛋白质免疫印迹法将蛋白质样品（每个样品上样量约为ｌＯｌＬ）用浓缩胶Ｔ＝＝３％，分离胶Ｔ＝１２％的
ＳＤＳ一聚丙烯酰胺凝胶分离。然后在１００Ｖ电压下，电转移９０ｍｉｎ至ＮＣ膜（ＩｍＢｌｏｔｔｅｒＴＭ－ＮＣ，普利莱）上。内参抗
体为鼠单克隆抗体Ｂ—Ａｃｔｉｎ ｃ４（ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ），稀释比例为１：１０００，其二抗为山羊抗小鼠ＩｇＧ（中杉金桥），稀释比
例为１：２５００：对于ＮＦ—ＫＢ，ＩＫＢ和Ｐ９４蛋白，ＮＦＫＢ抗体为免多克隆抗体ａｂｃａｍ），稀释比例为１：１０００；ＩＫＢ抗体
为免多克隆抗体（博士德），稀释比例为１：１０００；Ｐ９４抗体为免多克隆抗体Ｃａｌｐａｉｎ ３（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ），稀释比例为１：
１０００，其二抗均为山羊抗免ＩｇＧ—ＨＲＰ（华安生物），稀释比例为１：２０００；采用ＨＲＰ—ＤＡＢ底物显色试剂盒
（ＰＡｌ０９，天根公司）检测蛋白质信号。
１．５数据统计与分析
用捷达凝胶成像系统ＪＤ８０１拍照，并进行图像处理及得出ＩＯＤ值，根据ＮＦ—ＫＢ、ＩＫＢｅ￣与Ｂ—Ａｃｔｉｎ的ＩＯＤ
值的比值得出ＮＦ—ＫＢ、ＩＫＢｃ￣在背最长肌中的相对含量。用ＳＰＳＳ１３．０软件进行ＡＮＯＶＡ分析、相关和回归分析，
结果用平均值±标准差表示。
２结果与分析
２．１不同蛋白质水平对ｐ９４。ＮＦ—ＫＢ和ｈｃＢｏ￣在骨骼肌中的蛋白表达量及肌肉剪切力的影响
不同饲粮蛋白饲喂肥育猪对其骨骼肌ｐ９４，ＮＦ—ＫＢ和ＩＫＢａ蛋白质表达的影响见图１。ｐ９４，ＮＦ—ＫＢ和ＩＫＢｅｔ
蛋白质在猪背最长肌中的相对含量及背最长肌剪切力测定结果表明（表２）：ＮＦ—ＫＢ蛋白相对表达量随蛋白水
平的升高而降低，但各个处理组间差异均不显著（ｐ＞Ｏ．０５）；ＩＫＢｏｔ蛋白相对表达量随蛋白水平的升高而升高，中
蛋白组与高、低蛋白组差异显著（ｐ＜０．０５），而高蛋白组与低蛋白组差异极显著（ｐ＜０．０１）；ｐ９４蛋白相对表达量随
蛋白水平升高而降低，且高蛋白组与低蛋白组间差异极显著（ｐ＜０．０１）；剪切力随蛋白水平的升高而升高，其中
高蛋白组与低蛋白组差异显著（ｐ＜０．０５）。
１ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ ＮＦ－ｋＢ
一
Ｌｐ
一
ＬＰ
—
ＭＰ
—
ＭＰ
—ＨＰ
—ＨＰ
—
Ｌｐ
一
—
ＭＰ
—ＨＰ
图１不同饲粮蛋白水平下ＮＦ—ＫＢ、ＩＫＢａ、ｐ９４与１３一Ａｅｔｉｎ的蛋白表达
ＬＰ．低蛋白饲粮组（ＣＰ＝１２％）；ＭＰ，中蛋白饲粮组（ＣＰ＝１６％）；ＨＰ．高蛋白饲粮组（ＣＰ＝２０％）
Ｆｉｇｕｒｅ １ Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＮＦ－ＫＢ，ＩＫＢｏ￣，ｐ９４ ａｎｄ １３－Ａｅｔｉｎ ｉｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｄｉｅｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌｓ
ＬＰ．Ｌｏｗ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌ（ｃＰ＝１２％）；ＭＰ．Ｍｏｄｅｒａｔｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌ（ＣＰ＝１６％）；ＨＰ．Ｈｉｇｈ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌ（ＣＰ＝２０％）
２．２ ＮＦ—ｗ，Ｂ，ＩＫＢａ和ｐ９４在骨骼肌中的蛋白表达量与肌肉剪切力的相关性
由表３可见，ＮＦ—ＫＢ蛋白相对表达量与剪切力呈负相关，相关系数为一０．４７４，且差异不显著（ｐ＞０．Ｏ５）；ＩＫＢｏｔ
蛋白相对表达量与剪切力呈正相关，相关系数为Ｏ．６６３，且差异极显著（ｐ＜０．０１），ＩＫＢｅ￣蛋白相对表达量越高剪
切力越高；ｐ９４蛋白相对表达量与剪切力呈负相关，相关系数一０．５１１，且差异显著（ｐ＜０．０５），ｐ９４蛋白相对表达量
越高剪切力越低。
２．３ ＮＦ—ＫＢ、ＩＫＢｏＬ和ｐ９４蛋白相对表达量三者之间的相关性
ＮＦ—ＫＢ与Ｉ￣Ｂｏｔ蛋白相对表达量差异显著（ｐ＜０．０５），相关系数为一０．４７３，两者呈负：泪关；ｐ９４与ＮＦ—ＫＢ蛋白
相对表达量的相关系数０．２９７，差异不显著（ｐ＞０．０５）；ｐ９４与ＩＫＢ蛋白相对表达量的相关系数为一０．５６６，且差异
７０‘ 沈 阳 农 业
大 学 学 报 第４３卷
表２ ＮＦ－ＫＢ和ＩＫＢｏ￣在猪背最长肌中的相对含量及背最
表３ ＮＦ－ＫＢ，ＩＫＢｏＬ和ｐ９４在骨骼肌中相对表达量与背最
长肌剪切力值
长肌剪切力的回归方程
Ｔａｂｌｅ ２ ＮＦ—－ＫＢ ａｎｄ ＩＫＢｏＬ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ
ｔｈｅ ｓｈｅａｒ ｆｏｒｃｅ ｖａｌｕｅ ｉｎ ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ ｄｏｒｓｉ ｏｆ ｐｉｇｓ
Ｔａｂｌｅ ３ Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ＮＦ－－ＫＢ，ＩＫＢｏＬ ａｎｄ
ｐ９４ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｓ ｄｏｒｓｉ ａｎｄ ｓｈｅａｒ ｆｏｒｃｅ
Ｐｍｔｅｉｎ ｒｅｌａｄｖｅ ｃ０ｎｔｅｎｔ ２０％ １６％ １２％
注：同行 表示差异显著 ＜０ ０５）， ｛表示差异极显著（Ｐ＜Ｏ．Ｏ１），未标表
示差异不 著 ＞Ｏ．０５）。下表同
Ｎｏｔｅ：Ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｈｌｍｎ， ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（ｐ＜Ｏ．０５１． ｉｎ—
ｄｉｃａｌｅｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ（ｐ＜０．Ｏ１）．Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ．
显著 ＜０．０５）。
表４ ＮＦ—ＫＢ，ＩＫＢ 和ｐ９４相对蛋白表达量间的相关性
Ｔａｂｌｅ ４ Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ＮＦ－ＫＢ，ＩＫＢｏ￣
ａｎｄ ｐ９４ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
３ 讨论
３．１饲粮中不同蛋白质水平对肌肉剪切力的影响
饲粮中蛋白质含量只有与猪生长所需蛋白质的
量相适应，才能获得最大的蛋白质沉积，保证瘦肉的
生长 本试验结果中随着蛋白质水平的提高肌肉的
剪切力也有提高的趋势，与ＤＡＶＥＹ等，ＧＯＥＲＬ等【
９Ｊ研究结果相一致。低蛋白质水平能提高肉的嫩度，
其原因可能是肌肉内脂肪含量的升高和低蛋白饲粮
促使体内蛋白质周转加快所致 。
３．２ ＮＦ—ＫＢ，ＩＫＢｏＬ和ｐ９４蛋白表达量对肌肉剪切力的影响
肉的嫩度主要决定于肌纤维、肌节长度、肌内脂肪和结缔组织等，肌纤维的数量在出生时就决定了，出生后
肌纤维生长只限于肌纤维长度和横切面积的增长。研究表明 ，ＮＦ—ＫＢ家族的所有成员都参与了肌肉形成。
ＮＡＤＩＮＥ．Ａ指ｍ…Ｉ，ＮＦ—ＫＢ既可以作为肌原细胞分化与增殖的催化剂，也可以作为其抑制剂；但在成熟肌肉细
胞中干扰ＮＦ—ＫＢ信号通路可以加速再生性的肌细胞生成，反过来说，这个途径负调控成熟肌细胞的分化。说明
在成熟肌细胞中，ＮＦ—ＫＢ主要作用还是调控肌细胞再生，对于肌肉嫩度并没有直接的影响。这也与试验中ＮＦ—
ＫＢ与剪切力间不存在相关性的结果相符合。
ＧＵＴＴＲ１ＤＧＥ Ｄ Ｃ研究表明旧，通过提高ＩＫＢｃ￣的表达可以抑制ＮＦｋＢ信号途径，并增加肌细胞生成素（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）
的表达及加速肌小管（ｍｙｏｔｕｂｅ）的形成。此外．研究发现ｌｌ３。４＝Ｉ，很多抑制剂可以阻碍分化或最少使ＮＦ—ＫＢ失活，
从而阻碍细胞融合和骨骼肌特异性蛋白ｐ９４的表达。也有研究证明ｐ９４通过调节核因子１ＫＢ（ｘ而与控制细胞
凋亡问存在关联［１５－１６１。本试验中ＩＫＢｃ￣蛋白表达量之所以与剪切力呈一定的相关性，可能是与骨骼肌特异性蛋
白ｐ９４的表达有关。骨骼肌特异性蛋白ｐ９４作为钙蛋白酶（ｃａｌｐａｉｎｓ）家族的一员有可能参与或是调控了蛋白质
降解过程，且有研究Ｉ１７－］８１发现，ｃａｌｐａｉｎ首先水解的是Ｎ２线（Ｎ２１ｉｎｅ）。而ｐ９４与Ｎ２线的组分之一肌联蛋白紧密
结合在一起。通过本试验的结果来看，ｐ９４蛋白相对表达含量降低的同时肌肉剪切力升高，且相关性显著，说明
ｐ９４应当是参与了蛋白降解过程。前期研究中的ｐ９４ｍＲＮＡ丰度呈现的规律与本试验蛋白表达量检测结果不一
致，可能是因为ｐ９４ｍＲＮＡ在转录后所表达的原蛋白必须经过激活后才能表达活性 ，这点也与国外的一些研
究相同Ｉ】９Ｉ。
３．３饲粮中不同蛋白质水平对ＮＦ—ＫＢ。ＩＫＢｏ￣和ｐ９４蛋白表达量的影响
试验中饲粮中不同蛋白质水平对ＩＫＢ（ｘ的蛋白表达差异显著，且蛋白水平上升ＩＫＢｃ￣蛋白表达量升高。而
ｐ９４与ＮＦ～ＫＢ的蛋白表达均降低。其分子机理可能与ｐ９４有关，目前尚未见到这方而的报道．．而ＩＫＢ 作为
ＮＦ－ＫＢ的抑制剂，ＩＫＢｃ￣蛋白表达量的提高必定会抑制ＮＦ—ＫＢ的表达，但ｈ＜Ｂｃ￣并不是ＮＦ—ＫＢ唯一的的抑制
第１期 张 勇等：肥育猪背最长肌ＮＦ—ＫＢ，ＩＫＢｏｔ和ｐ９４蛋白表达量与其剪切力的相关性研究 ・７１・
剂，这也解释了试验中两者蛋白表达量相关系数不高的情况，同样，也解释了试验中ＮＦ。－ＫＢ蛋白表达量与饲粮
中蛋白质水平之间差异不显著的情况。ｐ９４与肌肉剪切力和ＩＫＢｃ￣的蛋白相对表达含量呈负相关，说明ｐ９４蛋
白相对表达量的升高可以抑制ＩＫＢｃ￣的表达同时降低肌肉剪切力。ＳＯＲＩＭＡＣＨＩ于２０００年也曾在试验中指出
［２ｏｌ
，
ｐ９４可以降解ＩＫＢｃｔ从而使ＮＦ—ＫＢ转移进入核内，这与本试验结果也正好相符。
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Ｏｈｉｏ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００８．
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Ｂｉｏｌ，１９９９，１９（８）：５７８５—５７９９．
【１３】ＬＥＥ Ｋ Ｈ．ＮＦ—ｋａｐｐａＢ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｎｉｔｉｒｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｆｕｓｉｏｎ ｏｆ ｃｈｉｃｋ ｅｍｂｒｙｒｏｎｉｃ
ｍｙｏｂｌａｓｔｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ，１９９７，３２４：２３７～２４２．
［１４】ＫＩＭ Ｓ Ｓ．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ ｂｌｏｃｋ ｔｈｅ ｍｙｏｇｅｎｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｒａｔ Ｌ６ ｍｙｏｂｌａｓｔｓ［Ｊ］．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ，１９９８，４３３：４７—５０．
［１５】ＢＡＧＨＤＩＧＵＩＡＮ Ｓ，ＭＡＲＴＩＮ Ｍ，ＲＩＣＨＡＲＤ Ｉ，ｅｔ ａ１．Ｃａｌｐａｉｎ ３ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｋｈ ｍｙｏｎｕｃｌｅａｒ ａｐ０ｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ
ｐｒｏｆｏｕｎｄ ｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＩＫＢｃｄＮＦ－ＫＢ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｌｉｍｂ－ｇｉｒｄｌｅ ｍｕｓｃｕｌａｒ ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ ｔｙｐｅ ２Ａ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｍｅｄ，１９９９，５：５０３—５１ １．
【１６】ＢＡＧＨＤＩＧＵＩＡＮ Ｓ，ＲＩＣＨＡＲＤ Ｉ，ＭＡＲＴＩＮ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｌｉｍｂ ｇｉｒｄｌｅ ｍｕｓｃｕｌａｒ ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ ｔｙｐｅ ２Ａ：Ｈｙｐｏｔｈｅｓｉｓ
ａｎｄ ｎｅｗ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ＩＫＢａ／ＮＦ－ＫＢ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅＯ］．Ｍｏｌ Ｍｅｄ，２００１，７９：２５４—２６１．
［１７１ ＨＥＮＫ Ｌ ＧＲＡＮＺＩＥＲ，ＳＩＥＧＦＲＩＥＤ ＬＡＢＥＩＴ．Ｔｈｅ Ｇｉａｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｉｔｉｎ：Ａ ｍａｊｏｒ ｐｌａｙｅｒ ｉｎ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｍｅｃｈａｎｉｃｓ，ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，ａｎｄ
ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ】．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４，９４：２８４—２９５
【ｌ８】ＴＡＹＬＯＲ Ｒ Ｇ，ＧＥＥＳＩＮＫ Ｇ Ｈ，ＴＨＯＭＰＳＯＮ Ｖ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｉｓ Ｚ－ｄｉｓｋ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ ｆｏｒ ｐｏｓｔｍｏｒｔｅｍ ｔｅｎｄｅｒｉｚａｔｉｏｎ［Ｊ］．
Ａｎｉｍ Ｓｃｉ，１９９５，７３：１３５１－１３６７．
（１９】ＲＯＢＹＮＭ ＭＵＲＰＨＹ．Ｃａｌｐａｉｎｓ，ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｅｒｃｉｓｅ ｆＪ１．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｉｌｌａｃｏ１０ｇＹ ａｎｄ
Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２０１０，３７：３８５—３９１．
［２０１ ＳＯＲＩＭＡＣＨＩ Ｈ，ＯＮＯ Ｙ，ＳＵＺＵＫＩ Ｋ．Ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ－ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｃａｌｐａｉｎ．ｐ９４．ａｎｄ ｃｏｎｎｅｃｔｉｎ／ｔｉｔｉｎ：Ｔｈｅｉｒ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ
ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｔｏ ｌｉｍｂ—ｇｉｒｄｌｅ ｍｕｓｃｕｌａｒ ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ ｔｙｐｅ ２Ａ［Ｊ］．Ｂｉｏｌ，２０００，４８ １：３８３—３９５．
［责任编辑王娟】