2024年4月10日发(作者：汉季)
可以。DNA的碱基在260nm处有吸收。用紫外分光光度计测260nm处DNA
分子的OD值，就能通过朗伯-比尔定律OD=εlc换算出浓度。式子里l是吸收光
路的长度；c是浓度，单位一般用μg/ml；ε是吸光系数,双链DNA一般取0.02ml/
（μg·cm)，单链DNA因为增色效应,ε要大一些，取0.05ml/(μg·cm)。
如果知道一个DNA片段的碱基数，还可以换算出DNA片段的物质的量浓度.
取1μDNA，用ddH2O水稀释到1ml，以1ml ddH2O为对照，紫外分光光度计
测定OD260，OD280,OD260/OD280(都在 1。8左右之间，说明 DNA样品纯
度较高)，concentration。
另，基因组DNA1％的琼脂糖凝胶电泳检测均呈现完整清晰条带没有
拖尾,说明 DNA 样品的完整性好，也可通过DNA marker 推算出DNA浓度。
目的： 了解紫外吸收检测DNA浓度与纯度的原理，掌握测定方法.
原理： 核酸的最大吸收波长为260nm,蛋白质为280nm，在波长260nm
时，1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml,单链
寡核苷酸的含量为30μg/ml,可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过
测定在260nm和280nm的OD值的比值
（OD260/OD280)，估计核酸的纯度。纯净DNA的比值为1。8, RNA
为2。0.若比值高于1。8说明DNA样品中的RNA尚未除
尽，若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低。270nm存在高吸收表
明有酚的干扰。 紫外分光光度法只能用于测定浓度
大于0.25μg/ml的核酸溶液，对浓度更小的样品，可采用荧光分光光度
法。
试剂与仪器： 提取的质粒DNA，紫外分光光度仪.
操作步骤:
1） 分光光度计先用水在260nm和280nm两个波长下校零。
2) 取质粒DNA样品2μl，用水稀释100倍，转入分光光度计的石英比
色杯中。
3） 在260nm和280nm分别读出样品光密度值.如果样品浓度单位为
μg/μl，则样品DNA浓度为OD 值的10倍,即如
OD260〈/SUB〉=0。1,则样品浓度即为1μg/μl。
4) 若OD
仍有RNA，可以考虑用RNA酶处理样品,若小于1.8，说
明样品中含有蛋白质或酚，应再用酚/氯仿抽提，以乙醇沉淀纯化DNA。
“1od=0.05ug/ul”这个说法很不严谨。按照我的理解，这句话的意思是：在光程为
1cm的吸收池内，测得双链DNA的OD值为1时，DNA溶液的浓度为0.05μg/μL.
因为OD=εlc,这里OD=1,光程l通常都是1cm，双链DNA的吸收系数ε=0.02mL/
（μg·cm)，那么浓度c=OD/（εl）=1/[0。02mL/（μg·cm）*1cm]=50μg/mL=0。
05μg/μL.
楼主的测定在类似条件下，所以l=1cm，ε=0.02mL/(μg·cm），而OD=0。45，
所以浓度c=OD/(εl）=0.45/［0。02mL/（μg·cm）＊1cm］
=22.5μg/mL=0.0225μg/μL。
实验准备工作:
1
所用离心管、枪头要洗净、烘干（最好灭菌)。
2
试剂配制:
1 M Tris—HCl (pH 8。0）: 称取Tris-Base 121g, 加入约800 ml 水在磁
力搅拌器上搅拌，使其充分溶解后加入浓盐酸调整pH至8.0后加水定溶至1000
ml. 灭菌后于室温保存。
2024年4月10日发(作者：汉季)
可以。DNA的碱基在260nm处有吸收。用紫外分光光度计测260nm处DNA
分子的OD值，就能通过朗伯-比尔定律OD=εlc换算出浓度。式子里l是吸收光
路的长度；c是浓度，单位一般用μg/ml；ε是吸光系数,双链DNA一般取0.02ml/
（μg·cm)，单链DNA因为增色效应,ε要大一些，取0.05ml/(μg·cm)。
如果知道一个DNA片段的碱基数，还可以换算出DNA片段的物质的量浓度.
取1μDNA，用ddH2O水稀释到1ml，以1ml ddH2O为对照，紫外分光光度计
测定OD260，OD280,OD260/OD280(都在 1。8左右之间，说明 DNA样品纯
度较高)，concentration。
另，基因组DNA1％的琼脂糖凝胶电泳检测均呈现完整清晰条带没有
拖尾,说明 DNA 样品的完整性好，也可通过DNA marker 推算出DNA浓度。
目的： 了解紫外吸收检测DNA浓度与纯度的原理，掌握测定方法.
原理： 核酸的最大吸收波长为260nm,蛋白质为280nm，在波长260nm
时，1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml,单链
寡核苷酸的含量为30μg/ml,可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过
测定在260nm和280nm的OD值的比值
（OD260/OD280)，估计核酸的纯度。纯净DNA的比值为1。8, RNA
为2。0.若比值高于1。8说明DNA样品中的RNA尚未除
尽，若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低。270nm存在高吸收表
明有酚的干扰。 紫外分光光度法只能用于测定浓度
大于0.25μg/ml的核酸溶液，对浓度更小的样品，可采用荧光分光光度
法。
试剂与仪器： 提取的质粒DNA，紫外分光光度仪.
操作步骤:
1） 分光光度计先用水在260nm和280nm两个波长下校零。
2) 取质粒DNA样品2μl，用水稀释100倍，转入分光光度计的石英比
色杯中。
3） 在260nm和280nm分别读出样品光密度值.如果样品浓度单位为
μg/μl，则样品DNA浓度为OD 值的10倍,即如
OD260〈/SUB〉=0。1,则样品浓度即为1μg/μl。
4) 若OD
仍有RNA，可以考虑用RNA酶处理样品,若小于1.8，说
明样品中含有蛋白质或酚，应再用酚/氯仿抽提，以乙醇沉淀纯化DNA。
“1od=0.05ug/ul”这个说法很不严谨。按照我的理解，这句话的意思是：在光程为
1cm的吸收池内，测得双链DNA的OD值为1时，DNA溶液的浓度为0.05μg/μL.
因为OD=εlc,这里OD=1,光程l通常都是1cm，双链DNA的吸收系数ε=0.02mL/
（μg·cm)，那么浓度c=OD/（εl）=1/[0。02mL/（μg·cm）*1cm]=50μg/mL=0。
05μg/μL.
楼主的测定在类似条件下，所以l=1cm，ε=0.02mL/(μg·cm），而OD=0。45，
所以浓度c=OD/(εl）=0.45/［0。02mL/（μg·cm）＊1cm］
=22.5μg/mL=0.0225μg/μL。
实验准备工作:
1
所用离心管、枪头要洗净、烘干（最好灭菌)。
2
试剂配制:
1 M Tris—HCl (pH 8。0）: 称取Tris-Base 121g, 加入约800 ml 水在磁
力搅拌器上搅拌，使其充分溶解后加入浓盐酸调整pH至8.0后加水定溶至1000
ml. 灭菌后于室温保存。