2024年5月6日发(作者：布如雪)
噬菌斑测病毒滴度
杆状病毒滴度检测
实验概要
本实验介绍了检测病毒滴度的方法。
实验原理
根据噬菌斑数计算病毒滴度。
工具/原料
•
1. 4% agarose gel：2g agrose 50ml 水，高压灭菌
•
2×Grace（unsupplemented）：9.14g粉末（invitrogen） 0.07gNaHCO3 H2O，调
PH6.1，定容至100ml，无菌过滤
•
supplemented Grace：1×Grace添加3.33mg/ml Lactalbumin，3.33mg/ml yeastolate，
无菌过滤
•
4. 高温灭活FBS
•
主要设备
1. 6孔板
2. 12ml离心管
3. 100ml无菌玻璃瓶
4. 无菌吸管
5. 70℃水浴锅
•
实验材料
杆状病毒， SF9：5×105cells/ml
方法/步骤
1. 1
无菌条件下，2ml/孔细胞（5×105cells/ml）种入6孔板，室温孵育1h使其贴壁，孵育后镜
检其贴壁程度；
2. 2
将4% agarose gel放入70℃水浴锅融解，空100ml无菌瓶与2×Grace放入40℃水浴锅预热；
3. 3
将杆状病毒用无血清supplemented Grace梯度稀释：10-1~10-8。
4. 4
弃6孔板内上清，快速加入稀释好的病毒，1ml/孔，复孔，室温孵育1h。
5. 5
配置上层琼脂：加20ml高温灭活FBS到2×Grace 100ml，25ml 2×Grace（含FBS） 12.5ml
噬菌斑测病毒滴度
无菌水 12.5ml 4% agarose gel，至预热的100ml无菌瓶，轻轻混匀，放入37℃水浴锅备用；
6. 6
弃6孔板内上清，快速加2ml上层琼脂，以防菌层干燥，静置10-20min使其凝固；
7. 7
将6孔板放入27℃培养箱，培养4－10天；
8. 8
计数板中噬菌斑，直至连续两天无变化，加1mg/ml中性红0.5ml，室温孵育2h后计数噬菌
斑。
END
注意事项
•
病毒滴度（pfu/ml）=1/稀释倍数×噬菌斑数×1/每孔接种体积
滴度
噬菌斑测病毒滴度
①某一物质与一定容量的另一物质产生反应所需的量。
②所谓滴度即病毒悬液的浓度，就是指pfu的数值。
③滴度是稀释度的倒数。例如上例中的 1 ： 180 的稀释度，其滴度就是 180 。
效价是滴度的同义词。效价即滴度，两者通用。当前虽然专业的化学和免疫学词典和专著中
对这些词的使用已规范化，但在不少书刊的文章中常见误用，如称效价 1 ： 40 之类。
④在化学反应中，指产生某一结果所需标准试剂的量。
⑤为当量浓度的二十分之一。在制碱与制碳酸氢铵中用以表示氨水的浓度。
⑥在免疫学中，指通过血清学方法能显示一定反应的抗体或抗血清的最高稀释倍数；如终点
稀释度为1/100，则血清的效价（每1ml的血清中抗体效价）为100抗体单位。
⑦在病毒学中，指用噬菌斑方法测得的噬菌体浓度。 噬菌体的效价（滴度）就是一毫升培
养液中所含活噬菌体的数量。
中文名：滴度
英文名：titer；titre
同义名：效价
符号：tt
效价测定的方法：
一般应用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，噬菌体产生肉眼可见的
噬菌斑，因此，能进行噬菌体的计数。但因噬菌斑计数方法其实际效率难以接近100%(一般
偏低，因为有少数活噬菌体可能未引起感染)，所以为了准确地表达病毒悬液的浓度(效价或
滴度)一般不用病毒粒子的绝对数目而是用噬菌斑形成单位(Plague-forming units，简写成
pfu)表示。
病毒滴度
也即病毒的毒力，或毒价，衡量病毒滴度的单位有最小致死量（MLD）、最小感染量（MID）
和半数致死量（LD50），其中以LD50最常用。它是指在一定时间内能使半数实验动物致死
的病毒量。然而，病毒对实验动物的致病作用不一定都以死亡为标志，例如以感染发病作指
标，则可以半数感染量（ID50）测定；此外，当实验的材料是鸡胚时则用鸡胚半数致死量
（ELD50）或鸡胚半数感染量（EID50）表示；实验的材料是细胞时则用组织细胞培养半数
感染量（TCID50）表示。
2024年5月6日发(作者：布如雪)
噬菌斑测病毒滴度
杆状病毒滴度检测
实验概要
本实验介绍了检测病毒滴度的方法。
实验原理
根据噬菌斑数计算病毒滴度。
工具/原料
•
1. 4% agarose gel：2g agrose 50ml 水，高压灭菌
•
2×Grace（unsupplemented）：9.14g粉末（invitrogen） 0.07gNaHCO3 H2O，调
PH6.1，定容至100ml，无菌过滤
•
supplemented Grace：1×Grace添加3.33mg/ml Lactalbumin，3.33mg/ml yeastolate，
无菌过滤
•
4. 高温灭活FBS
•
主要设备
1. 6孔板
2. 12ml离心管
3. 100ml无菌玻璃瓶
4. 无菌吸管
5. 70℃水浴锅
•
实验材料
杆状病毒， SF9：5×105cells/ml
方法/步骤
1. 1
无菌条件下，2ml/孔细胞（5×105cells/ml）种入6孔板，室温孵育1h使其贴壁，孵育后镜
检其贴壁程度；
2. 2
将4% agarose gel放入70℃水浴锅融解，空100ml无菌瓶与2×Grace放入40℃水浴锅预热；
3. 3
将杆状病毒用无血清supplemented Grace梯度稀释：10-1~10-8。
4. 4
弃6孔板内上清，快速加入稀释好的病毒，1ml/孔，复孔，室温孵育1h。
5. 5
配置上层琼脂：加20ml高温灭活FBS到2×Grace 100ml，25ml 2×Grace（含FBS） 12.5ml
噬菌斑测病毒滴度
无菌水 12.5ml 4% agarose gel，至预热的100ml无菌瓶，轻轻混匀，放入37℃水浴锅备用；
6. 6
弃6孔板内上清，快速加2ml上层琼脂，以防菌层干燥，静置10-20min使其凝固；
7. 7
将6孔板放入27℃培养箱，培养4－10天；
8. 8
计数板中噬菌斑，直至连续两天无变化，加1mg/ml中性红0.5ml，室温孵育2h后计数噬菌
斑。
END
注意事项
•
病毒滴度（pfu/ml）=1/稀释倍数×噬菌斑数×1/每孔接种体积
滴度
噬菌斑测病毒滴度
①某一物质与一定容量的另一物质产生反应所需的量。
②所谓滴度即病毒悬液的浓度，就是指pfu的数值。
③滴度是稀释度的倒数。例如上例中的 1 ： 180 的稀释度，其滴度就是 180 。
效价是滴度的同义词。效价即滴度，两者通用。当前虽然专业的化学和免疫学词典和专著中
对这些词的使用已规范化，但在不少书刊的文章中常见误用，如称效价 1 ： 40 之类。
④在化学反应中，指产生某一结果所需标准试剂的量。
⑤为当量浓度的二十分之一。在制碱与制碳酸氢铵中用以表示氨水的浓度。
⑥在免疫学中，指通过血清学方法能显示一定反应的抗体或抗血清的最高稀释倍数；如终点
稀释度为1/100，则血清的效价（每1ml的血清中抗体效价）为100抗体单位。
⑦在病毒学中，指用噬菌斑方法测得的噬菌体浓度。 噬菌体的效价（滴度）就是一毫升培
养液中所含活噬菌体的数量。
中文名：滴度
英文名：titer；titre
同义名：效价
符号：tt
效价测定的方法：
一般应用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，噬菌体产生肉眼可见的
噬菌斑，因此，能进行噬菌体的计数。但因噬菌斑计数方法其实际效率难以接近100%(一般
偏低，因为有少数活噬菌体可能未引起感染)，所以为了准确地表达病毒悬液的浓度(效价或
滴度)一般不用病毒粒子的绝对数目而是用噬菌斑形成单位(Plague-forming units，简写成
pfu)表示。
病毒滴度
也即病毒的毒力，或毒价，衡量病毒滴度的单位有最小致死量（MLD）、最小感染量（MID）
和半数致死量（LD50），其中以LD50最常用。它是指在一定时间内能使半数实验动物致死
的病毒量。然而，病毒对实验动物的致病作用不一定都以死亡为标志，例如以感染发病作指
标，则可以半数感染量（ID50）测定；此外，当实验的材料是鸡胚时则用鸡胚半数致死量
（ELD50）或鸡胚半数感染量（EID50）表示；实验的材料是细胞时则用组织细胞培养半数
感染量（TCID50）表示。