2024年5月16日发(作者：雍安国)
中国小儿血液与肿瘤杂志
2020
年
12
月第
25
卷第
6
期
J
China
PeOiae
Blood
Cancee
:
December
2020
,
Vol
25
,
No.
6
-
323
-
DOI
：
10
・
3969/j
・
issn
・
1673
-5323.2020
・
06.004
•
论
著
•
PML-RAR
a
异常调控
CST7-2TSS
轴影响
急性早幼粒细胞白血病细胞分化
李子平卫凤桂梁文怡符祥猛徐浩育
张辉
【
摘要
】目的
研究
CST7-CTSS
轴在急性早幼粒细胞白血病
(
APL
)
发病中的作用
。
方法
收
集急性髓系白血病表达谱数据集
，
进行相关性分析明确融合基因
PML-RAR
a
与
CST
7
的表达关系
，
并对其靶蛋白酶进行相关性分析
。
结果
通过
RT-qPCR
评价
PML-RAR
a
对
CST7-
T
TSS
轴的影响
。
通过敲低
CST7
表达
，
检测其对
APL
细胞分化的影响
。
通过相关性分析发现
CCT
仅在携带
PML-
RAR
a
的
APL
患者中显著增高
。
随着全反式维甲酸
(
ATRA
)
诱导
APL
分化
,CST
基因表达逐渐降
低
；
利用
Zn
剂处理
PR9
细胞诱导
PML-RAR
a
表达后
，
CST7
加
RA
表达水平明显增高
。
生物信息分
析显示
CTSS
是
CST7
的潜在上游蛋白
，
在
APL
中显著低表达
；
CTSS
表达水平随着
APL
细胞诱导分
化逐渐上调
。
敲低
CST
基因
，
能部分易化
ATRA
诱导
APL
细胞分化
。
结论
PML-TAR
a
可能直
接转录激活
CST,
进而影响其靶蛋白酶的功能
。
CTSS
是
CST7
的潜在靶蛋白酶之一
，
ATRA
可能
逆转
CST7-CTSS
的病理性异常以改善
APL
治疗
。
【
关键词
】
CST7
；
CTSS
；
急性早幼粒细胞白血病
；
诱导分化
Abnormal
regulation
of
CST7-CTSS
axis
by
PML-RARa
affects
differentiation
of
acute
promyelocytic
leukemia
cells
LI
Ziping
1
,
WEI
Fenggui
2
,
LIANG
Wewyi
,
FU
Xiangmeng
3
,
XU
Haoyu
,
ZHANG
Hui
.
1.
Dedartmedi
of
Hematolopy
u
O
Oncolopa
,
GuannzUon
Woma
u
O
Chiiyred
,
s
Medicoi
Centvr,
GuannzUon
514623
,
Chinn
；
2.
Depdamedi
of
Peniatmct
,
The
Fiat
Afiliated
Hospitai
of
GuannzUon
Medicoi
University
,
GuannzUon
SlOH
,
Chinn
；
3.
School
of
Peniatmct,
GuannzUon
Medicoi
University
,
GuannzUon
514141,
Chinn
Corresponninn
anthye
:
ZHANG
Hxi,EmUi
：
zUdnnhuikU@ywcme.
ora
[
Abstrrct
]
Objective
Tu
explore
the
roie
of CST7-CTSS
axis
in
the
puhop
—
is
of
pcoie
promyelocytle
00X6111
—
(
APL
)
.
Methods
Expression
cocelation
bawsp
the
fusion
yap
PML-RAR
a
u
O
CST
7
u
O
iis
tarael
proteasvs
was
analyzed
usiny
acoiv
myeloik
mnUemin
expression
proUiv
Oath
sei.
RT-qPCR
was
p
—
orm
—
ta
a
U
x
U
w
thv
effech
of
PML-RAR
a
on
thv
CST7-CTSS
axis.
CST7
exp
—
uent
was
yehormed
ta
OeOnv
its
dfect
on
APL
dikerentiation.
Resultt
Gene
expression
prolifd
analysis
show
—
thai
CST
7
was
semetiveiy
higher
expressed
in
APL
p
UW
o
W
with
PML-RAR
a
fusion
yenv.
CST
7
expression
was
yraPualiy
Ovcreased
Ouany
bl-trans
retinoic
acik
(
ATRA
)
-inOuced
APL
OUferentiation.
Usinn
PR9
(
inOxcibiv
PML-RARa
cells
)
cell
lino
as
stuUy
model
,
increased
CST
7
expression
was
iUentified
upon
Zn
2+
-inOuced
PML-RAR
a
expression.
BioinfOTmumo
analysis
inOicated
基金项目
：
广州医科大学大学生开放项目
(
B135004122
)
、
儿研所项目
(
IP
-
2013
-
11
)
、
广东省自然科学基金项目
(
2015A030313460
)
作者单位
：
510623
广州
，
广州市妇女儿童医疗中心血液肿瘤科(李子平
，
徐浩育,张辉)
eiHO
广州
，
广州医科大学附属第一医院儿科(卫
凤桂)
；
510121
广州
，
广州医科大学儿科学院(梁文怡
，
符祥猛)
通讯作者:张辉,
:
zUanahXqh@
yweme.
ora
・
324
・
中国小儿血液与肿瘤杂志彳
。
?
。
年
12
月第
25
卷第
6
期
J
China
Pediatr
Blood
Catcee,
December
2020
,
Vol
25
,
No.
6
thai
CTSS
poyntihiy
interacted
with
CST7.
Thv
expression
of
CTSS
was
goduhiy
itcreased
duont
APL
cell
€^2
x
1100-.
dowt
CST
7
gedv
expression
pdkidiy
facilitated
ATRA-intuced
APL
cell
differedtiation.
Conclusions
PML-RARa
potentihiy
activatvs
CCS
7
transcoption
,
theody
affectinj
thv
Uinction
of
ihs
taroel
proteasv.
CTSS
is
a
potential
taroel
protease
of
CST7.
ATRA
reverses
thv
phUolopich
apnormalita
of
CST7-8TSS
,
might
it
turn
coutrituSv
tv
APL
thpdpy.
【
Key
wordsi
CST7
;
CTSS
;
Aciuu
promyelocyUe
lenuemin
；
0:0
x
211100
intuction
急性早幼粒细胞白血病
(
nchSv
promyelocytle
司)
；
APL
代表性细胞系
NB4
细胞和模拟
APL
发病
lengemin,APL
)
是急性髓细胞白血病
(
nciilv
myeloid
kugemin,AML
)
的独特亚型
(
AML-M3
)
9
〕
,
其典型特
的
PR9
细胞均来自本实验室
。
1.2
APL
病人样本
本研究已获广州市妇女儿童
征是
95%
~
99%
的
APL
患者携带
1(
15
；
17)
染色体
易位形成
PME-TMR
a
融合基因
°
大量研究表明异常
转录因子
PML-RAR
a
是促进
APL
发生发展的关键
分子基础⑵
o
PML-RAR
a
通过招募共抑制复合物,
进而与靶基因的
DNA
结合形成致密的染色质结构,
抑制正常
PML
的转录功能
，
导致了转录调控抑制
，
最终导致造血细胞分化异常停滞在早幼粒细胞阶
段
。
药理浓度全反式维甲酸
(
ah-trans
retinole
acid
,
ATRA)
作用于
APL
细胞
，
能够解离共抑制复合物并
促进共激活复合物的重新结合,激活正常造血分化
关键基因的转录
，
进而逆转细胞异常停滞并诱导其
分化成熟
9
8
]
o
随着对肿瘤研究的不断深入
，
半胱氨酸蛋白酶
抑制剂(
cystahns
,
CSTs
)
-半胱氨酸蛋白酶
(
cathepsin
,
CTSs
)
轴在肿瘤发生
、
发展
、浸润和转移
中的作用逐渐引起关注
[6]
o
研究提示其表达水平
可以作为恶性肿瘤临床诊断和预后的指标
。
然而,
在
APL
病人中是否存在
CSTs-CTSs
轴异常
，
却至今
未见报告
。
CST7
属于半胱氨酸蛋白酶抑制剂
(cystahns
)
家族之一
，
是
2
型半胱氨酸蛋白酶抑制
因子
9
,CST7
通过与其靶组织蛋白酶形成高亲和性
复合物以调控靶蛋白酶功能
，
进行可逆性调节以维
持平衡
，
从而参加造血细胞免疫功能
9]
o
通过对
AML
表达谱数据进行分析
，
发现
CST
仅在
APL
细
胞高表达
，
提示
CST7
是
PML-RAR
a
的潜在靶基因
，
并具有亚型
/
髓系特异性
9
80
o
本文将研究
CST-
CTSS
轴功能异常调控在
APL
发病中的作用
。
资料和方法
1
研究资料
1.
1
试剂及细胞株
RPMI
1644
、
DMEM
、
FBS
(Gidco
公司)
；
PCR
试剂盒
(
Tabara
公司)
；
质粒小提
试剂盒
(
Qiagen
公司)
；
CDllb-FITC
抗体
(
BD
公
医疗中心医学研究伦理委员会批准及患儿监护人的
知情同意
，
收集经过
MICM
诊断的儿童
APL
细胞
。
2
方法
2.
1
相关性分析
在
https
：
//www.
nebt
nlm.
nit.
gva/gev/
网站
，
以
-RAR
a
和
t(15
；
17)
作为
关键词搜索并下载相关数据
，
进行相关性分析预测
CST7
的候选靶蛋白酶
。
入选标准
：
(
1
)满足逻辑回
归分析相关性分析
P
<0.
05
；
(2
)
趋势与
CST7
相
反
;(D
在其他数据库能被重复检验
。
2.
0
荧光定量
PCR
利用
100
ZnUO
A
处理
PR
细
胞
24h,
诱导
PML-RAR
a
融合基因表达从而模拟
APL
的发病
。
利用体外
1
辺
ATRA
处理
NB4
细胞
4
、
12
、
24
、
48
和
772
,
以及处理
APL
病人细胞
48h,
诱导
APL
细
胞分化
。
在相应的实验时间点提取
RNA
,
利用
5
x
POmePcyptUT
Master
Mio
将
RNA
反转录成
cDNA
。
设
计特异性引物
，
选择
TB
GreenPremio
Eo
TapII
(
Tli
RNaseH
Plus)
试剂盒进行
RT-8CR
实验
。
引物序列如
下
：
CST-F
：
5'-GTGTGAAGCCAGGATTTCCTAA-3'
；
CST7-R
：
5'-TGTCGTTCGTGCAGTTGTTGA-3'
；
CTSS-8：
CTSS-R
：
5'-CAG
TGGTGATCCAGGGTAGG-3'
；
GADPH-
8：
5
,
-8CAAC
TTTGGTATCGTGGAAGG-3'
；
GAPDH-
R
：
5'-GCCAT
CACGCCACAGTTTC-3
；
2.
3
CST
7
敲低实验
取对数生长期的
NB4
细胞
用于实验
，
构建
CST
7
的
shRNA
干扰载体及相应的
慢病毒
，
转染
NB4
细胞筛选稳定株
。
在成功构建
CST
7
敲低的
NB4
细胞后
，
用空载
NB4
细胞作为对
照
,
训
ATRA
处理细胞
24h
后
，
流式检查
CDllb-
FITC
表达评价细胞分化水平
。
CST
7
shRNA
核酸序
列
为
：
CCGGTCAAGGAGTCCCGCATCACAACTCGAG
TTGTGATGCGGGACTCCTTGATTTTTG
o
2.0
统计学分析
所有统计分析采用
SPSS
20.0
软件进行。
计量资料采用
x
±
s
表示,多组间比较采
中国小儿血液与肿瘤杂志
2Z2Z
年
12
月第
25
卷第
6
期
J
China
Pediatr
BlooU
Cancer
,
DecemUer
2Z2Z
,
Vol
25
,
No.
6
-
325
-
用方差分析
，
两组间比较米用
t
检验
,
P<5.50
为差
取冗余后进行分析
。
分析显示
CTSS
仅在携带
t
（
15
；
15
）
PML-RAR
a
的
APL
患者中显著降低
，
结果
异有显著性°
结
果
1
CST
5
在
APL
病人中明显高表达
以
APL
、
PML-
RAR
a
和
i
（
16
；
15
）
作为关键词
，
在
NCBI
_
GEO
在不同的研究组中得到可靠的重复
（
图
3
）
°
4
APL
分化过程中
CTSS
表达恢复
通过定量
RT-
PCR
检测
ATRA
治疗后
CTSS
诱导表达情况
结果
显示经
ATRA
处理
NB4
细胞后
,
随着时间延长,
PML-RAR
a
融合基因表达下降的同时
,
CST
4
表达下
dataset
数据库搜索并下载表达谱数据
。
相关性分析
的结果显示
CST
4
仅在携带
i
（
16
；
15
）
PML-RAR
a
融
降
,
而
CTSS
逐渐恢复
（
图
4A
）
；
同样地
,
我们利用体
外
1
ATRA
处理原代
APL
细胞
48h,
平行检测
合基因的
APL
患者中显著增高
（
图
1A-B
）
°
Z
PML-RAR
a
可诱导
CST
4
表达
利用体外
1
CTSS
表达
,
结果发现
：
随着
PML-RAR
a
表达下降,
ATRA
处理
3
例
APL
原代细胞
48h
,
结果发现:随着
PML-A4R
a
表达下降
,
CST
4
表达水平随之降低
（
图
CS77
表达水平随之降低
，
CTSS
表达上调
（
图
4B,
P<5.21
）
°
这些结果都提示
CTSS
可能是
CST5
的
靶蛋白酶
。
ZA
,
P
<
1.
）
°
1
ATRA
体外处理
NB4
细胞
ZnSO
4
处理
PR9
细胞
，
诱导
后
,
随着时间延长
CST
4
表达下降
（
图
2B
,
P
<
5
CS77
敲低能部分易化
APL
分化
通过
CST
5
5.051
）
°
利用
H
shRNA慢病毒载体敲低
CST
4
表达
，
如
（
图
5A
）
所
PML-A4R
a
融合基因表达从而模拟
APL
发病
。
在诱
示
,敲低
CST
4
表达的
NB4
细胞
,
细胞内的
PML-
RAR
a
表达量没有发生变化
,
而
CTSS
表达量有轻度
增高
。
对
CST4
敲低的
NB4
细胞进行
ATRA
诱导分
导
PML-A4R
a
表达的过程中检测
CST
5
的表达情况
水平
,
结果显示
：
在诱导
PML-RAR
a
表达的过程中
CS77
表达水平明显增高
（
图
2C,
P<5.21
）
°
以上实
验结果提示
PML-RAR
a
可能转录激活CST
4
°
化
，
流式细胞术检测
CD11U
表达情况
,
结果
（
图
5B
）
显示经
1
ATRA
处理
NB4
细胞
24h
后
，
CST
5
敲
低组细胞的分化率为
（
44.6
±3.2
）
%
,
而原始
NB4
细胞的分化率为
（
45.
4±4.2
）
%
,
提示
CST
4敲低部
3
CST
4
基因的表达变化
在
NCBI
GEO
dataset
数
据库
,
以
APL,
PML-RAR
a
和
t
（
15
；
15
）
作为关键词
搜索并下载相关数据
,
对原始数据进行标准化以及
分易化
NB4
细胞分化
（
P
=
1.
^
）
°
u
.2
s
s
a)
d
x
」
(D
2
-
0
-
8
-
6
-
CM
60-I
•
«
<
T
n
-
n
T
V
X
.
^
-
1
Dataset
N
on
M3
M3
N=N=
Rvalue
PMID
GSE1729
GSE14468
GSE10358
GSE1159
TCGA
10
23
15
35
19
14
33
423
68
149
266
230
1.13
E-03
3.43
E-07
1.82
E-05
1.52
E-12
9.22
E-05
5.82
E-13
15674361
19171880
18270328
15084694
23634996
核型:
NA
（
/
c
P
avaikUe
）
表示无核型信息
；
B
：
多组表达谱数据提示
CST
4
在
M3
患者中显著高表达
z
ls
o
图
1
CST5
在急性早幼粒细胞白血病病人中明显高表达
注:
A
：CST5
在不同
AML
亚型中的表达情况:
CK
（
complex
karyotype
）
表示复杂核型
;NK
（
normal
karyotype
）
表示正常
-
322
-
A
中国小儿血液与肿瘤杂志彳
。
?
。
年
12
月第
25
卷第
6
期
J
Chita
Pediatr
Blood
Catcee
-
December
彳
。
?
。
,
Vol
25
,
No.
6
B
C
Time
of
ATRA
treatment
(hours)
图
2
PML-RARa
可诱导
CST
7
表达
注:
A
：
利用
APL
病人样本
,
体外
1
|±M
ATRA
处理
45h
后
，
检测
CST
表达水平;
B
：
利用
NB4
细胞作为研究模型
,
以
1
|±M
ATRA
处理后检测
CST
表达水平;
C
：
利用
PR9
细胞作为研究模型
，
予以
100
|±M Z
n
SO
6
处理
24h,
检测
PML-RARa
和
CST
表达水平
A
u
o
ssa-
ld
xa
SSI
。
E
6
0
1
B
•
・
1
-
T
J
0
n
J
D
A
*
Dataset
M3
Non
M3
P
value
N=
N=
PMID
X
T
・・
•
T
B
4
GSE1729
10
GSE14468
23
15
GSE10358
35
GSE1159
19
TCGA
14
33
423
68
149
266
230
6.33
E-05
6.18
E-40
8.27
E-09
3.54
E-17
8.08
E-32
6.51
E-08
15674361
19171880
18270328
15084694
23634996
图
9
CTSS
基因在
PML-RARa
阳性
APL
患者中显著低表达
注:
A
:
CTSS
在不同
AML
亚型中的表达情况:
CK(
complex
goy/ype)
表示复杂核型
;NK(
uormai
ghy/ype)
表示正常核
型:
NA(uol
avaimble)
表示无核型信息
；
B
：
多组表达谱数据提示
CTSS
在
M3
患者中显著低表达
A
NB4+ATRA
NB4+ATRA
B
(
n
<
6
8,
u
o
w
s
a
ld
xe
4
2
0
s
s
io
-ATRA
+ATRA
图
4
APL
细胞诱导分化过程中
,CCSS
表达上调
注:
A
：
利用
NB4
细胞作为研究模型
，
予以
1
pM
ATRA
处理后检测
CTSS
以及分化基因
PU.
1
的表达水平;
B
：
利用
APL
病人样本
，
体外
1
pM
ATRA
处理
45h
后
，
检测
CTSS
表达水平
中国小儿血液与肿瘤杂志
2020
年
12
月第
25
卷第
6
期
J
China
Pediaw
Blood
Cancee
:
Decembea
2020
,
Vol
25,
No.
6
-
327
-
图
5
CST7
敲低能部分易化
APL
分化
注:
A
：
利用
NB4
细胞敲低
CST
表达
,
CCSS
表达量有轻度增高
；
B
：
利用流式细胞术检测
CDllb
表达率
,
1
|±M
ATRA
处理的
CSC
敲低
NB4
细胞分化率轻度增高
讨
论
是
2
型半胱氨酸蛋白酶抑制因子
，
作为半胱氨酸蛋
白酶的内源性抑制剂
，
与肿瘤的发生
、
发展
、
浸润和
APL
是急性髓细胞白血病的独特亚型
（
AML-
M3
）
,
其典型特征是
95%
~99%
的
APL
患者携带
转移密切相关
”
切
。
我们利用
APL
模式细胞和
APL
病人细胞进行研究发现,
ATRA
处理
NB4
细胞
t
（
15;17
）
染色体易位
，
形成
PML-RAR
a
融合基
因
7
3
°
有别于既往对
PML-RAR
a
的研究集中在转
后,
PML-R4R
a
转录水平被抑制
,
随之
CST
表达水
平降低
，
而
CCSS
表达水平增高
。
PML-RAR
a
激活
录抑制功能
，
本研究发现
PML-RAR
a
转录激活靶基
因
，
通过相关性分析和细胞生物学实验证实
PML-
CST7表达的结果
，
在临床原代
APL
细胞中得验证
。
ATRA
处理临床
APL
细胞
，
同样地能在下调
CSC
表达的同时上调
CCSS
表达
。
反之
，
在诱导
PML-
RAR
a
激活
CST-RCSS
轴
，
参与
APL
发生
。
越来越多的证据证实
APL
病人存在免疫异
常
°
如:组织相容性复合物分子在
APL
病人异
常早幼粒细胞表明表达降低或缺失
，
提示
APL
细胞
RAR
a
表达的过程中
，
CST
7
表达上调
,
而
CCSS
的表
达却被抑制
。
CSC
敲低后
，
能在一定程度上易化
ATRA
诱导的
NB4
细胞成熟分化
。
以上结果说明
存在抗原提呈障碍
，
导致机体免疫细胞识别
APL
细
胞障碍
。
转录因子
PML
影响内源性
/
外源性抗原肽
PML-RAR
a
与
CST7-CTSS
轴之间存在某种联系
，
而
CST7-CTSS
轴异常可能参与
APL
的发病
，
在有效
APL
治疗中参与一定的作用
。
本研究为
APL
发病
机制
（
尤其是免疫方向
）
提供了新线索
，
也为
APL
的
的提呈过程:
PML
能够调控
MHCT
类分子表达
，
如
LMP-2
和
LMP-2
,
并协助其与
MHCT
相关蛋白
TAPT
和
TAP-2
共同将抗原肽转运至膜上
，
易化免疫识
免疫治疗提供了新思路
。
参考文献
1
.
Arber
DA
,
Orazi
A
,
Hasserjian
R
,
ei
at.
The
2716
revision
to
the
别7
5
°
PML
能通过
II
类转录激活子有效诱导
MHCT
I
分子表达
，
进而协同抗原提呈
7
6
°
这提示
PML
功能异常将会使得肿瘤细胞易于逃逸宿主免
疫监视
。
致病性融合蛋白
PML-RAR
a
抑制了
PML
WorlO
Health
Oraanizatiou
classification
of
myeloik
neoplasms
anO
acote
leaUemia.
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AA
,
Ley
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NeaWophii
elasWse
clevves
PML-RARalpha
anO
is
impoaant
foa
the
Oeveloumedt
of
acote
promyelocytic
leuUemia
in
的正常功能
，
也就必然影响
APL
细胞的免疫功能
。
随着对肿瘤研究的不断深入
，
半胱氨酸蛋白酶抑制
剂
（
CSTs
）
-
半胱氨酸蛋白酶
（
CTSs）
轴在肿瘤发生
、
发展
、
浸润和转移中的作用逐渐引起关注
,
并有研究
提示其表达水平可以作为临床诊断和预后的指标
。
micc.
Cell,
2003
,
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：
305-313.
3.
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F
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L
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TaraeWd
therapy
alone
foa
acote
promyelocytic
leuUemia.
Neo
Enal
J
Med
,
2016
,
374
:
如:乳腺癌
、
结肠癌和胃癌组织中
CTSB
mRNA
和蛋
白表达水平较癌旁组织及正常组织明显增高
，
其表
达水平和
CSTL的表达与复发相关,是预后不良的
指标
。
CST7
属于半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族之一,
1197R190.
4.
McCulloch
D
,
Broun
C
,
IlanO
H.
ReOnoic
acik
anO
arsenic
trioxiUc
in
the
Weatmeat
of
acote
promyelocytic
leakemia
:
coxeat
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Taraets
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322
-
中国小儿血液与肿瘤杂志
2Z2Z
年
12
月第
25
卷第
6
期
J
China
Pediair
BlooU
Cancer
,
December
2020
,
Vol
25
,
No.
6
immuuoproteasome
subunits
Up
PML/RARalpPa
and
PU.
1
in
acute
promyelocytie
lenUemiv.
Oncopene
,
2014
,
33
：
2700-2708.
tOoxige
Rr
acyte
promyelocytie
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Wang
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,
Huang
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of
the
clinical
14. Furugaki
K
,
PoUoroa
K
,
Le
Popam
C
,
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al.
DNA
vaccination
with
SI-trans
retinoic
acid
063106
x
（
inCuces
loxa-teon
suoival
and
elicits
specific
immune
responses
repuirinp
CD4
+
anC
CD8
+
T-celi
sivnificance
and
pospective
molecylar
mecyanisms
of
cystatin
aenes
in
paPents
with
hepatitis
B
viois-related
hepatocellular
carcinoma.
Oncol
Rep
,
2Z16
,
42
：
189C01.
7.
Yang
C
,
Yu
T
,
Lin
Z
,
et
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Cystatin
F
as
a
key
family
2
cystatin
activation
in
an
acute
promyelocytie
lenUemiv
mouse
moUeX
BlooU
,
2111
115:653R656
．
13.
Gripnaci
F
,
De
Matteis
S
,
Nervi
C
,
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Fusion
proteins
of
the
suUuuit
anC
propnostic
UiomarOer
Rr
early-staae
pancreatic
ductal
agenocarcinoma.
Oncol
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2Z16
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42
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retinoic
acid
receptonalpha
recruit
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deacetylase
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14
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16.
Zhenp
P
,
Guo
Y
,
Nin
Q
,
et
al.
Proto-cxcovene
PML
conGois
aenes
9.
Hamilton
G
,
ColUeO
JD
,
ScyueVelkopf
AW
,
et
a.
Cystatin
F
is
a
cathepsin
C-6irecten
protease
mhibitor
regulated
Up
proteolysis.
devoted
to
MHC
class
I
antipen
presentatiox.
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Mumace
MJ
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Sheagac
K
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Ozaemirii
M
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Staae-specific
increases
in
cathepsin
B
messenaer
RNA
content
in
human
colorectai
carcinoma.
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51
：
1157-1142.
H.
ColUeO
JD
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Kos
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of
exopenous
cystatin
F
supresses
cysteine
proteases
and
induces
the
accymulatiox
of
sinale-cyain
0306X810
L
Up
multipie
mecOanisms.
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Campo
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Miquel
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B
expression
in
colorectai
carcinomas
cozelates
with
tumor
propressiox
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sPortened
031:16
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decreases
the
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MoU
JS
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RecUlies
AD
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AR.
CharacteUzatGx
of
a
thiol
proteinase
secreted
Up
malipnact
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tumours.
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614
：
134R43.
anC
inCibits
the
function
of
regulatoo
T
cells
:
which
map
coxGiUute
to
its
eXicacy
in
the
treatment
of
acute
pnmyekcypc
lenUemiv. LenU
（
收稿日期
:
6227C7C6
；
修回日期
：
2227C8C8
）
（
本文编辑:张传仓
）
Lymphoma,
ZU
,59:655-659.
13.
Yang
XW
,
Wang
P
,
Lin
JQ
,
et
al.
CoorOinated
regulation of
the
（
上接第
327
页
）
6.
Tan
EY
,
Boelens
JJ
,
Jones
SA
,
et
al.
Hematopoietic
Stem
cell
transplantation
in
inUout
erroo
of
metabolism.
Front
Pediatr,
micropliai
anC
mccropPaae
exaraftment
:
analysis
using
a
transpenic
,
bone
marrow
transplantation
moUeX
BlooU
,
1697,99
:
986-993.
7:
4336
12.
Wang
JM
,
Luaa
Z
,
Jiana
H
,
et
al.
Alopeceic
HematopoieVo
stem
cell
7.
Lum
SH
,
Miller
WP
,
Jones
S,
et
al.
Chances
in
the
incidence
,
patteuis
and
outcomes
of
araet
failure
Rllowina
hematopoietic
stem
cell
transplantation
Rr
Hurler
syndome.
Bone
Marrow
TransplacO
Oansplantatiox
in
thiky-Rur
pediatUc
cases
of
mncopolysaccUaUgosis-A
ten-year
repoO
from
the
China
Children
Transplaci
Group.
Biol
BlooU
Marrow
Transulact,2716
,22
:
2104-2108.
211752:
846R8536
15.
中华医学会儿科专委会小儿血液学组王坚敏
,
陈静执笔异基因
8.
Boelens
JJ
,
AldenCoven
M
,
Purtilt
D
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Outcomes
of
transplanGkox
using
vvUous
hematopoietic
cell
sources
in
cUildren
with
Hurler
造血干细胞移植治疗黏多糖贮积症儿科专家共识
.
中国小儿血
液与肿瘤杂志
2117
22
:
227R231．
14.
AldenCoven
M
,
Wysc
RF
,
OrcUarO
PJ,et
al.
Lona-term
outcome
of
Hurler
syygrome
patienU
after
hematopoietic
cell
transplantation
:
an
inteolakoxai
mulUcedtcr
stuUp.
BlooU
,2015,125
：
2164-2172.
syygrome
after
myeloablative
copOitioxina.
BlooU
,
2Z13
,
121
:
3981R39876
9.
Slatteo
JT
,
SanCeo
JE
,
BncUcer
CD
,
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al.
Graft-rejection
anC
toxicitu
Rllowina
Uone
marrow
transplantation
in
relation
to
Uusulfan
pharmacoUineVes.
Bone
Marrow
TransplacG
1995,16
：
51C2.
15.
Taylor
M
,
Khan
S
,
Stagletox
M
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al.
Hematopoietic
stem
cell
transplantation
Rr
mncopolysaccUaUdoses
:
Past
:
present
:
anC
10.
Kate
K
,
Maemura
R
,
Wabamatsu
M
,
et
al.
Alopeneic
stem
cell
transplantation
with
reduced
mtensTy
oopOitioxina
Rr
081^
x
0
with
abredoledUoPystropPp.
Mol
Genet
MetaU
,2018,18
：
1-6.
future.
Biol
BlooU
Marrow
Transplant
,2016
,
25
:
eV27-c274.
（
收稿日期
：
2424C1C9
；
修回日期
：
2424C2C3
）
（
本文编辑:吴南海
）
11.
Kednedy
DW
,
Abkowits
JL.
Kiceticr
of
cenGai
nervous
system
2024年5月16日发(作者：雍安国)
中国小儿血液与肿瘤杂志
2020
年
12
月第
25
卷第
6
期
J
China
PeOiae
Blood
Cancee
:
December
2020
,
Vol
25
,
No.
6
-
323
-
DOI
：
10
・
3969/j
・
issn
・
1673
-5323.2020
・
06.004
•
论
著
•
PML-RAR
a
异常调控
CST7-2TSS
轴影响
急性早幼粒细胞白血病细胞分化
李子平卫凤桂梁文怡符祥猛徐浩育
张辉
【
摘要
】目的
研究
CST7-CTSS
轴在急性早幼粒细胞白血病
(
APL
)
发病中的作用
。
方法
收
集急性髓系白血病表达谱数据集
，
进行相关性分析明确融合基因
PML-RAR
a
与
CST
7
的表达关系
，
并对其靶蛋白酶进行相关性分析
。
结果
通过
RT-qPCR
评价
PML-RAR
a
对
CST7-
T
TSS
轴的影响
。
通过敲低
CST7
表达
，
检测其对
APL
细胞分化的影响
。
通过相关性分析发现
CCT
仅在携带
PML-
RAR
a
的
APL
患者中显著增高
。
随着全反式维甲酸
(
ATRA
)
诱导
APL
分化
,CST
基因表达逐渐降
低
；
利用
Zn
剂处理
PR9
细胞诱导
PML-RAR
a
表达后
，
CST7
加
RA
表达水平明显增高
。
生物信息分
析显示
CTSS
是
CST7
的潜在上游蛋白
，
在
APL
中显著低表达
；
CTSS
表达水平随着
APL
细胞诱导分
化逐渐上调
。
敲低
CST
基因
，
能部分易化
ATRA
诱导
APL
细胞分化
。
结论
PML-TAR
a
可能直
接转录激活
CST,
进而影响其靶蛋白酶的功能
。
CTSS
是
CST7
的潜在靶蛋白酶之一
，
ATRA
可能
逆转
CST7-CTSS
的病理性异常以改善
APL
治疗
。
【
关键词
】
CST7
；
CTSS
；
急性早幼粒细胞白血病
；
诱导分化
Abnormal
regulation
of
CST7-CTSS
axis
by
PML-RARa
affects
differentiation
of
acute
promyelocytic
leukemia
cells
LI
Ziping
1
,
WEI
Fenggui
2
,
LIANG
Wewyi
,
FU
Xiangmeng
3
,
XU
Haoyu
,
ZHANG
Hui
.
1.
Dedartmedi
of
Hematolopy
u
O
Oncolopa
,
GuannzUon
Woma
u
O
Chiiyred
,
s
Medicoi
Centvr,
GuannzUon
514623
,
Chinn
；
2.
Depdamedi
of
Peniatmct
,
The
Fiat
Afiliated
Hospitai
of
GuannzUon
Medicoi
University
,
GuannzUon
SlOH
,
Chinn
；
3.
School
of
Peniatmct,
GuannzUon
Medicoi
University
,
GuannzUon
514141,
Chinn
Corresponninn
anthye
:
ZHANG
Hxi,EmUi
：
zUdnnhuikU@ywcme.
ora
[
Abstrrct
]
Objective
Tu
explore
the
roie
of CST7-CTSS
axis
in
the
puhop
—
is
of
pcoie
promyelocytle
00X6111
—
(
APL
)
.
Methods
Expression
cocelation
bawsp
the
fusion
yap
PML-RAR
a
u
O
CST
7
u
O
iis
tarael
proteasvs
was
analyzed
usiny
acoiv
myeloik
mnUemin
expression
proUiv
Oath
sei.
RT-qPCR
was
p
—
orm
—
ta
a
U
x
U
w
thv
effech
of
PML-RAR
a
on
thv
CST7-CTSS
axis.
CST7
exp
—
uent
was
yehormed
ta
OeOnv
its
dfect
on
APL
dikerentiation.
Resultt
Gene
expression
prolifd
analysis
show
—
thai
CST
7
was
semetiveiy
higher
expressed
in
APL
p
UW
o
W
with
PML-RAR
a
fusion
yenv.
CST
7
expression
was
yraPualiy
Ovcreased
Ouany
bl-trans
retinoic
acik
(
ATRA
)
-inOuced
APL
OUferentiation.
Usinn
PR9
(
inOxcibiv
PML-RARa
cells
)
cell
lino
as
stuUy
model
,
increased
CST
7
expression
was
iUentified
upon
Zn
2+
-inOuced
PML-RAR
a
expression.
BioinfOTmumo
analysis
inOicated
基金项目
：
广州医科大学大学生开放项目
(
B135004122
)
、
儿研所项目
(
IP
-
2013
-
11
)
、
广东省自然科学基金项目
(
2015A030313460
)
作者单位
：
510623
广州
，
广州市妇女儿童医疗中心血液肿瘤科(李子平
，
徐浩育,张辉)
eiHO
广州
，
广州医科大学附属第一医院儿科(卫
凤桂)
；
510121
广州
，
广州医科大学儿科学院(梁文怡
，
符祥猛)
通讯作者:张辉,
:
zUanahXqh@
yweme.
ora
・
324
・
中国小儿血液与肿瘤杂志彳
。
?
。
年
12
月第
25
卷第
6
期
J
China
Pediatr
Blood
Catcee,
December
2020
,
Vol
25
,
No.
6
thai
CTSS
poyntihiy
interacted
with
CST7.
Thv
expression
of
CTSS
was
goduhiy
itcreased
duont
APL
cell
€^2
x
1100-.
dowt
CST
7
gedv
expression
pdkidiy
facilitated
ATRA-intuced
APL
cell
differedtiation.
Conclusions
PML-RARa
potentihiy
activatvs
CCS
7
transcoption
,
theody
affectinj
thv
Uinction
of
ihs
taroel
proteasv.
CTSS
is
a
potential
taroel
protease
of
CST7.
ATRA
reverses
thv
phUolopich
apnormalita
of
CST7-8TSS
,
might
it
turn
coutrituSv
tv
APL
thpdpy.
【
Key
wordsi
CST7
;
CTSS
;
Aciuu
promyelocyUe
lenuemin
；
0:0
x
211100
intuction
急性早幼粒细胞白血病
(
nchSv
promyelocytle
司)
；
APL
代表性细胞系
NB4
细胞和模拟
APL
发病
lengemin,APL
)
是急性髓细胞白血病
(
nciilv
myeloid
kugemin,AML
)
的独特亚型
(
AML-M3
)
9
〕
,
其典型特
的
PR9
细胞均来自本实验室
。
1.2
APL
病人样本
本研究已获广州市妇女儿童
征是
95%
~
99%
的
APL
患者携带
1(
15
；
17)
染色体
易位形成
PME-TMR
a
融合基因
°
大量研究表明异常
转录因子
PML-RAR
a
是促进
APL
发生发展的关键
分子基础⑵
o
PML-RAR
a
通过招募共抑制复合物,
进而与靶基因的
DNA
结合形成致密的染色质结构,
抑制正常
PML
的转录功能
，
导致了转录调控抑制
，
最终导致造血细胞分化异常停滞在早幼粒细胞阶
段
。
药理浓度全反式维甲酸
(
ah-trans
retinole
acid
,
ATRA)
作用于
APL
细胞
，
能够解离共抑制复合物并
促进共激活复合物的重新结合,激活正常造血分化
关键基因的转录
，
进而逆转细胞异常停滞并诱导其
分化成熟
9
8
]
o
随着对肿瘤研究的不断深入
，
半胱氨酸蛋白酶
抑制剂(
cystahns
,
CSTs
)
-半胱氨酸蛋白酶
(
cathepsin
,
CTSs
)
轴在肿瘤发生
、
发展
、浸润和转移
中的作用逐渐引起关注
[6]
o
研究提示其表达水平
可以作为恶性肿瘤临床诊断和预后的指标
。
然而,
在
APL
病人中是否存在
CSTs-CTSs
轴异常
，
却至今
未见报告
。
CST7
属于半胱氨酸蛋白酶抑制剂
(cystahns
)
家族之一
，
是
2
型半胱氨酸蛋白酶抑制
因子
9
,CST7
通过与其靶组织蛋白酶形成高亲和性
复合物以调控靶蛋白酶功能
，
进行可逆性调节以维
持平衡
，
从而参加造血细胞免疫功能
9]
o
通过对
AML
表达谱数据进行分析
，
发现
CST
仅在
APL
细
胞高表达
，
提示
CST7
是
PML-RAR
a
的潜在靶基因
，
并具有亚型
/
髓系特异性
9
80
o
本文将研究
CST-
CTSS
轴功能异常调控在
APL
发病中的作用
。
资料和方法
1
研究资料
1.
1
试剂及细胞株
RPMI
1644
、
DMEM
、
FBS
(Gidco
公司)
；
PCR
试剂盒
(
Tabara
公司)
；
质粒小提
试剂盒
(
Qiagen
公司)
；
CDllb-FITC
抗体
(
BD
公
医疗中心医学研究伦理委员会批准及患儿监护人的
知情同意
，
收集经过
MICM
诊断的儿童
APL
细胞
。
2
方法
2.
1
相关性分析
在
https
：
//www.
nebt
nlm.
nit.
gva/gev/
网站
，
以
-RAR
a
和
t(15
；
17)
作为
关键词搜索并下载相关数据
，
进行相关性分析预测
CST7
的候选靶蛋白酶
。
入选标准
：
(
1
)满足逻辑回
归分析相关性分析
P
<0.
05
；
(2
)
趋势与
CST7
相
反
;(D
在其他数据库能被重复检验
。
2.
0
荧光定量
PCR
利用
100
ZnUO
A
处理
PR
细
胞
24h,
诱导
PML-RAR
a
融合基因表达从而模拟
APL
的发病
。
利用体外
1
辺
ATRA
处理
NB4
细胞
4
、
12
、
24
、
48
和
772
,
以及处理
APL
病人细胞
48h,
诱导
APL
细
胞分化
。
在相应的实验时间点提取
RNA
,
利用
5
x
POmePcyptUT
Master
Mio
将
RNA
反转录成
cDNA
。
设
计特异性引物
，
选择
TB
GreenPremio
Eo
TapII
(
Tli
RNaseH
Plus)
试剂盒进行
RT-8CR
实验
。
引物序列如
下
：
CST-F
：
5'-GTGTGAAGCCAGGATTTCCTAA-3'
；
CST7-R
：
5'-TGTCGTTCGTGCAGTTGTTGA-3'
；
CTSS-8：
CTSS-R
：
5'-CAG
TGGTGATCCAGGGTAGG-3'
；
GADPH-
8：
5
,
-8CAAC
TTTGGTATCGTGGAAGG-3'
；
GAPDH-
R
：
5'-GCCAT
CACGCCACAGTTTC-3
；
2.
3
CST
7
敲低实验
取对数生长期的
NB4
细胞
用于实验
，
构建
CST
7
的
shRNA
干扰载体及相应的
慢病毒
，
转染
NB4
细胞筛选稳定株
。
在成功构建
CST
7
敲低的
NB4
细胞后
，
用空载
NB4
细胞作为对
照
,
训
ATRA
处理细胞
24h
后
，
流式检查
CDllb-
FITC
表达评价细胞分化水平
。
CST
7
shRNA
核酸序
列
为
：
CCGGTCAAGGAGTCCCGCATCACAACTCGAG
TTGTGATGCGGGACTCCTTGATTTTTG
o
2.0
统计学分析
所有统计分析采用
SPSS
20.0
软件进行。
计量资料采用
x
±
s
表示,多组间比较采
中国小儿血液与肿瘤杂志
2Z2Z
年
12
月第
25
卷第
6
期
J
China
Pediatr
BlooU
Cancer
,
DecemUer
2Z2Z
,
Vol
25
,
No.
6
-
325
-
用方差分析
，
两组间比较米用
t
检验
,
P<5.50
为差
取冗余后进行分析
。
分析显示
CTSS
仅在携带
t
（
15
；
15
）
PML-RAR
a
的
APL
患者中显著降低
，
结果
异有显著性°
结
果
1
CST
5
在
APL
病人中明显高表达
以
APL
、
PML-
RAR
a
和
i
（
16
；
15
）
作为关键词
，
在
NCBI
_
GEO
在不同的研究组中得到可靠的重复
（
图
3
）
°
4
APL
分化过程中
CTSS
表达恢复
通过定量
RT-
PCR
检测
ATRA
治疗后
CTSS
诱导表达情况
结果
显示经
ATRA
处理
NB4
细胞后
,
随着时间延长,
PML-RAR
a
融合基因表达下降的同时
,
CST
4
表达下
dataset
数据库搜索并下载表达谱数据
。
相关性分析
的结果显示
CST
4
仅在携带
i
（
16
；
15
）
PML-RAR
a
融
降
,
而
CTSS
逐渐恢复
（
图
4A
）
；
同样地
,
我们利用体
外
1
ATRA
处理原代
APL
细胞
48h,
平行检测
合基因的
APL
患者中显著增高
（
图
1A-B
）
°
Z
PML-RAR
a
可诱导
CST
4
表达
利用体外
1
CTSS
表达
,
结果发现
：
随着
PML-RAR
a
表达下降,
ATRA
处理
3
例
APL
原代细胞
48h
,
结果发现:随着
PML-A4R
a
表达下降
,
CST
4
表达水平随之降低
（
图
CS77
表达水平随之降低
，
CTSS
表达上调
（
图
4B,
P<5.21
）
°
这些结果都提示
CTSS
可能是
CST5
的
靶蛋白酶
。
ZA
,
P
<
1.
）
°
1
ATRA
体外处理
NB4
细胞
ZnSO
4
处理
PR9
细胞
，
诱导
后
,
随着时间延长
CST
4
表达下降
（
图
2B
,
P
<
5
CS77
敲低能部分易化
APL
分化
通过
CST
5
5.051
）
°
利用
H
shRNA慢病毒载体敲低
CST
4
表达
，
如
（
图
5A
）
所
PML-A4R
a
融合基因表达从而模拟
APL
发病
。
在诱
示
,敲低
CST
4
表达的
NB4
细胞
,
细胞内的
PML-
RAR
a
表达量没有发生变化
,
而
CTSS
表达量有轻度
增高
。
对
CST4
敲低的
NB4
细胞进行
ATRA
诱导分
导
PML-A4R
a
表达的过程中检测
CST
5
的表达情况
水平
,
结果显示
：
在诱导
PML-RAR
a
表达的过程中
CS77
表达水平明显增高
（
图
2C,
P<5.21
）
°
以上实
验结果提示
PML-RAR
a
可能转录激活CST
4
°
化
，
流式细胞术检测
CD11U
表达情况
,
结果
（
图
5B
）
显示经
1
ATRA
处理
NB4
细胞
24h
后
，
CST
5
敲
低组细胞的分化率为
（
44.6
±3.2
）
%
,
而原始
NB4
细胞的分化率为
（
45.
4±4.2
）
%
,
提示
CST
4敲低部
3
CST
4
基因的表达变化
在
NCBI
GEO
dataset
数
据库
,
以
APL,
PML-RAR
a
和
t
（
15
；
15
）
作为关键词
搜索并下载相关数据
,
对原始数据进行标准化以及
分易化
NB4
细胞分化
（
P
=
1.
^
）
°
u
.2
s
s
a)
d
x
」
(D
2
-
0
-
8
-
6
-
CM
60-I
•
«
<
T
n
-
n
T
V
X
.
^
-
1
Dataset
N
on
M3
M3
N=N=
Rvalue
PMID
GSE1729
GSE14468
GSE10358
GSE1159
TCGA
10
23
15
35
19
14
33
423
68
149
266
230
1.13
E-03
3.43
E-07
1.82
E-05
1.52
E-12
9.22
E-05
5.82
E-13
15674361
19171880
18270328
15084694
23634996
核型:
NA
（
/
c
P
avaikUe
）
表示无核型信息
；
B
：
多组表达谱数据提示
CST
4
在
M3
患者中显著高表达
z
ls
o
图
1
CST5
在急性早幼粒细胞白血病病人中明显高表达
注:
A
：CST5
在不同
AML
亚型中的表达情况:
CK
（
complex
karyotype
）
表示复杂核型
;NK
（
normal
karyotype
）
表示正常
-
322
-
A
中国小儿血液与肿瘤杂志彳
。
?
。
年
12
月第
25
卷第
6
期
J
Chita
Pediatr
Blood
Catcee
-
December
彳
。
?
。
,
Vol
25
,
No.
6
B
C
Time
of
ATRA
treatment
(hours)
图
2
PML-RARa
可诱导
CST
7
表达
注:
A
：
利用
APL
病人样本
,
体外
1
|±M
ATRA
处理
45h
后
，
检测
CST
表达水平;
B
：
利用
NB4
细胞作为研究模型
,
以
1
|±M
ATRA
处理后检测
CST
表达水平;
C
：
利用
PR9
细胞作为研究模型
，
予以
100
|±M Z
n
SO
6
处理
24h,
检测
PML-RARa
和
CST
表达水平
A
u
o
ssa-
ld
xa
SSI
。
E
6
0
1
B
•
・
1
-
T
J
0
n
J
D
A
*
Dataset
M3
Non
M3
P
value
N=
N=
PMID
X
T
・・
•
T
B
4
GSE1729
10
GSE14468
23
15
GSE10358
35
GSE1159
19
TCGA
14
33
423
68
149
266
230
6.33
E-05
6.18
E-40
8.27
E-09
3.54
E-17
8.08
E-32
6.51
E-08
15674361
19171880
18270328
15084694
23634996
图
9
CTSS
基因在
PML-RARa
阳性
APL
患者中显著低表达
注:
A
:
CTSS
在不同
AML
亚型中的表达情况:
CK(
complex
goy/ype)
表示复杂核型
;NK(
uormai
ghy/ype)
表示正常核
型:
NA(uol
avaimble)
表示无核型信息
；
B
：
多组表达谱数据提示
CTSS
在
M3
患者中显著低表达
A
NB4+ATRA
NB4+ATRA
B
(
n
<
6
8,
u
o
w
s
a
ld
xe
4
2
0
s
s
io
-ATRA
+ATRA
图
4
APL
细胞诱导分化过程中
,CCSS
表达上调
注:
A
：
利用
NB4
细胞作为研究模型
，
予以
1
pM
ATRA
处理后检测
CTSS
以及分化基因
PU.
1
的表达水平;
B
：
利用
APL
病人样本
，
体外
1
pM
ATRA
处理
45h
后
，
检测
CTSS
表达水平
中国小儿血液与肿瘤杂志
2020
年
12
月第
25
卷第
6
期
J
China
Pediaw
Blood
Cancee
:
Decembea
2020
,
Vol
25,
No.
6
-
327
-
图
5
CST7
敲低能部分易化
APL
分化
注:
A
：
利用
NB4
细胞敲低
CST
表达
,
CCSS
表达量有轻度增高
；
B
：
利用流式细胞术检测
CDllb
表达率
,
1
|±M
ATRA
处理的
CSC
敲低
NB4
细胞分化率轻度增高
讨
论
是
2
型半胱氨酸蛋白酶抑制因子
，
作为半胱氨酸蛋
白酶的内源性抑制剂
，
与肿瘤的发生
、
发展
、
浸润和
APL
是急性髓细胞白血病的独特亚型
（
AML-
M3
）
,
其典型特征是
95%
~99%
的
APL
患者携带
转移密切相关
”
切
。
我们利用
APL
模式细胞和
APL
病人细胞进行研究发现,
ATRA
处理
NB4
细胞
t
（
15;17
）
染色体易位
，
形成
PML-RAR
a
融合基
因
7
3
°
有别于既往对
PML-RAR
a
的研究集中在转
后,
PML-R4R
a
转录水平被抑制
,
随之
CST
表达水
平降低
，
而
CCSS
表达水平增高
。
PML-RAR
a
激活
录抑制功能
，
本研究发现
PML-RAR
a
转录激活靶基
因
，
通过相关性分析和细胞生物学实验证实
PML-
CST7表达的结果
，
在临床原代
APL
细胞中得验证
。
ATRA
处理临床
APL
细胞
，
同样地能在下调
CSC
表达的同时上调
CCSS
表达
。
反之
，
在诱导
PML-
RAR
a
激活
CST-RCSS
轴
，
参与
APL
发生
。
越来越多的证据证实
APL
病人存在免疫异
常
°
如:组织相容性复合物分子在
APL
病人异
常早幼粒细胞表明表达降低或缺失
，
提示
APL
细胞
RAR
a
表达的过程中
，
CST
7
表达上调
,
而
CCSS
的表
达却被抑制
。
CSC
敲低后
，
能在一定程度上易化
ATRA
诱导的
NB4
细胞成熟分化
。
以上结果说明
存在抗原提呈障碍
，
导致机体免疫细胞识别
APL
细
胞障碍
。
转录因子
PML
影响内源性
/
外源性抗原肽
PML-RAR
a
与
CST7-CTSS
轴之间存在某种联系
，
而
CST7-CTSS
轴异常可能参与
APL
的发病
，
在有效
APL
治疗中参与一定的作用
。
本研究为
APL
发病
机制
（
尤其是免疫方向
）
提供了新线索
，
也为
APL
的
的提呈过程:
PML
能够调控
MHCT
类分子表达
，
如
LMP-2
和
LMP-2
,
并协助其与
MHCT
相关蛋白
TAPT
和
TAP-2
共同将抗原肽转运至膜上
，
易化免疫识
免疫治疗提供了新思路
。
参考文献
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.
Arber
DA
,
Orazi
A
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2716
revision
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the
别7
5
°
PML
能通过
II
类转录激活子有效诱导
MHCT
I
分子表达
，
进而协同抗原提呈
7
6
°
这提示
PML
功能异常将会使得肿瘤细胞易于逃逸宿主免
疫监视
。
致病性融合蛋白
PML-RAR
a
抑制了
PML
WorlO
Health
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myeloik
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foa
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of
acote
promyelocytic
leuUemia
in
的正常功能
，
也就必然影响
APL
细胞的免疫功能
。
随着对肿瘤研究的不断深入
，
半胱氨酸蛋白酶抑制
剂
（
CSTs
）
-
半胱氨酸蛋白酶
（
CTSs）
轴在肿瘤发生
、
发展
、
浸润和转移中的作用逐渐引起关注
,
并有研究
提示其表达水平可以作为临床诊断和预后的指标
。
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alone
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promyelocytic
leuUemia.
Neo
Enal
J
Med
,
2016
,
374
:
如:乳腺癌
、
结肠癌和胃癌组织中
CTSB
mRNA
和蛋
白表达水平较癌旁组织及正常组织明显增高
，
其表
达水平和
CSTL的表达与复发相关,是预后不良的
指标
。
CST7
属于半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族之一,
1197R190.
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McCulloch
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C
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IlanO
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promyelocytic
leakemia
:
coxeat
peapectUes.
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Thea
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322
-
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2Z2Z
年
12
月第
25
卷第
6
期
J
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Pediair
BlooU
Cancer
,
December
2020
,
Vol
25
,
No.
6
immuuoproteasome
subunits
Up
PML/RARalpPa
and
PU.
1
in
acute
promyelocytie
lenUemiv.
Oncopene
,
2014
,
33
：
2700-2708.
tOoxige
Rr
acyte
promyelocytie
lenUemiv.
New
Engl
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063106
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loxa-teon
suoival
and
elicits
specific
immune
responses
repuirinp
CD4
+
anC
CD8
+
T-celi
sivnificance
and
pospective
molecylar
mecyanisms
of
cystatin
aenes
in
paPents
with
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本文编辑:吴南海
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