2024年5月21日发(作者：脱夜梅)
医学研究杂志２００８年ｌ２月 第３７卷第１２期 ・综逑与进展・
１４—３—３蛋白的生物学功能
吕 靖 曹济民
１４—３—３蛋白家族是由多个高度保守但又各具特异性的
Ｋ 一ＡＴＰａｓｅ参与的胞吞作用中，通过多巴胺对三磷酸肌醇激
成员构成的具有复杂功能的调节性蛋白家族，它们主要通过
与磷酸化丝氨酸模体结合来发挥作用。１４—３—３蛋白参与很
多重要的细胞生理过程，如酶和细胞因子活性、离子通道、细
胞骨架动力学调节，ＤＮＡ损伤时细胞周期关卡的引发及维持，
细胞增生、分化和凋亡调节等。
目前在人类细胞及其他生物体中已发现有１Ｏ个以上１４
—
３—３蛋白家族成员…。在人类，已经鉴定出７个不同组织
表型的异构体 ，它们各自具有不同的功能。１４—３—３蛋白
是高度酸性的二聚化的细胞内蛋白，主要与磷酸化丝氨酸模
体结合。很多已鉴别出的１４—３—３相互作用蛋白都有ＲＳＸ－
ＰＳＸＰ识别序列，其中Ｘ是可变的，但磷酸化的丝氨酸对于与
１４—３—３的结合是关键的。１４—３—３与靶蛋白的结合通常
发生在靶序列的第１个丝氨酸被磷酸化之后 。１４—３—３
与靶蛋白的结合通常导致靶蛋白的亚细胞定位的改变或其相
关功能和活性的改变。目前研究较多的靶蛋白包括蛋白磷酸
激酶Ｒａｆｌ、ＫＳＲ１、ＡＳＲ１、ＭＥＫＫ１、Ｂｃｒ、Ｃａ“／ＣａＭＫ、ＰＫＣ、蛋白
磷酸酶Ｃｄｃ２５ｃ、ｅＣｂｌ、ＢＡＤ、Ａ２０、转录因子ＦＫＫＨＲ１、ＭＳＮ２、
ＭＳ、ＧＲ、Ｔｌｘ２、ＮＦＡＴ及端粒酶的催化亚基ＴＥＲＴ等。１４—３—３
蛋白还与一些离子通道的活性有关，被认为是这些离子通道
的辅助性受体蛋白。１４—３—３蛋白在肿瘤及其他一些疾病的
发病机制及诊疗中的意义也越来越受到重视。
一
、
ｌ４—３—３与多种酶的相互作用及联系
１．１４—３—３与Ｎａ 一Ｋ 一ＡＴＰ酶及胞吞作用的关系：在
对Ｇ蛋白偶联受体信号传导作出反应时，Ｎａ 一Ｋ 一ＡＴＰ酶
（Ｎａ 一Ｋ 一ＡＴＰａｓｅ）在胞吞过程中所起的作用，受到（亚基
的磷酸化及三磷酸肌醇激酶的结合所控制，而后者又与１４—３
—
３有密切的关系。用免疫共沉淀法处理１４—３—３蛋白正常
的细胞后，显微镜下显示，多巴胺可以促进１４—３—３蛋白与
胞质膜的联系，并有利于１４—３—３蛋白与Ｎａ 一Ｋ 一ＡＴ—
Ｐａｓｅ的（亚基定位于同一个区域，其中（亚基Ｎ端的第１８位
丝氨酸对１４—３—３蛋白的结合很关键。而在１４—３—３突变
的鼠肾脏细胞中，却发现多巴胺既不能降低Ｎａ 一Ｋ 一ＡＴ—
Ｐａｓｅ的活性，也不能促进胞吞作用。实验中还发现，在Ｎａ 一
基金项目：国家自然科学基金（３０１２５０１６，３０３７０５６５）；９７３项目
（２００６ＣＢ５０３８０６）
作者单位：１００００５ 北京，中国医学科学院基础医学研究所／：Ｉｔ京
协和医学院基础学院生理学与病理生理学系
通讯作者：曹济民，电子信箱：ｃａｏｊｉｍｉｎ＠１２６．ＣＯＢ
酶的激活需要激酶的（亚基的１个富含脯氨酸的结构域结合，
而这一作用在１４—３—３突变时受到阻止。１４—３—３为将三
磷酸肌醇激酶募集到Ｎａ 一Ｋ ＡＴＰａｓｅ的正确位置使其参与
胞吞过程的起到了关键性作用 。
２．在拟南芥中１４—３—３与Ｈ 一ＡＴＰａｓｅ及其异构体之
间相互作用的特异性：Ｈ 一ＡＴＰａｓｅ是胞质膜处与１４—３—３
结合的主要靶蛋白。Ｈ 一ＡＴＰａｓｅ的活性是由１４—３—３与其
磷酸化的ｃ端结合所激活的。在非应激状态下，少于总数
１％的１４—３—３与Ｈ 一ＡＴＰａｓｅ结合。但是在需要氢离子泵
完全激活的条件下，如使用真菌毒素壳梭孢（菌）素时，参与
Ｈ 一ＡＴＰａｓｅ激活的１４—３—３将会增至数个百分点。虽然拟
南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）中１４—３—３家族成员蛋白都典型地包含有
保守的序列，但是在发展渊源上它们有明显的多态性。在对
若干拟南芥１４—３—３／ＧＦＰ融合物的测量分析中发现，１４—３
—
３在不同的亚细胞分区中有着不同的类型。用肽类或化学
试剂能阻断不同的１４—３—３与细胞相应的蛋白质的结合，进
一
步证明了区域化１４—３—３与各自的靶蛋白的作用的特异
性。体外实验中，各１４—３—３异构体都能与Ｈ 一ＡＴＰａｓｅ结
合。但在体内，１４—３—３与Ｈ 一ＡＴＰａｓｅ两者的异构体之间
存在结合特异性。使用１４—３—３的９种异构体的特异性抗
体进行实验，发现在拟南芥叶里，ＧＦ１４ｅ、 、∞、Ｘ、‘Ｐ和Ｏ都
存在，但被隔离的胞质膜处缺乏ＧＦ１４Ｘ、‘ｐ和ｅ。使用所有１４
—
３—３和Ｈ 一ＡＴＰａｓｅ异构体的特异性探针进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ
ｂｌｏｔ分析时，发现大部分异构体的转录产物都存在。在ｍＲＮＡ
水平，ＧＦ１４ｅ、 、ｘ是在叶中高度表达的１４—３—３异构体，
而ＡＨＡ１，３，１１是高度表达的Ｈ 一ＡＴＰａｓｅ异构体。不过在
使用ｍａｓｓ ｐｅｐｔｉｄｅ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ实验方法时，ＡＨＡ１与ＡＨＡ２
得分最高，而且它们的存在可以通过ＭＳ／ＭＳ得到证明 。
３．１４—３—３调控ＣＡＭＫＫ的ＰＫＡ磷酸化依赖性抑制作
用：细胞内钙离子的浓度调节了许多生理过程，如细胞骨架的
动力学反应和基因转录及突触的可塑性等。钙离子信号一部
分是由Ｃａ“／ＣａＭＫ级联所转导的，该级联由ＣａＭＫＫ及其下
游的ＣａＭＫＩ和ＣａＭＫＩＶ组成。该级联还与其他信号转导途径
相关联。如ＣａＭＰ依赖的ＰＫＡ通路中，ＰＫＡ能直接磷酸化
ＣａＭＫＫ的两个抑制性位点（１０８位的Ｔｈｒ及４５８位的Ｓｅｒ），从
而抑制了ＣａＭＫＫ的活性。１４—３—３与这一抑制作用有关。
从共转染的异源细胞以及鼠的脑匀浆中都可通过免疫共沉淀
法得到ＣａＭＫＫ与１４—３—３。突变定位实验鉴定出ＣａＭＫＫ
的磷酸化的第７４位丝氨酸是１４—３—３结合的主要位点。在
・
】０９・
・
综述与进展・
培养的鼠海马神经元以及快速海马切片中，当用ｆｏｒｓｋｌｉｎ处理
使得ＰＫＡ激活时，这种相互作用加强；而当使用ＰＫＡ的抑制
剂时，这种相互作用被阻断。在体外，１４—３—３与ＣａＭＫＫ的
相互作用有两个调节结果：一是直接抑制了ＣａＭＫＫ的活性，
二是打破了抑制性磷酸化位点的第１０８位Ｔｈｒ的去磷酸化。
当用ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ刺激转染了ＣａＭＫＫ的２３９个人类胚胎肾细胞
时，１４—３—３共转染时第１０８位Ｔｈｒ的去磷酸化的抑制作用
的程度，与使用蛋白磷酸酶的抑制作用的程度相当。因此，１４
—
３—３与ＣａＭＫＫ的结合稳定了ＰＫＡ介导的磷酸化的抑制作
用，这对ＣａＭＫＩ、ＣａＭＫＩＶ、ＰＫＢ及ＥＲＫ信号转导通路都起了
重要的调节作用 。
４．１４—３～３￡与ＰＫＣ￣，的相互作用及其与缝隙连接活性
的关系：在上皮细胞中，缝隙连接的活性是受ＰＫＣ￣／介导的对
Ｃｘ４３的磷酸化的调节的。胰岛素样生长因子Ｉ可以促进
ＰＫＣ，／移位及其对Ｃｘ４３的磷酸化，从而提高缝隙连接的活性。
而１４—３—３８可以通过抑制ＰＫＣ７的活性来抑制间隙连接的
活性。实验中鉴别出了ＰＫＣ＇ｙ的ｃ１结构域中两个负责与１４
—
３—３ｅ相互作用的位点：ｃｌＢ１（由１０１～１１２位氨基酸残基
组成）及ｃｌＢ５（由１４１～１５１位氨基酸残基组成）。体外及体
内实验都显示，ｃｌＢ１和（或）ｃ１Ｂ５的合成肽能直接竞争性地
与１４—３—３￡结合，导致内源性的ＰＫＣ３，从与１４—３—３ｅ的结
合中游离释放出来，ＰＫＣ７的活性及其磷酸化作用被激活，并
且转移至细胞膜，导致缝隙连接的活性受到抑制。与对照组
相比，使用了ｃ１Ｂ１或ｃ１Ｂ５合成肽来处理的缝隙连接的活性
至少减少了５倍。用１００ｍｍｏｌ／Ｌ的ｃ１Ｂ１或ｃ１Ｂ５肽处理时，
与对照组相比，Ｃｘ４３的形成下降了１０或４倍。因此，ＰＫＣ７的
活性及其定位是受到它的ｃｌＢ１结构域与１４—３—３ｅ结合所
调节的。与这些ＰＫＣ３，结构域相对应的合成肽可以竞争性地
与１４—３—３￡结合，导致间隙连接的活性受到抑制。合成肽
可以用来调节间隙连接的活性…。
５．１４—３—３调节ＤＹＲＫＩＡ的活性：ＤＹＲＫＩＡ是与唐氏综
合征（ｄｏｗｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）导致的智力发育迟滞有关的酶。用酵母
双杂交法寻找能调节ＤＹＲＫＩＡ活性的蛋白质时，鉴定出１４—３
—
３是与ＤＹＲＫＩＡ相互作用的蛋白质，它们之间的作用与已
经得到证实的ＹａｋｌＰ和Ｂｍｈｌ／２ｐ的相互作用类似。在体外
和体内实验中，ｌ４—３—３与ＤＹＲＫＩＡ的结合都需要ＤＹＲＫＩＡ
的Ｎ端，而且都依赖于ＤＹＲＫＩＡ的磷酸化状态。在体外，１４—
３—３的结合以剂量依赖的方式增加了ＤＹＲＫＩＡ的活性；在体
内，抑制１４—３—３结合的小肽Ｓｃ１３８降低了１４—３—３的活
性。可见，ＤＹＲＫＩＡ的活性可以通过与１４—３～３的相互作用
而受到调节 。
二、１４—３—３与信号转导关键蛋白Ｇｒｂｌ０的联系
Ｇｒｂｌ０是受体蛋白的一种，在受体酪氨酸激酶的信号转导
过程中起重要作用。Ｇｒｂｌ０的表达水平可影响Ａｋｔ的活性。
Ｇｒｂｌ０可在将Ａｋｔ重新定位于细胞膜时起到受体蛋白的作用。
用酵母双杂交法可检测出Ｇｒｂｌ０的一个搭档蛋白１４—３—３。
１４—３—３／Ｇｒｂｌ０的相互作用需要Ｇｒｂｌ０的磷酸化。只有磷酸
．
１】０・
Ｊ Ｍｅｄ Ｒｅｓ，Ｄｅｃ ２００８，Ｖｏ１．３７ Ｎｏ．１２
化形式的Ｇｒｂｌ０可以与内源性的１４—３—３发生免疫共沉淀。
Ｇｒｂｌ０发生磷酸化的位点可能位于经典的１４—３—３结合模体
ＲＳＶＳＥＮ，因为这个位点突变后Ｇｒｂｌ０便失去与１４—３—３结
合的能力。因而，Ｇｒｂｌ０存在有两种不同的磷酸化状态，当第
４２８位丝氨酸发生磷酸化时与１４—３—３组成复合物。有证据
表明Ａｋｔ直接与Ｇｒｂｌ０结合，在体外实验中能磷酸化Ｇｒｂｌ０。
因而，存在１个包括由Ｇｒｂｌ０、１４—３—３与Ａｋｔ组成的磷酸化
调节复合物在内的调节性通路 。
三、１４—３—３与ｃ—Ａｂｌ及细胞程序化凋亡的关系
Ｃ—Ａｂ！酪氨酸激酶在胞质与胞核都存在。细胞核的Ｃ—
Ａｂｌ被不同基因毒性物质激活，引导细胞凋亡。在ＤＮＡ损伤
应答中，胞质的Ｃ—Ａｂｌ被送至胞核发挥作用。Ｃ—Ａｂｌ通过与
１４—３—３结合而滞留于胞质。Ｃ—Ａｂｌ的第７３５位Ｔｈｒ的磷酸
化提供了与１４—３—３直接结合的位点。在对ＤＮＡ损伤作出
应答时，Ｃ—ｊｕｎＮ端激酶（ｊｎｋ）的激活引导了１４—３—３的磷酸
化，使得１４—３—３离开Ｃ—Ａｂｌ。非磷酸化的１４—３—３变异
体抑制了ＤＮＡ损伤诱导的Ｃ—Ａｂｌ往胞核的运输及细胞凋
亡。可见１４—３—３是细胞内ｅ—Ａｂｌ定位及基因毒性应激的
关键性调节因子，并与细胞凋亡有关 。
四、１４—３—３的功能性双性槽在细胞动力学中的作用
过去曾认为，１４—３—３Ｂ结合于ｐ一整合素（以下简称为
整合素），１４—３—３Ｂ的过度表达促进了细胞的伸展及移位
但在后来的实验中发现，１４—３—３Ｂ的与其他配体相互作用
的位于双性槽外面的第６０位丝氨酸的突变，虽然抑制了ｌ４—
３—３ｐ与整合索的相互作用，但是并不防碍１４—３—３ｐ促进
细胞伸展及移位。这表明，ｌ４—３—３Ｂ与整合素的相互作用
对于它在细胞动力学中的作用并不是必需的。实验中还发
现，１４—３—３Ｂ的双性槽（ｇｒｏｏｖｅ）中数个关键氨基酸残基的突
变，尽管不影响１４—３—３８与整合素的相互作用，却破坏了１４
—
３—３Ｂ与其磷酸化丝氨酸的配体Ｒａｆ及Ｃａｓ之间的相互作
用。对突变体ＬＦ（１２９位Ａｒｇ与１３０位Ｔｙｒ换成了Ｌｅｕ及Ｐｈｅ）
的分析表明，不像野生型１４～３—３Ｂ，ＬＦ不能刺激细胞伸展与
移位。这提示了功能性的两性槽对于１４—３—３Ｂ对细胞的调
节作用是必需的。因而是功能性的双性槽，而不是与整合素的
作用，是１４～３—３Ｂ在细胞动力学方面发挥作用的关键。
五、１４—３—３与Ｋ 通道
１．１４—３—３对大麦胚芽的Ｋ 通道的调节及其与生长发
育的关系：种子的萌芽经历两个阶段：最初的吸入阶段及随后
的生长阶段。在大麦中，后一阶段（生长阶段）在胚芽出现时
比较明显。对于生长阶段的继续进行来说，激活性物质（主要
是Ｋ ）是很关键的。大麦胚芽中存在着内向和外向两种Ｋ
通道。脱落酸（ａｂｓｅｉｓｉｃ ａｃｉｄ，ＡＢＡ）激素可抑制大麦的萌芽，而
Ｆｃ（ｆｕｓｉｃｏｃｃｉｎ）则是已经被广泛认同的萌芽刺激因子。ＡＢＡ
阻止Ｋ 内流并降低内向Ｋ 通道的活性。而ＦＣ则促进Ｋ
内流并降低外向Ｋ 通道的活性。这两种Ｋ 通道都受１４—３
—
３的调控，组成一个完整的信号转导途径。１４—３—３对这
两种Ｋ 通道的作用是相反的：内向Ｋ 通道的激活完全依赖
医学研究杂志２００８年１２月 第３７卷第１２期
于１４—３—３，而外向Ｋ 通道的活性可被１４—３—３下调了
６０％。如果再与前述的１４—３—３调节浆膜Ｈ 一ＡＴＰａｓｅ的
活性相联系，可推测１４—３—３是调节细胞的渗透压泵的最初
的因子。
・综述与进展・
影响最大的，它的活性的增加使得复极化时外向离子流的速
率加快，从而加速了动作电位的复极化进程，缩短了动作电位
的时程。内源性ＰＫＡ更倾向于被运送到细胞膜附近时磷酸
化通道。ＰＫＡ是通过ＡＫＡＰｓ定位于胞膜的。胞膜附近相对
丰富的可供利用的１４—３—３￡或许会改变ＨＥＲＧ维持磷酸化
状态的可能性。反过来，细胞内其他１４—３—３８的靶蛋白与
ＨＥＲＧ竞争性结合１４—３—３￡，决定了该处可供与ＨＥＲＧ结合
的１４—３—３￡的浓度。１４—３—３ｓ通过与ＨＥＲＧ的动态性联
２．１４—３—３￡与人心肌细胞ＨＥＲＧ钾通道的相互作用：
对复杂的心血管变化作出及时的适应性的心脏节律的变化需
要对膜兴奋性的动态性调节。离子通道建立并调节了心肌细
胞的膜电位及兴奋性。通道活性的精细调控对于调节心脏节
律是必需的。心脏节律的紊乱可由不正常的离子通道活性引
起。ＨＥＲＧ基因编码了通道的极性形成亚基，后者形成ＩＫｒ
（快速激活延迟整流Ｋ 流）。ＩＫｒ的特殊性在于对心肌动作
电位复极化作出反应及相应的调节，因而它对于心脏节律的
调控是关键的。ＨＥＲＧ蛋白的突变可以导致长ＱＴ综合征
（ＬＱＴＳ）。ＬＱＴＳ的节律性紊乱通常是应激诱导的，提示Ｂ一
肾上腺素能的增强性应激与心脏离子通道活性有关。应激激
动Ｂ一肾上腺素受体，导致ｃＡＭＰ水平升高，ｃＡＭＰ可直接或
间接通过ＰＫＡ的磷酸化来调节ＨＥＲＧ的Ｋ 通道。
已经发现越来越多的第２亚基及辅助性结合蛋白，与离
子通道相关联并调节离子通道的表达、转运及活性。相当一
部分离子通道存在于由激酶、磷酸酶及信号转导分子组成的
动态的大分子复合物中。对于ＨＥＲＧ通道，实验中发现了Ｂ
一
肾上腺素能信号转导与ＨＥＲＧ通道活性的改变之间联系起
来的一个重要蛋白１４—３—３８。ＨＥＲＧ／ＩＫ可能存在于一个包
括１４—３—３８，还可能包括ＡＫＡＰｓ在内的大分子信号转导复
合物中。这个复合物通过将不同路径对通道活性的调节进行
协调，动态地调节了膜的兴奋性。
１４—３—３８同时与ＨＥＲＧ通道的Ｎ端及ｃ端结合，提高
了ＨＥＲＧ的活性，这一作用需要ＰＫＡ对ＨＥＲＧ的磷酸化及１４
—
３—３８的二聚化。ｌ４—３—３￡与ＨＥＲＧ之间的相互作用还
可以阻止磷酸酶从细胞内释放，稳定了通道的ＰＫＡ磷酸化状
态的时间，从而导致了Ｂ一。肾上腺素受体对ＨＥＲＧ通道活性
的刺激作用的增强。１４—３—３￡定位于１７号染色体，１７Ｐ１３．
３，它所编码的１４—３—３ｓ异构体是１４—３—３各种异构体中，
在心脏表达最丰富的类型。酵母双杂交法证明了ＨＥＲＧ的钾
离子通道与１４—３—３Ｅ存在着相互作用。在体外实验中，这
一
相互作用被Ｒ１８肽（１个对靶蛋白ＨＥＲＧ有高亲和力的１４
—
３—３的竞争性抑制剂）所阻断。进一步的实验表明，ＨＥＲＧ
蛋白与１４—３—３８的结合部位位于２１５—３７５位氨基酸残基，
包括ＰＫＡ的磷酸化位点２８０ＲＲＡ（Ｐ）ＳＳＤ２８５。ＨＥＲＧ有４个
磷酸化位点：￥２８３、￥８９０、Ｔ８９５ＪＩ及Ｓ１１３７。实验证明，￥２８３与
Ｓ１１３７介导了与１４—３—３￡的结合。在１个ＨＥＲＧ通道四聚
体中有８个潜在的１４—３—３￡结合位点。ＨＥＲＧ与１４—３—
３ｓ之间的相互作用的发挥需要１４—３—３８二聚化并直接与
ＨＥＲＧ的相应位点结合。１４—３—３￡与ＨＥＲＧ的相互作用使
得在电压依赖性激活中往超极化方向增加了１１ｍＶ的振幅，
在原来的（２Ｏ～ｌＯＯｍＶ的电变化范围的基础上增加了１５％到
４５％，提高了ＨＥＲＧ／ＩＫｒ的活性。而ＩＫｒ又是对心脏动作电位
系，为心脏在对应激作出恰当的电生理反应提供了一个调节
机制。
总之，１４—３—３￡与ＨＥＲＧ之间的相互作用增强了肾上
腺素对ＨＥＲＧ Ｋ 通道活性的刺激作用为对膜的兴奋性及心
脏节律性的控制的可塑性提供了一个独特的机制 Ｊ。
六、１４—３—３与肿瘤
１４—３—３与肿瘤密切相关，这是因为它不仅与端粒和端
粒酶的活性相关，而且在Ｇ：细胞周期关卡中发挥了重要的作
用，从而确保了基因的完整性、ＤＮＡ损伤的及时修复及细胞的
存活。
１．１４—３—３与端粒及端粒酶活性的关系：有报道指出，１４
—
３—３￣ｒ的下调与端粒酶的持续性活性及Ｐ１６１ＮＫ４ａ肿瘤抑
制基因的大量下调相伴随。还有实验显示，两个１４—３—３ｔｒ
基因都失活时，细胞出现端粒重复序列丢失，提高了染色体端
端相连及末端非相互移位的频率。这些现象与端粒的Ｇ带悬
突的数量减少以及核基质与端粒的关系的改变有关。
２．１４—３—３￣ｒ与Ｇ 细胞周期关卡的关系：１４—３—３￣ｒ在
功能水平上与Ｐ５３引导的Ｇ，细胞周期关卡有关，１４—３—３￣ｒ
引发及维持了ＤＮＡ损伤后的Ｇ 期停顿，使得在从Ｇ 期进入
Ｍ期之前，ＤＮＡ得到修复。Ｃｄｃ２５Ｃ磷酸酶的去磷酸化作用可
以激活ｃｙｃｌｉｎＢ１／Ｃｄｃ２复合物，而１４—３—３ 通过结合于
Ｃｄｃ２５ｃ的２１６位的Ｓｅｒ残基来使得Ｃｄｃ２５ｃ磷酸酶失活。１４—
３—３ 还将Ｃｄｃ２限定于胞质，防止它在Ｇ：后期移位至核。
在未经处理的循环周期的细胞，偶发的染色体断裂或者端粒
之间的融合会被Ｇ 细胞周期关卡捕获，细胞周期发生停顿，
接着这些突变了的染色体结构在进入Ｍ期之前进行修复。
但如果这些细胞的１４—３—３￣ｒ在维持Ｇ 细胞周期关卡方面
有缺陷，这些细胞在进入Ｍ期时突变的染色体结构就会没有
得到恢复，进而在有丝分裂时导致细胞凋亡 。
七、１４—３—３与其他疾病的关系
１４—３—３可作为从神经脱髓鞘疾病病人中挑选出很可能
发展为更严重的复杂性硬化者的标志物。编码１４—３—３家
族的基因中ＹＷＨＡＺ基因的ＳＮＰｒｓ９８３５８３Ｇ／Ａ与狂妄型精神分
裂症有重要的联系，ＹＷＨＡＺ基因是一个潜在的狂妄型精神分
裂症的易感性基因。总之，１４—３—３是癌症与多种人类疾病
的研究的焦点之一。１４—３—３蛋白可能会在诊断与治疗人类
疾病中发挥越来越大的作用。
参考文献
１ Ｐａｕｌ ＡＬ．Ｓｅｈｎｋｅ ＰＣ．Ｆｅｒｌ ＲＪ．Ｉｓｏｆｏｒｍ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ ｌｏｃａｌｉｚａ．
・
１１ １・
・
综述与进展・ Ｊ Ｍｅｄ Ｒｅｓ，Ｄｅｃ ２００８，Ｖｏ１．３７ Ｎｏ．１２
ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｋｉｎａｓｅ ｂｙ ｐｒｏｔｅｉｎ １４—３—３．Ｊ
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ｉｎｔｏ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈ０ ｐｈ０ｉｎ０ｓｉｔｉｄｅ ３一ｋｉｎａｓｅ ｄｕｒｉｎｇ ｅｎｄｏ－
９ Ｕｒｓｃｈｅｌ Ｓ，Ｂａｓｓｅｒｍａｎｎ Ｆ，Ｂａｉ ＲＹ，ｅｔ ａ１．Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｒｂｌ０
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（收稿：２００８—０９—１２）
梗阻性黄疸并发急性肾衰竭机制的研究概况
张喜平 沈延飞 黄鑫梅
梗阻性黄疸（ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｊａｕｎｄｉｃｅ，ＯＪ）是一种主要由胆道
结石、胆管狭窄、胆管癌、壶腹周围癌等引起的临床征象。除
能引起肝脏的明显损害外，对其他脏器及组织均有不同程度
的损害，且影响治疗的效果。急性肾衰竭（ａｃｕｔｅ ｒｅｎａｌ ｆａｉｌｕｒｅ，
ＡＲＦ）是梗阻性黄疸患者常见的死亡原因之一。据文献报道，
内毒素水平的升高与０Ｊ时机体的免疫功能受抑有关。彭兵
等 研究发现无论术前还是术后，ＯＪ患者血液中的白细胞介
素一６（ＩＬ一６）、白细胞介素一８（ＩＬ一８）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ
一
）等炎症介质均明显高于对照组（Ｐ＜０．０５），对机体免疫
功能的下降有着直接影响，而且炎症介质的释放，还可引起肾
在接受手术的０Ｊ患者中ＡＲＦ发生率约有８％～９％，病死率
更高达６８％ ，本文对０Ｊ时ＡＲＦ的发生机制做一综述。
一
血液动力学改变，加重肾脏低灌注 ，从而对肾脏造成一定程
度损害。
、
内毒素血症
内毒素血症还可直接激活凝血因子Ⅺ和Ⅻ启动内源性凝
血系统，诱导前列腺素与血栓素等的产生 ，从而引起肾小球
和肾小管周围纤维蛋白沉积，它还可以通过肾交感神经兴奋
性来激活肾素一血管紧张素系统，提高血管对儿茶酚胺的敏
感性，引起血管收缩…，从而加重。肾脏缺血、缺氧，直接导致肾
内毒素是肠内的革兰阴性菌细胞壁上的一种脂多糖，正
常情况下，来自胆汁的胆酸、胆盐和分泌型免疫球蛋白Ａ（ｓｌ—
ｇＡ），均能抑制肠内菌群过度繁殖和内毒素产生，维持黏膜屏
障的完整，阻止内毒素的吸收。０Ｊ时肠一肝循环中断，缺乏
胆盐及ｓｌｇＡ，肠腔内革兰阴性菌过度增生，菌群失调，微生态
紊乱，内毒素产生增多，加上肠黏膜屏障功能受损，内毒素从
肠道吸收增多，同时又由于胆汁反流人血，高浓度胆红素的毒
功能损害。综上所述，０Ｊ时内毒素血症的发生可通过直接和
间接的途径来影响肾脏的功能，对ＡＲＦ的产生有着较大的影
响。还有研究表明 术前应用胆酸钠或抗内毒素制剂等进行
性作用，肝库普弗细胞功能受到抑制，不能有效阻止门静脉血
中内毒素溢入外周，从而形成肠源性内毒素血症（ｅｎｄｏｔｏｘ—
抗内毒素治疗可有效降低术后血中内毒素水平，有效地改善
肾功能。因此，保护肠道黏膜，调整肠道菌群的紊乱，减少肠
ｅｍｉａ，ＥＴＭ） 。肝脏是降解内毒素、杀灭细菌的主要场所，而
内毒素血症的形成，又加重了肝细胞损伤。有研究表明 ，内
毒素是引起０Ｊ免疫功能受抑的主要原因之一，０Ｊ患者血液
基金项目：浙江省中医药卫生科技计划项目（２００４Ｃ１４２）；杭问市
科技计划项目（２００５２２４）
道内毒素的吸收，提高肝脏Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞及机体免疫功能以增
强内毒素的清除作用，对抑制并发症的发生有着积极的作
用 。
二、免疫功能下降
０Ｊ时存在全身免疫功能下降，尤其是细胞免疫机能降低
的问题。有研究证实内毒素是引起０Ｊ时免疫功能受抑的主
要原因之一 ，主要涉及的细胞因子有ＴＮＦ一 、ＩＬ一１、ＩＬ一
２、ＩＬ一６、ＩＬ一８等。其中ＩＬ一１、ＩＬ一６、ＩＬ一８主要来源于单核
作者单位：３１０００６杭州市第一人民医院普外科（张喜平）；浙江
中医药大学（沈延飞、黄鑫梅）
通讯作者：张喜平，电子信箱：ｚｘｐ９９６８８＠ｙａｈｏｏ．ｔｏｍ
・
１１２・
2024年5月21日发(作者：脱夜梅)
医学研究杂志２００８年ｌ２月 第３７卷第１２期 ・综逑与进展・
１４—３—３蛋白的生物学功能
吕 靖 曹济民
１４—３—３蛋白家族是由多个高度保守但又各具特异性的
Ｋ 一ＡＴＰａｓｅ参与的胞吞作用中，通过多巴胺对三磷酸肌醇激
成员构成的具有复杂功能的调节性蛋白家族，它们主要通过
与磷酸化丝氨酸模体结合来发挥作用。１４—３—３蛋白参与很
多重要的细胞生理过程，如酶和细胞因子活性、离子通道、细
胞骨架动力学调节，ＤＮＡ损伤时细胞周期关卡的引发及维持，
细胞增生、分化和凋亡调节等。
目前在人类细胞及其他生物体中已发现有１Ｏ个以上１４
—
３—３蛋白家族成员…。在人类，已经鉴定出７个不同组织
表型的异构体 ，它们各自具有不同的功能。１４—３—３蛋白
是高度酸性的二聚化的细胞内蛋白，主要与磷酸化丝氨酸模
体结合。很多已鉴别出的１４—３—３相互作用蛋白都有ＲＳＸ－
ＰＳＸＰ识别序列，其中Ｘ是可变的，但磷酸化的丝氨酸对于与
１４—３—３的结合是关键的。１４—３—３与靶蛋白的结合通常
发生在靶序列的第１个丝氨酸被磷酸化之后 。１４—３—３
与靶蛋白的结合通常导致靶蛋白的亚细胞定位的改变或其相
关功能和活性的改变。目前研究较多的靶蛋白包括蛋白磷酸
激酶Ｒａｆｌ、ＫＳＲ１、ＡＳＲ１、ＭＥＫＫ１、Ｂｃｒ、Ｃａ“／ＣａＭＫ、ＰＫＣ、蛋白
磷酸酶Ｃｄｃ２５ｃ、ｅＣｂｌ、ＢＡＤ、Ａ２０、转录因子ＦＫＫＨＲ１、ＭＳＮ２、
ＭＳ、ＧＲ、Ｔｌｘ２、ＮＦＡＴ及端粒酶的催化亚基ＴＥＲＴ等。１４—３—３
蛋白还与一些离子通道的活性有关，被认为是这些离子通道
的辅助性受体蛋白。１４—３—３蛋白在肿瘤及其他一些疾病的
发病机制及诊疗中的意义也越来越受到重视。
一
、
ｌ４—３—３与多种酶的相互作用及联系
１．１４—３—３与Ｎａ 一Ｋ 一ＡＴＰ酶及胞吞作用的关系：在
对Ｇ蛋白偶联受体信号传导作出反应时，Ｎａ 一Ｋ 一ＡＴＰ酶
（Ｎａ 一Ｋ 一ＡＴＰａｓｅ）在胞吞过程中所起的作用，受到（亚基
的磷酸化及三磷酸肌醇激酶的结合所控制，而后者又与１４—３
—
３有密切的关系。用免疫共沉淀法处理１４—３—３蛋白正常
的细胞后，显微镜下显示，多巴胺可以促进１４—３—３蛋白与
胞质膜的联系，并有利于１４—３—３蛋白与Ｎａ 一Ｋ 一ＡＴ—
Ｐａｓｅ的（亚基定位于同一个区域，其中（亚基Ｎ端的第１８位
丝氨酸对１４—３—３蛋白的结合很关键。而在１４—３—３突变
的鼠肾脏细胞中，却发现多巴胺既不能降低Ｎａ 一Ｋ 一ＡＴ—
Ｐａｓｅ的活性，也不能促进胞吞作用。实验中还发现，在Ｎａ 一
基金项目：国家自然科学基金（３０１２５０１６，３０３７０５６５）；９７３项目
（２００６ＣＢ５０３８０６）
作者单位：１００００５ 北京，中国医学科学院基础医学研究所／：Ｉｔ京
协和医学院基础学院生理学与病理生理学系
通讯作者：曹济民，电子信箱：ｃａｏｊｉｍｉｎ＠１２６．ＣＯＢ
酶的激活需要激酶的（亚基的１个富含脯氨酸的结构域结合，
而这一作用在１４—３—３突变时受到阻止。１４—３—３为将三
磷酸肌醇激酶募集到Ｎａ 一Ｋ ＡＴＰａｓｅ的正确位置使其参与
胞吞过程的起到了关键性作用 。
２．在拟南芥中１４—３—３与Ｈ 一ＡＴＰａｓｅ及其异构体之
间相互作用的特异性：Ｈ 一ＡＴＰａｓｅ是胞质膜处与１４—３—３
结合的主要靶蛋白。Ｈ 一ＡＴＰａｓｅ的活性是由１４—３—３与其
磷酸化的ｃ端结合所激活的。在非应激状态下，少于总数
１％的１４—３—３与Ｈ 一ＡＴＰａｓｅ结合。但是在需要氢离子泵
完全激活的条件下，如使用真菌毒素壳梭孢（菌）素时，参与
Ｈ 一ＡＴＰａｓｅ激活的１４—３—３将会增至数个百分点。虽然拟
南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）中１４—３—３家族成员蛋白都典型地包含有
保守的序列，但是在发展渊源上它们有明显的多态性。在对
若干拟南芥１４—３—３／ＧＦＰ融合物的测量分析中发现，１４—３
—
３在不同的亚细胞分区中有着不同的类型。用肽类或化学
试剂能阻断不同的１４—３—３与细胞相应的蛋白质的结合，进
一
步证明了区域化１４—３—３与各自的靶蛋白的作用的特异
性。体外实验中，各１４—３—３异构体都能与Ｈ 一ＡＴＰａｓｅ结
合。但在体内，１４—３—３与Ｈ 一ＡＴＰａｓｅ两者的异构体之间
存在结合特异性。使用１４—３—３的９种异构体的特异性抗
体进行实验，发现在拟南芥叶里，ＧＦ１４ｅ、 、∞、Ｘ、‘Ｐ和Ｏ都
存在，但被隔离的胞质膜处缺乏ＧＦ１４Ｘ、‘ｐ和ｅ。使用所有１４
—
３—３和Ｈ 一ＡＴＰａｓｅ异构体的特异性探针进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ
ｂｌｏｔ分析时，发现大部分异构体的转录产物都存在。在ｍＲＮＡ
水平，ＧＦ１４ｅ、 、ｘ是在叶中高度表达的１４—３—３异构体，
而ＡＨＡ１，３，１１是高度表达的Ｈ 一ＡＴＰａｓｅ异构体。不过在
使用ｍａｓｓ ｐｅｐｔｉｄｅ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ实验方法时，ＡＨＡ１与ＡＨＡ２
得分最高，而且它们的存在可以通过ＭＳ／ＭＳ得到证明 。
３．１４—３—３调控ＣＡＭＫＫ的ＰＫＡ磷酸化依赖性抑制作
用：细胞内钙离子的浓度调节了许多生理过程，如细胞骨架的
动力学反应和基因转录及突触的可塑性等。钙离子信号一部
分是由Ｃａ“／ＣａＭＫ级联所转导的，该级联由ＣａＭＫＫ及其下
游的ＣａＭＫＩ和ＣａＭＫＩＶ组成。该级联还与其他信号转导途径
相关联。如ＣａＭＰ依赖的ＰＫＡ通路中，ＰＫＡ能直接磷酸化
ＣａＭＫＫ的两个抑制性位点（１０８位的Ｔｈｒ及４５８位的Ｓｅｒ），从
而抑制了ＣａＭＫＫ的活性。１４—３—３与这一抑制作用有关。
从共转染的异源细胞以及鼠的脑匀浆中都可通过免疫共沉淀
法得到ＣａＭＫＫ与１４—３—３。突变定位实验鉴定出ＣａＭＫＫ
的磷酸化的第７４位丝氨酸是１４—３—３结合的主要位点。在
・
】０９・
・
综述与进展・
培养的鼠海马神经元以及快速海马切片中，当用ｆｏｒｓｋｌｉｎ处理
使得ＰＫＡ激活时，这种相互作用加强；而当使用ＰＫＡ的抑制
剂时，这种相互作用被阻断。在体外，１４—３—３与ＣａＭＫＫ的
相互作用有两个调节结果：一是直接抑制了ＣａＭＫＫ的活性，
二是打破了抑制性磷酸化位点的第１０８位Ｔｈｒ的去磷酸化。
当用ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ刺激转染了ＣａＭＫＫ的２３９个人类胚胎肾细胞
时，１４—３—３共转染时第１０８位Ｔｈｒ的去磷酸化的抑制作用
的程度，与使用蛋白磷酸酶的抑制作用的程度相当。因此，１４
—
３—３与ＣａＭＫＫ的结合稳定了ＰＫＡ介导的磷酸化的抑制作
用，这对ＣａＭＫＩ、ＣａＭＫＩＶ、ＰＫＢ及ＥＲＫ信号转导通路都起了
重要的调节作用 。
４．１４—３～３￡与ＰＫＣ￣，的相互作用及其与缝隙连接活性
的关系：在上皮细胞中，缝隙连接的活性是受ＰＫＣ￣／介导的对
Ｃｘ４３的磷酸化的调节的。胰岛素样生长因子Ｉ可以促进
ＰＫＣ，／移位及其对Ｃｘ４３的磷酸化，从而提高缝隙连接的活性。
而１４—３—３８可以通过抑制ＰＫＣ７的活性来抑制间隙连接的
活性。实验中鉴别出了ＰＫＣ＇ｙ的ｃ１结构域中两个负责与１４
—
３—３ｅ相互作用的位点：ｃｌＢ１（由１０１～１１２位氨基酸残基
组成）及ｃｌＢ５（由１４１～１５１位氨基酸残基组成）。体外及体
内实验都显示，ｃｌＢ１和（或）ｃ１Ｂ５的合成肽能直接竞争性地
与１４—３—３￡结合，导致内源性的ＰＫＣ３，从与１４—３—３ｅ的结
合中游离释放出来，ＰＫＣ７的活性及其磷酸化作用被激活，并
且转移至细胞膜，导致缝隙连接的活性受到抑制。与对照组
相比，使用了ｃ１Ｂ１或ｃ１Ｂ５合成肽来处理的缝隙连接的活性
至少减少了５倍。用１００ｍｍｏｌ／Ｌ的ｃ１Ｂ１或ｃ１Ｂ５肽处理时，
与对照组相比，Ｃｘ４３的形成下降了１０或４倍。因此，ＰＫＣ７的
活性及其定位是受到它的ｃｌＢ１结构域与１４—３—３ｅ结合所
调节的。与这些ＰＫＣ３，结构域相对应的合成肽可以竞争性地
与１４—３—３￡结合，导致间隙连接的活性受到抑制。合成肽
可以用来调节间隙连接的活性…。
５．１４—３—３调节ＤＹＲＫＩＡ的活性：ＤＹＲＫＩＡ是与唐氏综
合征（ｄｏｗｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）导致的智力发育迟滞有关的酶。用酵母
双杂交法寻找能调节ＤＹＲＫＩＡ活性的蛋白质时，鉴定出１４—３
—
３是与ＤＹＲＫＩＡ相互作用的蛋白质，它们之间的作用与已
经得到证实的ＹａｋｌＰ和Ｂｍｈｌ／２ｐ的相互作用类似。在体外
和体内实验中，ｌ４—３—３与ＤＹＲＫＩＡ的结合都需要ＤＹＲＫＩＡ
的Ｎ端，而且都依赖于ＤＹＲＫＩＡ的磷酸化状态。在体外，１４—
３—３的结合以剂量依赖的方式增加了ＤＹＲＫＩＡ的活性；在体
内，抑制１４—３—３结合的小肽Ｓｃ１３８降低了１４—３—３的活
性。可见，ＤＹＲＫＩＡ的活性可以通过与１４—３～３的相互作用
而受到调节 。
二、１４—３—３与信号转导关键蛋白Ｇｒｂｌ０的联系
Ｇｒｂｌ０是受体蛋白的一种，在受体酪氨酸激酶的信号转导
过程中起重要作用。Ｇｒｂｌ０的表达水平可影响Ａｋｔ的活性。
Ｇｒｂｌ０可在将Ａｋｔ重新定位于细胞膜时起到受体蛋白的作用。
用酵母双杂交法可检测出Ｇｒｂｌ０的一个搭档蛋白１４—３—３。
１４—３—３／Ｇｒｂｌ０的相互作用需要Ｇｒｂｌ０的磷酸化。只有磷酸
．
１】０・
Ｊ Ｍｅｄ Ｒｅｓ，Ｄｅｃ ２００８，Ｖｏ１．３７ Ｎｏ．１２
化形式的Ｇｒｂｌ０可以与内源性的１４—３—３发生免疫共沉淀。
Ｇｒｂｌ０发生磷酸化的位点可能位于经典的１４—３—３结合模体
ＲＳＶＳＥＮ，因为这个位点突变后Ｇｒｂｌ０便失去与１４—３—３结
合的能力。因而，Ｇｒｂｌ０存在有两种不同的磷酸化状态，当第
４２８位丝氨酸发生磷酸化时与１４—３—３组成复合物。有证据
表明Ａｋｔ直接与Ｇｒｂｌ０结合，在体外实验中能磷酸化Ｇｒｂｌ０。
因而，存在１个包括由Ｇｒｂｌ０、１４—３—３与Ａｋｔ组成的磷酸化
调节复合物在内的调节性通路 。
三、１４—３—３与ｃ—Ａｂｌ及细胞程序化凋亡的关系
Ｃ—Ａｂ！酪氨酸激酶在胞质与胞核都存在。细胞核的Ｃ—
Ａｂｌ被不同基因毒性物质激活，引导细胞凋亡。在ＤＮＡ损伤
应答中，胞质的Ｃ—Ａｂｌ被送至胞核发挥作用。Ｃ—Ａｂｌ通过与
１４—３—３结合而滞留于胞质。Ｃ—Ａｂｌ的第７３５位Ｔｈｒ的磷酸
化提供了与１４—３—３直接结合的位点。在对ＤＮＡ损伤作出
应答时，Ｃ—ｊｕｎＮ端激酶（ｊｎｋ）的激活引导了１４—３—３的磷酸
化，使得１４—３—３离开Ｃ—Ａｂｌ。非磷酸化的１４—３—３变异
体抑制了ＤＮＡ损伤诱导的Ｃ—Ａｂｌ往胞核的运输及细胞凋
亡。可见１４—３—３是细胞内ｅ—Ａｂｌ定位及基因毒性应激的
关键性调节因子，并与细胞凋亡有关 。
四、１４—３—３的功能性双性槽在细胞动力学中的作用
过去曾认为，１４—３—３Ｂ结合于ｐ一整合素（以下简称为
整合素），１４—３—３Ｂ的过度表达促进了细胞的伸展及移位
但在后来的实验中发现，１４—３—３Ｂ的与其他配体相互作用
的位于双性槽外面的第６０位丝氨酸的突变，虽然抑制了ｌ４—
３—３ｐ与整合索的相互作用，但是并不防碍１４—３—３ｐ促进
细胞伸展及移位。这表明，ｌ４—３—３Ｂ与整合素的相互作用
对于它在细胞动力学中的作用并不是必需的。实验中还发
现，１４—３—３Ｂ的双性槽（ｇｒｏｏｖｅ）中数个关键氨基酸残基的突
变，尽管不影响１４—３—３８与整合素的相互作用，却破坏了１４
—
３—３Ｂ与其磷酸化丝氨酸的配体Ｒａｆ及Ｃａｓ之间的相互作
用。对突变体ＬＦ（１２９位Ａｒｇ与１３０位Ｔｙｒ换成了Ｌｅｕ及Ｐｈｅ）
的分析表明，不像野生型１４～３—３Ｂ，ＬＦ不能刺激细胞伸展与
移位。这提示了功能性的两性槽对于１４—３—３Ｂ对细胞的调
节作用是必需的。因而是功能性的双性槽，而不是与整合素的
作用，是１４～３—３Ｂ在细胞动力学方面发挥作用的关键。
五、１４—３—３与Ｋ 通道
１．１４—３—３对大麦胚芽的Ｋ 通道的调节及其与生长发
育的关系：种子的萌芽经历两个阶段：最初的吸入阶段及随后
的生长阶段。在大麦中，后一阶段（生长阶段）在胚芽出现时
比较明显。对于生长阶段的继续进行来说，激活性物质（主要
是Ｋ ）是很关键的。大麦胚芽中存在着内向和外向两种Ｋ
通道。脱落酸（ａｂｓｅｉｓｉｃ ａｃｉｄ，ＡＢＡ）激素可抑制大麦的萌芽，而
Ｆｃ（ｆｕｓｉｃｏｃｃｉｎ）则是已经被广泛认同的萌芽刺激因子。ＡＢＡ
阻止Ｋ 内流并降低内向Ｋ 通道的活性。而ＦＣ则促进Ｋ
内流并降低外向Ｋ 通道的活性。这两种Ｋ 通道都受１４—３
—
３的调控，组成一个完整的信号转导途径。１４—３—３对这
两种Ｋ 通道的作用是相反的：内向Ｋ 通道的激活完全依赖
医学研究杂志２００８年１２月 第３７卷第１２期
于１４—３—３，而外向Ｋ 通道的活性可被１４—３—３下调了
６０％。如果再与前述的１４—３—３调节浆膜Ｈ 一ＡＴＰａｓｅ的
活性相联系，可推测１４—３—３是调节细胞的渗透压泵的最初
的因子。
・综述与进展・
影响最大的，它的活性的增加使得复极化时外向离子流的速
率加快，从而加速了动作电位的复极化进程，缩短了动作电位
的时程。内源性ＰＫＡ更倾向于被运送到细胞膜附近时磷酸
化通道。ＰＫＡ是通过ＡＫＡＰｓ定位于胞膜的。胞膜附近相对
丰富的可供利用的１４—３—３￡或许会改变ＨＥＲＧ维持磷酸化
状态的可能性。反过来，细胞内其他１４—３—３８的靶蛋白与
ＨＥＲＧ竞争性结合１４—３—３￡，决定了该处可供与ＨＥＲＧ结合
的１４—３—３￡的浓度。１４—３—３ｓ通过与ＨＥＲＧ的动态性联
２．１４—３—３￡与人心肌细胞ＨＥＲＧ钾通道的相互作用：
对复杂的心血管变化作出及时的适应性的心脏节律的变化需
要对膜兴奋性的动态性调节。离子通道建立并调节了心肌细
胞的膜电位及兴奋性。通道活性的精细调控对于调节心脏节
律是必需的。心脏节律的紊乱可由不正常的离子通道活性引
起。ＨＥＲＧ基因编码了通道的极性形成亚基，后者形成ＩＫｒ
（快速激活延迟整流Ｋ 流）。ＩＫｒ的特殊性在于对心肌动作
电位复极化作出反应及相应的调节，因而它对于心脏节律的
调控是关键的。ＨＥＲＧ蛋白的突变可以导致长ＱＴ综合征
（ＬＱＴＳ）。ＬＱＴＳ的节律性紊乱通常是应激诱导的，提示Ｂ一
肾上腺素能的增强性应激与心脏离子通道活性有关。应激激
动Ｂ一肾上腺素受体，导致ｃＡＭＰ水平升高，ｃＡＭＰ可直接或
间接通过ＰＫＡ的磷酸化来调节ＨＥＲＧ的Ｋ 通道。
已经发现越来越多的第２亚基及辅助性结合蛋白，与离
子通道相关联并调节离子通道的表达、转运及活性。相当一
部分离子通道存在于由激酶、磷酸酶及信号转导分子组成的
动态的大分子复合物中。对于ＨＥＲＧ通道，实验中发现了Ｂ
一
肾上腺素能信号转导与ＨＥＲＧ通道活性的改变之间联系起
来的一个重要蛋白１４—３—３８。ＨＥＲＧ／ＩＫ可能存在于一个包
括１４—３—３８，还可能包括ＡＫＡＰｓ在内的大分子信号转导复
合物中。这个复合物通过将不同路径对通道活性的调节进行
协调，动态地调节了膜的兴奋性。
１４—３—３８同时与ＨＥＲＧ通道的Ｎ端及ｃ端结合，提高
了ＨＥＲＧ的活性，这一作用需要ＰＫＡ对ＨＥＲＧ的磷酸化及１４
—
３—３８的二聚化。ｌ４—３—３￡与ＨＥＲＧ之间的相互作用还
可以阻止磷酸酶从细胞内释放，稳定了通道的ＰＫＡ磷酸化状
态的时间，从而导致了Ｂ一。肾上腺素受体对ＨＥＲＧ通道活性
的刺激作用的增强。１４—３—３￡定位于１７号染色体，１７Ｐ１３．
３，它所编码的１４—３—３ｓ异构体是１４—３—３各种异构体中，
在心脏表达最丰富的类型。酵母双杂交法证明了ＨＥＲＧ的钾
离子通道与１４—３—３Ｅ存在着相互作用。在体外实验中，这
一
相互作用被Ｒ１８肽（１个对靶蛋白ＨＥＲＧ有高亲和力的１４
—
３—３的竞争性抑制剂）所阻断。进一步的实验表明，ＨＥＲＧ
蛋白与１４—３—３８的结合部位位于２１５—３７５位氨基酸残基，
包括ＰＫＡ的磷酸化位点２８０ＲＲＡ（Ｐ）ＳＳＤ２８５。ＨＥＲＧ有４个
磷酸化位点：￥２８３、￥８９０、Ｔ８９５ＪＩ及Ｓ１１３７。实验证明，￥２８３与
Ｓ１１３７介导了与１４—３—３￡的结合。在１个ＨＥＲＧ通道四聚
体中有８个潜在的１４—３—３￡结合位点。ＨＥＲＧ与１４—３—
３ｓ之间的相互作用的发挥需要１４—３—３８二聚化并直接与
ＨＥＲＧ的相应位点结合。１４—３—３￡与ＨＥＲＧ的相互作用使
得在电压依赖性激活中往超极化方向增加了１１ｍＶ的振幅，
在原来的（２Ｏ～ｌＯＯｍＶ的电变化范围的基础上增加了１５％到
４５％，提高了ＨＥＲＧ／ＩＫｒ的活性。而ＩＫｒ又是对心脏动作电位
系，为心脏在对应激作出恰当的电生理反应提供了一个调节
机制。
总之，１４—３—３￡与ＨＥＲＧ之间的相互作用增强了肾上
腺素对ＨＥＲＧ Ｋ 通道活性的刺激作用为对膜的兴奋性及心
脏节律性的控制的可塑性提供了一个独特的机制 Ｊ。
六、１４—３—３与肿瘤
１４—３—３与肿瘤密切相关，这是因为它不仅与端粒和端
粒酶的活性相关，而且在Ｇ：细胞周期关卡中发挥了重要的作
用，从而确保了基因的完整性、ＤＮＡ损伤的及时修复及细胞的
存活。
１．１４—３—３与端粒及端粒酶活性的关系：有报道指出，１４
—
３—３￣ｒ的下调与端粒酶的持续性活性及Ｐ１６１ＮＫ４ａ肿瘤抑
制基因的大量下调相伴随。还有实验显示，两个１４—３—３ｔｒ
基因都失活时，细胞出现端粒重复序列丢失，提高了染色体端
端相连及末端非相互移位的频率。这些现象与端粒的Ｇ带悬
突的数量减少以及核基质与端粒的关系的改变有关。
２．１４—３—３￣ｒ与Ｇ 细胞周期关卡的关系：１４—３—３￣ｒ在
功能水平上与Ｐ５３引导的Ｇ，细胞周期关卡有关，１４—３—３￣ｒ
引发及维持了ＤＮＡ损伤后的Ｇ 期停顿，使得在从Ｇ 期进入
Ｍ期之前，ＤＮＡ得到修复。Ｃｄｃ２５Ｃ磷酸酶的去磷酸化作用可
以激活ｃｙｃｌｉｎＢ１／Ｃｄｃ２复合物，而１４—３—３ 通过结合于
Ｃｄｃ２５ｃ的２１６位的Ｓｅｒ残基来使得Ｃｄｃ２５ｃ磷酸酶失活。１４—
３—３ 还将Ｃｄｃ２限定于胞质，防止它在Ｇ：后期移位至核。
在未经处理的循环周期的细胞，偶发的染色体断裂或者端粒
之间的融合会被Ｇ 细胞周期关卡捕获，细胞周期发生停顿，
接着这些突变了的染色体结构在进入Ｍ期之前进行修复。
但如果这些细胞的１４—３—３￣ｒ在维持Ｇ 细胞周期关卡方面
有缺陷，这些细胞在进入Ｍ期时突变的染色体结构就会没有
得到恢复，进而在有丝分裂时导致细胞凋亡 。
七、１４—３—３与其他疾病的关系
１４—３—３可作为从神经脱髓鞘疾病病人中挑选出很可能
发展为更严重的复杂性硬化者的标志物。编码１４—３—３家
族的基因中ＹＷＨＡＺ基因的ＳＮＰｒｓ９８３５８３Ｇ／Ａ与狂妄型精神分
裂症有重要的联系，ＹＷＨＡＺ基因是一个潜在的狂妄型精神分
裂症的易感性基因。总之，１４—３—３是癌症与多种人类疾病
的研究的焦点之一。１４—３—３蛋白可能会在诊断与治疗人类
疾病中发挥越来越大的作用。
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（收稿：２００８—０９—１２）
梗阻性黄疸并发急性肾衰竭机制的研究概况
张喜平 沈延飞 黄鑫梅
梗阻性黄疸（ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｊａｕｎｄｉｃｅ，ＯＪ）是一种主要由胆道
结石、胆管狭窄、胆管癌、壶腹周围癌等引起的临床征象。除
能引起肝脏的明显损害外，对其他脏器及组织均有不同程度
的损害，且影响治疗的效果。急性肾衰竭（ａｃｕｔｅ ｒｅｎａｌ ｆａｉｌｕｒｅ，
ＡＲＦ）是梗阻性黄疸患者常见的死亡原因之一。据文献报道，
内毒素水平的升高与０Ｊ时机体的免疫功能受抑有关。彭兵
等 研究发现无论术前还是术后，ＯＪ患者血液中的白细胞介
素一６（ＩＬ一６）、白细胞介素一８（ＩＬ一８）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ
一
）等炎症介质均明显高于对照组（Ｐ＜０．０５），对机体免疫
功能的下降有着直接影响，而且炎症介质的释放，还可引起肾
在接受手术的０Ｊ患者中ＡＲＦ发生率约有８％～９％，病死率
更高达６８％ ，本文对０Ｊ时ＡＲＦ的发生机制做一综述。
一
血液动力学改变，加重肾脏低灌注 ，从而对肾脏造成一定程
度损害。
、
内毒素血症
内毒素血症还可直接激活凝血因子Ⅺ和Ⅻ启动内源性凝
血系统，诱导前列腺素与血栓素等的产生 ，从而引起肾小球
和肾小管周围纤维蛋白沉积，它还可以通过肾交感神经兴奋
性来激活肾素一血管紧张素系统，提高血管对儿茶酚胺的敏
感性，引起血管收缩…，从而加重。肾脏缺血、缺氧，直接导致肾
内毒素是肠内的革兰阴性菌细胞壁上的一种脂多糖，正
常情况下，来自胆汁的胆酸、胆盐和分泌型免疫球蛋白Ａ（ｓｌ—
ｇＡ），均能抑制肠内菌群过度繁殖和内毒素产生，维持黏膜屏
障的完整，阻止内毒素的吸收。０Ｊ时肠一肝循环中断，缺乏
胆盐及ｓｌｇＡ，肠腔内革兰阴性菌过度增生，菌群失调，微生态
紊乱，内毒素产生增多，加上肠黏膜屏障功能受损，内毒素从
肠道吸收增多，同时又由于胆汁反流人血，高浓度胆红素的毒
功能损害。综上所述，０Ｊ时内毒素血症的发生可通过直接和
间接的途径来影响肾脏的功能，对ＡＲＦ的产生有着较大的影
响。还有研究表明 术前应用胆酸钠或抗内毒素制剂等进行
性作用，肝库普弗细胞功能受到抑制，不能有效阻止门静脉血
中内毒素溢入外周，从而形成肠源性内毒素血症（ｅｎｄｏｔｏｘ—
抗内毒素治疗可有效降低术后血中内毒素水平，有效地改善
肾功能。因此，保护肠道黏膜，调整肠道菌群的紊乱，减少肠
ｅｍｉａ，ＥＴＭ） 。肝脏是降解内毒素、杀灭细菌的主要场所，而
内毒素血症的形成，又加重了肝细胞损伤。有研究表明 ，内
毒素是引起０Ｊ免疫功能受抑的主要原因之一，０Ｊ患者血液
基金项目：浙江省中医药卫生科技计划项目（２００４Ｃ１４２）；杭问市
科技计划项目（２００５２２４）
道内毒素的吸收，提高肝脏Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞及机体免疫功能以增
强内毒素的清除作用，对抑制并发症的发生有着积极的作
用 。
二、免疫功能下降
０Ｊ时存在全身免疫功能下降，尤其是细胞免疫机能降低
的问题。有研究证实内毒素是引起０Ｊ时免疫功能受抑的主
要原因之一 ，主要涉及的细胞因子有ＴＮＦ一 、ＩＬ一１、ＩＬ一
２、ＩＬ一６、ＩＬ一８等。其中ＩＬ一１、ＩＬ一６、ＩＬ一８主要来源于单核
作者单位：３１０００６杭州市第一人民医院普外科（张喜平）；浙江
中医药大学（沈延飞、黄鑫梅）
通讯作者：张喜平，电子信箱：ｚｘｐ９９６８８＠ｙａｈｏｏ．ｔｏｍ
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