2024年5月22日发(作者：姒寄灵)
遗传ＨＥＲＥＤｆＴＡＳ （Ｂｅｉｊｉｎｐ） ８ （５）； ４２－４４ １９８６
鱼类染色体的白细胞一ＰＨＡ活体内
处理制片及其组型观察‘’
高建民
（福建师范大学生物系，福州）
目前，鱼类染色体标本制备的方法主要是
由Ｙａｍａｍｏｔ。等建立的肾细胞－ＰＨＡ体外短期
培养法和Ｏｊｉｍ：等提出的外周血淋巴细胞离体
培养法［［１，７，８１，以及活体注射ＰＨＡ直接用肾组
织的细胞制片等Ｌ３，４１。用短期细胞培养研究鱼类
染色体有较突出的优点，它能保持染色体的自
然状态，染色体的形态特征较易于显示出来，中
期分裂相多，染色体分散均匀、清晰。但细胞培
养法需要有特定的条件，在设备差或野外工作
条件下不易做到，而且程序繁琐、费时较长（一
般需要３至１０夭）Ｌ１］，在应用上受到一定的限
制。直接用常规空气干燥法制片，获得的中期分
裂相少，制片效果亦不理想Ｌ４１。我们参照Ｂａｋｅｒ
在蛇类的工作【ｓ１并稍加改良，采用ＰＨＡ活体内
注射取外周血，不需进行细胞体外培养和无菌
操作制备鱼类染色体标本。由于使用这种方法
可避免杀死动物，因此也可以连续检查同一个
体的染色体组型。我们所获得的初步结果，为研
究某些需要保持其继续存活的对象，如稀有的
杂交后代和通过细胞工程获得的少量实验对象
的染色体提供了一个新途径。同时，直接用从
活体繁殖的细胞制片，可以排除体外培养时可
能出现的有害效应，在环境监测中可望作为一
种监测手段用于水质污染与鱼类染色体损伤相
互关系的研究。
材料和方法
实验动物为大黑罗非鱼（安氏罗非鱼Ｔｉｌａ－
砂ａ ａｎｄｅｒｓｏｎｉｉ） ２ｅ， ４？，采自福州市郊区水
产局水技站，体重１００一４００克。
４２
具体操作步骤如下：
１．前处理将采来的活动物按１－２毫
克八００克体重的剂量进行腹腔注射植物血凝素
（ＰＨＡ）（上海生物化学研究所生产），２４小时
后重复注射１次。再经２４小时后取材。取材
前４－６小时按５微克／每克体重的剂量腹腔注
射秋水仙素溶液。
２．取材及低渗处理动物体表经局部碘
酒与７０务酒精消毒之后，用０．２％肝素（１３０单
位／每毫克）湿润的消毒过的注射器，自尾静脉
采血约０．２－１毫升。在采血量较大（１毫升以
上）时，可以先分离白细胞，即将肝素抗凝血
在４℃冰箱中静置１－２小时，或离心（３ ００－
５００ｒｐｍ ３－１０分钟），取上中层液。在全血或分
离得的上中层液（含白细胞）加人０．４外ｋｃ１３－４
毫升，低渗２０－３０分钟。
３．制片按常规方法固定，空气干燥法
制片，Ｇｉｅｒｎｓａ染色。
４．组型分析染色体组型分析按丹佛会
议（１９６０）常规，染色体形态区分及命名，参照
Ｌｅｖａｎ等（１９６４）的标准。
结果与讨论
从白细胞－ＰＨＡ活体内处理制片所获得的
中期分裂相，随机统计了２０个视野，得出细胞
Ｇａｏ Ｊａａｎｍｉｎ： Ａ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎ ｖｉｖｏ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ
ｆｏｒ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｉｎ Ｆｉｓｈ （Ｔ：ｌａｐｉａ ａｎｄｅ－
ｒｓｏｎｉｓ） ａｎｄ Ｉｔｓ Ｋａｒｙｏｔｙｐｅ
１）本实验得到丁汉波教授和张健老师的热忱指导，特此
致谢。
本文于１９８５年３月１３日收到。
有丝分裂指数为２．０１１ ０．９６ Ｊ ｏ
根据１００个可靠的中期分裂相的染色体计
数，确定大黑罗非鱼的二倍体染色体数目为
４４（２。二４４），可配成２２对。在一般观察的基
础上，选取其中１０个分散好的中期分裂相照相
放大，测量和计算相对长度（该号染色体长度占
单倍体总长度的百分值），臂比指数（长臂／短
臂）和着丝粒指数（短臂／该染色体长度），结果
见表ｔｏ
表１大黑罗非鱼的染色体形态测Ａ
编号相对长度臂比指数
着丝粒指数
着丝粒
位置
１
１４．０５＋０．６５
８．０４＋０。１５１１．０９＋１．８３
ｔ
２
６．５２＋０．３８
２．４０＋０．４５２９．洲＋３．２９
Ｓｆｎ
３
４．８５＋０．２２
６．９４十０．１１
１乙．弓９＋２．巧
ｓｔ
４
４．８２十０．３２２．５５＋０．０６２８．！７十１．２３
Ｓｉｌｌ
５４．７９十０．２６３． １５－１－０． １３２４．１１十！．６０
Ｓｔ
６
４．７５－１－０．２８
２。１１＋０．口９３２． １４＋ １．７Ｉ
Ｓｔｎ
７４．６８＋０．２２２．０４＋０．０９３２．８弓＋Ｉ。６９
５Ｍ
８
４．６４士０．３２
５．８３＋０．２８
１４．６４十２．９４
Ｓｔ
９
４．２８士０．科
３．５０十０．０６
２２。２２十］。斗斗
Ｓｔ
１Ｏ３．９７１－０．２０５．５０十（）。２５
巧．３８十３．１６
Ｓｔ
ＩＩ
３．９０１－０．１７６． １９十０．１２
１３．９１士１．亏１
Ｓｔ
１２
３．８９士０．１９
２． １２＋０．０７３２．２９＋１．卜；
５ｎ，
Ｉ３
３．８７１－０．１４
５．７１＋０。１３
１４．９１－｛－３．３７
Ｓｔ
１４
ｉ．８６＋０．２１７．３苏＋０．２弓Ｉ１．９７＋２．８了
ｔ
１５
３．８斗士０．１８
４．３８十０．１１１８．弓Ｙ十２．２了
Ｓｔ
里６
３．５６士０．１６
５．１８十０．玛１６． １９十２．７８
ｓＰ
Ｉ７３．５３十０．２２４．７８十０．１１
ｌ丁．３１＋２．３０
Ｓｔ
１８
３．５２＋０．１９３．８０＋０．（），２０．８５＋ １ ．８５
Ｓｔ
Ｉ９
３．４８＋０． １５
７．５５＋０．３１
Ｉ１。７０＋３．６８
ｔ
２０
３．１９土０．１４
８．斗０＋０．２８１０．６４十２．９４
ｔ
２１
３．０５＋０．邝５．４３十０．份１５．５６十２．３４
Ｓｔ
２２
２．９９士０．２１
４．５０十０．１５
１８．１３土１．８３
Ｓｔ
图版Ｉ为大黑罗非鱼染色体组型图，按染
色体的长度由大到小的次序排列。第１对染色
体是具端着丝粒的最大染色体，其长度显著地
大于其他染色体，容易识别。第２对为仅次于
第１对的大型染色体，其臂比指数，在有些细胞
近似近端着丝粒染色体，但从多数细胞平均值
看，仍为近中着丝粒染色体。其余２０对的大小
相差无几，其中第４， ６， ７， １２对为近中着丝粒
染色体，第１４， １９， ２０为端着丝粒染色体，余下
均为近端着丝拉染色体。因此大黑罗非鱼染色
休组型公式似可定为１０ｓｍ ＋ ２６ｓｔ ＋ ８ｔ， ＮＦ＝
５斗。比较两性个体间染色体组形态上的特征，
没有观察到相对应的染色体对有形态上的差
别。此外，在所观察的细胞中，也未发现有次溢
痕及随体等标志性特征。
大黑罗非鱼是安氏罗非鱼（Ｔ． ａｎｄｅｒｓｏｎｉｉ）
的通称，属于妒形目（Ｐｅｒｃｉｆｏｒｍｅｓ）鲡鱼科（Ｃｉ－
ｃｈｌｉｄａｅ）罗非鱼属（Ｔｉｌａｐｉａ）。该属大约有１００
多种，是原产于非洲的具优良养殖性状的热带
鱼，我国已引种的有１０多种。为了提高罗非鱼
的产量，近年来国内外都作了大量的研究。因
此进行罗非鱼细胞遗传学的研究也有重要意
义。Ｋｏｒ ｎｆｉｃｌｄ根据对鲡鱼科４个属的６种鱼核
型的研究ｔ“，认为它们核型模式的一般特征是：
除第１对为特大的染色体外，还有１５－１７对近
端着丝粒染色体和弓一，对近中着丝粒染色体。
国内陈敏容等也作过莫桑比克罗非鱼（Ｔ． ｍ ｏ－
ｓｓａｍｂｉｃａ ）、尼罗罗非鱼（Ｔ． ｎｉｌｏｔｉｃａ）及加俐俐罗
非鱼（Ｔ． ｇａｌｉｌａｅｕｓ）染色体组型的比较研究Ｌ２Ｊ。他
们认为以上３种罗非鱼染色体组型均有ｌ对特
大的染色体，４对近中着丝粒染色体和１７对近
端着丝粒染色体。我们所研究的大黑罗非鱼的
形态性状和这三种罗非鱼都有着明显的区别，
但它们的染色体组型特征都基本符合Ｋｏｒｎｆｉｅｌｄ
的一般模式。看来，仅用常规的染色体染色的
方法，难以区分罗非鱼属的各个种。目前我国
鱼类染色体组型的研究，已由个别种类的零星
报道深人到科内或科间种类的比较研究。Ｌ＇－＂７
内外对鲤科鱼类的研究〔，１认为，该科｛，类的染
色体基本二倍数为２ｎ ＝ ４８－－－５０，且以中着丝
粒与亚中着丝粒占多数。妒形目是鱼类中最大
的一个目，国内尚只有少数几种的报道。从已
有的资料看来，鲜形日鱼类与鲤科有显著的差
异，是以端着丝粒染色体占多数。一般认为，随
着鱼类的进化，其染色体二倍数越收敛，端若丝
粒染色体增多，染色体臂数减少。因此，妒形目
鱼类在鱼类系统发生中是处于高位类群。
众所周知，鱼类细胞的染色体比哺乳类的
要小，染色体数目亦多，进行组型和带型分析有－
一定难度。近些年来，随着鱼类细胞的培养及其
斗３
2024年5月22日发(作者：姒寄灵)
遗传ＨＥＲＥＤｆＴＡＳ （Ｂｅｉｊｉｎｐ） ８ （５）； ４２－４４ １９８６
鱼类染色体的白细胞一ＰＨＡ活体内
处理制片及其组型观察‘’
高建民
（福建师范大学生物系，福州）
目前，鱼类染色体标本制备的方法主要是
由Ｙａｍａｍｏｔ。等建立的肾细胞－ＰＨＡ体外短期
培养法和Ｏｊｉｍ：等提出的外周血淋巴细胞离体
培养法［［１，７，８１，以及活体注射ＰＨＡ直接用肾组
织的细胞制片等Ｌ３，４１。用短期细胞培养研究鱼类
染色体有较突出的优点，它能保持染色体的自
然状态，染色体的形态特征较易于显示出来，中
期分裂相多，染色体分散均匀、清晰。但细胞培
养法需要有特定的条件，在设备差或野外工作
条件下不易做到，而且程序繁琐、费时较长（一
般需要３至１０夭）Ｌ１］，在应用上受到一定的限
制。直接用常规空气干燥法制片，获得的中期分
裂相少，制片效果亦不理想Ｌ４１。我们参照Ｂａｋｅｒ
在蛇类的工作【ｓ１并稍加改良，采用ＰＨＡ活体内
注射取外周血，不需进行细胞体外培养和无菌
操作制备鱼类染色体标本。由于使用这种方法
可避免杀死动物，因此也可以连续检查同一个
体的染色体组型。我们所获得的初步结果，为研
究某些需要保持其继续存活的对象，如稀有的
杂交后代和通过细胞工程获得的少量实验对象
的染色体提供了一个新途径。同时，直接用从
活体繁殖的细胞制片，可以排除体外培养时可
能出现的有害效应，在环境监测中可望作为一
种监测手段用于水质污染与鱼类染色体损伤相
互关系的研究。
材料和方法
实验动物为大黑罗非鱼（安氏罗非鱼Ｔｉｌａ－
砂ａ ａｎｄｅｒｓｏｎｉｉ） ２ｅ， ４？，采自福州市郊区水
产局水技站，体重１００一４００克。
４２
具体操作步骤如下：
１．前处理将采来的活动物按１－２毫
克八００克体重的剂量进行腹腔注射植物血凝素
（ＰＨＡ）（上海生物化学研究所生产），２４小时
后重复注射１次。再经２４小时后取材。取材
前４－６小时按５微克／每克体重的剂量腹腔注
射秋水仙素溶液。
２．取材及低渗处理动物体表经局部碘
酒与７０务酒精消毒之后，用０．２％肝素（１３０单
位／每毫克）湿润的消毒过的注射器，自尾静脉
采血约０．２－１毫升。在采血量较大（１毫升以
上）时，可以先分离白细胞，即将肝素抗凝血
在４℃冰箱中静置１－２小时，或离心（３ ００－
５００ｒｐｍ ３－１０分钟），取上中层液。在全血或分
离得的上中层液（含白细胞）加人０．４外ｋｃ１３－４
毫升，低渗２０－３０分钟。
３．制片按常规方法固定，空气干燥法
制片，Ｇｉｅｒｎｓａ染色。
４．组型分析染色体组型分析按丹佛会
议（１９６０）常规，染色体形态区分及命名，参照
Ｌｅｖａｎ等（１９６４）的标准。
结果与讨论
从白细胞－ＰＨＡ活体内处理制片所获得的
中期分裂相，随机统计了２０个视野，得出细胞
Ｇａｏ Ｊａａｎｍｉｎ： Ａ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎ ｖｉｖｏ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ
ｆｏｒ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｉｎ Ｆｉｓｈ （Ｔ：ｌａｐｉａ ａｎｄｅ－
ｒｓｏｎｉｓ） ａｎｄ Ｉｔｓ Ｋａｒｙｏｔｙｐｅ
１）本实验得到丁汉波教授和张健老师的热忱指导，特此
致谢。
本文于１９８５年３月１３日收到。
有丝分裂指数为２．０１１ ０．９６ Ｊ ｏ
根据１００个可靠的中期分裂相的染色体计
数，确定大黑罗非鱼的二倍体染色体数目为
４４（２。二４４），可配成２２对。在一般观察的基
础上，选取其中１０个分散好的中期分裂相照相
放大，测量和计算相对长度（该号染色体长度占
单倍体总长度的百分值），臂比指数（长臂／短
臂）和着丝粒指数（短臂／该染色体长度），结果
见表ｔｏ
表１大黑罗非鱼的染色体形态测Ａ
编号相对长度臂比指数
着丝粒指数
着丝粒
位置
１
１４．０５＋０．６５
８．０４＋０。１５１１．０９＋１．８３
ｔ
２
６．５２＋０．３８
２．４０＋０．４５２９．洲＋３．２９
Ｓｆｎ
３
４．８５＋０．２２
６．９４十０．１１
１乙．弓９＋２．巧
ｓｔ
４
４．８２十０．３２２．５５＋０．０６２８．！７十１．２３
Ｓｉｌｌ
５４．７９十０．２６３． １５－１－０． １３２４．１１十！．６０
Ｓｔ
６
４．７５－１－０．２８
２。１１＋０．口９３２． １４＋ １．７Ｉ
Ｓｔｎ
７４．６８＋０．２２２．０４＋０．０９３２．８弓＋Ｉ。６９
５Ｍ
８
４．６４士０．３２
５．８３＋０．２８
１４．６４十２．９４
Ｓｔ
９
４．２８士０．科
３．５０十０．０６
２２。２２十］。斗斗
Ｓｔ
１Ｏ３．９７１－０．２０５．５０十（）。２５
巧．３８十３．１６
Ｓｔ
ＩＩ
３．９０１－０．１７６． １９十０．１２
１３．９１士１．亏１
Ｓｔ
１２
３．８９士０．１９
２． １２＋０．０７３２．２９＋１．卜；
５ｎ，
Ｉ３
３．８７１－０．１４
５．７１＋０。１３
１４．９１－｛－３．３７
Ｓｔ
１４
ｉ．８６＋０．２１７．３苏＋０．２弓Ｉ１．９７＋２．８了
ｔ
１５
３．８斗士０．１８
４．３８十０．１１１８．弓Ｙ十２．２了
Ｓｔ
里６
３．５６士０．１６
５．１８十０．玛１６． １９十２．７８
ｓＰ
Ｉ７３．５３十０．２２４．７８十０．１１
ｌ丁．３１＋２．３０
Ｓｔ
１８
３．５２＋０．１９３．８０＋０．（），２０．８５＋ １ ．８５
Ｓｔ
Ｉ９
３．４８＋０． １５
７．５５＋０．３１
Ｉ１。７０＋３．６８
ｔ
２０
３．１９土０．１４
８．斗０＋０．２８１０．６４十２．９４
ｔ
２１
３．０５＋０．邝５．４３十０．份１５．５６十２．３４
Ｓｔ
２２
２．９９士０．２１
４．５０十０．１５
１８．１３土１．８３
Ｓｔ
图版Ｉ为大黑罗非鱼染色体组型图，按染
色体的长度由大到小的次序排列。第１对染色
体是具端着丝粒的最大染色体，其长度显著地
大于其他染色体，容易识别。第２对为仅次于
第１对的大型染色体，其臂比指数，在有些细胞
近似近端着丝粒染色体，但从多数细胞平均值
看，仍为近中着丝粒染色体。其余２０对的大小
相差无几，其中第４， ６， ７， １２对为近中着丝粒
染色体，第１４， １９， ２０为端着丝粒染色体，余下
均为近端着丝拉染色体。因此大黑罗非鱼染色
休组型公式似可定为１０ｓｍ ＋ ２６ｓｔ ＋ ８ｔ， ＮＦ＝
５斗。比较两性个体间染色体组形态上的特征，
没有观察到相对应的染色体对有形态上的差
别。此外，在所观察的细胞中，也未发现有次溢
痕及随体等标志性特征。
大黑罗非鱼是安氏罗非鱼（Ｔ． ａｎｄｅｒｓｏｎｉｉ）
的通称，属于妒形目（Ｐｅｒｃｉｆｏｒｍｅｓ）鲡鱼科（Ｃｉ－
ｃｈｌｉｄａｅ）罗非鱼属（Ｔｉｌａｐｉａ）。该属大约有１００
多种，是原产于非洲的具优良养殖性状的热带
鱼，我国已引种的有１０多种。为了提高罗非鱼
的产量，近年来国内外都作了大量的研究。因
此进行罗非鱼细胞遗传学的研究也有重要意
义。Ｋｏｒ ｎｆｉｃｌｄ根据对鲡鱼科４个属的６种鱼核
型的研究ｔ“，认为它们核型模式的一般特征是：
除第１对为特大的染色体外，还有１５－１７对近
端着丝粒染色体和弓一，对近中着丝粒染色体。
国内陈敏容等也作过莫桑比克罗非鱼（Ｔ． ｍ ｏ－
ｓｓａｍｂｉｃａ ）、尼罗罗非鱼（Ｔ． ｎｉｌｏｔｉｃａ）及加俐俐罗
非鱼（Ｔ． ｇａｌｉｌａｅｕｓ）染色体组型的比较研究Ｌ２Ｊ。他
们认为以上３种罗非鱼染色体组型均有ｌ对特
大的染色体，４对近中着丝粒染色体和１７对近
端着丝粒染色体。我们所研究的大黑罗非鱼的
形态性状和这三种罗非鱼都有着明显的区别，
但它们的染色体组型特征都基本符合Ｋｏｒｎｆｉｅｌｄ
的一般模式。看来，仅用常规的染色体染色的
方法，难以区分罗非鱼属的各个种。目前我国
鱼类染色体组型的研究，已由个别种类的零星
报道深人到科内或科间种类的比较研究。Ｌ＇－＂７
内外对鲤科鱼类的研究〔，１认为，该科｛，类的染
色体基本二倍数为２ｎ ＝ ４８－－－５０，且以中着丝
粒与亚中着丝粒占多数。妒形目是鱼类中最大
的一个目，国内尚只有少数几种的报道。从已
有的资料看来，鲜形日鱼类与鲤科有显著的差
异，是以端着丝粒染色体占多数。一般认为，随
着鱼类的进化，其染色体二倍数越收敛，端若丝
粒染色体增多，染色体臂数减少。因此，妒形目
鱼类在鱼类系统发生中是处于高位类群。
众所周知，鱼类细胞的染色体比哺乳类的
要小，染色体数目亦多，进行组型和带型分析有－
一定难度。近些年来，随着鱼类细胞的培养及其
斗３