2024年2月20日发(作者：牟靓影)

扌直逖碌妇

2021,

47(3):54

-

60Platt

Protection粉红螺旋聚抱霉高效生防菌株的筛选与评价吴海霞12,袁梦蕾2,江

娜2,马桂珍"，孙漫红2",李世东2(1.江苏海洋大学海洋学院，连云港222005；

2.中国农业科学院植物保护研究所，北京100193)摘要粉红螺旋聚抱霉Clonostachys

rosea是一种重要的植物病原生防真菌。本研究测定了不同地理来源的42株

粉红螺旋聚抱霉菌株对核盘菌Sclerotinia

sclerotiorum菌核的寄生能力，以及菌株几丁质酶和-,3-葡聚糖酶的活

性，同时测定了不同菌株对番茄灰霉病菌Botryi

cinerea的拮抗作用以及对番茄果实灰霉病的防治效果。结果表

明，不同来源的粉红螺旋聚抱霉菌株对核盘菌菌核均有一定的寄生能力,45.2%的菌株寄生能力达到4级#1,3-葡

聚糖酶和几丁质酶活性与其寄生能力呈极显著正相关。研究发现，粉红螺旋聚抱霉菌株对番茄灰霉病菌有一定的

拮抗作用，抑制率最高可达78.

4%；HN-56、STG211、GS61等菌株对离体番茄果实灰霉病的防效达到75%以上，显

示出良好的生防潜力。本研究为丰富植物真菌病害生防资源和高效粉红螺旋聚抱霉生防制剂的研发奠定了基础。

关键词粉红螺旋聚抱霉；菌寄生；细胞壁降解酶；核盘菌；番茄灰霉病

中图分类号：S

432.

44

文献标识码：A

DOI：

10.16688/j.

zwbh

2020120Screening

and

evaluation

of

highly

efficient

biocontrol

strains

of

Clonostachys

roseaWU

Haixia1，,

YUAN

Menglei2,

JIANG

Na2,

MAGuizhen1*

,

SUN

Manhong2*

,

LI

Shidong2(1.

School

of Marine

Science

and

Technology,

Jiangsu

Ocean

University,

Lianyungang

222005,

China

；2.

Institute

of

Plant

Protection,

Chinese

Academy

of

Agricultural

Sciencss,

Beijing

100193,

China)Abstract

Clonostachys

rosea

is an

important

biocontrol fungus

of

plant

diseases.

In

this

study,

42

C.

rosea

strainsderived

from

different

areas

were

chosen and

their

mycoparasitic

ability

against

Sclerotinia

sclerotiorum

sclerotia,

enzyme

activities

of

chitinase

and

!-1,3-glucanase

and

control

effects

on

tomato

gray

mold

caused

by

Botrytis

cinerea

were

investigated.

The

results

indicated

that

all

the

isolates

tested

could

parasitize

the

sclerotia,

in

which

45.2%

reached

the

highest

level

of

grade

four.

The

enzyme

activities

of

chitinase

and

!-1,

3-glucanase

had

significant

positive

correlations

with

fungal

mycoparasitic

ability.

The

maximum

of

inhibition

rates

of

C.

rosea

awas78.4%$andthecontrolefficaciesofstrainHN-56$STG-21-1andGS6-1againstgraymold

oftomatofruitsinvitroachievedmorethan75%.Thisstudyprovidesnewresourcesofbiocontrolagentsagainst

plantfungaldds

Clonostachysrosea；

mycoparasitism；

celwaldegradingenzyme；

BotrytiscinereaSclerotiniasclerotiorum；我国是一个农业生产大国,长期以来植物病害,

尤其是真菌病害严重制约了农作物的安全和可持续

叶和茎等部位，严重时番茄减产60%以上,在储运

过程中也会造成果实大量腐烂,带来巨大损失78)。

牛产(-刃”如核盘菌Sclerotinia

sclerotiorum

引起

的菌核病$其产生的菌核可在土壤中存活多年$条件

对植物真菌病害的防治,可采取栽种抗病品种、农业

防治、化学防治和生物防治等多种手段囱，但在实际

适宜时萌发侵染植物,造成农作物产量和品质的下

降36)；由灰葡萄抱Botrytis

cinerea引起的灰霉病

生产中仍以化学防治为主。长期大量使用化学农药

带来的环境污染、农药残留、食品安全等问题日益严

是番茄生产中的毁灭性病害之一，可侵染果实、花、重，利用生防微生物及其代谢产物抑制病害的发生

亠

业科学院重大科研选题(CAAS-ZDXT2018005)*

通信作者

E-mail:马桂珍

******************；孙漫红

**********************收稿日期：2020-03-11

修订日期：2020-03-

23基金项目：国家重点研发计划(2017YFD0201102);青海省科技计划(2019-NK-116);内蒙古自治区科技重大专项(zdzx2018009)；中国农

47

卷第3

期吴海霞等:粉红螺旋聚抱霉高效生防菌株的筛选与评价•

55

•和传播越来越受到人们的关注匚0

&和0

.

3%

MgSO4

,

250

mL三角瓶装液量60

mL。

121°C灭菌25

min,待用。拮抗菌的应用是生物防治的一个重要方面。方

翔等筛选出对桑葚菌核病有明显拮抗作用的甲

DNS溶液:称取192

g酒石酸钾钠溶于预热至

70C的500

mL蒸馏水中，依次加入6.

3

g

DNS、

基营养型芽胞杆菌Badllus

methylotrophicus

,邵胜

楠等口2)从新疆高寒地区分离到1株高效卡那霉素

21

g

NaOH

和

5g

无水

Na2SO4，定容至

1

000

mL,

棕色瓶中储存。链霉菌Streptomyces

kanamyceticus可有效抑制番

茄灰霉病菌和油菜菌核病菌,牛贞福等口3)利用绿色

木霉Trichoderma

uiride防治番茄灰霉病，田间防

效达到60%以上。尽管一些生防菌已在田间得到

胶体几丁质制备:称取5

g几丁质加入200

mL

浓盐酸中，加热溶解，然后加入2

000

mL双蒸水,

4C过夜,5

000

r/min离心5

min,收集胶体物质。应用，但在实际生产中往往会受到土壤环境等多方

面的影响，导致防治效果不佳或不稳定。因此，迫切

需要开展各类高效生防新菌株的筛选评价，以提高

生防作用效果、扩大应用范围。粉红螺旋聚抱霉Clonostachys

rosea

(异名：粉

红黏帚霉

roseum)是一类重要的菌寄

生菌，对多种植物病害显示出良好的生防潜力&

已有的研究表明，粉红螺旋聚抱霉可以寄生病原真

菌,产生几丁质酶、葡聚糖酶等细胞壁降解酶，抑制

病原菌的侵染(9)，还可以通过拮抗作用、对营养物

质的竞争和诱导植物抗性等多种方式抑制病害的发

生与扩展粉红螺旋聚抱霉的研究起步较晚,

目前对这类生防资源的挖掘还十分缺乏。本研究选

取国内外不同来源的粉红螺旋聚抱霉菌株，进行了

寄生能力和细胞壁降解酶活性测定，以及对番茄灰

霉病防治效果评价，以期为病害防控提供新的生防

资源，为粉红螺旋聚抱霉生防制剂的研发奠定基础&1材料与方法1.1材料1.1.1供试菌株不同来源粉红螺旋聚抱霉菌株42

株(表1)、核

盘菌、番茄灰霉菌均由中国农业科学植物保护研究

所土传病害生防实验室保存。1.1.2供试药剂50%腐霉利可湿性粉剂(WP),日本住友化学株

式会社生产。1.1.3培养基与试剂PDA：马铃薯200

g/L,葡萄糖20

g/L,琼脂

20

g/L,水

1

L。胡萝卜培养基：胡萝卜200

g切成小块，装于

2L三角瓶中。菌核粉培养基:核盘菌菌核粉碎，过25目筛。

培养基中含1%菌核粉、0.

3%NaCl、0.

3%K2HPO4

1%胶体几丁质磷酸缓冲液:1

mL胶体几丁质

溶于含

37.

5

mL

的

0.

2

mol/L

K2

HPO4

和

62.

5

mL

0 2

mol/LNaH2PO4

溶液中。0.

2

mol/L

pH

5醋酸-醋酸钠缓冲液：0.

2

mol/L

醋酸溶液14

8

mL和0.

2

mol/L醋酸钠溶液35.

2

mL

混匀。-1,3-葡聚糖酶促反应底物:100 mg昆布多糖溶

于100

mL

0.

2

mol/L

pH

5醋酸-醋酸钠缓冲液中。1.1.4

试验番茄圣女果，产地海南,购自北京生鲜超市&1-

2方法1.

2.1菌核培养将实验室前期保存的核盘菌菌核用1%

NaClO

表面消毒30

s,无菌水冲洗4遍，超净工作台中吹

干，然后放置于PDA平板中央，每皿放1个菌核,

25C培养4d。待菌核萌发菌丝后，挑取菌丝接种到9

cm的PDA平板上,25°C培养5

d,用解剖刀切成

1

cm的菌块，全部接种到胡萝卜培养基中，每皿接

2瓶。26°C培养10〜15

d,待长出黑色颗粒状菌核

后,用自来水反复冲洗去除物料及菌丝，用75%乙

醇表面消毒,阴凉干燥处储存备用&1.2.2寄生能力测定将不同来源的粉红螺旋聚抱霉菌株接种于

PDA平板上,26°C培养7〜10

d,加入5

mL无菌水

洗脱抱子,调节菌悬液浓度至抱子含量107个/mL。

菌核消毒后,浸于不同的菌悬液中，10

min后取出，

灭菌滤纸上晾干，然后转入铺有湿润滤纸的培养皿

(9

cm)中，每皿放置20〜25粒菌核。28°C保湿培养10

d,观察菌核被寄生的情况。根据菌株生长及菌核

的腐烂程度，将粉红螺旋聚抱霉寄生能力分为5个等

级(2)。0级:菌核表面无寄生菌生长；1级:菌核表

面长有寄生菌，菌核萌发；2级:菌核表面长有寄生

菌,菌核萌发受到抑制但表皮不脱落;3级:菌核表

面长有寄生菌,菌核表皮脱落，但菌核内部无软化现

・56・2021象;4级:菌核表面长满寄生菌，整个菌核变得软腐

（图1）。每个菌株3个重复图1粉红螺旋聚孢霉寄生核盘菌菌核等级Fig.

1

Mycoparasitic

level

of

Clonostachys

rosea

strains

against Sclerotinia

sclerotinia sclerotia1.2.3粉红螺旋聚孢霉伏13-葡聚糖酶活性7

d,测量菌落直径，计算粉红螺旋聚抱霉对番茄灰

霉病菌的抑制率。抑制率=（对照组菌落直径一处

按4%接种量将不同菌株抱子悬液接种于菌核

粉培养基中$8°C'80

r/min振荡培养3

d&取发酵

理组菌落直径）/对照组菌落直径X100%&以只接

种番茄灰霉病菌的PDA平板为对照每个处理

3次重复。液4°C下离心15

min,转速10

000

r/min,收集上清

液作为粗酶液。葡萄糖标准曲线的绘制:试管中分别加入0、50、

100、200、400、600、800、1

000'

200'

400

&L

葡萄糖

。1.

2.

6对离体番茄果实灰霉病的防治效果灰霉病菌在PDA平板上，28°C培养10

d,加入无

菌水洗脱抱子,3层擦镜纸过滤，血球计数板调节菌液

抱子浓度为5X104个/mL。选取大小一致、外皮无损

标准溶液，加蒸馏水定容至2.

0

mL0加入2.

0

mL

DNS溶液$00°C水浴10

min,冷却后定容至15

mL,

分光光度计（UV-2550型，日本岛津）540

nm处测定

吸光度，绘制标准曲线。#13-葡聚糖酶活性的测定:试管中分别加入

伤的新鲜圣女果，用1%

NqCIO消毒30

s,无菌水反

复冲洗，吹干，用灭菌的1

mL

Tip头在果皮赤道处刺

1个1

mm深的小孔，然后浸于浓度为107个/mL的

不同粉红螺旋聚抱霉菌株的抱子悬浮液中，30

min

1

mL葡聚糖底物和1

mL粗酶液，40°C恒温水浴

30

min,以100°C灭活粗酶液为对照。加入2.

0

mL

DNS

溶液100°C水浴终止反应，测定吸光度&

3次重复。1.2.4粉红螺旋聚孢霉几丁质酶活性后取出，无菌滤纸吸取残留的菌液。将一直径5

mm

的无菌滤纸片贴在小孔上，然后滴加10

&L灰霉病菌

抱子悬浮液。以无菌水和50%腐霉利可湿性粉剂

N-乙酰氨基葡萄糖标准曲线的绘制:试管中分

别加入

0、50、100、150、200,250、300、350

&L

N-乙

1

000倍稀释液分别代替粉红螺旋聚抱霉菌悬液作为

空白对照和药剂对照。28C保湿培养7

d后调查番

酰氨基葡萄糖标准溶液，加水定容至0.

5

mL,再加

入0.

5

mL

DNS溶液,100°C水浴10

min,冷却后定

茄果实发病情况。每个处理4次重复。根据病斑的扩展程度对番茄灰霉病进行分

级（3）0

0级:无病斑；1级:病斑直径-1cm；

3级:

容至5

mL,540

nm测定吸光度，绘制标准曲线。几丁质酶活性的测定:试管中加入1

mL

1%胶

1

emV病斑直径—2

cm；

5级：2

cm＜病斑直径—3

cm；

7级：3

emV病斑直径—4

cm；

9级:病斑直径〉体几丁质底物和1

mL粗酶液，40°C恒温水浴

30

min,离心取上清液，以灭活粗酶液为对照。加入

0.5

mL

DNS溶液100°C终止反应，测定吸光度。

4

cm。病情指数f

100X

+

（各级发病果实数量X相

对级值）/（调查总数X最高级值）；防效f

（对照病情

3次重复。1.2.5对灰霉病菌的拮抗作用对强寄生力和细胞壁降解酶活性高的菌株进行

拮抗作用测定。PDA平板培养粉红螺旋聚抱霉和

番茄灰霉病菌，用打孔器在菌落边缘打取直径5

mm

指数一处理病情指数）/对照病情指数X100%。2结果与分析2-

粉红螺旋聚抱霉菌株对核盘菌菌核的寄生

能力的菌饼，在距PDA平板两侧1.

5

cm处分别放置粉

供试粉红螺旋聚抱霉菌株对核盘菌菌核均具有

一定的寄生作用。其中19个菌株寄生能力达到4红螺旋聚抱霉和番茄灰霉病菌菌块,28C对峙培养

47卷第3期吴海霞等:粉红螺旋聚抱霉高效生防菌株的筛选与评价・57・级$菌核被寄生后变得软腐$表面布满粉红螺旋聚抱

核表皮脱落$表面布满粉红螺旋聚抱霉菌丝。但也有

霉的菌丝;12个菌株寄生能力达到3级，可以看到菌

近30%的菌株寄生能力相对较弱，为1〜2级（表1）o表1不同来源粉红螺旋聚抱霉对核盘菌菌核的寄生能力Table

1

Mycoparasitic

ability

of

Clonostachys

rosea

strains

derived

from

different

areas

against Sclerotinia

sclerotinia

sclerotia菌株Strain菌株来源Source

of

strains寄生等级Parasitic

levll菌株StrainACCC30355菌株来源Sourceofstrains寄生等级Parasiticlevel3.

365554-1中国普通微生物菌种保藏中心黑龙江海南乐东4444444444444444444ACCC30444ACCC30482中国普通微生物菌种保藏中心中国普通微生物菌种保藏中心中国普通微生物菌种保藏中心中国普通微生物菌种保藏中心33333333332222222222167-1CBS227.

8GG-1-2GS6-1GZH-1-1HL-1-1HLD1荷兰微生物菌种保藏中心甘肃天水甘肃武威甘肃张掖湖南浏阳海南乐东山西原平吉林省白成农业科学院江西九江内蒙古呼和浩特陕西渭南陕西渭南山西吕梁山西太原山西原平云南建水ACCC37734ATCC62200BD-21-6CBS431. 87CBS100379美国ATCC生物标准品资源中心北京大兴荷兰微生物菌种保藏中心荷兰微生物菌种保藏中心山西大同山西大同中国普通微生物菌种保藏中心中国普通微生物菌种保藏中心中国普通微生物菌种保藏中心SDT-10-1SDT-5-1ACCC30147ACCC37758ACCC58676HN-56JLB7-1JXLS-1-1NHH-48-2SHW-1-1SHW-3-1SJC-5-1STY-2-3SYP-4-2ATCC48179ATCC46475美国ATCC生物标准品资源中心美国ATCC生物标准品资源中心GL-1-1NHH-42-1NHH-61-2YJS-3-2FJCT-3-2STG-21-1甘肃兰州内蒙古呼和浩特内蒙古呼和浩特山西太原广东广州中国普通微生物菌种保藏中心ACCC30190福建龙岩中国普通微生物菌种保藏中心33XSZ-1-33. 39872.

2粉红螺旋聚抱霉p-1,3-葡聚糖酶活性对较弱（图3）。葡萄糖标准曲线方程为y=0.

000

6乞一0.

029

3$0.997

3（图2）供试的粉红螺旋聚抱霉菌株仔-

13-葡聚糖酶活性范围在31.

45〜77.

3

U/mL0可

以看出，酶活性较高的菌株，如-48-2'

6-1和HN-56,寄生能力均为4级，而菌

株

NHH-42-1、ACCC37734、CBS100379

和

3.

398

7

图2葡萄糖标准曲线Fig.

2

Standard

curve

of

glucose菌株的什1$-葡聚糖酶活性较低，其寄生能力也相SOWAPOe(uiazubxzee

smu

IU4SH

eI二汝

e二出

號

omov

CA也

CAM—

HS

oi寸出

06

I寸0E0O2OOOV

wl朱stra.

m

寸Euov

ooegu

H

v

丄

寸寸寸o二

H寸出

goov

D

寸

A

寸9tooHv

E0AHS9BNHACTDD286E0ISHO9L6I8tooHvL9L98UOV«ASEVZSXW9U9SD「ms图3粉红螺旋聚孢霉菌株j-1,3-葡聚糖酶活性Fig.

3

Enzyme

activities

of

p-1,3-glucanase

in

Clonostachys

rosea

strains「mascnHorESI0EXDVqGHe-DHsZDHSHNHNV

・58・2-粉红螺旋聚抱霉几丁质酶活性扌直約碌疥4005

2021N-乙酰氨基葡萄糖的标准曲线方程为y

f

0.001

1^—0.

016

5,D=0.

991

9（图

4）,产几丁质

—QO酶活性范围为2.

69〜10.

39

U/mL,其中菌株GS6-

1、GZH--1、GG--2、SHW--1

和

STG-21-1

几丁质

酶活性较

ACCC58676,

YES-2-14

和

ACCC30190

-0.05L

50

100

N-乙酰氨基葡萄糖/yg

•

mL-1N-acetylglucosamine150400图4

N■乙酰氨基葡萄糖标准曲线Fig.

4

Standard

curve

of

N-acetylglucosamine高,相应地，其寄生能力也相对较强（图5）。12

埠鑑sosAgoe8

亠6

4

2

I4「

IIIhllllllllllllllhllzoi寸寸

丄i2-粉红螺旋聚抱霉寄生能力与细胞壁降解酶的

相关性对粉红螺旋聚抱霉寄生能力与几丁质酶、！1,3-

葡聚糖酶活性进行相关性分析，结果表明，菌寄生能

力与几丁质酶和—,3-葡聚糖酶活性呈极显著正相

关，其中寄生能力达到4级的菌株，其活性大多高于

其他级别菌株（表2"表明粉红螺旋聚抱霉在寄生核

盘菌过程中细胞壁降解酶发挥着极为重要的作用&表2粉红螺旋聚抱霉寄生能力与细胞壁降解酶活性的

相关性分析1Table2

Correlationanalyi

ofmycoparaiticabilityandthe

activitie

of

celwaldegrading

enzyme

in

Clonostachys

rosea葡聚几丁质酶活性寄生能力Activity of

#

Activityof

#13-葡聚糖

OUIAZUM弱

o

mov

雷翔^•

o-寸§m8o

v

寸Emov

Z9-—GHGGS

CQ

zca-holi寸寸寸

ZIOdD寸HS

寸

9L98SOOOV

」L86E.E

匸显

寸

寸O

GEREZRHS9UNHCTDDz.06I0movC800ee9oalv6E00ISHOL8ZZZSHOETZSXufs酶活性Activity

of

#1,3-glucanase

1,3-glucanase1.

000I.L9ITTHFig.

5

Enzyme

activities

of

chitinase

in

Clonostachys

rosea

strainsU9SD图5粉红螺旋聚抱霉菌株几丁质酶活性「ITMHSITHZDcnHlomov-dAS9,HHNOEOOOV9SJXf-HHNchitinaseMycoparasitic

ability-HHNOHV

nst

ral

2-粉红螺旋聚抱霉菌株对灰霉病菌的拮抗作用平板对峙试验结果表明，供试的粉红螺旋聚抱

霉菌株对番茄灰霉病菌都具有较为明显的拮抗作

用，但不同菌株间存在较大的差异，其中3.

365

5、

JXLS--1、HLI>1、GZH--1

和

54-1

菌株作用较强,

抑制率达70%以上，显示出良好的生防潜力（图6）

&

2-粉红螺旋聚抱霉菌株对番茄果实灰霉病的防

治效果7

d后只接种病原菌抱子悬浮液的番茄表面

布满灰霉菌菌丝，而采用粉红螺旋聚抱霉菌悬液

浸泡处理的番茄与对照相比病害明显减轻，番茄

表面病斑直径较小，60%的菌株对番茄灰霉病防

效达

50%以上，其中,HN-56、STG-21-1

和

GS6-1

等菌株的防效超过75%，与化学农药50%腐霉

0.

4190. 760**利可湿性粉剂1

000倍稀释液的防病效果相当

（图7〜图8）。几丁质酶活性

Activityof

chitinase

10000. 583**3讨论本研究发现，不同来源的供试粉红螺旋聚抱霉

菌株都能够在核盘菌菌核上寄生，其中超过70%的

寄生能力

Mycoparasitic

ability1.0001)表中数值为相关系数，**表示极显著相关(PV0.

000

1)。The

value

are

correlation

coefficients.

*

*

indicates

significant

correlation

at

0.

01

level

(PV0.

000

1).菌株寄生能力达到3级或4级，菌核被寄生后不能

47卷第3期9o8o7o6o%菩

、tuo吴海霞等:粉红螺旋聚抱霉高效生防菌株的筛选与评价・59・工1工工5o4o3o2o1o

二

:sq船

刊一10090801

70Fig.

7

Control

efficacy

of

Clonostachys

rosea

strains

against

gray

mold

of

tomato

fruits

in

vitroa:对照;b:

50%腐霉利可湿性粉剂;c:菌株GS6-l;d:菌株HN-56;

e:菌株STY-2-3;

f:菌株54-1;

g:菌株GG-1-2;

h:菌株SYP-4-2a:

CK;

b:

procymidone

50%

WP;

c:

Strain

GS6-1;

d:

Strain

HN-56;

e:

Strain

STY-2-3;

f:

Strain

54-1;

g:

Strain

GG-1-2;

h:

Strain

SYP-4-2Fig. 8

Control

efficacy

of

Clonostachys

rosea

strains

against

gray

mold

of

tomato

fruits

in

vitrojquiICAM’HS二寸I4「ms寸

qEA

9UNHG8-HHNe-E-e-AHsITMHS

2

179U9SDws「cnHFig.

6

Antagonistic

activities

of

Clonostachys

rosea

strains

against

Botrytisz-dhsStrain图6粉红螺旋聚抱霉菌株对灰霉病菌的拮抗作用Il

III

lllliillllhlE寸寸.dAS菌-HZD」xf朱

宾»煙％

ls二二0「9BNHCTDDW9「9SD图8粉红螺旋聚抱霉菌株对离体番茄果实灰霉病的防治作用-eMHSlCHH

£H

图7粉红螺旋聚抱霉菌株对离体番茄果实灰霉病的防效GDIS-dAS-HZD-HHN

•

60

*继续萌发侵染寄主植物,从而有效降低了初侵染源。

在生防菌寄生过程中，几丁质酶和#1,3-葡聚糖酶

等细胞壁降解酶发挥了重要作用。葡聚糖和几丁质

2021参考文献康振生.我国植物真菌病害的研究现状及发展策略植物

是病原真菌细胞壁的主要成分，生防菌通过产生细

胞壁降解酶破坏病原菌细胞壁结构，导致病原菌死

亡出⑹&刘惠元研究表明，绿黏帚霉Giclai

um

virens和融黏帚霉G.

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Antifungal

ac-

壁降解酶，破坏核盘菌菌核。本研究也发现，粉红螺

旋聚抱霉寄生能力与#1，3-葡聚糖酶和几丁质酶活

tivityofanendophyticstrainofPhomopsissp6onSc"erotinia

性呈正相关，寄生能力强的菌株酶活性也较高，表明

细胞壁降解酶活性的高低可以作为筛选高效菌株的

一个重要指标。拮抗作用是粉红螺旋聚抱霉的一个重要生防机

制。前期研究发现，粉红螺旋聚抱霉对小麦赤霉病

菌

Fusarium

graminicola

'黄瓜枯萎病菌

Fusarium

oxysporum

苹果腐烂病菌Valsa

mal、杨树溃疡病

菌Botryosphaeria

dothidea等多种植物病原菌表

现出强烈的抑制作用(4,2829

&我们对筛选出的高

致病性生防菌株进行对峙培养发现，这些菌株对番

茄灰霉病菌都表现出较为明显的拮抗作用，其中

5个菌株抑制率达到70%以上，显示出良好的生防

潜力。灰霉病是番茄生产中一种常见的真菌病害，也

是番茄运输贮存过程中的一个重要危害因子。通过

生防菌剂喷施、浸果等处理防治番茄果实灰霉病已

取得良好的效果。袁和奇等(0)将淡紫紫抱菌P"i

pureocillium

lilacinus接种于番茄伤口处，有效减

轻了灰霉病的发生。本研究采用粉红螺旋聚抱霉抱

子悬浮液浸果防治番茄果实灰霉病，结果表明，HN-

56,STG-21-1等菌株防效达到75%以上，与常规化

学农药腐霉利的效果相当。推测可能是生防菌通过

占据生态位点，直接作用于病原菌，抑制抱子的萌发

和菌丝的生长，同时，通过与病原菌竞争空间和营

养，使其能够更有效地抑制病原菌的增殖，降低病害

的发生和发展。本研究为防治番茄果实灰霉病及解

决采摘后番茄储存问题提供了一条有效可行的

途径。本研究通过对不同来源的粉红螺旋聚抱霉菌株

寄生能力和细胞壁降解酶活性测定，以及对番茄灰

霉病防治效果评价，获得了

-1-1和

GS6-1等高效菌株，对这些菌株将进一步进行田间

试验和作用机制的研究。sclerotiorum,

the causal

agent

of Sclerotinia disease

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47

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new

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withthetomato

etal

Synergisticinteractionbetween

Tomatochlorosisvirus

and

Tomato

spotted

xvilt

virus

results

in

breakdown

of

resistance

in

to­yelowleafcurldiseaseco-existwithparentalvirusesintomato

epidemics

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does

not

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525

-

530.(责任编辑：杨明丽)

2024年2月20日发(作者：牟靓影)

扌直逖碌妇

2021,

47(3):54

-

60Platt

Protection粉红螺旋聚抱霉高效生防菌株的筛选与评价吴海霞12,袁梦蕾2,江

娜2,马桂珍"，孙漫红2",李世东2(1.江苏海洋大学海洋学院，连云港222005；

2.中国农业科学院植物保护研究所，北京100193)摘要粉红螺旋聚抱霉Clonostachys

rosea是一种重要的植物病原生防真菌。本研究测定了不同地理来源的42株

粉红螺旋聚抱霉菌株对核盘菌Sclerotinia

sclerotiorum菌核的寄生能力，以及菌株几丁质酶和-,3-葡聚糖酶的活

性，同时测定了不同菌株对番茄灰霉病菌Botryi

cinerea的拮抗作用以及对番茄果实灰霉病的防治效果。结果表

明，不同来源的粉红螺旋聚抱霉菌株对核盘菌菌核均有一定的寄生能力,45.2%的菌株寄生能力达到4级#1,3-葡

聚糖酶和几丁质酶活性与其寄生能力呈极显著正相关。研究发现，粉红螺旋聚抱霉菌株对番茄灰霉病菌有一定的

拮抗作用，抑制率最高可达78.

4%；HN-56、STG211、GS61等菌株对离体番茄果实灰霉病的防效达到75%以上，显

示出良好的生防潜力。本研究为丰富植物真菌病害生防资源和高效粉红螺旋聚抱霉生防制剂的研发奠定了基础。

关键词粉红螺旋聚抱霉；菌寄生；细胞壁降解酶；核盘菌；番茄灰霉病

中图分类号：S

432.

44

文献标识码：A

DOI：

10.16688/j.

zwbh

2020120Screening

and

evaluation

of

highly

efficient

biocontrol

strains

of

Clonostachys

roseaWU

Haixia1，,

YUAN

Menglei2,

JIANG

Na2,

MAGuizhen1*

,

SUN

Manhong2*

,

LI

Shidong2(1.

School

of Marine

Science

and

Technology,

Jiangsu

Ocean

University,

Lianyungang

222005,

China

；2.

Institute

of

Plant

Protection,

Chinese

Academy

of

Agricultural

Sciencss,

Beijing

100193,

China)Abstract

Clonostachys

rosea

is an

important

biocontrol fungus

of

plant

diseases.

In

this

study,

42

C.

rosea

strainsderived

from

different

areas

were

chosen and

their

mycoparasitic

ability

against

Sclerotinia

sclerotiorum

sclerotia,

enzyme

activities

of

chitinase

and

!-1,3-glucanase

and

control

effects

on

tomato

gray

mold

caused

by

Botrytis

cinerea

were

investigated.

The

results

indicated

that

all

the

isolates

tested

could

parasitize

the

sclerotia,

in

which

45.2%

reached

the

highest

level

of

grade

four.

The

enzyme

activities

of

chitinase

and

!-1,

3-glucanase

had

significant

positive

correlations

with

fungal

mycoparasitic

ability.

The

maximum

of

inhibition

rates

of

C.

rosea

awas78.4%$andthecontrolefficaciesofstrainHN-56$STG-21-1andGS6-1againstgraymold

oftomatofruitsinvitroachievedmorethan75%.Thisstudyprovidesnewresourcesofbiocontrolagentsagainst

plantfungaldds

Clonostachysrosea；

mycoparasitism；

celwaldegradingenzyme；

BotrytiscinereaSclerotiniasclerotiorum；我国是一个农业生产大国,长期以来植物病害,

尤其是真菌病害严重制约了农作物的安全和可持续

叶和茎等部位，严重时番茄减产60%以上,在储运

过程中也会造成果实大量腐烂,带来巨大损失78)。

牛产(-刃”如核盘菌Sclerotinia

sclerotiorum

引起

的菌核病$其产生的菌核可在土壤中存活多年$条件

对植物真菌病害的防治,可采取栽种抗病品种、农业

防治、化学防治和生物防治等多种手段囱，但在实际

适宜时萌发侵染植物,造成农作物产量和品质的下

降36)；由灰葡萄抱Botrytis

cinerea引起的灰霉病

生产中仍以化学防治为主。长期大量使用化学农药

带来的环境污染、农药残留、食品安全等问题日益严

是番茄生产中的毁灭性病害之一，可侵染果实、花、重，利用生防微生物及其代谢产物抑制病害的发生

亠

业科学院重大科研选题(CAAS-ZDXT2018005)*

通信作者

E-mail:马桂珍

******************；孙漫红

**********************收稿日期：2020-03-11

修订日期：2020-03-

23基金项目：国家重点研发计划(2017YFD0201102);青海省科技计划(2019-NK-116);内蒙古自治区科技重大专项(zdzx2018009)；中国农

47

卷第3

期吴海霞等:粉红螺旋聚抱霉高效生防菌株的筛选与评价•

55

•和传播越来越受到人们的关注匚0

&和0

.

3%

MgSO4

,

250

mL三角瓶装液量60

mL。

121°C灭菌25

min,待用。拮抗菌的应用是生物防治的一个重要方面。方

翔等筛选出对桑葚菌核病有明显拮抗作用的甲

DNS溶液:称取192

g酒石酸钾钠溶于预热至

70C的500

mL蒸馏水中，依次加入6.

3

g

DNS、

基营养型芽胞杆菌Badllus

methylotrophicus

,邵胜

楠等口2)从新疆高寒地区分离到1株高效卡那霉素

21

g

NaOH

和

5g

无水

Na2SO4，定容至

1

000

mL,

棕色瓶中储存。链霉菌Streptomyces

kanamyceticus可有效抑制番

茄灰霉病菌和油菜菌核病菌,牛贞福等口3)利用绿色

木霉Trichoderma

uiride防治番茄灰霉病，田间防

效达到60%以上。尽管一些生防菌已在田间得到

胶体几丁质制备:称取5

g几丁质加入200

mL

浓盐酸中，加热溶解，然后加入2

000

mL双蒸水,

4C过夜,5

000

r/min离心5

min,收集胶体物质。应用，但在实际生产中往往会受到土壤环境等多方

面的影响，导致防治效果不佳或不稳定。因此，迫切

需要开展各类高效生防新菌株的筛选评价，以提高

生防作用效果、扩大应用范围。粉红螺旋聚抱霉Clonostachys

rosea

(异名：粉

红黏帚霉

roseum)是一类重要的菌寄

生菌，对多种植物病害显示出良好的生防潜力&

已有的研究表明，粉红螺旋聚抱霉可以寄生病原真

菌,产生几丁质酶、葡聚糖酶等细胞壁降解酶，抑制

病原菌的侵染(9)，还可以通过拮抗作用、对营养物

质的竞争和诱导植物抗性等多种方式抑制病害的发

生与扩展粉红螺旋聚抱霉的研究起步较晚,

目前对这类生防资源的挖掘还十分缺乏。本研究选

取国内外不同来源的粉红螺旋聚抱霉菌株，进行了

寄生能力和细胞壁降解酶活性测定，以及对番茄灰

霉病防治效果评价，以期为病害防控提供新的生防

资源，为粉红螺旋聚抱霉生防制剂的研发奠定基础&1材料与方法1.1材料1.1.1供试菌株不同来源粉红螺旋聚抱霉菌株42

株(表1)、核

盘菌、番茄灰霉菌均由中国农业科学植物保护研究

所土传病害生防实验室保存。1.1.2供试药剂50%腐霉利可湿性粉剂(WP),日本住友化学株

式会社生产。1.1.3培养基与试剂PDA：马铃薯200

g/L,葡萄糖20

g/L,琼脂

20

g/L,水

1

L。胡萝卜培养基：胡萝卜200

g切成小块，装于

2L三角瓶中。菌核粉培养基:核盘菌菌核粉碎，过25目筛。

培养基中含1%菌核粉、0.

3%NaCl、0.

3%K2HPO4

1%胶体几丁质磷酸缓冲液:1

mL胶体几丁质

溶于含

37.

5

mL

的

0.

2

mol/L

K2

HPO4

和

62.

5

mL

0 2

mol/LNaH2PO4

溶液中。0.

2

mol/L

pH

5醋酸-醋酸钠缓冲液：0.

2

mol/L

醋酸溶液14

8

mL和0.

2

mol/L醋酸钠溶液35.

2

mL

混匀。-1,3-葡聚糖酶促反应底物:100 mg昆布多糖溶

于100

mL

0.

2

mol/L

pH

5醋酸-醋酸钠缓冲液中。1.1.4

试验番茄圣女果，产地海南,购自北京生鲜超市&1-

2方法1.

2.1菌核培养将实验室前期保存的核盘菌菌核用1%

NaClO

表面消毒30

s,无菌水冲洗4遍，超净工作台中吹

干，然后放置于PDA平板中央，每皿放1个菌核,

25C培养4d。待菌核萌发菌丝后，挑取菌丝接种到9

cm的PDA平板上,25°C培养5

d,用解剖刀切成

1

cm的菌块，全部接种到胡萝卜培养基中，每皿接

2瓶。26°C培养10〜15

d,待长出黑色颗粒状菌核

后,用自来水反复冲洗去除物料及菌丝，用75%乙

醇表面消毒,阴凉干燥处储存备用&1.2.2寄生能力测定将不同来源的粉红螺旋聚抱霉菌株接种于

PDA平板上,26°C培养7〜10

d,加入5

mL无菌水

洗脱抱子,调节菌悬液浓度至抱子含量107个/mL。

菌核消毒后,浸于不同的菌悬液中，10

min后取出，

灭菌滤纸上晾干，然后转入铺有湿润滤纸的培养皿

(9

cm)中，每皿放置20〜25粒菌核。28°C保湿培养10

d,观察菌核被寄生的情况。根据菌株生长及菌核

的腐烂程度，将粉红螺旋聚抱霉寄生能力分为5个等

级(2)。0级:菌核表面无寄生菌生长；1级:菌核表

面长有寄生菌，菌核萌发；2级:菌核表面长有寄生

菌,菌核萌发受到抑制但表皮不脱落;3级:菌核表

面长有寄生菌,菌核表皮脱落，但菌核内部无软化现

・56・2021象;4级:菌核表面长满寄生菌，整个菌核变得软腐

（图1）。每个菌株3个重复图1粉红螺旋聚孢霉寄生核盘菌菌核等级Fig.

1

Mycoparasitic

level

of

Clonostachys

rosea

strains

against Sclerotinia

sclerotinia sclerotia1.2.3粉红螺旋聚孢霉伏13-葡聚糖酶活性7

d,测量菌落直径，计算粉红螺旋聚抱霉对番茄灰

霉病菌的抑制率。抑制率=（对照组菌落直径一处

按4%接种量将不同菌株抱子悬液接种于菌核

粉培养基中$8°C'80

r/min振荡培养3

d&取发酵

理组菌落直径）/对照组菌落直径X100%&以只接

种番茄灰霉病菌的PDA平板为对照每个处理

3次重复。液4°C下离心15

min,转速10

000

r/min,收集上清

液作为粗酶液。葡萄糖标准曲线的绘制:试管中分别加入0、50、

100、200、400、600、800、1

000'

200'

400

&L

葡萄糖

。1.

2.

6对离体番茄果实灰霉病的防治效果灰霉病菌在PDA平板上，28°C培养10

d,加入无

菌水洗脱抱子,3层擦镜纸过滤，血球计数板调节菌液

抱子浓度为5X104个/mL。选取大小一致、外皮无损

标准溶液，加蒸馏水定容至2.

0

mL0加入2.

0

mL

DNS溶液$00°C水浴10

min,冷却后定容至15

mL,

分光光度计（UV-2550型，日本岛津）540

nm处测定

吸光度，绘制标准曲线。#13-葡聚糖酶活性的测定:试管中分别加入

伤的新鲜圣女果，用1%

NqCIO消毒30

s,无菌水反

复冲洗，吹干，用灭菌的1

mL

Tip头在果皮赤道处刺

1个1

mm深的小孔，然后浸于浓度为107个/mL的

不同粉红螺旋聚抱霉菌株的抱子悬浮液中，30

min

1

mL葡聚糖底物和1

mL粗酶液，40°C恒温水浴

30

min,以100°C灭活粗酶液为对照。加入2.

0

mL

DNS

溶液100°C水浴终止反应，测定吸光度&

3次重复。1.2.4粉红螺旋聚孢霉几丁质酶活性后取出，无菌滤纸吸取残留的菌液。将一直径5

mm

的无菌滤纸片贴在小孔上，然后滴加10

&L灰霉病菌

抱子悬浮液。以无菌水和50%腐霉利可湿性粉剂

N-乙酰氨基葡萄糖标准曲线的绘制:试管中分

别加入

0、50、100、150、200,250、300、350

&L

N-乙

1

000倍稀释液分别代替粉红螺旋聚抱霉菌悬液作为

空白对照和药剂对照。28C保湿培养7

d后调查番

酰氨基葡萄糖标准溶液，加水定容至0.

5

mL,再加

入0.

5

mL

DNS溶液,100°C水浴10

min,冷却后定

茄果实发病情况。每个处理4次重复。根据病斑的扩展程度对番茄灰霉病进行分

级（3）0

0级:无病斑；1级:病斑直径-1cm；

3级:

容至5

mL,540

nm测定吸光度，绘制标准曲线。几丁质酶活性的测定:试管中加入1

mL

1%胶

1

emV病斑直径—2

cm；

5级：2

cm＜病斑直径—3

cm；

7级：3

emV病斑直径—4

cm；

9级:病斑直径〉体几丁质底物和1

mL粗酶液，40°C恒温水浴

30

min,离心取上清液，以灭活粗酶液为对照。加入

0.5

mL

DNS溶液100°C终止反应，测定吸光度。

4

cm。病情指数f

100X

+

（各级发病果实数量X相

对级值）/（调查总数X最高级值）；防效f

（对照病情

3次重复。1.2.5对灰霉病菌的拮抗作用对强寄生力和细胞壁降解酶活性高的菌株进行

拮抗作用测定。PDA平板培养粉红螺旋聚抱霉和

番茄灰霉病菌，用打孔器在菌落边缘打取直径5

mm

指数一处理病情指数）/对照病情指数X100%。2结果与分析2-

粉红螺旋聚抱霉菌株对核盘菌菌核的寄生

能力的菌饼，在距PDA平板两侧1.

5

cm处分别放置粉

供试粉红螺旋聚抱霉菌株对核盘菌菌核均具有

一定的寄生作用。其中19个菌株寄生能力达到4红螺旋聚抱霉和番茄灰霉病菌菌块,28C对峙培养

47卷第3期吴海霞等:粉红螺旋聚抱霉高效生防菌株的筛选与评价・57・级$菌核被寄生后变得软腐$表面布满粉红螺旋聚抱

核表皮脱落$表面布满粉红螺旋聚抱霉菌丝。但也有

霉的菌丝;12个菌株寄生能力达到3级，可以看到菌

近30%的菌株寄生能力相对较弱，为1〜2级（表1）o表1不同来源粉红螺旋聚抱霉对核盘菌菌核的寄生能力Table

1

Mycoparasitic

ability

of

Clonostachys

rosea

strains

derived

from

different

areas

against Sclerotinia

sclerotinia

sclerotia菌株Strain菌株来源Source

of

strains寄生等级Parasitic

levll菌株StrainACCC30355菌株来源Sourceofstrains寄生等级Parasiticlevel3.

365554-1中国普通微生物菌种保藏中心黑龙江海南乐东4444444444444444444ACCC30444ACCC30482中国普通微生物菌种保藏中心中国普通微生物菌种保藏中心中国普通微生物菌种保藏中心中国普通微生物菌种保藏中心33333333332222222222167-1CBS227.

8GG-1-2GS6-1GZH-1-1HL-1-1HLD1荷兰微生物菌种保藏中心甘肃天水甘肃武威甘肃张掖湖南浏阳海南乐东山西原平吉林省白成农业科学院江西九江内蒙古呼和浩特陕西渭南陕西渭南山西吕梁山西太原山西原平云南建水ACCC37734ATCC62200BD-21-6CBS431. 87CBS100379美国ATCC生物标准品资源中心北京大兴荷兰微生物菌种保藏中心荷兰微生物菌种保藏中心山西大同山西大同中国普通微生物菌种保藏中心中国普通微生物菌种保藏中心中国普通微生物菌种保藏中心SDT-10-1SDT-5-1ACCC30147ACCC37758ACCC58676HN-56JLB7-1JXLS-1-1NHH-48-2SHW-1-1SHW-3-1SJC-5-1STY-2-3SYP-4-2ATCC48179ATCC46475美国ATCC生物标准品资源中心美国ATCC生物标准品资源中心GL-1-1NHH-42-1NHH-61-2YJS-3-2FJCT-3-2STG-21-1甘肃兰州内蒙古呼和浩特内蒙古呼和浩特山西太原广东广州中国普通微生物菌种保藏中心ACCC30190福建龙岩中国普通微生物菌种保藏中心33XSZ-1-33. 39872.

2粉红螺旋聚抱霉p-1,3-葡聚糖酶活性对较弱（图3）。葡萄糖标准曲线方程为y=0.

000

6乞一0.

029

3$0.997

3（图2）供试的粉红螺旋聚抱霉菌株仔-

13-葡聚糖酶活性范围在31.

45〜77.

3

U/mL0可

以看出，酶活性较高的菌株，如-48-2'

6-1和HN-56,寄生能力均为4级，而菌

株

NHH-42-1、ACCC37734、CBS100379

和

3.

398

7

图2葡萄糖标准曲线Fig.

2

Standard

curve

of

glucose菌株的什1$-葡聚糖酶活性较低，其寄生能力也相SOWAPOe(uiazubxzee

smu

IU4SH

eI二汝

e二出

號

omov

CA也

CAM—

HS

oi寸出

06

I寸0E0O2OOOV

wl朱stra.

m

寸Euov

ooegu

H

v

丄

寸寸寸o二

H寸出

goov

D

寸

A

寸9tooHv

E0AHS9BNHACTDD286E0ISHO9L6I8tooHvL9L98UOV«ASEVZSXW9U9SD「ms图3粉红螺旋聚孢霉菌株j-1,3-葡聚糖酶活性Fig.

3

Enzyme

activities

of

p-1,3-glucanase

in

Clonostachys

rosea

strains「mascnHorESI0EXDVqGHe-DHsZDHSHNHNV

・58・2-粉红螺旋聚抱霉几丁质酶活性扌直約碌疥4005

2021N-乙酰氨基葡萄糖的标准曲线方程为y

f

0.001

1^—0.

016

5,D=0.

991

9（图

4）,产几丁质

—QO酶活性范围为2.

69〜10.

39

U/mL,其中菌株GS6-

1、GZH--1、GG--2、SHW--1

和

STG-21-1

几丁质

酶活性较

ACCC58676,

YES-2-14

和

ACCC30190

-0.05L

50

100

N-乙酰氨基葡萄糖/yg

•

mL-1N-acetylglucosamine150400图4

N■乙酰氨基葡萄糖标准曲线Fig.

4

Standard

curve

of

N-acetylglucosamine高,相应地，其寄生能力也相对较强（图5）。12

埠鑑sosAgoe8

亠6

4

2

I4「

IIIhllllllllllllllhllzoi寸寸

丄i2-粉红螺旋聚抱霉寄生能力与细胞壁降解酶的

相关性对粉红螺旋聚抱霉寄生能力与几丁质酶、！1,3-

葡聚糖酶活性进行相关性分析，结果表明，菌寄生能

力与几丁质酶和—,3-葡聚糖酶活性呈极显著正相

关，其中寄生能力达到4级的菌株，其活性大多高于

其他级别菌株（表2"表明粉红螺旋聚抱霉在寄生核

盘菌过程中细胞壁降解酶发挥着极为重要的作用&表2粉红螺旋聚抱霉寄生能力与细胞壁降解酶活性的

相关性分析1Table2

Correlationanalyi

ofmycoparaiticabilityandthe

activitie

of

celwaldegrading

enzyme

in

Clonostachys

rosea葡聚几丁质酶活性寄生能力Activity of

#

Activityof

#13-葡聚糖

OUIAZUM弱

o

mov

雷翔^•

o-寸§m8o

v

寸Emov

Z9-—GHGGS

CQ

zca-holi寸寸寸

ZIOdD寸HS

寸

9L98SOOOV

」L86E.E

匸显

寸

寸O

GEREZRHS9UNHCTDDz.06I0movC800ee9oalv6E00ISHOL8ZZZSHOETZSXufs酶活性Activity

of

#1,3-glucanase

1,3-glucanase1.

000I.L9ITTHFig.

5

Enzyme

activities

of

chitinase

in

Clonostachys

rosea

strainsU9SD图5粉红螺旋聚抱霉菌株几丁质酶活性「ITMHSITHZDcnHlomov-dAS9,HHNOEOOOV9SJXf-HHNchitinaseMycoparasitic

ability-HHNOHV

nst

ral

2-粉红螺旋聚抱霉菌株对灰霉病菌的拮抗作用平板对峙试验结果表明，供试的粉红螺旋聚抱

霉菌株对番茄灰霉病菌都具有较为明显的拮抗作

用，但不同菌株间存在较大的差异，其中3.

365

5、

JXLS--1、HLI>1、GZH--1

和

54-1

菌株作用较强,

抑制率达70%以上，显示出良好的生防潜力（图6）

&

2-粉红螺旋聚抱霉菌株对番茄果实灰霉病的防

治效果7

d后只接种病原菌抱子悬浮液的番茄表面

布满灰霉菌菌丝，而采用粉红螺旋聚抱霉菌悬液

浸泡处理的番茄与对照相比病害明显减轻，番茄

表面病斑直径较小，60%的菌株对番茄灰霉病防

效达

50%以上，其中,HN-56、STG-21-1

和

GS6-1

等菌株的防效超过75%，与化学农药50%腐霉

0.

4190. 760**利可湿性粉剂1

000倍稀释液的防病效果相当

（图7〜图8）。几丁质酶活性

Activityof

chitinase

10000. 583**3讨论本研究发现，不同来源的供试粉红螺旋聚抱霉

菌株都能够在核盘菌菌核上寄生，其中超过70%的

寄生能力

Mycoparasitic

ability1.0001)表中数值为相关系数，**表示极显著相关(PV0.

000

1)。The

value

are

correlation

coefficients.

*

*

indicates

significant

correlation

at

0.

01

level

(PV0.

000

1).菌株寄生能力达到3级或4级，菌核被寄生后不能

47卷第3期9o8o7o6o%菩

、tuo吴海霞等:粉红螺旋聚抱霉高效生防菌株的筛选与评价・59・工1工工5o4o3o2o1o

二

:sq船

刊一10090801

70Fig.

7

Control

efficacy

of

Clonostachys

rosea

strains

against

gray

mold

of

tomato

fruits

in

vitroa:对照;b:

50%腐霉利可湿性粉剂;c:菌株GS6-l;d:菌株HN-56;

e:菌株STY-2-3;

f:菌株54-1;

g:菌株GG-1-2;

h:菌株SYP-4-2a:

CK;

b:

procymidone

50%

WP;

c:

Strain

GS6-1;

d:

Strain

HN-56;

e:

Strain

STY-2-3;

f:

Strain

54-1;

g:

Strain

GG-1-2;

h:

Strain

SYP-4-2Fig. 8

Control

efficacy

of

Clonostachys

rosea

strains

against

gray

mold

of

tomato

fruits

in

vitrojquiICAM’HS二寸I4「ms寸

qEA

9UNHG8-HHNe-E-e-AHsITMHS

2

179U9SDws「cnHFig.

6

Antagonistic

activities

of

Clonostachys

rosea

strains

against

Botrytisz-dhsStrain图6粉红螺旋聚抱霉菌株对灰霉病菌的拮抗作用Il

III

lllliillllhlE寸寸.dAS菌-HZD」xf朱

宾»煙％

ls二二0「9BNHCTDDW9「9SD图8粉红螺旋聚抱霉菌株对离体番茄果实灰霉病的防治作用-eMHSlCHH

£H

图7粉红螺旋聚抱霉菌株对离体番茄果实灰霉病的防效GDIS-dAS-HZD-HHN

•

60

*继续萌发侵染寄主植物,从而有效降低了初侵染源。

在生防菌寄生过程中，几丁质酶和#1,3-葡聚糖酶

等细胞壁降解酶发挥了重要作用。葡聚糖和几丁质

2021参考文献康振生.我国植物真菌病害的研究现状及发展策略植物

是病原真菌细胞壁的主要成分，生防菌通过产生细

胞壁降解酶破坏病原菌细胞壁结构，导致病原菌死

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LI

Furong,

LIU

Ruijun,

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Antifungal

ac-

壁降解酶，破坏核盘菌菌核。本研究也发现，粉红螺

旋聚抱霉寄生能力与#1，3-葡聚糖酶和几丁质酶活

tivityofanendophyticstrainofPhomopsissp6onSc"erotinia

性呈正相关，寄生能力强的菌株酶活性也较高，表明

细胞壁降解酶活性的高低可以作为筛选高效菌株的

一个重要指标。拮抗作用是粉红螺旋聚抱霉的一个重要生防机

制。前期研究发现，粉红螺旋聚抱霉对小麦赤霉病

菌

Fusarium

graminicola

'黄瓜枯萎病菌

Fusarium

oxysporum

苹果腐烂病菌Valsa

mal、杨树溃疡病

菌Botryosphaeria

dothidea等多种植物病原菌表

现出强烈的抑制作用(4,2829

&我们对筛选出的高

致病性生防菌株进行对峙培养发现，这些菌株对番

茄灰霉病菌都表现出较为明显的拮抗作用，其中

5个菌株抑制率达到70%以上，显示出良好的生防

潜力。灰霉病是番茄生产中一种常见的真菌病害，也

是番茄运输贮存过程中的一个重要危害因子。通过

生防菌剂喷施、浸果等处理防治番茄果实灰霉病已

取得良好的效果。袁和奇等(0)将淡紫紫抱菌P"i

pureocillium

lilacinus接种于番茄伤口处，有效减

轻了灰霉病的发生。本研究采用粉红螺旋聚抱霉抱

子悬浮液浸果防治番茄果实灰霉病，结果表明，HN-

56,STG-21-1等菌株防效达到75%以上，与常规化

学农药腐霉利的效果相当。推测可能是生防菌通过

占据生态位点，直接作用于病原菌，抑制抱子的萌发

和菌丝的生长，同时，通过与病原菌竞争空间和营

养，使其能够更有效地抑制病原菌的增殖，降低病害

的发生和发展。本研究为防治番茄果实灰霉病及解

决采摘后番茄储存问题提供了一条有效可行的

途径。本研究通过对不同来源的粉红螺旋聚抱霉菌株

寄生能力和细胞壁降解酶活性测定，以及对番茄灰

霉病防治效果评价，获得了

-1-1和

GS6-1等高效菌株，对这些菌株将进一步进行田间

试验和作用机制的研究。sclerotiorum,

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