2024年2月21日发(作者：昝南蓉)

·９１６·ＷＯＲＬＤＣＨＩＮＥＳＥＭＥＤＩＣＩＮＥ　Ｍａｒｃｈ．２０２１，Ｖｏｌ．１６，Ｎｏ．６丹参酮ⅡＡ通过ＮＬＲＰ３／Ｃａｓｐａｓｅ１信号通路对心肌成纤维细胞的保护作用郑　鹏１　王俊帅１　占大钱１　王　敏１　夏海发２　刘旭东１　明晓青１　周代星１　冯　俊１（１华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊内科，武汉，４３００００；２华中科技大学同济医学院附属协和医院麻醉科，武汉，４３００００）摘要　目的：探讨丹参酮ⅡＡ对心肌成纤维细胞损伤的保护作用及可能机制。方法：分离和培养大鼠心肌成纤维细胞（ＣａｒｄｉａｃＦｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＣＦｓ）。以脂多糖（ＬＰＳ）刺激ＣＦｓ建立脓毒症心肌损伤体外模型，以不同浓度丹参酮ⅡＡ预处理ＣＦｓ３０ｍｉｎ后，给予ＬＰＳ刺激，设对照组，ＬＰＳ模型组，ＬＰＳ＋不同浓度ＴＳＡ（２μｍｏｌ／Ｌ、１０μｍｏｌ／Ｌ、５０μｍｏｌ／Ｌ）组；采用蛋白质免疫印迹试验法（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ）检测ＣＦｓ的ＮＬＲＰ３和Ｃａｓｐａｓｅ１蛋白表达水平，酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测细胞上清Ｌ１Ｌ１８的含量。结果：ＬＰＳ刺激２４ｈ后，ＣＦｓ的ＮＬＲＰ３蛋白的表达水平最高。ＬＰＳ模型组ＮＬＲＰ３和Ｃａｓｐａｓｅ１中Ｉβ和Ｉ蛋白的表达较对照组明显升高（Ｐ＜００１）。与ＬＰＳ模型组比较，丹参酮ⅡＡ（１０μｍｏｌ／Ｌ、５０μｍｏｌ／Ｌ）处理组ＮＬＲＰ３和Ｃａｓｐａｓｅ１蛋白的表达均明显降低（Ｐ＜００５）；丹参酮ⅡＡ处理组的ＩＬ１Ｌ１８水平均明显低于ＬＰＳ模型组（Ｐ＜β和Ｉ００５）。结论：丹参酮ⅡＡ能抑制ＬＰＳ诱导的心肌成纤维细胞内ＮＬＲＰ３／Ｃａｓｐａｓｅ１炎症反应信号通路分子的表达，这可能是其保护心肌细胞的分子机制之一。关键词　丹参酮ⅡＡ；脓毒症；心肌成纤维细胞；ＮＬＲＰ３／Ｃａｓｐａｓｅ１信号通路ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＥｆｆｅｃｔｏｆＴａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡｏｎＣａｒｄｉａｃＦｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅＮＬＲＰ３／Ｃａｓｐａｓｅ１ＳｉｇｎａｌｉｎｇＰａｔｈｗａｙ１１１１２１ＺＨＥＮＧＰｅｎｇ，ＷＡＮＧＪｕｎｓｈｕａｉ，ＺＨＡＮＤａｑｉａｎ，ＷＡＮＧＭｉｎ，ＸＩＡＨａｉｆａ，ＬＩＵＸｕｄｏｎｇ，１１１ＭＩＮＧＸｉａｏｑｉｎｇ，ＺＨＯＵＤａｉｘｉｎｇ，ＦＥＮＧＪｕｎ（１ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＥｍｅｒｇｅｎｃｙ，ＴｏｎｇｊｉＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｏｎｇｊｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＨｕａｚｈｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ４３００００，Ｃｈｉｎａ；２ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＡｎｅｓｔｈｅｓｉａ，ＷｕｈａｎＵｎｉｏｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｏｎｇｊｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＨｕａｚｈｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ４３００００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇｒｏｌｅａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｔａｎｓｈｉｎｏｎｅｎｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（ＬＰＳ）ｉｎｄｕｃｅｄｃａｒⅡＡｉｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｉｎｊｕｒｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｒａｔｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ（ＣａｒｄｉａｃＦｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＣＦｓ）ｗｅｒｅＩｓｏｌａｔｅｄａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｄ．Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（ＬＰＳ）ｗａｓｕｓｅｄｔｏｓｔｉｍｕｌａｔｅＣＦｓｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎｉｎｖｉｔｒｏｍｏｄｅｌｏｆｓｅｐｔｉｃｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｎｊｕｒｙ．ＡｆｔｅｒＣＦｓｗｅｒｅｐｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆＴａｎｓｈｉｎｏｎｅｏｒ３０ｍｉｎ，ｔｈｅｙｗｅｒｅｇｉｖｅｎＬＰＳｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ．Ａｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ａｎＬＰＳｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐａｎｄＬＰＳ＋ｄｉｆⅡＡｆｆｅｒｅｎｔＴＳＡ（２μｍｏｌ／Ｌ，１０μｍｏｌ／Ｌ，５０μｍｏｌ／Ｌ）ｗｅｒｅｓｅｔｕｐ．ＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅＮＬＲＰ３ａｎｄＣａｓｐａｓｅ１ｐｒｏ，ａｎｄｔｈｅｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）ｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆ１ｎｄＩＬｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＣＦｓβａ１８．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ａｆｔｅｒ２４ｈｏｆＬＰＳｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＮＬＲＰ３ｐｒｏｔｅｉｎｉｎＣＦｓｗａｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮＬＲＰ３ａｎｄＣａｓｐａｓｅ１ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｈｅＬＰＳｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜００１）．ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅＬＰＳｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＮＬＲＰ３ａｎｄＣａｓｐａｓｅ１ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｈｅＴａｎｓｈｉｎｏｎｅ１０μｍｏｌ／Ｌ，５０μｍｏｌ／Ｌ）ｔｒｅａｔｍｅｎｔⅡＡ（ｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｄｕｃｅｄ（Ｐ＜００５）；ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＩＬ１ｎｄＩＬ１８ｉｎｔｈｅＴａｎｓｈｉｎｏｎｅｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔβａⅡＡｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｈｅＬＰＳｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜００５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴａｎｓｈｉｎｏｎｅａｙｂｅａｐｏｔｅｎｔａｇｅｎｔｔｏｐｒｏｔｅｃｔａｇａｉｎｓｔｍｙｏⅡＡｍｃａｒｄｉａｌｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｓｅｐｓｉｓｂｙｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＮＬＲＰ３／Ｃａｓｐａｓｅ１ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　ＴａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡ；Ｓｅｐｓｉｓ；Ｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ；ＮＬＲＰ３／Ｃａｓｐａｓｅ１ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ中图分类号：Ｒ２８５５文献标识码：Ａｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－７２０２．２０２１．０６．０１１　　脓毒症是宿主对感染的反应异常，产生危及生命的器官功能损害，大约５０％的脓毒症患者存在心１］脏功能损害［。脓毒症引起心肌损害的机制尚不明细胞（ＣＦｓ）占比则高达６０％。研究显示心肌成纤维４］细胞发挥着感受损伤和炎症反应的前哨作用［。Ｎｏｄ受体蛋白３（ＮＬＲＰ３）是一类重要的胞质内５６］受体蛋白，它对多种物理和化学刺激做出反应［，确。目前普遍认为脓毒症患者体内过度的炎症反应２３］可能参与了心脏功能损害的过程［。在心脏的细与Ｃａｓｐａｓｅ１形成的炎性小体可导致炎症介质ＩＬ１β７］和ＩＬ１８的成熟［。ＮＬＲＰ３炎性小体及其下游炎症０％，而心脏成纤维胞组成中，心肌细胞占比低于５省自然科学基金项目（２０２０ＣＦＢ５７７）基金项目：国家自然科学基金项目（８１７０１８８７）———ＰｒｏｔｅｃｔｉｎＤＸ调节中性粒细胞活化在脓毒症致急性肺损伤中的作用及其机制研究；湖北作者简介：郑鹏（１９８６１０—），男，博士，主治医师，研究方向：脓毒症，Ｅｍａｉｌ：ｚｈｐ２０１４ｄ＠１２６ｃｏｍ通信作者：冯俊（１９７８０７—），男，博士，副主任医师，研究方向：脓毒症，Ｅｍａｉｌ：ａｎｄｙｔｅｒｒｙ５５５＠１６３ｃｏｍ

世界中医药　２０２１年３月第１６卷第６期·９１７·介质ＩＬ１、ＩＬ１８在冠状动脉疾病或心肌梗死患者中８］的表达升高［。ＮＬＲＰ３炎性小体主要表达在心肌９］成纤维细胞上，心肌细胞上则很少［。心肌成纤维０％胎牛血清的肌细胞）。收集所得细胞，加入含１ＤＭＥＭＦ１２培养基培养。经鉴定成纤维细胞标志物１６］（ＥＲＴＲ７）染色阳性细胞达９５％［。将第一代至第ＬＲＰ３炎性小体的过度激活参与了心肌缺细胞上Ｎ血再灌注损伤过程。在脓毒症心肌损伤动物模型１０］中，ＮＬＲＰ３、Ｃａｓｐａｓｅ１均显著上调［。Ｆｓ，三代之间的细胞用于实验。取对数生长期的Ｃ８２以细胞浓度１×１０／ｍＬ接种于１０ｃｍ培养皿中，培养２４ｈ，分为对照组，ＬＰＳ模型组，丹参酮ⅡＡ２μｍｏｌ／Ｌ、１０μｍｏｌ／Ｌ、５０μｍｏｌ／Ｌ）处理组。１２２　给药方法　将ＬＰＳ（５０μｇ／ｍＬ）加入ＤＭＥＭＦ１２培养基刺激ＣＦｓ；盐水作为对照添加到培养基ＬＲＰ３炎性小体激活的最佳时间窗，预中。为确定Ｎ丹参酮ⅡＡ（ＴａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡ）是从中药丹参里提取出的一种主要成分，广泛运用于心血管疾病１１］中［。研究表明，丹参酮ⅡＡ能通过抑制ＮＡＤＰＨ１２］氧化酶２从而减轻ＬＰＳ诱导的小鼠心肌纤维化［。此外，丹参酮ⅡＡ可抑制脑缺血再灌注损伤过程中ＮＬＲＰ３的表达［１３］。动物实验中，丹参酮ⅡＡ能改善脓毒症小鼠心脏收缩功能障碍［１４］，降低肌钙蛋白Ｉ、肌钙蛋白Ｔ等心肌损伤指标［１５］。其作用机制未完全明确。本研究通过建立体外脓毒症心肌损伤模型，探讨丹参酮ⅡＡ能否影响心脏成纤维细胞上ＮＬＲＰ３炎性小体及其下游炎症介质。１　材料与方法１１　材料１１１　动物　Ｗｉｓｔａｒ大鼠，体质量１８０～２２０ｇ，购自北京华阜康生物科技公司［许可证ＳＣＸＫ（京）２０１９０００８］；本次动物实验经华中科技大学同济医学院附属同济医院医学伦理委员会批准（伦理审批号：ＨＳＺＰＰＪ２０２０００１０１），符合动物伦理委员会的要求，饲养于同济医院动物实验中心，饲养温度２０～２５℃，湿度５５％，１２ｈ明暗交替环境，标准饲料和水喂养，术前禁食不禁水。１１２　药物　丹参酮ⅡＡ（中国药品生物制品检定所，批号：１１０７６６２０１７２１）。１１３　试剂与仪器　大鼠ＩＬ１βＥＬＩＳＡ试剂盒（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ公司，美国，货号：ＲＬＢ００），ＩＬ１８ＥＬＩＳＡ试剂盒（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ公司，美国，货号：ＤＹ５２１０５），ＮＬＲＰ３抗体（Ａｂｃａｍ公司，美国，货号：ａｂ２６３８９９），Ｃａｓｐａｓｅ１抗体（Ａｂｃａｍ公司，美国，货号：ａｂ７４２７９），βａｃｔｉｎ抗体（Ａｂｃａｍ公司，美国，货号：ａｂ１１５７７７），电转仪（北京六一仪器公司，型号：ＤＹＣＺ４０），电泳槽（北京六一仪器公司，型号：ＤＹＣＺ２４ＤＮ），酶标仪（Ｔｈｅｒｍｏ，美国，型号：ＭｕｌｔｉｓｋａｎＭＫ３）。１２　方法１２１　分组与模型制备　将Ｗｉｓｔａｒ大鼠麻醉，摘除心脏，酶解（胶原酶ＩＩ，２ｍｇ／ｍＬ）心肌组织。细胞悬液通过尼龙过滤器（７０μｍ）后，磁珠技术去除内皮细胞。随后将细胞置于３７℃、５％ＣＯ２培养箱培养９０ｍｉｎ。贴壁细胞以ＣＦｓ为主，移除非贴壁细胞（心实验分别用ＬＰＳ刺激ＣＦｓ４、８、１２、２４ｈ，再加入３ｍｍｏｌ／ＬＡＴＰ作用３０ｍｉｎ，以激活ＮＬＲＰ３炎性小体［１７］。根据结果，将ＬＰＳ刺激２４ｈ的ＣＦｓ用于后续实验。丹参酮ⅡＡ处理组以丹参酮ⅡＡ预处理细胞３０ｍｉｎ后加入ＬＰＳ培养２４ｈ。再加入３ｍｍｏｌ／ＬＡＴＰ作用３０ｍｉｎ。每个浓度梯度设３个复孔。１２３　检测指标与方法　１）Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测ＣＦｓ中ＮＬＲＰ３和Ｃａｓｐａｓｅ１蛋白的表达水平：将培养皿中的细胞用ＰＢＳ洗涤后加入预冷ＰＢＳ，刮下细胞，１０００ｒ／ｍｉｎ，离心半径１３ｃｍ，４℃离心１０ｍｉｎ，向沉淀中加入３００μＬ细胞裂解液裂解细胞提取总蛋白。行ＳＤＳＰＡＧＥ凝胶电泳。电泳后，将蛋白转移至ＰＶＤＦ膜。封闭２ｈ后，加入１∶１０００稀释的ＮＬＲＰ３和Ｃａｓｐａｓｅ１一抗和１∶２０００稀释的内参βａｃｔｉｎ一抗，４℃孵育过夜。次日ＴＢＳＴ洗膜，１∶４０００稀释的二抗室温孵育２ｈ，ＴＢＳＴ洗膜。用化学发光法显色，凝胶成像系统采集图像。２）ＥＬＩＳＡ检测细胞上清中ＩＬ１β和ＩＬ１８的含量：取对数生长期的ＣＦｓ，以细胞浓度１×１０５／ｍＬ接种于９６孔板中，培养２４ｈ，随后的分组和处理同上。按ＥＬＩＳＡ试剂盒说明书操作步骤检测各组细胞上清ＩＬ１β和ＩＬ１８含量。１３　统计学方法　采用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ７０统计软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（珋ｘ±ｓ）表示，组间均数比较采用单因素方差分析，以Ｐ＜００５为差异有统计学意义。２　结果２１　ＬＰＳ诱导心肌成纤维细胞ＮＬＲＰ３蛋白的表达　　结果显示，ＬＰＳ刺激２４ｈＮＬＲＰ３蛋白的表达最高（Ｐ＜００５）。因此，将ＬＰＳ刺激２４ｈ的ＣＦｓ用于后续实验。见图１。２２　丹参酮ⅡＡ抑制ＬＰＳ诱导心肌成纤维细胞ＮＬＲＰ３和Ｃａｓｐａｓｅ１蛋白表达　ＬＰＳ组ＮＬＲＰ３和Ｃａｓｐａｓｅ１蛋白的表达较对照组明显升高（Ｐ＜００１）。与ＬＰＳ模型组比较，各浓度梯度的丹参酮Ⅱ

世界中医药　２０２１年３月第１６卷第６期·９１９·官功能障碍为特征。其中心脏是重要的受影响的器官。明确脓毒症心肌损伤的机制对脓毒症的治疗非常重要。研究表明，失控的炎症反应在脓毒症心肌损伤２３，１８］中发挥重要作用［。ＮＬＲＰ３是一种胞质内的模［５］ＲａｔｈｉｎａｍＶＡ，ＶａｎａｊａＳＫ，ＦｉｔｚｇｅｒａｌｄＫＡ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ［Ｊ］．ＮａｔＩｍｍｕｎｏｌ，２０１２，１３（４）：３３３３４２．ｓｉｇｎａｌｉｎｇ［６］ＧｒｏｓｌａｍｂｅｒｔＭ，ＰｙＢＦ．ＳｐｏｔｌｉｇｈｔｏｎｔｈｅＮＬＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅｐａｔｈ［Ｊ］．ＪＩｎｆｌａｍｍＲｅｓ，２０１８，１１：３５９３７４．ｗａｙ［７］ＷａｎｇＹ，ＸｕＣＦ，ＬｉｕＹＪ，ｅｔａｌ．ＳａｌｉｄｒｏｓｉｄｅＡｔｔｅｎｕａｔｅｓＶｅｎｔｉｌａｔｉｏｎＩｎｄｕｃｅｄＬｕｎｇＩｎｊｕｒｙｖｉａＳＩＲＴ１ＤｅｐｅｎｄｅｎｔＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＮＬＲＰ３Ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ［Ｊ］．ＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌＢｉｏｃｈｅｍ，２０１７，４２（１）：３４４３．［８］ＴａｋａｈａｓｈｉＭ．ＲｏｌｅｏｆＮＬＲＰ３ＩｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅｉｎＣａｒｄｉａｃＩｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｎｄＲｅｍｏｄｅｌｉｎｇａｆｔｅｒＭｙｏｃａｒｄｉａｌＩｎｆａｒｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＢｉｏｌＰｈａｒｍＢｕｌｌ，２０１９，４２（４）：５１８５２３．［９］Ｓａｎｄａｎｇｅｒ，ＲａｎｈｅｉｍＴ，ＶｉｎｇｅＬＥ，ｅｔａｌ．ＴｈｅＮＬＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅｉｓｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄｉｎｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓａｎｄｍｅｄｉａｔｅｓｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈａｅ［Ｊ］．ＣａｒｄｉｏｖａｓｃＲｅｓ，２０１３，９９（１）：１６４１７４．ｍｉａｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ式识别受体，它可以被感染性和非感染性信号激活。ＮＬＲＰ３与凋亡相关斑点样蛋白（ＡＳＣ）形成炎性小体，使天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶１（Ｃａｓｐａｓｅ７，１９］１）活化，促进ＩＬ１Ｌ１８的成熟和释放［。β和ＩＮＬＲＰ３炎性小体主要存在于心脏成纤维细胞中，心肌细胞上则很少。而心脏成纤维细胞与心肌细胞存在交互作用，体外实验发现药物或基因层面抑制心脏成纤维细胞ＮＬＲＰ３炎性小体能增加心肌细胞环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）水平［９，２０］，升高的心肌细胞ｃＡＭＰ水平间接反映了心脏收缩功能的改善。丹参酮ⅡＡ是治疗心血管疾病的临床常用中药，近年来在脓毒症中的研究也越来越多［１４，２１２２］。在脓毒症小鼠模型中，丹参酮ⅡＡ能降低外周血炎症介质ＴＮＦα和ＩＬ１β水平［１４］，降低心肌活性氧族水平，改善心脏收缩功能。另一项研究中发现丹参酮ⅡＡ能改善ＬＰＳ导致的血流动力学紊乱［２１］。然而丹参酮ⅡＡ在脓毒症中的机制仍未完全明确。本研究通过ＬＰＳ刺激心肌成纤维细胞构建体外脓毒症心肌损伤模型，发现ＬＰＳ刺激下，心肌成纤维细胞ＮＬＲＰ３／Ｃａｓｐａｓｅ１炎症反应信号通路激活，下游炎症介质ＩＬ１β和ＩＬ１８释放增加。丹参酮ⅡＡ预处理心肌成纤维细胞，能有效抑制ＬＰＳ诱导的心肌成纤维细胞ＮＬＲＰ３和Ｃａｓｐａｓｅ１蛋白表达，减少ＩＬ１β和ＩＬ１８释放，其作用随丹参酮ⅡＡ浓度的升高而抑制程度增加，显示丹参酮ⅡＡ能通过作用于心脏成纤维细胞ＮＬＲＰ３信号通路来发挥心脏保护作用。本研究从细胞层面探索丹参酮ⅡＡ的在脓毒症心肌损伤中的心脏保护作用机制，为丹参酮ⅡＡ在脓毒症的治疗中运用提供了一定的分子理论基础。参考文献［１］ＡｍｅｒｉｃａｎＣｏｌｌｅｇｅｏｆＣｈｅｓｔＰｈｙｓｉｃｉａｎｓ／ＳｏｃｉｅｔｙｏｆＣｒｉｔｉｃａｌＣａｒｅＭｅｄｉｃｉｎｅＣｏｎｓｅｎｓｕｓＣｏｎｆｅｒｅｎｃｅ．Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎｓｆｏｒｓｅｐｓｉｓａｎｄｏｒｇａｎｆａｉｌｕｒｅａｎｄｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓｆｏｒｔｈｅｕｓｅｏｆｉｎｎｏｖａｔｉｖｅｔｈｅｒａｐｉｅｓｉｎｓｅｐｓｉｓ［Ｊ］．ＣｒｉｔＣａｒｅＭｅｄ，１９９２，２０（６）：８６４８７４．［２］ＫｏｎｇＷ，ＫａｎｇＫ，ＧａｏＹ，ｅｔａｌ．ＧＴＳ２１ＰｒｏｔｅｃｔｅｄＡｇａｉｎｓｔＬＰＳＩｎｄｕｃｅｄＳｅｐｓｉｓＭｙｏｃａｒｄｉａｌＩｎｊｕｒｙｉｎＭｉｃｅＴｈｒｏｕｇｈα７ｎＡＣｈＲ［Ｊ］．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，２０１８，４１（３）：１０７３１０８３．［３］ＬｉｕＹＣ，ＹｕＭＭ，ＳｈｏｕＳＴ，ｅｔａｌ．ＳｅｐｓｉｓＩｎｄｕｃｅｄＣａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ：ＭｅｃｈａｎｉｓｍｓａｎｄＴｒｅａｔｍｅｎｔｓ［Ｊ］．ＦｒｏｎｔＩｍｍｕｎｏｌ，２０１７，８：１０２１．［４］ＨｕｍｅｒｅｓＣ，ＦｒａｎｇｏｇｉａｎｎｉｓＮＧ．ＦｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｉｎｔｈｅＩｎｆａｒｃｔｅｄ，Ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ，ａｎｄＦａｉｌｉｎｇＨｅａｒｔ［Ｊ］．ＪＡＣＣＢａｓｉｃＴｒａｎｓｌＳｃｉ，２０１９，４（３）：４４９４６７．［１０］ＹａｎｇＣ，ＸｉａＷ，ＬｉｕＸ，ｅｔａｌ．ＲｏｌｅｏｆＴＸＮＩＰ／ＮＬＲＰ３ｉｎｓｅｐｓｉｓｉｎｄｕｃｅｄｍｙｏｃａｒｄｉａｌｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＩｎｔＪＭｏｌＭｅｄ，２０１９，４４（２）：４１７４２６．［１１］ＲｅｎＪ，ＦｕＬ，ＮｉｌｅＳＨ，ｅｔａｌ．ＳａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｉｎＴｒｅａｔｉｎｇＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＤｉｓｅａｓｅｓ：ＡＲｅｖｉｅｗｏｎＩｔｓＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＦｒｏｎｔＰｈａｒｍａｃｏｌ，２０１９，１０：７５３．［１２］ＨｕａｎｇＬ，ＺｈｕＪ，ＺｈｅｎｇＭ，ｅｔａｌ．ＴａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡｐｒｏｔｅｃｔｓａｇａｉｎｓｔｓｕｂｃｌｉｎｉｃａｌｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｉｎｄｕｃｅｄｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｍｉｃｅｔｈｒｏｕｇｈｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＮＡＤＰＨｏｘｉｄａｓｅ［Ｊ］．ＩｎｔＩｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１８，６０：５９６３．［１３］ＣａｉＬ，ＹｉＸＢ，ＹｕａｎＬＢ，ｅｔａｌ．ＴｈｅＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＥｆｆｅｃｔｏｆＴａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡｏｎＯｘｙｇｅｎｇｌｕｃｏｓｅＤｅｐｒｉｖａｔｉｏｎａｎｄＲｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎＩｎｊｕｒｙｏｆＭｉｃｒｏｇｌｉａＴｈｒｏｕｇｈｔｈｅＮＬＲＰ３ＩｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＳｉｇｎａｌｉｎｇＰａｔｈｗａｙ［Ｊ］．ＳｉｃｈｕａｎＤａＸｕｅＸｕｅＢａｏＹｉＸｕｅＢａｎ，２０１６，４７（５）：６６０６６４．［１４］ＨｕａｎｇＬ，ＺｈｅｎｇＭ，ＺｈｏｕＹ，ｅｔａｌ．ＴａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡａｔｔｅｎｕａｔｅｓｃａｒｄｉａｃｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｅｎｄｏｔｏｘｉｎｉｎｄｕｃｅｄｓｅｐｔｉｃｍｉｃｅｖｉａｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＮＡＤＰＨｏｘｉｄａｓｅ２ｒｅｌａｔｅｄｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．ＩｎｔＩｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１５，２８（１）：４４４４４９．［１５］ＭｅｎｇＺＪ，ＷａｎｇＣ，ＭｅｎｇＬＴ，ｅｔａｌ．ＳｏｄｉｕｍｔａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡｓｕｌｆｏｎａｔｅａｔｔｅｎｕａｔｅｓｃａｒｄｉａｃｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｓｓｕｒｖｉｖａｌｏｆｒａｔｓｗｉｔｈｃｅｃａｌｌｉｇａｔｉｏｎａｎｄｐｕｎｃｔｕｒｅｉｎｄｕｃｅｄｓｅｐｓｉｓ［Ｊ］．ＣｈｉｎＪＮａｔＭｅｄ，２０１８，１６（１１）：８４６８５５．［１６］ＳｔｒｕｔｚＦ，ＯｋａｄａＨ，ＬｏＣＷ，ｅｔａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｍａｒｋｅｒ：ＦＳＰ１［Ｊ］．ＪＣｅｌｌＢｉｏｌ，１９９５，１３０（２）：３９３４０５．［１７］ＢｒａｃｅｙＮＡ，ＧｅｒｓｈｋｏｖｉｃｈＢ，ＣｈｕｎＪ，ｅｔａｌ．ＭｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＮＬＲＰ３ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｄｕｃｅｓｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓｔｏｐｒｏｍｏｔｅＳｍａｄｐｒｏｔｅｉｎｓｉｇｎａｌｉｎｇａｎｄｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｆｒｏｍｔｈｅｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ［Ｊ］．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２０１４，２８９（２８）：１９５７１１９５８４．［１８］ＳｏｎｇＰ，ＳｈｅｎＤＦ，ＭｅｎｇＹＹ，ｅｔａｌ．ＧｅｎｉｐｏｓｉｄｅｐｒｏｔｅｃｔｓａｇａｉｎｓｔｓｅｐｓｉｓｉｎｄｕｃｅｄｍｙｏｃａｒｄｉａｌｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｔｈｒｏｕｇｈＡＭＰＫαｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．ＦｒｅｅＲａｄｉｃＢｉｏｌＭｅｄ，２０２０，１５２：１８６１９６．［１９］ＧａｉｄｔＭＭ，ＨｏｒｎｕｎｇＶ．ＴｈｅＮＬＲＰ３ＩｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅＲｅｎｄｅｒｓＣｅｌｌＤｅａｔｈＰｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ［Ｊ］．ＪＭｏｌＢｉｏｌ，２０１８，４３０（２）：１３３１４１．［２０］ＺｈａｎｇＷ，ＸｕＸ，ＫａｏＲ，ｅｔａｌ．Ｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｔｏｍｙｏｃａｒｄｉａｌｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｍｉｃｅｗｉｔｈｓｅｐｓｉｓ：ｔｈｅｒｏｌｅｏｆＮＬＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ，２０１４，９（９）：ｅ１０７６３９．［２１］ＭａＳ，ＷａｎｇＸ，ＷａｎｇＹ，ｅｔａｌ．ＳｏｄｉｕｍＴａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡＳｕｌｆｏｎａｔｅＩｍｐｒｏｖｅｓＨｅｍｏｄｙｎａｍｉｃＰａｒａｍｅｔｅｒｓ，ＣｙｔｏｋｉｎｅＲｅｌｅａｓｅ，ａｎｄＭｕｌｔｉＯｒｇａｎＤａｍａｇｅｉｎＥｎｄｏｔｏｘｅｍｉａＲａｂｂｉｔｓ［Ｊ］．ＭｅｄＳｃｉＭｏｎｉｔ，２０１８，２４：２９７５２９８２．［２２］ＱｕａｎＭ，ＬｖＹ，ＤａｉＹ，ｅｔａｌ．ＴａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡｐｒｏｔｅｃｔｓａｇａｉｎｓｔｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｉｎｄｕｃｅｄｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙｔｈｒｏｕｇｈｔａｒｇｅｔｉｎｇＳｉｒｔ１［Ｊ］．ＪＰｈａｒｍＰｈａｒｍａｃｏｌ，２０１９，７１（７）：１１４２１１５１．（２０２０－０７－１７收稿　责任编辑：王明）

2024年2月21日发(作者：昝南蓉)

·９１６·ＷＯＲＬＤＣＨＩＮＥＳＥＭＥＤＩＣＩＮＥ　Ｍａｒｃｈ．２０２１，Ｖｏｌ．１６，Ｎｏ．６丹参酮ⅡＡ通过ＮＬＲＰ３／Ｃａｓｐａｓｅ１信号通路对心肌成纤维细胞的保护作用郑　鹏１　王俊帅１　占大钱１　王　敏１　夏海发２　刘旭东１　明晓青１　周代星１　冯　俊１（１华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊内科，武汉，４３００００；２华中科技大学同济医学院附属协和医院麻醉科，武汉，４３００００）摘要　目的：探讨丹参酮ⅡＡ对心肌成纤维细胞损伤的保护作用及可能机制。方法：分离和培养大鼠心肌成纤维细胞（ＣａｒｄｉａｃＦｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＣＦｓ）。以脂多糖（ＬＰＳ）刺激ＣＦｓ建立脓毒症心肌损伤体外模型，以不同浓度丹参酮ⅡＡ预处理ＣＦｓ３０ｍｉｎ后，给予ＬＰＳ刺激，设对照组，ＬＰＳ模型组，ＬＰＳ＋不同浓度ＴＳＡ（２μｍｏｌ／Ｌ、１０μｍｏｌ／Ｌ、５０μｍｏｌ／Ｌ）组；采用蛋白质免疫印迹试验法（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ）检测ＣＦｓ的ＮＬＲＰ３和Ｃａｓｐａｓｅ１蛋白表达水平，酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测细胞上清Ｌ１Ｌ１８的含量。结果：ＬＰＳ刺激２４ｈ后，ＣＦｓ的ＮＬＲＰ３蛋白的表达水平最高。ＬＰＳ模型组ＮＬＲＰ３和Ｃａｓｐａｓｅ１中Ｉβ和Ｉ蛋白的表达较对照组明显升高（Ｐ＜００１）。与ＬＰＳ模型组比较，丹参酮ⅡＡ（１０μｍｏｌ／Ｌ、５０μｍｏｌ／Ｌ）处理组ＮＬＲＰ３和Ｃａｓｐａｓｅ１蛋白的表达均明显降低（Ｐ＜００５）；丹参酮ⅡＡ处理组的ＩＬ１Ｌ１８水平均明显低于ＬＰＳ模型组（Ｐ＜β和Ｉ００５）。结论：丹参酮ⅡＡ能抑制ＬＰＳ诱导的心肌成纤维细胞内ＮＬＲＰ３／Ｃａｓｐａｓｅ１炎症反应信号通路分子的表达，这可能是其保护心肌细胞的分子机制之一。关键词　丹参酮ⅡＡ；脓毒症；心肌成纤维细胞；ＮＬＲＰ３／Ｃａｓｐａｓｅ１信号通路ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＥｆｆｅｃｔｏｆＴａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡｏｎＣａｒｄｉａｃＦｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅＮＬＲＰ３／Ｃａｓｐａｓｅ１ＳｉｇｎａｌｉｎｇＰａｔｈｗａｙ１１１１２１ＺＨＥＮＧＰｅｎｇ，ＷＡＮＧＪｕｎｓｈｕａｉ，ＺＨＡＮＤａｑｉａｎ，ＷＡＮＧＭｉｎ，ＸＩＡＨａｉｆａ，ＬＩＵＸｕｄｏｎｇ，１１１ＭＩＮＧＸｉａｏｑｉｎｇ，ＺＨＯＵＤａｉｘｉｎｇ，ＦＥＮＧＪｕｎ（１ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＥｍｅｒｇｅｎｃｙ，ＴｏｎｇｊｉＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｏｎｇｊｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＨｕａｚｈｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ４３００００，Ｃｈｉｎａ；２ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＡｎｅｓｔｈｅｓｉａ，ＷｕｈａｎＵｎｉｏｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｏｎｇｊｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＨｕａｚｈｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ４３００００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇｒｏｌｅａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｔａｎｓｈｉｎｏｎｅｎｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（ＬＰＳ）ｉｎｄｕｃｅｄｃａｒⅡＡｉｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｉｎｊｕｒｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｒａｔｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ（ＣａｒｄｉａｃＦｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＣＦｓ）ｗｅｒｅＩｓｏｌａｔｅｄａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｄ．Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（ＬＰＳ）ｗａｓｕｓｅｄｔｏｓｔｉｍｕｌａｔｅＣＦｓｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎｉｎｖｉｔｒｏｍｏｄｅｌｏｆｓｅｐｔｉｃｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｎｊｕｒｙ．ＡｆｔｅｒＣＦｓｗｅｒｅｐｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆＴａｎｓｈｉｎｏｎｅｏｒ３０ｍｉｎ，ｔｈｅｙｗｅｒｅｇｉｖｅｎＬＰＳｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ．Ａｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ａｎＬＰＳｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐａｎｄＬＰＳ＋ｄｉｆⅡＡｆｆｅｒｅｎｔＴＳＡ（２μｍｏｌ／Ｌ，１０μｍｏｌ／Ｌ，５０μｍｏｌ／Ｌ）ｗｅｒｅｓｅｔｕｐ．ＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅＮＬＲＰ３ａｎｄＣａｓｐａｓｅ１ｐｒｏ，ａｎｄｔｈｅｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）ｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆ１ｎｄＩＬｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＣＦｓβａ１８．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ａｆｔｅｒ２４ｈｏｆＬＰＳｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＮＬＲＰ３ｐｒｏｔｅｉｎｉｎＣＦｓｗａｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮＬＲＰ３ａｎｄＣａｓｐａｓｅ１ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｈｅＬＰＳｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜００１）．ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅＬＰＳｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＮＬＲＰ３ａｎｄＣａｓｐａｓｅ１ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｈｅＴａｎｓｈｉｎｏｎｅ１０μｍｏｌ／Ｌ，５０μｍｏｌ／Ｌ）ｔｒｅａｔｍｅｎｔⅡＡ（ｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｄｕｃｅｄ（Ｐ＜００５）；ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＩＬ１ｎｄＩＬ１８ｉｎｔｈｅＴａｎｓｈｉｎｏｎｅｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔβａⅡＡｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｈｅＬＰＳｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜００５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴａｎｓｈｉｎｏｎｅａｙｂｅａｐｏｔｅｎｔａｇｅｎｔｔｏｐｒｏｔｅｃｔａｇａｉｎｓｔｍｙｏⅡＡｍｃａｒｄｉａｌｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｓｅｐｓｉｓｂｙｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＮＬＲＰ３／Ｃａｓｐａｓｅ１ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　ＴａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡ；Ｓｅｐｓｉｓ；Ｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ；ＮＬＲＰ３／Ｃａｓｐａｓｅ１ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ中图分类号：Ｒ２８５５文献标识码：Ａｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－７２０２．２０２１．０６．０１１　　脓毒症是宿主对感染的反应异常，产生危及生命的器官功能损害，大约５０％的脓毒症患者存在心１］脏功能损害［。脓毒症引起心肌损害的机制尚不明细胞（ＣＦｓ）占比则高达６０％。研究显示心肌成纤维４］细胞发挥着感受损伤和炎症反应的前哨作用［。Ｎｏｄ受体蛋白３（ＮＬＲＰ３）是一类重要的胞质内５６］受体蛋白，它对多种物理和化学刺激做出反应［，确。目前普遍认为脓毒症患者体内过度的炎症反应２３］可能参与了心脏功能损害的过程［。在心脏的细与Ｃａｓｐａｓｅ１形成的炎性小体可导致炎症介质ＩＬ１β７］和ＩＬ１８的成熟［。ＮＬＲＰ３炎性小体及其下游炎症０％，而心脏成纤维胞组成中，心肌细胞占比低于５省自然科学基金项目（２０２０ＣＦＢ５７７）基金项目：国家自然科学基金项目（８１７０１８８７）———ＰｒｏｔｅｃｔｉｎＤＸ调节中性粒细胞活化在脓毒症致急性肺损伤中的作用及其机制研究；湖北作者简介：郑鹏（１９８６１０—），男，博士，主治医师，研究方向：脓毒症，Ｅｍａｉｌ：ｚｈｐ２０１４ｄ＠１２６ｃｏｍ通信作者：冯俊（１９７８０７—），男，博士，副主任医师，研究方向：脓毒症，Ｅｍａｉｌ：ａｎｄｙｔｅｒｒｙ５５５＠１６３ｃｏｍ

世界中医药　２０２１年３月第１６卷第６期·９１７·介质ＩＬ１、ＩＬ１８在冠状动脉疾病或心肌梗死患者中８］的表达升高［。ＮＬＲＰ３炎性小体主要表达在心肌９］成纤维细胞上，心肌细胞上则很少［。心肌成纤维０％胎牛血清的肌细胞）。收集所得细胞，加入含１ＤＭＥＭＦ１２培养基培养。经鉴定成纤维细胞标志物１６］（ＥＲＴＲ７）染色阳性细胞达９５％［。将第一代至第ＬＲＰ３炎性小体的过度激活参与了心肌缺细胞上Ｎ血再灌注损伤过程。在脓毒症心肌损伤动物模型１０］中，ＮＬＲＰ３、Ｃａｓｐａｓｅ１均显著上调［。Ｆｓ，三代之间的细胞用于实验。取对数生长期的Ｃ８２以细胞浓度１×１０／ｍＬ接种于１０ｃｍ培养皿中，培养２４ｈ，分为对照组，ＬＰＳ模型组，丹参酮ⅡＡ２μｍｏｌ／Ｌ、１０μｍｏｌ／Ｌ、５０μｍｏｌ／Ｌ）处理组。１２２　给药方法　将ＬＰＳ（５０μｇ／ｍＬ）加入ＤＭＥＭＦ１２培养基刺激ＣＦｓ；盐水作为对照添加到培养基ＬＲＰ３炎性小体激活的最佳时间窗，预中。为确定Ｎ丹参酮ⅡＡ（ＴａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡ）是从中药丹参里提取出的一种主要成分，广泛运用于心血管疾病１１］中［。研究表明，丹参酮ⅡＡ能通过抑制ＮＡＤＰＨ１２］氧化酶２从而减轻ＬＰＳ诱导的小鼠心肌纤维化［。此外，丹参酮ⅡＡ可抑制脑缺血再灌注损伤过程中ＮＬＲＰ３的表达［１３］。动物实验中，丹参酮ⅡＡ能改善脓毒症小鼠心脏收缩功能障碍［１４］，降低肌钙蛋白Ｉ、肌钙蛋白Ｔ等心肌损伤指标［１５］。其作用机制未完全明确。本研究通过建立体外脓毒症心肌损伤模型，探讨丹参酮ⅡＡ能否影响心脏成纤维细胞上ＮＬＲＰ３炎性小体及其下游炎症介质。１　材料与方法１１　材料１１１　动物　Ｗｉｓｔａｒ大鼠，体质量１８０～２２０ｇ，购自北京华阜康生物科技公司［许可证ＳＣＸＫ（京）２０１９０００８］；本次动物实验经华中科技大学同济医学院附属同济医院医学伦理委员会批准（伦理审批号：ＨＳＺＰＰＪ２０２０００１０１），符合动物伦理委员会的要求，饲养于同济医院动物实验中心，饲养温度２０～２５℃，湿度５５％，１２ｈ明暗交替环境，标准饲料和水喂养，术前禁食不禁水。１１２　药物　丹参酮ⅡＡ（中国药品生物制品检定所，批号：１１０７６６２０１７２１）。１１３　试剂与仪器　大鼠ＩＬ１βＥＬＩＳＡ试剂盒（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ公司，美国，货号：ＲＬＢ００），ＩＬ１８ＥＬＩＳＡ试剂盒（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ公司，美国，货号：ＤＹ５２１０５），ＮＬＲＰ３抗体（Ａｂｃａｍ公司，美国，货号：ａｂ２６３８９９），Ｃａｓｐａｓｅ１抗体（Ａｂｃａｍ公司，美国，货号：ａｂ７４２７９），βａｃｔｉｎ抗体（Ａｂｃａｍ公司，美国，货号：ａｂ１１５７７７），电转仪（北京六一仪器公司，型号：ＤＹＣＺ４０），电泳槽（北京六一仪器公司，型号：ＤＹＣＺ２４ＤＮ），酶标仪（Ｔｈｅｒｍｏ，美国，型号：ＭｕｌｔｉｓｋａｎＭＫ３）。１２　方法１２１　分组与模型制备　将Ｗｉｓｔａｒ大鼠麻醉，摘除心脏，酶解（胶原酶ＩＩ，２ｍｇ／ｍＬ）心肌组织。细胞悬液通过尼龙过滤器（７０μｍ）后，磁珠技术去除内皮细胞。随后将细胞置于３７℃、５％ＣＯ２培养箱培养９０ｍｉｎ。贴壁细胞以ＣＦｓ为主，移除非贴壁细胞（心实验分别用ＬＰＳ刺激ＣＦｓ４、８、１２、２４ｈ，再加入３ｍｍｏｌ／ＬＡＴＰ作用３０ｍｉｎ，以激活ＮＬＲＰ３炎性小体［１７］。根据结果，将ＬＰＳ刺激２４ｈ的ＣＦｓ用于后续实验。丹参酮ⅡＡ处理组以丹参酮ⅡＡ预处理细胞３０ｍｉｎ后加入ＬＰＳ培养２４ｈ。再加入３ｍｍｏｌ／ＬＡＴＰ作用３０ｍｉｎ。每个浓度梯度设３个复孔。１２３　检测指标与方法　１）Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测ＣＦｓ中ＮＬＲＰ３和Ｃａｓｐａｓｅ１蛋白的表达水平：将培养皿中的细胞用ＰＢＳ洗涤后加入预冷ＰＢＳ，刮下细胞，１０００ｒ／ｍｉｎ，离心半径１３ｃｍ，４℃离心１０ｍｉｎ，向沉淀中加入３００μＬ细胞裂解液裂解细胞提取总蛋白。行ＳＤＳＰＡＧＥ凝胶电泳。电泳后，将蛋白转移至ＰＶＤＦ膜。封闭２ｈ后，加入１∶１０００稀释的ＮＬＲＰ３和Ｃａｓｐａｓｅ１一抗和１∶２０００稀释的内参βａｃｔｉｎ一抗，４℃孵育过夜。次日ＴＢＳＴ洗膜，１∶４０００稀释的二抗室温孵育２ｈ，ＴＢＳＴ洗膜。用化学发光法显色，凝胶成像系统采集图像。２）ＥＬＩＳＡ检测细胞上清中ＩＬ１β和ＩＬ１８的含量：取对数生长期的ＣＦｓ，以细胞浓度１×１０５／ｍＬ接种于９６孔板中，培养２４ｈ，随后的分组和处理同上。按ＥＬＩＳＡ试剂盒说明书操作步骤检测各组细胞上清ＩＬ１β和ＩＬ１８含量。１３　统计学方法　采用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ７０统计软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（珋ｘ±ｓ）表示，组间均数比较采用单因素方差分析，以Ｐ＜００５为差异有统计学意义。２　结果２１　ＬＰＳ诱导心肌成纤维细胞ＮＬＲＰ３蛋白的表达　　结果显示，ＬＰＳ刺激２４ｈＮＬＲＰ３蛋白的表达最高（Ｐ＜００５）。因此，将ＬＰＳ刺激２４ｈ的ＣＦｓ用于后续实验。见图１。２２　丹参酮ⅡＡ抑制ＬＰＳ诱导心肌成纤维细胞ＮＬＲＰ３和Ｃａｓｐａｓｅ１蛋白表达　ＬＰＳ组ＮＬＲＰ３和Ｃａｓｐａｓｅ１蛋白的表达较对照组明显升高（Ｐ＜００１）。与ＬＰＳ模型组比较，各浓度梯度的丹参酮Ⅱ

世界中医药　２０２１年３月第１６卷第６期·９１９·官功能障碍为特征。其中心脏是重要的受影响的器官。明确脓毒症心肌损伤的机制对脓毒症的治疗非常重要。研究表明，失控的炎症反应在脓毒症心肌损伤２３，１８］中发挥重要作用［。ＮＬＲＰ３是一种胞质内的模［５］ＲａｔｈｉｎａｍＶＡ，ＶａｎａｊａＳＫ，ＦｉｔｚｇｅｒａｌｄＫＡ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ［Ｊ］．ＮａｔＩｍｍｕｎｏｌ，２０１２，１３（４）：３３３３４２．ｓｉｇｎａｌｉｎｇ［６］ＧｒｏｓｌａｍｂｅｒｔＭ，ＰｙＢＦ．ＳｐｏｔｌｉｇｈｔｏｎｔｈｅＮＬＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅｐａｔｈ［Ｊ］．ＪＩｎｆｌａｍｍＲｅｓ，２０１８，１１：３５９３７４．ｗａｙ［７］ＷａｎｇＹ，ＸｕＣＦ，ＬｉｕＹＪ，ｅｔａｌ．ＳａｌｉｄｒｏｓｉｄｅＡｔｔｅｎｕａｔｅｓＶｅｎｔｉｌａｔｉｏｎＩｎｄｕｃｅｄＬｕｎｇＩｎｊｕｒｙｖｉａＳＩＲＴ１ＤｅｐｅｎｄｅｎｔＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＮＬＲＰ３Ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ［Ｊ］．ＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌＢｉｏｃｈｅｍ，２０１７，４２（１）：３４４３．［８］ＴａｋａｈａｓｈｉＭ．ＲｏｌｅｏｆＮＬＲＰ３ＩｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅｉｎＣａｒｄｉａｃＩｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｎｄＲｅｍｏｄｅｌｉｎｇａｆｔｅｒＭｙｏｃａｒｄｉａｌＩｎｆａｒｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＢｉｏｌＰｈａｒｍＢｕｌｌ，２０１９，４２（４）：５１８５２３．［９］Ｓａｎｄａｎｇｅｒ，ＲａｎｈｅｉｍＴ，ＶｉｎｇｅＬＥ，ｅｔａｌ．ＴｈｅＮＬＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅｉｓｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄｉｎｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓａｎｄｍｅｄｉａｔｅｓｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈａｅ［Ｊ］．ＣａｒｄｉｏｖａｓｃＲｅｓ，２０１３，９９（１）：１６４１７４．ｍｉａｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ式识别受体，它可以被感染性和非感染性信号激活。ＮＬＲＰ３与凋亡相关斑点样蛋白（ＡＳＣ）形成炎性小体，使天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶１（Ｃａｓｐａｓｅ７，１９］１）活化，促进ＩＬ１Ｌ１８的成熟和释放［。β和ＩＮＬＲＰ３炎性小体主要存在于心脏成纤维细胞中，心肌细胞上则很少。而心脏成纤维细胞与心肌细胞存在交互作用，体外实验发现药物或基因层面抑制心脏成纤维细胞ＮＬＲＰ３炎性小体能增加心肌细胞环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）水平［９，２０］，升高的心肌细胞ｃＡＭＰ水平间接反映了心脏收缩功能的改善。丹参酮ⅡＡ是治疗心血管疾病的临床常用中药，近年来在脓毒症中的研究也越来越多［１４，２１２２］。在脓毒症小鼠模型中，丹参酮ⅡＡ能降低外周血炎症介质ＴＮＦα和ＩＬ１β水平［１４］，降低心肌活性氧族水平，改善心脏收缩功能。另一项研究中发现丹参酮ⅡＡ能改善ＬＰＳ导致的血流动力学紊乱［２１］。然而丹参酮ⅡＡ在脓毒症中的机制仍未完全明确。本研究通过ＬＰＳ刺激心肌成纤维细胞构建体外脓毒症心肌损伤模型，发现ＬＰＳ刺激下，心肌成纤维细胞ＮＬＲＰ３／Ｃａｓｐａｓｅ１炎症反应信号通路激活，下游炎症介质ＩＬ１β和ＩＬ１８释放增加。丹参酮ⅡＡ预处理心肌成纤维细胞，能有效抑制ＬＰＳ诱导的心肌成纤维细胞ＮＬＲＰ３和Ｃａｓｐａｓｅ１蛋白表达，减少ＩＬ１β和ＩＬ１８释放，其作用随丹参酮ⅡＡ浓度的升高而抑制程度增加，显示丹参酮ⅡＡ能通过作用于心脏成纤维细胞ＮＬＲＰ３信号通路来发挥心脏保护作用。本研究从细胞层面探索丹参酮ⅡＡ的在脓毒症心肌损伤中的心脏保护作用机制，为丹参酮ⅡＡ在脓毒症的治疗中运用提供了一定的分子理论基础。参考文献［１］ＡｍｅｒｉｃａｎＣｏｌｌｅｇｅｏｆＣｈｅｓｔＰｈｙｓｉｃｉａｎｓ／ＳｏｃｉｅｔｙｏｆＣｒｉｔｉｃａｌＣａｒｅＭｅｄｉｃｉｎｅＣｏｎｓｅｎｓｕｓＣｏｎｆｅｒｅｎｃｅ．Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎｓｆｏｒｓｅｐｓｉｓａｎｄｏｒｇａｎｆａｉｌｕｒｅａｎｄｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓｆｏｒｔｈｅｕｓｅｏｆｉｎｎｏｖａｔｉｖｅｔｈｅｒａｐｉｅｓｉｎｓｅｐｓｉｓ［Ｊ］．ＣｒｉｔＣａｒｅＭｅｄ，１９９２，２０（６）：８６４８７４．［２］ＫｏｎｇＷ，ＫａｎｇＫ，ＧａｏＹ，ｅｔａｌ．ＧＴＳ２１ＰｒｏｔｅｃｔｅｄＡｇａｉｎｓｔＬＰＳＩｎｄｕｃｅｄＳｅｐｓｉｓＭｙｏｃａｒｄｉａｌＩｎｊｕｒｙｉｎＭｉｃｅＴｈｒｏｕｇｈα７ｎＡＣｈＲ［Ｊ］．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，２０１８，４１（３）：１０７３１０８３．［３］ＬｉｕＹＣ，ＹｕＭＭ，ＳｈｏｕＳＴ，ｅｔａｌ．ＳｅｐｓｉｓＩｎｄｕｃｅｄＣａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ：ＭｅｃｈａｎｉｓｍｓａｎｄＴｒｅａｔｍｅｎｔｓ［Ｊ］．ＦｒｏｎｔＩｍｍｕｎｏｌ，２０１７，８：１０２１．［４］ＨｕｍｅｒｅｓＣ，ＦｒａｎｇｏｇｉａｎｎｉｓＮＧ．ＦｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｉｎｔｈｅＩｎｆａｒｃｔｅｄ，Ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ，ａｎｄＦａｉｌｉｎｇＨｅａｒｔ［Ｊ］．ＪＡＣＣＢａｓｉｃＴｒａｎｓｌＳｃｉ，２０１９，４（３）：４４９４６７．［１０］ＹａｎｇＣ，ＸｉａＷ，ＬｉｕＸ，ｅｔａｌ．ＲｏｌｅｏｆＴＸＮＩＰ／ＮＬＲＰ３ｉｎｓｅｐｓｉｓｉｎｄｕｃｅｄｍｙｏｃａｒｄｉａｌｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＩｎｔＪＭｏｌＭｅｄ，２０１９，４４（２）：４１７４２６．［１１］ＲｅｎＪ，ＦｕＬ，ＮｉｌｅＳＨ，ｅｔａｌ．ＳａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｉｎＴｒｅａｔｉｎｇＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＤｉｓｅａｓｅｓ：ＡＲｅｖｉｅｗｏｎＩｔｓＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＦｒｏｎｔＰｈａｒｍａｃｏｌ，２０１９，１０：７５３．［１２］ＨｕａｎｇＬ，ＺｈｕＪ，ＺｈｅｎｇＭ，ｅｔａｌ．ＴａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡｐｒｏｔｅｃｔｓａｇａｉｎｓｔｓｕｂｃｌｉｎｉｃａｌｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｉｎｄｕｃｅｄｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｍｉｃｅｔｈｒｏｕｇｈｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＮＡＤＰＨｏｘｉｄａｓｅ［Ｊ］．ＩｎｔＩｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１８，６０：５９６３．［１３］ＣａｉＬ，ＹｉＸＢ，ＹｕａｎＬＢ，ｅｔａｌ．ＴｈｅＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＥｆｆｅｃｔｏｆＴａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡｏｎＯｘｙｇｅｎｇｌｕｃｏｓｅＤｅｐｒｉｖａｔｉｏｎａｎｄＲｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎＩｎｊｕｒｙｏｆＭｉｃｒｏｇｌｉａＴｈｒｏｕｇｈｔｈｅＮＬＲＰ３ＩｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＳｉｇｎａｌｉｎｇＰａｔｈｗａｙ［Ｊ］．ＳｉｃｈｕａｎＤａＸｕｅＸｕｅＢａｏＹｉＸｕｅＢａｎ，２０１６，４７（５）：６６０６６４．［１４］ＨｕａｎｇＬ，ＺｈｅｎｇＭ，ＺｈｏｕＹ，ｅｔａｌ．ＴａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡａｔｔｅｎｕａｔｅｓｃａｒｄｉａｃｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｅｎｄｏｔｏｘｉｎｉｎｄｕｃｅｄｓｅｐｔｉｃｍｉｃｅｖｉａｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＮＡＤＰＨｏｘｉｄａｓｅ２ｒｅｌａｔｅｄｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．ＩｎｔＩｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１５，２８（１）：４４４４４９．［１５］ＭｅｎｇＺＪ，ＷａｎｇＣ，ＭｅｎｇＬＴ，ｅｔａｌ．ＳｏｄｉｕｍｔａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡｓｕｌｆｏｎａｔｅａｔｔｅｎｕａｔｅｓｃａｒｄｉａｃｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｓｓｕｒｖｉｖａｌｏｆｒａｔｓｗｉｔｈｃｅｃａｌｌｉｇａｔｉｏｎａｎｄｐｕｎｃｔｕｒｅｉｎｄｕｃｅｄｓｅｐｓｉｓ［Ｊ］．ＣｈｉｎＪＮａｔＭｅｄ，２０１８，１６（１１）：８４６８５５．［１６］ＳｔｒｕｔｚＦ，ＯｋａｄａＨ，ＬｏＣＷ，ｅｔａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｍａｒｋｅｒ：ＦＳＰ１［Ｊ］．ＪＣｅｌｌＢｉｏｌ，１９９５，１３０（２）：３９３４０５．［１７］ＢｒａｃｅｙＮＡ，ＧｅｒｓｈｋｏｖｉｃｈＢ，ＣｈｕｎＪ，ｅｔａｌ．ＭｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＮＬＲＰ３ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｄｕｃｅｓｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓｔｏｐｒｏｍｏｔｅＳｍａｄｐｒｏｔｅｉｎｓｉｇｎａｌｉｎｇａｎｄｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｆｒｏｍｔｈｅｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ［Ｊ］．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２０１４，２８９（２８）：１９５７１１９５８４．［１８］ＳｏｎｇＰ，ＳｈｅｎＤＦ，ＭｅｎｇＹＹ，ｅｔａｌ．ＧｅｎｉｐｏｓｉｄｅｐｒｏｔｅｃｔｓａｇａｉｎｓｔｓｅｐｓｉｓｉｎｄｕｃｅｄｍｙｏｃａｒｄｉａｌｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｔｈｒｏｕｇｈＡＭＰＫαｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．ＦｒｅｅＲａｄｉｃＢｉｏｌＭｅｄ，２０２０，１５２：１８６１９６．［１９］ＧａｉｄｔＭＭ，ＨｏｒｎｕｎｇＶ．ＴｈｅＮＬＲＰ３ＩｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅＲｅｎｄｅｒｓＣｅｌｌＤｅａｔｈＰｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ［Ｊ］．ＪＭｏｌＢｉｏｌ，２０１８，４３０（２）：１３３１４１．［２０］ＺｈａｎｇＷ，ＸｕＸ，ＫａｏＲ，ｅｔａｌ．Ｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｔｏｍｙｏｃａｒｄｉａｌｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｍｉｃｅｗｉｔｈｓｅｐｓｉｓ：ｔｈｅｒｏｌｅｏｆＮＬＲＰ３ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ，２０１４，９（９）：ｅ１０７６３９．［２１］ＭａＳ，ＷａｎｇＸ，ＷａｎｇＹ，ｅｔａｌ．ＳｏｄｉｕｍＴａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡＳｕｌｆｏｎａｔｅＩｍｐｒｏｖｅｓＨｅｍｏｄｙｎａｍｉｃＰａｒａｍｅｔｅｒｓ，ＣｙｔｏｋｉｎｅＲｅｌｅａｓｅ，ａｎｄＭｕｌｔｉＯｒｇａｎＤａｍａｇｅｉｎＥｎｄｏｔｏｘｅｍｉａＲａｂｂｉｔｓ［Ｊ］．ＭｅｄＳｃｉＭｏｎｉｔ，２０１８，２４：２９７５２９８２．［２２］ＱｕａｎＭ，ＬｖＹ，ＤａｉＹ，ｅｔａｌ．ＴａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡｐｒｏｔｅｃｔｓａｇａｉｎｓｔｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｉｎｄｕｃｅｄｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙｔｈｒｏｕｇｈｔａｒｇｅｔｉｎｇＳｉｒｔ１［Ｊ］．ＪＰｈａｒｍＰｈａｒｍａｃｏｌ，２０１９，７１（７）：１１４２１１５１．（２０２０－０７－１７收稿　责任编辑：王明）