2024年3月20日发(作者：牢芷若)
以剂量依赖方式抑制细胞增殖和诱导凋亡川。可见它也是一种潜在的抗肿瘤药
物。
肝癌在世界范围内癌症发病人群中占据着重要的一席，且死亡率较高，作为
一个危害着人们健康和生命的杀手，研究肝癌的治疗方法有着重要意义，而蛋白
酶体抑制剂正是近几年来众多抗肿瘤研究中的一颗闪亮新星。在第一部分的实验
中我们将蛋白酶体抑制剂ＭＧ－１３２作用于人肝癌７７２１细胞，观察其细胞生长和
凋亡的情况。
５
材料和方法
１、材料
１．Ｉ细胞
ＳＭＭＣ７７２１人肝癌细胞系，由上海第二军医大学病理解剖教研室建株。
１．２试剂
（１）ＲＰＭＩ１６４０培养基为ＧＩＢＣＯ公司产品。
（２）小牛血清为Ｈｙｅｌｏｎｅ公司产品。
（３）蛋白酶体抑制剂ＭＧ－１３２购自ｓｉｇｍａ公司。
（４）多聚甲醛（Ｐａｒａｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ）为Ｍｅｒｃｋ公司产品，上海西巴斯生物公司分
装。
（５）４％多聚甲醛固定液：称取４９多聚甲醛溶于８０ｍｌ
ＰＢＳ缓冲液中，６０。ｃ水
浴中充分溶解后，去除杂质后，用ｌＭ的ＮａＯＨ调整ＰＨ值至８．３，用ＰＢＳ补
足到１００１Ｉｌｌ。
１．３主要实验仪器
低温离心机：日本产Ｈｅｔｔｉｅｈ
荧光显微镜：０ｎ‘ＭＰＵＳ
流式细胞仪：美国ＢＤ公司ＦａｓＣａｌｉｂｕｒ流式细胞仪
２．方法
２．１细胞培养及加药处理
２．１．１细胞培养
ＳＭＭＣ．７７２１细胞培养于含１０％小牛血清、１００ｕ／ｍｌ青霉素和ｌＯＯｕ／ｍｌ链霉素
的ＲＰＭＩ１６４０培养液中。３７。ｃ，５％Ｃ０２。
２．１．２
ＭＧ－１３２处理细胞的制备
取指数生长期的细胞，分别加入蛋白酶体抑制剂ＭＧ一１３２（ＤＭＳｏ）至终浓
度２ｕｍｏｌ／Ｌ、５ｕｍｏｌ／Ｌ和１０｜Ｉｔｏｏｌ／Ｌ，标准条件孵育至预定时间收集细胞。
２．２倒置显微镜下直接观察药物对细胞形态学特征的影响
Ｍ１”ｔｒ法测细胞增殖率
５％ｃ０２孵箱中培养。
２．待细胞长至５０％左右，分别加入ＭＧ－１３２（ＤＭｓｏ）至终浓度２
ｌｌ
２．３
１．取指数生长期细胞２ｘ１０４／ｍｌ接种在９６孔板内，每孔２００ｕ
ｌ置于３７＂Ｃ，
ｍｏｌ／Ｌ、５
６
2024年3月20日发(作者：牢芷若)
以剂量依赖方式抑制细胞增殖和诱导凋亡川。可见它也是一种潜在的抗肿瘤药
物。
肝癌在世界范围内癌症发病人群中占据着重要的一席，且死亡率较高，作为
一个危害着人们健康和生命的杀手，研究肝癌的治疗方法有着重要意义，而蛋白
酶体抑制剂正是近几年来众多抗肿瘤研究中的一颗闪亮新星。在第一部分的实验
中我们将蛋白酶体抑制剂ＭＧ－１３２作用于人肝癌７７２１细胞，观察其细胞生长和
凋亡的情况。
５
材料和方法
１、材料
１．Ｉ细胞
ＳＭＭＣ７７２１人肝癌细胞系，由上海第二军医大学病理解剖教研室建株。
１．２试剂
（１）ＲＰＭＩ１６４０培养基为ＧＩＢＣＯ公司产品。
（２）小牛血清为Ｈｙｅｌｏｎｅ公司产品。
（３）蛋白酶体抑制剂ＭＧ－１３２购自ｓｉｇｍａ公司。
（４）多聚甲醛（Ｐａｒａｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ）为Ｍｅｒｃｋ公司产品，上海西巴斯生物公司分
装。
（５）４％多聚甲醛固定液：称取４９多聚甲醛溶于８０ｍｌ
ＰＢＳ缓冲液中，６０。ｃ水
浴中充分溶解后，去除杂质后，用ｌＭ的ＮａＯＨ调整ＰＨ值至８．３，用ＰＢＳ补
足到１００１Ｉｌｌ。
１．３主要实验仪器
低温离心机：日本产Ｈｅｔｔｉｅｈ
荧光显微镜：０ｎ‘ＭＰＵＳ
流式细胞仪：美国ＢＤ公司ＦａｓＣａｌｉｂｕｒ流式细胞仪
２．方法
２．１细胞培养及加药处理
２．１．１细胞培养
ＳＭＭＣ．７７２１细胞培养于含１０％小牛血清、１００ｕ／ｍｌ青霉素和ｌＯＯｕ／ｍｌ链霉素
的ＲＰＭＩ１６４０培养液中。３７。ｃ，５％Ｃ０２。
２．１．２
ＭＧ－１３２处理细胞的制备
取指数生长期的细胞，分别加入蛋白酶体抑制剂ＭＧ一１３２（ＤＭＳｏ）至终浓
度２ｕｍｏｌ／Ｌ、５ｕｍｏｌ／Ｌ和１０｜Ｉｔｏｏｌ／Ｌ，标准条件孵育至预定时间收集细胞。
２．２倒置显微镜下直接观察药物对细胞形态学特征的影响
Ｍ１”ｔｒ法测细胞增殖率
５％ｃ０２孵箱中培养。
２．待细胞长至５０％左右，分别加入ＭＧ－１３２（ＤＭｓｏ）至终浓度２
ｌｌ
２．３
１．取指数生长期细胞２ｘ１０４／ｍｌ接种在９６孔板内，每孔２００ｕ
ｌ置于３７＂Ｃ，
ｍｏｌ／Ｌ、５
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