2024年3月27日发(作者：迮以南)
实验一
急性毒性试验（改进寇氏法）
一、目的与要求
1、学习急性毒性试验的方法，掌握LD50的测定方法。
2、观察马钱子的毒性反应。
二、实验原理
急性毒性试验是指受试动物在一次大剂量给药后所产生的毒性反
应和死亡情况。药物毒性的大小，常用动物的致死量来表示，因为动物
生与死的生理指标较其他指标明显、客观、容易掌握。致死量的测定也
较准确。在测定致死量的同时，还应仔细观察动物是否出现耸毛、倦卧、
耳壳苍白或充血、突眼、步履蹒跚、肌肉瘫痪、呼吸困难、昏迷、惊厥、
大小便失禁等不良反应。
致死量的测定常以半数致死量为标准。半数致死量是指能够引起试
验动物一半死亡的剂量，妈药物致死量对数值，用符号LD50表示。由
于LD50的测定较简便、可靠，而且稳定，现已成为标志动物急性中毒
程度的重要常数。LD50测定的方法有多种，如Bliss法、改进寇氏法、
简化机率单位法、累积插值法、机率单位-加权直线加归法等等。以上
方法虽各有特点，但都有共同的要求：
（1）动物：均选用体重17～22克健康小鼠（同次试验体重相差不
得超过4克），或选用体重120～150克（同次试验体重相差不得超过1
0克）健康大鼠作实验动物。性别相同或雌雄各半。
1 / 4
（2）给药途径：要求采用两种给药途径，其中必须有一种与临床
所采用的相同。溶于水的药物沿须测定静脉注射的LD50。值得提出的是，
临床上虽然不用腹腔注射，但动物实验因腹腔注射给药方便，吸收迅速，
颇为常用。若供试药物在腹腔内不引起强烈刺激或局部变化（如纤维性
病变等），那么啮齿类动物腹腔注射的LD50，参数很接近于静脉给药的
LD50。口服制剂无法通过注射给药途径时，可只用胃肠给药。
(3)试验周期和观察指标：给药后至少观察7天。观察期间应逐日
记录动物的毒性反应情况和死亡动物的分布。
（4）正式试验前，均须先用少量动物进行预试试验，大致测出受
试药物引起0%和100%死亡率的致死量范围，然后安排正式试验。正式
试验组数不得少于三个剂量组，一般选用4～5个剂量组，每组动物数
为10～20只。
（5）报告LD50时需注明实验动物的种属及品系、性别、体重范围、
给药途径及每个剂量组动物数等，还需注明受试药物的配制方法、给药
剂量、各组剂量间的比值（一般以0.65～0.85为宜）、给药容积、观
察时间及计算方法。还须标出LD50的95%可信限。
三、实验材料和试剂
动物：小鼠
药品：马钱子水煎液
器材：注射器、灌胃针头、鼠笼
四、操作方法
2 / 4
1、预试实验：预试实验目的是为了找出引起动物0%（Dn）和100%
（Dm）死亡的剂量，以便安排正式实验。预试实验一般采用少量动物（6～
9只小鼠）进行，将动物随机分为3组，组间剂量比值一般以1：0.5
或1：0.7为宜。灌服或腹腔注射量以0.2ml/10g体重为度。预试实验
应进行到找出Dn和Dm后方可安排正式实验。
2、正式实验：在预试实验测得Dn和Dm的剂量范围内设4～6个剂
量组，最多10组。最理想的结果是使LD50的上下各有2～3组。组数
愈少，准确性愈差。各剂量组的动物要求相等，至少10只动物（分组
时应注意分层随机均匀化的原则）。本实验要求最大反应率为100%，最
小反应率为0%， 或至少反应率接近100%或0%。组间剂量比值（1：K），
常用1：0.8或1：0.75。如实验中出现相邻剂量有重复的100%和0%反
应率时，应将靠边的组弃去不计，使大剂量组只有一个100%的反应率，
小剂量组也只有一个0%的反应率。
分组完毕和各组剂量算出后，分组灌服或注射不同剂量的受试药
物。为能得到理想的结果，实验最好从中间剂量开始，以便从最初几个
剂量组动物接受药物后的反应来判断两端剂量是否合适，便于调整剂量
和组数。为了提高实验的精确度和节省药物，受试药物可按“低比稀释
法”配置。即使每只动物的用药体积相等（0.2ml/10g），而溶质不等。
给药后逐日观察并记录中毒反应、死亡率和死亡情况。
五、实验结果记录与计算
3 / 4
马钱子水煎液对小鼠死亡率的影响
组别 剂量
g/kg(d)
1
2
3
4
Logd(X) 死亡数 死亡率（P） P
2
P-P
2
公式1: （logLD
50
） X
50
=Xm-i(ΣP-05)
则LD
50=
log
-1
X
50
公式2： Sx
50
=i*
(
p
p2)/(n1)
公式3：LD
50
的95%可信限=lg
-1
（X
50
±1.96S
X50
）
LD
50
的平均可信限= LD
50
±（LD
50高限-
LD
50低限
）/2
Xm：最大剂量组剂量的对数值
i：相邻两组剂量（d）对数值之差，或相邻两组高剂量与低剂量之比的对数。
P：各组动物的死亡率，用小数表示。
ΣP：为各组动物死亡率的总和。
n：每组动物数。
Sx
50
：logLD
50
的标准误。
4 / 4
2024年3月27日发(作者：迮以南)
实验一
急性毒性试验（改进寇氏法）
一、目的与要求
1、学习急性毒性试验的方法，掌握LD50的测定方法。
2、观察马钱子的毒性反应。
二、实验原理
急性毒性试验是指受试动物在一次大剂量给药后所产生的毒性反
应和死亡情况。药物毒性的大小，常用动物的致死量来表示，因为动物
生与死的生理指标较其他指标明显、客观、容易掌握。致死量的测定也
较准确。在测定致死量的同时，还应仔细观察动物是否出现耸毛、倦卧、
耳壳苍白或充血、突眼、步履蹒跚、肌肉瘫痪、呼吸困难、昏迷、惊厥、
大小便失禁等不良反应。
致死量的测定常以半数致死量为标准。半数致死量是指能够引起试
验动物一半死亡的剂量，妈药物致死量对数值，用符号LD50表示。由
于LD50的测定较简便、可靠，而且稳定，现已成为标志动物急性中毒
程度的重要常数。LD50测定的方法有多种，如Bliss法、改进寇氏法、
简化机率单位法、累积插值法、机率单位-加权直线加归法等等。以上
方法虽各有特点，但都有共同的要求：
（1）动物：均选用体重17～22克健康小鼠（同次试验体重相差不
得超过4克），或选用体重120～150克（同次试验体重相差不得超过1
0克）健康大鼠作实验动物。性别相同或雌雄各半。
1 / 4
（2）给药途径：要求采用两种给药途径，其中必须有一种与临床
所采用的相同。溶于水的药物沿须测定静脉注射的LD50。值得提出的是，
临床上虽然不用腹腔注射，但动物实验因腹腔注射给药方便，吸收迅速，
颇为常用。若供试药物在腹腔内不引起强烈刺激或局部变化（如纤维性
病变等），那么啮齿类动物腹腔注射的LD50，参数很接近于静脉给药的
LD50。口服制剂无法通过注射给药途径时，可只用胃肠给药。
(3)试验周期和观察指标：给药后至少观察7天。观察期间应逐日
记录动物的毒性反应情况和死亡动物的分布。
（4）正式试验前，均须先用少量动物进行预试试验，大致测出受
试药物引起0%和100%死亡率的致死量范围，然后安排正式试验。正式
试验组数不得少于三个剂量组，一般选用4～5个剂量组，每组动物数
为10～20只。
（5）报告LD50时需注明实验动物的种属及品系、性别、体重范围、
给药途径及每个剂量组动物数等，还需注明受试药物的配制方法、给药
剂量、各组剂量间的比值（一般以0.65～0.85为宜）、给药容积、观
察时间及计算方法。还须标出LD50的95%可信限。
三、实验材料和试剂
动物：小鼠
药品：马钱子水煎液
器材：注射器、灌胃针头、鼠笼
四、操作方法
2 / 4
1、预试实验：预试实验目的是为了找出引起动物0%（Dn）和100%
（Dm）死亡的剂量，以便安排正式实验。预试实验一般采用少量动物（6～
9只小鼠）进行，将动物随机分为3组，组间剂量比值一般以1：0.5
或1：0.7为宜。灌服或腹腔注射量以0.2ml/10g体重为度。预试实验
应进行到找出Dn和Dm后方可安排正式实验。
2、正式实验：在预试实验测得Dn和Dm的剂量范围内设4～6个剂
量组，最多10组。最理想的结果是使LD50的上下各有2～3组。组数
愈少，准确性愈差。各剂量组的动物要求相等，至少10只动物（分组
时应注意分层随机均匀化的原则）。本实验要求最大反应率为100%，最
小反应率为0%， 或至少反应率接近100%或0%。组间剂量比值（1：K），
常用1：0.8或1：0.75。如实验中出现相邻剂量有重复的100%和0%反
应率时，应将靠边的组弃去不计，使大剂量组只有一个100%的反应率，
小剂量组也只有一个0%的反应率。
分组完毕和各组剂量算出后，分组灌服或注射不同剂量的受试药
物。为能得到理想的结果，实验最好从中间剂量开始，以便从最初几个
剂量组动物接受药物后的反应来判断两端剂量是否合适，便于调整剂量
和组数。为了提高实验的精确度和节省药物，受试药物可按“低比稀释
法”配置。即使每只动物的用药体积相等（0.2ml/10g），而溶质不等。
给药后逐日观察并记录中毒反应、死亡率和死亡情况。
五、实验结果记录与计算
3 / 4
马钱子水煎液对小鼠死亡率的影响
组别 剂量
g/kg(d)
1
2
3
4
Logd(X) 死亡数 死亡率（P） P
2
P-P
2
公式1: （logLD
50
） X
50
=Xm-i(ΣP-05)
则LD
50=
log
-1
X
50
公式2： Sx
50
=i*
(
p
p2)/(n1)
公式3：LD
50
的95%可信限=lg
-1
（X
50
±1.96S
X50
）
LD
50
的平均可信限= LD
50
±（LD
50高限-
LD
50低限
）/2
Xm：最大剂量组剂量的对数值
i：相邻两组剂量（d）对数值之差，或相邻两组高剂量与低剂量之比的对数。
P：各组动物的死亡率，用小数表示。
ΣP：为各组动物死亡率的总和。
n：每组动物数。
Sx
50
：logLD
50
的标准误。
4 / 4