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PinX1在食管鳞状细胞癌中的表达及其与临床病理特征的关系

IT圈 admin 44浏览 0评论

2024年3月29日发(作者:信晓枫)

PinX1

在食管鳞状细胞癌中的表达及其与临床病理特征的关系

左静

王大虎

目的

张祥宏

1

刘淑霞刘亮

河北医科大学第四医院肿瘤内科

河北石家庄

050014)

探讨

Pin2/TRF1

结合蛋白

X1(PinX1)

与食管癌发生发展及与临床病理特征的关系

方法采用半定量反转录聚合酶链反应

PinX1(RT-PCR)

和流式细胞术方法

(FCM)

检测

50

例原发性食管癌患者的癌组织及食管切缘正常黏膜

距离癌

5cm

以上

PinX1

的表达

结果

(P<0.05),

但与患者年龄

性别无关

(P>0.05)。

结论

判定癌分化程度

浸润转移和判定预后的分子标志物

关键词

食管鳞状细胞癌

;Pin2/TRF1

结合蛋白

X1

基因

;RT-PCR;

流式细胞术

中图分类号

〕R735.1〔

文献标识码

〕A

mRNA

和蛋白在食管癌组织中表达显著低于食管正常组织

(P<0.01)。

且在食管癌中的表达与癌细胞分化程度

浸润深度及淋巴结转移呈负相关

PinX1

作为一种潜在的抑癌基因

其表达下调可能参与了食管鳞状细胞癌的发生和发展

文章编号

〕1005-9202(2012)02-0259-02;doi:10.3969/.1005-9202.2012.02.017

食管癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一

发病率在世界

范围内居恶性肿瘤的第

6

大量研究表明食管癌的形成和

转移是多步骤

多阶段的级联式反应过程

涉及癌细胞与宿主

细胞间的一系列相互作用

涉及某些基因的异常表达

并受多

种细胞因子的影响和调控

。PinX1

基因近年来被认为是一种潜

在的抑癌基因

其表达可能与多种肿瘤的发生发展有关

实验证实在胃癌

〔2〕

〔1〕

PCR

酶混合物

赛百盛生物工程公司

引物

上海生工生物工程

公司

;Trizol

试剂

美国

GibcoBRL

公司

;PCR

自动扩增仪

德国

EPPendorf

公司

流式细胞仪

美国

BeckmanCoulter

公司

PinX1

抗体

北京中杉金桥生物技术有限公司

1.3

1.3.1

方法

RT-PCR

法检测不同食管组织

PinX1

mRNA

表达

大肠癌

〔3〕

及白血病

〔4〕

患者中

PinX1

表达明

〔6〕

。PinX1

上游

PCR

采用两步法以

Trizol

试剂提取

RNA。RT-

显下降

但是也有研究显示

PinX1

在肝癌细胞中的表达与正常

组织无显著差异

〔5〕

3',

下游引物

5'-

引物

5'-GGGTGGTCTAAAGGAAAGGGTT-

CGCCCTCGGGAGTCTTCTTAC-3'

扩增片段

1004bp;GAPDH

CTCAGACACCATGGGGAAGGTGA-3'

下游引物

5'-

游引物

5'-

ATGATCTTGAGGCTGTTGTCATA-3'

扩增片段

238bp。

扩增条

94℃

变性

30s,55℃

退火

30s,72℃

件为

94℃

预变性

2min

延伸

30s,

30

个循环

最后

72℃

充分延伸

5min。

对扩增产

物进行

2%

琼脂糖电泳

溴化乙锭染色

在凝胶成像分析仪下

proAnalyzer3.1

软件分析扩增产物的光密度成像

Gel-

(OD),

计算

PinX1OD

值与

GAPDHOD

值的比值

PinX1

mRNA

表达强度进行光密度半定量分析

1.3.2

流式细胞术检测

PinX1

蛋白首先制备实体组织单细

6

胞悬液

然后取单细胞悬液

0.1ml(

1×10

个细胞

),

进行

。PinX1

基因的作用越来越引起人们的重

PinX1

基因在食管癌中的表达及生物学意视

但到目前为止

PCR

和流式义

作用机制等国内外鲜有报道

本研究采用

RT-

细胞术方法检测

PinX1

在人食管癌及正常食管组织中的表达

探讨

PinX1

与食管癌发生发展及与食管癌临床分期

病理分型

及预后的相关性

1

1.1

材料与方法

材料收集河北医科大学第四医院

2009

1

月至

2010

11

月食管癌手术切除标本

所有患者术前未接受过化疗和

放疗

每例标本分别取癌组织及手术切缘正常食管黏膜

距癌

边缘

5cm

以上

)。

术中立刻取新鲜食管癌组织及手术切缘正

常食管组织保存在液氮和

4%

多聚甲醛溶液中

分别用于

RT-

PCR

和流式细胞术检测

所有标本临床病理资料完整

全部经

病理检查确诊

包括

50

例食管鳞状细胞癌

中分化鳞癌

39

低分化鳞癌

11

侵及纤维膜

34

未达到纤维膜

16

有淋巴结转移

17

无淋巴结转移

33

50

例正常食管黏

膜组织

。50

例患者中男

35

15

年龄

38~83

平均

年龄

(58.38±6.70)

中位年龄

58.5

其中≤

60

30

>60

20

1.2

主要试剂及仪器

RT

试剂盒

美国

Promega

公司

A3500;

PinX1

蛋白的免疫荧光标记

在对免疫荧光标记物测定时

别设

PBS

代替一抗和二抗的阴性对照

以及只加一抗或二抗的

同型对照

最后进行流式细胞仪检测

。FCM

检测

PinX1

蛋白

表达量以平均荧光强度表示

1.4

统计学处理采用

SPSS11.5

统计学软件完成统计学处

检测数据以

x±s

表示

组间比较采用方差分析

进一步两

两比较采用

LSD

相关分析采用

Pearson

相关分析

2

2.1

结果

PinX1mRNA

在不同食管组织中的表达

RT-PCR

结果

PinX1mRNA

在食管癌中的表达量为

(0.35±0.11),

显示

在正

1

河北医科大学基础医学院病理学教研室

病因

病理学研究

第一作者

),

(1978-

主治医师

硕士

主要从事消化道肿瘤研

PinX1mRNA

在食管癌常食管组织中表达量为

(0.85±0.13),

中的表达显著低于正常食管组织

(P<0.01)。

见图

1。

2.2PinX1

蛋白在不同食管组织中的表达

PinX1

蛋白在正

常食管和食管癌组织中的表达量

(FI)

分别为

(479.21±12.13)

(401.79±15.12),

表明

PinX1

蛋白在食管癌组织中表达显

),

通讯作者

张祥宏

(1957-

教授

博士

博士生导师

主要从事肿瘤

·260·

著低于食管正常组织

(P<0.01)。

2.3

食管癌组织中

PinX1mRNA

和蛋白表达与临床病理特征

的关系

PinX1mRNA

和蛋白的表达与年龄

性别

细胞分化程

浸润深度

淋巴结转移等临床病理特征的关系见表

1,PinX1

表达量在低分化者

浸润深度达到纤维膜者

有淋巴结转移者

显著低于中高分化者

浸润深度未达到纤维膜者

无淋巴结转

移者

P<0.05)。

但是年龄

<60

岁与年龄≥

60

岁的食管癌

组织相比

PinX1

表达水平无显著性差异

P>0.05)。

M:

标准分子量

;1:

食管正常黏膜

;2:

癌组织

1RT-PCR

检测不同食管病变中

PinX1mRNA

的表达

1PinX1

在食管癌中的表达与

不同临床参数之间的关系

(x±s)

临床参数

nPinX1mRNAP

PinX1

蛋白

P

年龄

<60300.71±0.16445.88±22.13

60200.69±0.130.58443.38±23.950.63

性别

350.69±0.15442.70±22.57

150.73±0.130.21449.39±23.180.23

组织学分级

高分化

390.68±0.15441.04±22.02

低分化

110.76±0.120.03455.33±22.220.01

浸润深度

达到纤维膜

340.72±0.13448.80±22.76

未达纤维膜

160.65±0.170.04436.45±21.020.02

淋巴结转移

170.76±0.16453.91±19.78

330.67±0.130.01440.14±23.040.01

3

讨论

抑癌基因控制正常细胞的增殖

其丢失与失活跟肿瘤发生

发展有密切关系

随着分子生物技术的发展

新的肿瘤相关基

因又在不断被发现

抑癌基因

PinX1

在人细胞中是单基因

位于染色体

8p23———

一个在多种人类肿瘤中发生高频杂合缺

中国老年学杂志

2012

1

月第

32

(LOH)

的区域

〔7〕

而该段染色体缺失引起很多肿瘤诸如肺

乳腺癌

头颈部肿瘤和泌尿系肿瘤

〔8~10〕

国外有研究表明

PinX1

的高度同源性基因

LPTS

基因在肝癌中表达明显下

〔11〕

。PinX1

基因在人类多种肿瘤表达异常提示其可能在肿

瘤的发生发展中有重要作用

国内外至今未见食管癌中

PinX1

基因表达情况的研究

本研究发现在食管癌组织中

PinX1

达要低于正常组织

。PinX1

基因表达减少表明

PinX1

可能是由

正常细胞到癌变过程中一种重要的调控因子

我们研究表明

PinX1

表达在食管癌患者中与年龄

性别无关

但和食管癌临床

分期和病理分级呈明显负相关

临床分期和病理分级越高

PinX1

表达越低

提示

PinX1

在某种程度上可以作为一种判断

肿瘤细胞分化程度的指标

根据

PinX1

表达情况判断食管癌恶

性程度

为临床判断预后提供帮助

同时

调控

PinX1

在肿瘤

细胞的表达

有可能为食管癌治疗提供新的思路

4

参考文献

1CaiMY,ZhangB,sedexpressionofPinX1proteiniscor-

relatedwithtumordevelopmentandisanewindependentpoorprognostic

factorinovariancarcinoma〔J〕.CancerSci,2010;101(6):1543-9.

2WangHB,WangWQ,1genetransfectionenhancesthe

sensitivityofgastriccarcinomacelllineto5-fluorouracil〔J〕.Hepatogas-

troenterology,2011;58(106):682-6.

3

付强

朱理玮

王鹏志

.

内源性端粒酶抑制基因在大肠癌中的表

达及临床研究

〔J〕.

中华普通外科杂志

,2004;19(3):157-9.

4

孙洁

谭亚敏

黄河

.

白血病细胞中端粒酶抑制因子

PinX1

的表达与端粒酶活性关系的研究

〔J〕.

中国病理生理杂志

,2006;22

(9):1725-8.

5MaY,WuL,relationofgeneticinstabilityofPINX1gene

toclinico-pathologicalfeaturesofgastriccancerintheChinesepopulation

〔J〕.JCancerResClinOncol,2009;135(3):431-7.

6DoyleLa,YangW,drugresistancetransporterfrom

humanMCF-7breastcancercells〔J〕.ProcNatlAcadSciUSA,1998;95

(26):15665-70.

7KondoT,OueN,heterozygosityandhistonehypoacety-

lationofthePINX1geneareassociatedwithreducedexpressioningastric

carcinoma〔J〕.Oncogene,2005;24(1):157-64.

8BockmuhlU,IshwadCS,ationof8p23deletionswith

poorsurvivalinheadandneckcancer〔J〕.OtolaryngolHeadNeckSurg,

2001;124(4):451-5.

9EmiM,FujiwaraY,ntlossofheterozygosityforloca-

tionchromosome8pinhepatocellularcarcinoma,colorectalcancer,and

lungcancer〔J〕.CancerRes,1998;52(121):5368-72.

10MuscheckM,SukosdF,nsitydeletionmappingofblad-

dercancerlocalizestheputativetumorsuppressorgenebetweenloci

D8s504and8s264atchromosome8p23.3〔J〕.LabInvest,2000;80

(10):1089-93.

11LiaoC,ZhaoMJ,-expressionofLPTS-Linhepatocellular

carcinomacelllineSMMC-7721inducescrisis〔J〕.WorldJGastroen-

terol,2002;8(6):1050-2.

〔2010-12-31

收稿

2011-05-19

修回

编辑曹梦园

2024年3月29日发(作者:信晓枫)

PinX1

在食管鳞状细胞癌中的表达及其与临床病理特征的关系

左静

王大虎

目的

张祥宏

1

刘淑霞刘亮

河北医科大学第四医院肿瘤内科

河北石家庄

050014)

探讨

Pin2/TRF1

结合蛋白

X1(PinX1)

与食管癌发生发展及与临床病理特征的关系

方法采用半定量反转录聚合酶链反应

PinX1(RT-PCR)

和流式细胞术方法

(FCM)

检测

50

例原发性食管癌患者的癌组织及食管切缘正常黏膜

距离癌

5cm

以上

PinX1

的表达

结果

(P<0.05),

但与患者年龄

性别无关

(P>0.05)。

结论

判定癌分化程度

浸润转移和判定预后的分子标志物

关键词

食管鳞状细胞癌

;Pin2/TRF1

结合蛋白

X1

基因

;RT-PCR;

流式细胞术

中图分类号

〕R735.1〔

文献标识码

〕A

mRNA

和蛋白在食管癌组织中表达显著低于食管正常组织

(P<0.01)。

且在食管癌中的表达与癌细胞分化程度

浸润深度及淋巴结转移呈负相关

PinX1

作为一种潜在的抑癌基因

其表达下调可能参与了食管鳞状细胞癌的发生和发展

文章编号

〕1005-9202(2012)02-0259-02;doi:10.3969/.1005-9202.2012.02.017

食管癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一

发病率在世界

范围内居恶性肿瘤的第

6

大量研究表明食管癌的形成和

转移是多步骤

多阶段的级联式反应过程

涉及癌细胞与宿主

细胞间的一系列相互作用

涉及某些基因的异常表达

并受多

种细胞因子的影响和调控

。PinX1

基因近年来被认为是一种潜

在的抑癌基因

其表达可能与多种肿瘤的发生发展有关

实验证实在胃癌

〔2〕

〔1〕

PCR

酶混合物

赛百盛生物工程公司

引物

上海生工生物工程

公司

;Trizol

试剂

美国

GibcoBRL

公司

;PCR

自动扩增仪

德国

EPPendorf

公司

流式细胞仪

美国

BeckmanCoulter

公司

PinX1

抗体

北京中杉金桥生物技术有限公司

1.3

1.3.1

方法

RT-PCR

法检测不同食管组织

PinX1

mRNA

表达

大肠癌

〔3〕

及白血病

〔4〕

患者中

PinX1

表达明

〔6〕

。PinX1

上游

PCR

采用两步法以

Trizol

试剂提取

RNA。RT-

显下降

但是也有研究显示

PinX1

在肝癌细胞中的表达与正常

组织无显著差异

〔5〕

3',

下游引物

5'-

引物

5'-GGGTGGTCTAAAGGAAAGGGTT-

CGCCCTCGGGAGTCTTCTTAC-3'

扩增片段

1004bp;GAPDH

CTCAGACACCATGGGGAAGGTGA-3'

下游引物

5'-

游引物

5'-

ATGATCTTGAGGCTGTTGTCATA-3'

扩增片段

238bp。

扩增条

94℃

变性

30s,55℃

退火

30s,72℃

件为

94℃

预变性

2min

延伸

30s,

30

个循环

最后

72℃

充分延伸

5min。

对扩增产

物进行

2%

琼脂糖电泳

溴化乙锭染色

在凝胶成像分析仪下

proAnalyzer3.1

软件分析扩增产物的光密度成像

Gel-

(OD),

计算

PinX1OD

值与

GAPDHOD

值的比值

PinX1

mRNA

表达强度进行光密度半定量分析

1.3.2

流式细胞术检测

PinX1

蛋白首先制备实体组织单细

6

胞悬液

然后取单细胞悬液

0.1ml(

1×10

个细胞

),

进行

。PinX1

基因的作用越来越引起人们的重

PinX1

基因在食管癌中的表达及生物学意视

但到目前为止

PCR

和流式义

作用机制等国内外鲜有报道

本研究采用

RT-

细胞术方法检测

PinX1

在人食管癌及正常食管组织中的表达

探讨

PinX1

与食管癌发生发展及与食管癌临床分期

病理分型

及预后的相关性

1

1.1

材料与方法

材料收集河北医科大学第四医院

2009

1

月至

2010

11

月食管癌手术切除标本

所有患者术前未接受过化疗和

放疗

每例标本分别取癌组织及手术切缘正常食管黏膜

距癌

边缘

5cm

以上

)。

术中立刻取新鲜食管癌组织及手术切缘正

常食管组织保存在液氮和

4%

多聚甲醛溶液中

分别用于

RT-

PCR

和流式细胞术检测

所有标本临床病理资料完整

全部经

病理检查确诊

包括

50

例食管鳞状细胞癌

中分化鳞癌

39

低分化鳞癌

11

侵及纤维膜

34

未达到纤维膜

16

有淋巴结转移

17

无淋巴结转移

33

50

例正常食管黏

膜组织

。50

例患者中男

35

15

年龄

38~83

平均

年龄

(58.38±6.70)

中位年龄

58.5

其中≤

60

30

>60

20

1.2

主要试剂及仪器

RT

试剂盒

美国

Promega

公司

A3500;

PinX1

蛋白的免疫荧光标记

在对免疫荧光标记物测定时

别设

PBS

代替一抗和二抗的阴性对照

以及只加一抗或二抗的

同型对照

最后进行流式细胞仪检测

。FCM

检测

PinX1

蛋白

表达量以平均荧光强度表示

1.4

统计学处理采用

SPSS11.5

统计学软件完成统计学处

检测数据以

x±s

表示

组间比较采用方差分析

进一步两

两比较采用

LSD

相关分析采用

Pearson

相关分析

2

2.1

结果

PinX1mRNA

在不同食管组织中的表达

RT-PCR

结果

PinX1mRNA

在食管癌中的表达量为

(0.35±0.11),

显示

在正

1

河北医科大学基础医学院病理学教研室

病因

病理学研究

第一作者

),

(1978-

主治医师

硕士

主要从事消化道肿瘤研

PinX1mRNA

在食管癌常食管组织中表达量为

(0.85±0.13),

中的表达显著低于正常食管组织

(P<0.01)。

见图

1。

2.2PinX1

蛋白在不同食管组织中的表达

PinX1

蛋白在正

常食管和食管癌组织中的表达量

(FI)

分别为

(479.21±12.13)

(401.79±15.12),

表明

PinX1

蛋白在食管癌组织中表达显

),

通讯作者

张祥宏

(1957-

教授

博士

博士生导师

主要从事肿瘤

·260·

著低于食管正常组织

(P<0.01)。

2.3

食管癌组织中

PinX1mRNA

和蛋白表达与临床病理特征

的关系

PinX1mRNA

和蛋白的表达与年龄

性别

细胞分化程

浸润深度

淋巴结转移等临床病理特征的关系见表

1,PinX1

表达量在低分化者

浸润深度达到纤维膜者

有淋巴结转移者

显著低于中高分化者

浸润深度未达到纤维膜者

无淋巴结转

移者

P<0.05)。

但是年龄

<60

岁与年龄≥

60

岁的食管癌

组织相比

PinX1

表达水平无显著性差异

P>0.05)。

M:

标准分子量

;1:

食管正常黏膜

;2:

癌组织

1RT-PCR

检测不同食管病变中

PinX1mRNA

的表达

1PinX1

在食管癌中的表达与

不同临床参数之间的关系

(x±s)

临床参数

nPinX1mRNAP

PinX1

蛋白

P

年龄

<60300.71±0.16445.88±22.13

60200.69±0.130.58443.38±23.950.63

性别

350.69±0.15442.70±22.57

150.73±0.130.21449.39±23.180.23

组织学分级

高分化

390.68±0.15441.04±22.02

低分化

110.76±0.120.03455.33±22.220.01

浸润深度

达到纤维膜

340.72±0.13448.80±22.76

未达纤维膜

160.65±0.170.04436.45±21.020.02

淋巴结转移

170.76±0.16453.91±19.78

330.67±0.130.01440.14±23.040.01

3

讨论

抑癌基因控制正常细胞的增殖

其丢失与失活跟肿瘤发生

发展有密切关系

随着分子生物技术的发展

新的肿瘤相关基

因又在不断被发现

抑癌基因

PinX1

在人细胞中是单基因

位于染色体

8p23———

一个在多种人类肿瘤中发生高频杂合缺

中国老年学杂志

2012

1

月第

32

(LOH)

的区域

〔7〕

而该段染色体缺失引起很多肿瘤诸如肺

乳腺癌

头颈部肿瘤和泌尿系肿瘤

〔8~10〕

国外有研究表明

PinX1

的高度同源性基因

LPTS

基因在肝癌中表达明显下

〔11〕

。PinX1

基因在人类多种肿瘤表达异常提示其可能在肿

瘤的发生发展中有重要作用

国内外至今未见食管癌中

PinX1

基因表达情况的研究

本研究发现在食管癌组织中

PinX1

达要低于正常组织

。PinX1

基因表达减少表明

PinX1

可能是由

正常细胞到癌变过程中一种重要的调控因子

我们研究表明

PinX1

表达在食管癌患者中与年龄

性别无关

但和食管癌临床

分期和病理分级呈明显负相关

临床分期和病理分级越高

PinX1

表达越低

提示

PinX1

在某种程度上可以作为一种判断

肿瘤细胞分化程度的指标

根据

PinX1

表达情况判断食管癌恶

性程度

为临床判断预后提供帮助

同时

调控

PinX1

在肿瘤

细胞的表达

有可能为食管癌治疗提供新的思路

4

参考文献

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〔2010-12-31

收稿

2011-05-19

修回

编辑曹梦园

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