2024年4月17日发(作者：云嘉木)
中国生物制品学杂志2013年5月第26卷第5期ChinJBiologicalsMay2013，Vol.26No.5
·
723
·
·技术方法·
CaptoCore700在流感疫苗中去除
卵清蛋白的应用
马志宇
1
，陈美丽
2
，张萌
2
，刘静
1
，贾重来
2
，罗亮
1
，解红艳
1
thcare生命科学部，北京100176；2.北京天坛生物制品股份有限公司流感科室，北京100024
摘要：目的用新型复合型填料CaptoCore700层析介质纯化鸡胚流感疫苗
，
以降低卵清蛋白的残留水平
。
方法
三部
用CaptoCore700进一步纯化鸡胚培养的不同亚型的流感病毒纯化后原液及超滤浓缩液
，
参考《中国药典
》
血凝素含量及卵清蛋白残留量。
结果卵清蛋白残留量较纯化前降低（2010版）检测纯化前、后样品中总蛋白含量
、
约10倍，血凝素和总蛋白含量基本保持不变
。
结论
白残留量，从而提高产品质量。
关键词：鸡胚流感疫苗；纯化；CaptoCore700；卵清蛋白
中图分类号：R373.1+3O657.7+2文献标识码：A文章编号：1004
鄄
5503（2013）05鄄0723鄄03
CaptoCore700新型填料可有效去除鸡胚流感疫苗中的卵清蛋
ApplicationofCaptoCore700toremovalofovalbuminfrominfluenza
vaccine
MAZhi鄄yu
*
，CHENMei鄄li，ZHANGMeng，LIUJing，JIAChong鄄lai，LUOLiang，XIEHong鄄yan
*
DepartmentofLifeScience，GEHealthcareLifeScience，Beijing100176，China
Correspondingauthor:XIEHong鄄yan，E鄄mail:hong.**************
Abstract：ObjectiveTopurifychickembryo鄄derivedinfluenzavaccinebyusinganovelcompositefillerCaptoCore700
chickembryosafterpurificationandconcentrationbyultrafiltrationwerefurtherpurifiedwithCaptoCore700，andthe
totalprotein，hemagglutininandresidualovalbumincontentsbeforeandafterfurtherpurificationweredetermined
whiletsion
sThebulksofvarioussubtypesofinfluenzaculturedin
residualovalbumincontentbulkofinfluenzavirusdecreasedbyabout10foldsascomparedwiththatbeforepurification，
CaptoCore700removed
accordingtotherequirementsinChinesePharmacopoeia（Volume芋，2010）.ResultsAfterfurtherpurification，the
theresidualovalbumininchickembryo鄄derivedinfluenzavaccineeffectivelyandimprovedthequalityofproduct.
Keywords：Chickembryo鄄derivedinfluenzavaccine;Purification;CaptoCore700;Ovalbumin
新型填料CaptoCore700是一种多模式层析介
质，其以核心微球技术为基础，介质表面是5微米厚
度的凝胶层
，
空间间隙为相对分子质量700000的孔
环绕成球体，球体内部为带有锌氨基配基的正电荷分
子，小于700000的生物分子将在纯化过程中进入到
孔内，带负电荷的杂质会被其吸附，利用病毒分子从
外水体积流出
，
杂质被介质吸附的方式
，
达到去除杂
质的目的
［1］
。
目前国内生产的裂解流感病毒疫苗的卵清蛋白
残留量均比较高。卵清蛋白是一种糖蛋白，鸡的卵
清蛋白相对分子质量约5000~40000，氨基末端为
甘氨酸，羧基末端为脯氨酸，等电点pH约4.7。为
通讯作者：解红艳，E鄄mail:*******************
降低卵清蛋白的残留水平及疫苗副反应，本实验采
用Captocore700的分子筛模式使大病毒分子从凝
胶层表面流出
，
卵清蛋白进入孔内被吸附
，
从而达到
去除卵清蛋白的目的。
1材料与方法
1.1鸡胚流感疫苗经Sepharose4FF介质纯化后
的鸡胚流感病毒（H1N1和H3N2）纯化后原液和鸡
（
H3N2和乙型）胚流感病毒超滤浓缩液均由北京天
坛生物制品股份有限公司提供。
1.2层析柱及层析设备HiScreenCaptoCore700层
析柱（柱体积4.7ml，结构见图1）及AKTApurifier鄄
100层析设备均为GE医疗集团产品。
··
724
中国生物制品学杂志2013年5月第26卷第5期ChinJBiologicalsMay2013，Vol.26No.5
图1CaptoCore结构图
ureofCaptoCore
1.
7.
3缓冲液工作缓冲液：20mmol辕L
合
4；CIP清洗液：1mol辕LNaOH和30%
PBS
的
，
异
pH
丙
7.
醇
2
混
~
1.
液
4
。
流感疫苗的纯化在室温条件下，用工作缓冲
液平衡3~5个柱体积后，将鸡胚流感病毒超滤浓缩
液和纯化液上样，上样体积控制在3~5个柱体积，
流速控制在300cm辕h。收集流穿峰后，经工作缓冲
液洗涤2个柱体积，经CIP清洗液对层析柱进行再
生，
1.5
以
卵
去
清蛋白
除吸附
残留
的杂
量
质
、血
。
凝素及总蛋白含量的检测参
考《中国药典
》三部（
2010版
）
［2］
，分别检测纯化前
、
后样品中总蛋白含量、血凝素含量及卵清蛋白残留量。
2结果
纯化后原液经CaptoCore700层析柱进一步纯
化后，收集流穿峰，第1个穿透峰为H3N2，第2个穿
透峰为H1N1，见图2。超滤浓缩液经CaptoCore700
层析柱纯化后，收集流穿峰，图3A第1个峰为H3N2，
图3B第1个峰为乙型，第2个峰均为杂质峰。纯化
前、后样品的总蛋白含量、血凝素含量及卵清蛋白残
留量检测结果见表1，结果显示超滤浓缩液及纯化
后原液，过柱前后总蛋白和血凝素均保持在同一水
平，无明显损失，而卵清蛋白含量均较进一步纯化前
降低了约10倍。
员缘园园
员园园园
缘园园
0
园圆园源园远园
体积（
愿园
ml）
员园园员圆园员4园员6园
图2鸡胚流感病毒纯化后原液
influenza
Fig2.
virus
Chromatographic
afterpurification
profile
层析图
ofchickembryo鄄derived
表1鸡胚流感纯化后原液及超滤浓缩液中总蛋白含量
、卵清
蛋白残留量及血凝素含量检测结果
rotein，residualovalbuminandhemagglutinin
purification
contentsin
and
bulks
原液
concentration
ofchickembryo
总蛋白
by
卵
ultrafiltration
鄄derivedinfluenzavirusafter
过
H3N2
柱前
纯化后
767.
（
滋
25
g辕ml）清蛋白
161.
（
81
ng辕ml）血凝
425.
素
（
滋
629
g辕ml）
流穿峰629.2311.47399.29
H1N1
过柱前
纯化后原液
890.34288.49440.21
流穿峰812.0169.9438.39
H3N2
过柱前
超滤浓缩液
594149辕
流穿峰49426.24辕
乙型浓缩液
过柱前1551182辕
过柱后125915.98辕
注：辕表示未检测该项目。
员
员
6园园
粤
员
4
员
2
园园
园园园
园园
愿园园
远园园
源园园
圆园园
园
园圆园源园
体积
远园
（
ml）
愿园员园园
月
员缘园园
员园园园
缘园园
0
160180200
体积（
220
ml）
240260
图
A：H3N2
3鸡
；
胚
B：
流
乙
感
型。
病毒超滤浓缩液层析图
tographicprofileofchickembryo鄄derived
influenzavirusafterconcentrationbyultrafiltration
3讨论
rose4FF
目前
凝胶
国内
过
流
滤
感
纯
疫
化。
苗生
传
产
统
工
的
艺
凝胶
大多
过
数采
滤填
用
料
Sepha
上样
鄄
中国生物制品学杂志2013年5月第26卷第5期ChinJBiologicalsMay2013，Vol.26No.5
量控制在5%以内
，
流速控制在100cm辕h以下
，
工
艺时间长；介质装柱需保持在60cm柱高以上，对柱
效要求较高，装柱不易操作。本实验用的Captocore
EV71、狂犬病毒、轮状病毒及重组VLP类大分子病
毒疫苗的生产。
参考文献
［1］
［2］
应用文献指南29鄄0003鄄34AAGEHealthcareLifeSciences.
［
S］
中国
国家食品药品监督管理局援中国药典（
三部）
.北京：
医药科技出版社援
·
725
·
700层析介质采用了凝胶过滤和离子吸附相结合的
模式，上样量可提高到柱体积的10倍，该介质以高
流速琼脂糖为基架，耐压能力更好，上样流速可达
500cm辕h，缩短了工艺时间；由于离子吸附模式的介
入，装柱高度可缩小1~2倍，易于装柱。实验结果
显示，纯化后的卵清蛋白的残留量较未纯化前均降
低了约10倍。该纯化工艺简单、易操作，可较大程
度的提高批间样品通量、缩短工艺时间，而且由于对
工作缓冲液pH值及盐浓度无特殊要求，因此，该介
质可用于工业大规模生产，也可尝试将该填料用于
（收稿日期：2013鄄04鄄19）
（上接第716页）
［7］YangG，XuY，ChenX，1playsanessentialrolein
2007，26（4）:594鄄603.
theantiproliferativeactionofinterferon鄄gamma［J］.Oncogene，
approach［J］.CancerLett，2008，263（2）:243鄄252.
［12］杨怡姝，孙晓娜，王小利，等.实时荧光定量PCR技术的操
作实践［J］.实验室研究与探索
，
2011，30（7）：15鄄19.
［13］RadonicA，ThulkeS，MackayIM，netoreference
geneselectionforquantitativereal鄄timePCR［J］.Boichem
BiophysResCommun，2004，313（4）:856鄄862.
［14］MoriR，WangQ，DanenbergKD，ta鄄actinand
quantitativeRT鄄PCRinhumanFFPEtissuesamplesofprostate
cancer［J］.Prostate，2008，68(14):1555鄄1560.
［15］王玉林，史进方，蔡惠芬，等.内参基因茁鄄actin质粒标准品的
构建［J］.中国组织工程研究与临床康复，2008，12（48）：9501鄄
9504.
GAPDHareusefulreferencegenesfornormalizationof
［8］HatannoH，KudoY，OgawaI，鄄inducedtransmembrane
protein1promotesinvasionatearlystageofheadandneckcancer
progression［J］.ClinCancerRes，2008，14（19）:6097鄄6105.
［9］SeoGS，LeeJK，YuJI，ficationofthepolymorphisms
inIFITM3geneandtheirassociationinaKoreanpopulation
withulcerativecolitis［J］.ExpMolMed，2010，42（2）:99鄄104.
［10］朱桂启，赵阴环，刘美霞，等.系统性红斑狼疮患者干扰素诱导
基因IFITM1，IFITM2和IFITM3表达的研究［J］.中国临床医
师杂志，2011，5（5）：95鄄98.
［11］SeyfriedNT，HuysentruytLC，AtwoodJA3rd，鄄regulation
proteins1and3inmouseastrocytoma:amembraneproteomics
ofNG2proteoglycanandinterferon鄄inducedtransmembrane
（收稿日期：2012鄄10鄄17）
2024年4月17日发(作者：云嘉木)
中国生物制品学杂志2013年5月第26卷第5期ChinJBiologicalsMay2013，Vol.26No.5
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723
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·技术方法·
CaptoCore700在流感疫苗中去除
卵清蛋白的应用
马志宇
1
，陈美丽
2
，张萌
2
，刘静
1
，贾重来
2
，罗亮
1
，解红艳
1
thcare生命科学部，北京100176；2.北京天坛生物制品股份有限公司流感科室，北京100024
摘要：目的用新型复合型填料CaptoCore700层析介质纯化鸡胚流感疫苗
，
以降低卵清蛋白的残留水平
。
方法
三部
用CaptoCore700进一步纯化鸡胚培养的不同亚型的流感病毒纯化后原液及超滤浓缩液
，
参考《中国药典
》
血凝素含量及卵清蛋白残留量。
结果卵清蛋白残留量较纯化前降低（2010版）检测纯化前、后样品中总蛋白含量
、
约10倍，血凝素和总蛋白含量基本保持不变
。
结论
白残留量，从而提高产品质量。
关键词：鸡胚流感疫苗；纯化；CaptoCore700；卵清蛋白
中图分类号：R373.1+3O657.7+2文献标识码：A文章编号：1004
鄄
5503（2013）05鄄0723鄄03
CaptoCore700新型填料可有效去除鸡胚流感疫苗中的卵清蛋
ApplicationofCaptoCore700toremovalofovalbuminfrominfluenza
vaccine
MAZhi鄄yu
*
，CHENMei鄄li，ZHANGMeng，LIUJing，JIAChong鄄lai，LUOLiang，XIEHong鄄yan
*
DepartmentofLifeScience，GEHealthcareLifeScience，Beijing100176，China
Correspondingauthor:XIEHong鄄yan，E鄄mail:hong.**************
Abstract：ObjectiveTopurifychickembryo鄄derivedinfluenzavaccinebyusinganovelcompositefillerCaptoCore700
chickembryosafterpurificationandconcentrationbyultrafiltrationwerefurtherpurifiedwithCaptoCore700，andthe
totalprotein，hemagglutininandresidualovalbumincontentsbeforeandafterfurtherpurificationweredetermined
whiletsion
sThebulksofvarioussubtypesofinfluenzaculturedin
residualovalbumincontentbulkofinfluenzavirusdecreasedbyabout10foldsascomparedwiththatbeforepurification，
CaptoCore700removed
accordingtotherequirementsinChinesePharmacopoeia（Volume芋，2010）.ResultsAfterfurtherpurification，the
theresidualovalbumininchickembryo鄄derivedinfluenzavaccineeffectivelyandimprovedthequalityofproduct.
Keywords：Chickembryo鄄derivedinfluenzavaccine;Purification;CaptoCore700;Ovalbumin
新型填料CaptoCore700是一种多模式层析介
质，其以核心微球技术为基础，介质表面是5微米厚
度的凝胶层
，
空间间隙为相对分子质量700000的孔
环绕成球体，球体内部为带有锌氨基配基的正电荷分
子，小于700000的生物分子将在纯化过程中进入到
孔内，带负电荷的杂质会被其吸附，利用病毒分子从
外水体积流出
，
杂质被介质吸附的方式
，
达到去除杂
质的目的
［1］
。
目前国内生产的裂解流感病毒疫苗的卵清蛋白
残留量均比较高。卵清蛋白是一种糖蛋白，鸡的卵
清蛋白相对分子质量约5000~40000，氨基末端为
甘氨酸，羧基末端为脯氨酸，等电点pH约4.7。为
通讯作者：解红艳，E鄄mail:*******************
降低卵清蛋白的残留水平及疫苗副反应，本实验采
用Captocore700的分子筛模式使大病毒分子从凝
胶层表面流出
，
卵清蛋白进入孔内被吸附
，
从而达到
去除卵清蛋白的目的。
1材料与方法
1.1鸡胚流感疫苗经Sepharose4FF介质纯化后
的鸡胚流感病毒（H1N1和H3N2）纯化后原液和鸡
（
H3N2和乙型）胚流感病毒超滤浓缩液均由北京天
坛生物制品股份有限公司提供。
1.2层析柱及层析设备HiScreenCaptoCore700层
析柱（柱体积4.7ml，结构见图1）及AKTApurifier鄄
100层析设备均为GE医疗集团产品。
··
724
中国生物制品学杂志2013年5月第26卷第5期ChinJBiologicalsMay2013，Vol.26No.5
图1CaptoCore结构图
ureofCaptoCore
1.
7.
3缓冲液工作缓冲液：20mmol辕L
合
4；CIP清洗液：1mol辕LNaOH和30%
PBS
的
，
异
pH
丙
7.
醇
2
混
~
1.
液
4
。
流感疫苗的纯化在室温条件下，用工作缓冲
液平衡3~5个柱体积后，将鸡胚流感病毒超滤浓缩
液和纯化液上样，上样体积控制在3~5个柱体积，
流速控制在300cm辕h。收集流穿峰后，经工作缓冲
液洗涤2个柱体积，经CIP清洗液对层析柱进行再
生，
1.5
以
卵
去
清蛋白
除吸附
残留
的杂
量
质
、血
。
凝素及总蛋白含量的检测参
考《中国药典
》三部（
2010版
）
［2］
，分别检测纯化前
、
后样品中总蛋白含量、血凝素含量及卵清蛋白残留量。
2结果
纯化后原液经CaptoCore700层析柱进一步纯
化后，收集流穿峰，第1个穿透峰为H3N2，第2个穿
透峰为H1N1，见图2。超滤浓缩液经CaptoCore700
层析柱纯化后，收集流穿峰，图3A第1个峰为H3N2，
图3B第1个峰为乙型，第2个峰均为杂质峰。纯化
前、后样品的总蛋白含量、血凝素含量及卵清蛋白残
留量检测结果见表1，结果显示超滤浓缩液及纯化
后原液，过柱前后总蛋白和血凝素均保持在同一水
平，无明显损失，而卵清蛋白含量均较进一步纯化前
降低了约10倍。
员缘园园
员园园园
缘园园
0
园圆园源园远园
体积（
愿园
ml）
员园园员圆园员4园员6园
图2鸡胚流感病毒纯化后原液
influenza
Fig2.
virus
Chromatographic
afterpurification
profile
层析图
ofchickembryo鄄derived
表1鸡胚流感纯化后原液及超滤浓缩液中总蛋白含量
、卵清
蛋白残留量及血凝素含量检测结果
rotein，residualovalbuminandhemagglutinin
purification
contentsin
and
bulks
原液
concentration
ofchickembryo
总蛋白
by
卵
ultrafiltration
鄄derivedinfluenzavirusafter
过
H3N2
柱前
纯化后
767.
（
滋
25
g辕ml）清蛋白
161.
（
81
ng辕ml）血凝
425.
素
（
滋
629
g辕ml）
流穿峰629.2311.47399.29
H1N1
过柱前
纯化后原液
890.34288.49440.21
流穿峰812.0169.9438.39
H3N2
过柱前
超滤浓缩液
594149辕
流穿峰49426.24辕
乙型浓缩液
过柱前1551182辕
过柱后125915.98辕
注：辕表示未检测该项目。
员
员
6园园
粤
员
4
员
2
园园
园园园
园园
愿园园
远园园
源园园
圆园园
园
园圆园源园
体积
远园
（
ml）
愿园员园园
月
员缘园园
员园园园
缘园园
0
160180200
体积（
220
ml）
240260
图
A：H3N2
3鸡
；
胚
B：
流
乙
感
型。
病毒超滤浓缩液层析图
tographicprofileofchickembryo鄄derived
influenzavirusafterconcentrationbyultrafiltration
3讨论
rose4FF
目前
凝胶
国内
过
流
滤
感
纯
疫
化。
苗生
传
产
统
工
的
艺
凝胶
大多
过
数采
滤填
用
料
Sepha
上样
鄄
中国生物制品学杂志2013年5月第26卷第5期ChinJBiologicalsMay2013，Vol.26No.5
量控制在5%以内
，
流速控制在100cm辕h以下
，
工
艺时间长；介质装柱需保持在60cm柱高以上，对柱
效要求较高，装柱不易操作。本实验用的Captocore
EV71、狂犬病毒、轮状病毒及重组VLP类大分子病
毒疫苗的生产。
参考文献
［1］
［2］
应用文献指南29鄄0003鄄34AAGEHealthcareLifeSciences.
［
S］
中国
国家食品药品监督管理局援中国药典（
三部）
.北京：
医药科技出版社援
·
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700层析介质采用了凝胶过滤和离子吸附相结合的
模式，上样量可提高到柱体积的10倍，该介质以高
流速琼脂糖为基架，耐压能力更好，上样流速可达
500cm辕h，缩短了工艺时间；由于离子吸附模式的介
入，装柱高度可缩小1~2倍，易于装柱。实验结果
显示，纯化后的卵清蛋白的残留量较未纯化前均降
低了约10倍。该纯化工艺简单、易操作，可较大程
度的提高批间样品通量、缩短工艺时间，而且由于对
工作缓冲液pH值及盐浓度无特殊要求，因此，该介
质可用于工业大规模生产，也可尝试将该填料用于
（收稿日期：2013鄄04鄄19）
（上接第716页）
［7］YangG，XuY，ChenX，1playsanessentialrolein
2007，26（4）:594鄄603.
theantiproliferativeactionofinterferon鄄gamma［J］.Oncogene，
approach［J］.CancerLett，2008，263（2）:243鄄252.
［12］杨怡姝，孙晓娜，王小利，等.实时荧光定量PCR技术的操
作实践［J］.实验室研究与探索
，
2011，30（7）：15鄄19.
［13］RadonicA，ThulkeS，MackayIM，netoreference
geneselectionforquantitativereal鄄timePCR［J］.Boichem
BiophysResCommun，2004，313（4）:856鄄862.
［14］MoriR，WangQ，DanenbergKD，ta鄄actinand
quantitativeRT鄄PCRinhumanFFPEtissuesamplesofprostate
cancer［J］.Prostate，2008，68(14):1555鄄1560.
［15］王玉林，史进方，蔡惠芬，等.内参基因茁鄄actin质粒标准品的
构建［J］.中国组织工程研究与临床康复，2008，12（48）：9501鄄
9504.
GAPDHareusefulreferencegenesfornormalizationof
［8］HatannoH，KudoY，OgawaI，鄄inducedtransmembrane
protein1promotesinvasionatearlystageofheadandneckcancer
progression［J］.ClinCancerRes，2008，14（19）:6097鄄6105.
［9］SeoGS，LeeJK，YuJI，ficationofthepolymorphisms
inIFITM3geneandtheirassociationinaKoreanpopulation
withulcerativecolitis［J］.ExpMolMed，2010，42（2）:99鄄104.
［10］朱桂启，赵阴环，刘美霞，等.系统性红斑狼疮患者干扰素诱导
基因IFITM1，IFITM2和IFITM3表达的研究［J］.中国临床医
师杂志，2011，5（5）：95鄄98.
［11］SeyfriedNT，HuysentruytLC，AtwoodJA3rd，鄄regulation
proteins1and3inmouseastrocytoma:amembraneproteomics
ofNG2proteoglycanandinterferon鄄inducedtransmembrane
（收稿日期：2012鄄10鄄17）