西北牧区牧民自制酸奶中c9,t11-CLA含量的研究-USB迷|专注于互联网分享

2024年5月20日发(作者：善子亦)

※分析检测　良品科学　２００８，ＶｏＬ　２９，Ｎｏ．１１　５２１　

西北牧区牧民自制酸奶中ｃ９，ｔ１　１－ＣＬＡ含量　

的研究　

甘伯中，杜宁娟，妥彦峰，杨燕萍，刘兴龙　

（甘肃农业大学食品科学与工程学院，甘肃兰州　７３００７０）　

摘要：共轭亚油酸（ＣＬＡ）是亚油酸的一组几何和位置异构体，具有多种生理功能。反刍动物肉、乳制品是ｃ９，　

ｔｌ　１－ＣＬＡ丰富的天然来源。本研究用气相色谱法测定青海、甘南、天祝和肃北４个不同牧区牧民自制酸奶中ｃ９，ｔｌ　１一　

ＣＬＡ的含量，并与市售酸奶和牦牛乳中的含量进行对比。结果表明：采用该方法使牧区酸奶中ｃ９，ｔｌ１．ＣＬＡ得到　

很好的分离，测得青海、甘南、天祝和肃北牧区酸奶中ｃ９，ｔｌ１．ＣＬＡ的含量分别为１．００７、０．７８２、Ｏ，９８７、１．１９６ｍｇ／　

ｍｌ酸奶；牧区自制酸奶中ｃ９，ｔ１１．ＣＬＡ的含量与市售酸奶中的含量差异不显著（ｐ＞０．０５）：但含量极显著低于牦牛乳　

（ｐ＜Ｏ．０１）。　

关键词：气相色谱；ｃ９，ｔ１　１一ＣＬＡ；自制酸奶；牧区　

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｃ９，ｔｌ　１－ＣＬＡ　ｉｎ　Ｓｅｌｆ－ｍａｄｅ　Ｙｏｇｈｏｕｒｔｓ　ｂｙ　Ｈｅｒｄｓｍｅｎ　ｆｒｏｍ　Ｐａｓｔｏｒａｌ　Ａｒｅａ　

ｉｎＮｏｒｔｈｗｅｓｔＣｈｉｎａ　

ＧＡＮ　Ｂｏ—ｚｈｏｎｇ，ＤＵ　Ｎｉｎｇ－ｊｕａｎ，ＴＵＯ　Ｙａｎ—ｆｅｎｇ，ＹＡＮＧ　Ｙａｎ—ｐｉｎｇ，ＬＩＵ　Ｘｉｎｇ－ｌｏｎｇ　

（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆＦｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｇａｎｓｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ　７３００７０，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ　ｌｉｎｏｌｅｉｃ　ａｃｉｄ（ＣＬＡ）ｉｓ　ａ　ｃｌａｓｓ　ｏｆｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ　ｎｄ　ａｇｅｏｍｅｔｒｉｃ　ｉｓｏｍｅｒｓ　ｏｆｌｉｎｏｌｅｉｃ　ａｃｉｄ，ｗｈｉｃｈ　ｐｏｓｓｅｓｓｅｓ　ｖａｒｉｅｔｙ　

ｏｆｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．Ｔｈｅ　ａｂｕｎｄａｎｔ　ｃｒｕｄｅ　ｓｏｕｒｃｅ　ｏｆｃ９，ｔｌ　１－ＣＬＡ　ｉｓ　ｄａｉｒｙ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ａｎｄ　ｍｅａｔ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｏｆｒｕｍｉｎａｎｔｓ．Ｔｈｅ　ｃ９，　

ｔｌ　１－ＣＬＡ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｉｎ　ｓｅｌ￣ｍａｄｅ　ｙｏｇｈｏｕｒｔｓ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｈｅｒｄｓｍｅｎ　ｆｒｏｍ　Ｑｉｎｇｈａｉ，Ｇａｎｎａｎ，Ｔｉａｎｚｈｕ　ａｎｄ　Ｓｕｂｅｉ　ｐａｓｔｏｒａｌ　ａｒｅａｓ　ｗｅｒｅ　

ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ａｎｄ　ｔｈｅｙ　ｗｅｒｅ　ｃｏｍｐｅｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｓａｌｅｄ　ｙｏｇｈｏｕｒｔ　ｎｄ　ａｙａｋ　ｍｉｌｋ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　

ｔｈａｔｃ９，ｔｌ１－ＣＬＡｉｓ　ｓｅｐａｒａｔｅｄｗｅｌ１．ｈｅｃ９，ｔＴｌ１－ＣＬＡｃｏｎｔｅｎｔｉｎｔｈｅ　ｓｅｌｆ－ｍａｄｅｙｏｇｈｏｕｒｔｓｂｙｔｈｅｈｅｒｄｓｍｅｎｆｒｏｍＱｉｎｇｈａｉａｎｄＧａｎｎａｎ，　

Ｔｉａｎｚｈｕ，Ｓｕｂｅｉ　ｐａｓｔｏｒａｌ　ａｒｅａｓ　ａｒｅ　１．００７，Ｏ．７８２，０．９８７　ａｎｄ　１．１　９６　ｍｇ／ｍｌ　ｙｏｇｌ１ｏｕｒｔ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｃ９，ｔｌ　１－ＣＬＡ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　

ｓｅｌｆ－ｍａｄｅ　ｙｏｇｈｏｕｒｔｓ　ｄｏ　ｎｏｔ　ｓｈｏｗ　ｎｏｔａｂｌｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ｔｏ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｓａｌｅｄ　ｙｏｇｈｏｕｒｔ（ｐ＞Ｏ．０５），ｂｕｔ　ｈｅ　ｔｃ９，ｔｌ　１－ＣＬＡ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｉｎ　ａｌｌ　ｈｅ　ｔ

ｙｏｇｈｏｕｒｔｓ　ｒｅａ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｌｏｗｅｒ　ｈａｔｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｙａｋ　ｍｉｌｋ（ｐ＜０．０１）．　

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ｃ９。ｔｌ　１－ＣＬＡ；ｓｅｌ￣ｍａｄｅ　ｙｏｇｈｏｕｒｔ；ｐａｓｔｏｒａｌ　ａｒｅａ　

中图分类号：ＴＳ２５２　文献标识码：Ａ　文章编号：１００２．６６３０（２００８）１　１－０５２１．０３　

共轭亚油酸（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ　ｌｉｎｏｌｅｉｃ　ａｃｉｄ，简称ＣＬＡ）是　

一

免疫力，减缓免疫系统副反应；调节血糖，抗糖尿病；　

系列在碳９、ｌ　１或１０、１２位具有双键的亚油酸的位　

调控代谢，促进生长发育和防霉变作用等多种生理功　

能，对人体健康具有十分重要的意义［３－４］。　

置和几何异构体。天然和人工合成的都是以Ｃ９，ｔ１　１＿　

ＣＬＡ、ｔｌ０，ｃ１２．ＣＬＡ、ｔ９，ｔｌ　１一ＣＬＡ和ｔｌ０，ｔｌ２．ＣＬＡ等４种　

几何异构体为主，其中ｃ９，ｔ１１一ＣＬＡ和ｔｌ０，ｃ１２．ＣＬＡ两种　

目前，ＣＬＡ的分析方法很多，有紫外分光光度法、　

银离子高效液相色谱法、气相色谱法、气质联用法、　

异构体被研究证实具有很强的生理活性。ＣＬＡ存在于许　

多动物性食品中，包括人乳、牛乳和其他反刍动物…。　

气相．傅立叶红外光谱法、核磁共振法和高效毛细管电　

泳法［５］。其中，气相色谱法（ＧＣ）是传统分析脂肪酸的方　

法，具有快速、高效、灵敏的优点，其分析结果准　

天然来源的ＣＬＡ主要存在于反刍动物肉、乳制品中，以　

ｃ９，ｔｌ１．ＣＬＡ为主，约占总ＣＬＡ的７５％～９０％［　】。大量研　

究表明，ＣＬＡ具有抗癌ｆ胃癌、皮肤癌、前列腺癌）；　

抗肿瘤；抗动脉粥样硬化；降低脂肪积累；增强机体　

收稿日期：２００８．０３—１２　

确度较高，稳定性好，完全适用于ＣＬＡ异构体的常规　

测定。方李行等［６］用ＧＣ．ＦＩＤ法分析了牛肉中ｃ９，ｔｌＩ－ＣＬＡ　

的含量；梁燕娴等［７］用气相色谱法测定了牛奶中ｃ９，ｔｌ　１－　

基金项目：甘肃牧区酸奶中益生菌的分离鉴定及开发应用项目（０７０２—１２）　

作者简介：甘伯＠（１９６９。），男，副教授，主要从事乳品工艺和保健食品研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｇａｎｂｚ＠１２６．ｃｏｒｎ　

５２２　２００＆ＶｏＬ　２９，Ｎｏ．１１　良晶科学　※分析检测　

ＣＬＡ的含量；王小静等［ｓ］用毛细管气相色谱法测定乳脂　

中的ｃ９，ｔ１　１－ＣＬＡ；郑玉梅等ｆ９］用气相色谱分析法测定了　

酸奶和奶油中的ｃ９，ｔｌ１．ＣＬＡ的含量。　

酸奶因其良好的营养价值和功能特性而深受人们喜　

爱，酸奶产业也因而成为食品行业中具有蓬勃生命力的　

产业之一。目前对牧区自制酸奶研究主要是优良乳酸菌　

的分离鉴定及发酵性能［１０］，而对牧区自制酸奶中的功能　

性成分的研究很少，因此本研究应用ＧＣ．ＦＩＤ法进行牧　

区酸奶中ｃ９，ｔｌ　１．ＣＬＡ含量测定研究。　

１　材料与方法　

１．１　材料与试剂　

牧区酸奶来自青海省海北藏族自治州、甘南合作自　

治州、天祝抓喜秀龙乡和肃北蒙古自治州牧民自制酸牦　

牛奶；市售酸奶；牦牛乳来源于天祝抓喜秀龙乡。　

ｃ９，ｔｌ１．ＣＬＡ甲酯标准品购自瑞典公司，纯度为　

６　

９　８％；甲醇、氯仿、氢氧化钾、无水硫酸钠等均为分　

Ｆ　

ｇ　

析纯，正己烷为色谱纯。　

８　１　

１．２　仪器与设备　

美国Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ公司Ｃｌａｍｓ　５００气相色谱仪，自　

动进样器，分流／不分流进样口，氢火焰离子化检测器　

（ＦＩＤ）；载气Ｎ：，燃气Ｈ　，助燃气空气；高速冷冻离　

心机，旋转蒸发仪等。　

１＿３　色谱条件　

色谱柱：ＦＦＡＰ（５０ｍ×０．２５ｍｍ，０．５０￣ｔｍ），Ｎ２流量　

ｌｍｌ／ｍｉｎ，空气流量４５０ｍｌ／ｍｉｎ，Ｈ２流量４５ｍｌ／ｍｉｎ，分　

流比１９：１，进样量为１　ｌ；程序升温：初始温度为２００￣Ｃ，　

保持２ｒａｉｎ，后以５℃／ｍｉｎ的速率升至２４０℃，保持１５ｍｉｎ，　

总运行时间为２５ｍｉｎ。进样口和ＦＩＤ的温度均为２５０℃。　

１．４　标准溶液的配制　

准确称取ｃ９，ｔｌ　１－ＣＬＡ甲酯标准品２５ｒａｇ置于１０ｍｌ容　

量瓶中，用正己烷定容，振荡摇匀，即得２．５ｍｇ／ｍｌ的　

标准溶液，用正己烷逐级稀释至所需要的浓度。　

１．５　样品中脂肪的提取与甲酯化　

脂肪的提取参照范亚苇等用气相色谱法测定乳制品　

中共轭亚油酸的含量的方法…】。具体操作为取１Ｏｍｌ奶　

样，加入一定量的氯仿．甲醇（Ｖ：ｖ＝２：１　，摇匀，离心　

（４０００ｒ／ｍｉｎ，ｌ０ｒａｉｎ，４℃）后，取下层氯仿层，上层溶　

液中再加入氯仿甲醇混合溶液，摇匀后，再次离心，　

合并两次的氯仿层，进行旋转蒸发，得到油脂。　

取提取后的油脂进行甲酯化，参照ＧＢ／Ｔ　１７３７６—　

１９９８中的碱式甲酯化法。　

１．６　定性和定量分析　．　

在上述色谱条件下，取ＣＬＡ甲酯标准溶液和甲酯化　

的样品上清液测定，以保留时间定性，以外标法定量。　

２　结果与分析　

２．１　色谱分析结果　

在上述色谱条件下，ｃ９，ｔ１　１－ＣＬＡ甲酯标准溶液的色　

谱图如图１，同时青海、肃北、甘南和天祝牧区酸奶　

样品中ＣＬＡ甲酯也达到基线分离，见图２。　

１０　１２　ｌ４　ｌ６　１８　２０　２２　２４　

时ｆ￣（ｍｉｎ１　

图１　ｃ９．ｔ１１一ＣＬＡ甲酯标准溶液色谱图　

Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｃ９，ｔｌ　ｌ－ＣＬＡ，ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ　

２Ｏ　

ｌ８　

１６　

１４　

１２　

ｌＯ　

８　

６　

０　２　４　６　８　ｌ０　１２　１４　１６　ｌ８　２Ｏ　２２　２４　

时间（ｍｉｎ）　

２０　

Ｃ　

ｌ８　

１６　

１４　

１２　

１Ｏ　

Ｉｌｌ｛ｉ！＇ｍ　

８　

６　

｛ｌ＃　●ＪＩ　｛　：＝　；　

２　４　６　８　ｌ０　１２　ｌ４　ｌ６　１８　２０　２２　２４　

时间（ａｒｉｎ）　

ｌ８　

ｌ６　

１４　

１２　

ｌＯ　

８　

６　

Ｏ　２　４　６　８　１０　１２　１４　１６　ｌ８　２０　２２　２４　

时间（ｒａｉｎ）　

Ａ．青海；Ｂ．肃北；Ｃ．甘南；Ｄ．天祝。　

标注１的峰为ｃ９．ｔｌ　１一ＣＬＡ甲酯色谱峰。　

图２　西北不同牧区酸奶样中ｃ９．ｔ１卜ｃＬＡ甲酯色谱图　

Ｆｉｇ．２　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｃ９，ｔｌ　１・ＣＬＡ，ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ　ｏｆ　ｓｅｌｆ－ｍａｄｅ　

ｙｏｇｈｏｕｒｔｓ　ｉｎ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｐａｓｔｏｒａｌ　ａｒｅａｓ　

一　

，　

＿＿ｌ一　　

※分析检测　食品科学　２００８，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．１１　５２３　

注：同列数字注有不同大写字母为差异极显著（ｐ‘０．０１）。　

由图１可知，在ｌ８．６７ｒａｉｎ出的峰为ｃ９，ｔｌ１．ＣＬＡ甲　

酯，由图１和图２可知，４个牧区自制酸奶样色谱图　

中均有ｃ９，ｔｌ１．ＣＬＡ峰。实验中所采用的ＦＦＡＰ（５０ｍ×　

０．２５ｍｍ，Ｏ．５０￣ｍ）色谱柱，适合用于ＣＬＡ的分析，以　

２００℃的起始温度升温，以１ｍｌ／ｍｉｎ的流速，可以将样　

品中ｃ９，ｔｌ　１－ＣＬＡ与其它成分很好的分离。本研究升温条　

件只需２０ｍｉｎ就完成１次ＣＬＡ主要异构体的分析，所以　

选择此程序升温不但可以达到较好的分离效果，而且较　

省时、快速。　

２．２　线性范围与检测限　

将ｃ９，ｔｌ　１－ＣＬＡ甲酯标准溶液分别配制成０．０２５、０．０５、　

０．１、０．２、０．２５、２．５ｍｇ／ｍｌ系列标准溶液，分别进样，　

计算不同质量浓度下的峰面积。以峰面积Ｙ对其质量浓　

度Ｘ（ｍｇ／ｍ１）进行线性回归分析，得到ｃ９，ｔｌ１．ＣＬＡ甲酯　

标准溶液线性回归方程和相关系数分别为ｙ＝５８６３２ｘ＋　

２１４２．２，Ｒ２＝０．９９９４；线性范围为０．０２５～２．５ｍｇ／ｍｌ，最　

低检测限（以信噪比为３计）为０．００５ｍｇ／ｍｌ。　

２＿３　精密度实验　

共进行了６次精密度实验，测得牧区酸奶中ｃ９，ｔｌ１．　

ＣＬＡ的含量平均值为１．１４０ｍｇ／ｍｌ乳，相对标准偏差（ＲＳＤ）　

为０．７６％，可见采用这种方法测定酸乳中的ｃ９，ｔ１１一ＣＬＡ　

的含量具有很好的重复性。　

２－４　回收率实验　

取１ｍｌ提取的油／Ｊ￣（ｃ９，ｔＩ　１－ＣＬＡ的质量浓度为　

０．８９２ｍｇ／ｍ１）６份，分别加入ｃ９，ｔｌ　１－ＣＬＡ标准液（质量浓　

度为０．５ｍｇ／ｍ１）１ｍｌ，置于具塞试管中，作为加标样品　

液。将此样品溶液按１．５所述方法进行甲酯化，按１．３　

所述色谱条件测定，测得ｃ９，ｔ１　１－ＣＬＡ的平均加标回收率　

（ｎ＝６）为９６．２６％。　

２．５　样品测定　

对不同牧区自制酸奶、市售酸奶和牦牛乳样品中　

ｃ９，ｔ１　１．ＣＬＡ进行测定，其结果见表１。　

由表ｌ可知，青海、甘南、天祝和肃北４个牧　

区自制酸奶样中均含有ｃ９，ｔｌ　１一ＣＬＡ，平均含量分别为　

１．００７、０．７８２、０．９８７、１．１９６ｍｇ／ｍｌ酸奶，由ＤＰＳｖ３．０ｌ　

专业版统计软件分析，４个不同牧区酸奶中ｃ９，ｔ１　１－ＣＬＡ　

含量差异不显著（ｐ＞０．０５）；因为造成ＣＬＡ含量差异的根　

源在于新鲜牧草采食量及其质且【　】，这４个不同牧区的　

牦牛都处于放牧，不补饲其他饲料且新鲜牧草质量相　

同。牧区自制酸奶中ｃ９，ｔｌ　１－ＣＬＡ的含量与市售酸奶中的　

含量差异不显著（ｐ＞０．０５），但含量极显著低于牦牛乳（ｐ　

＜０．０１）。因为ＣＬＡ在食品中的含量高低与自然条件和加　

工方式等多种因素有关，研究表明加工过程中温度、发　

酵剂的选择等因素均影响酸奶制品中ＣＬＡ含量的高　

低ｆ１１】。虽然牧区酸奶原料是牦牛乳，但是当地牧民用　

传统的制作方法，即将挤出的新鲜牦牛奶加热煮沸，待　

其冷却至不烫手后，将自己所制酸奶作为发酵剂加入，　

然后密闭，用棉被包裹起来，待发酵至凝乳即可，这　

种传统的制作方法使得牧区酸奶和牦牛乳中的ＣＬＡ的主　

要异构体含量存在差异。　

３　结　论　

本方法以标准样品的保留时间定性，外标法定量，进　

行了奶样中ＣＬＡ含量气相色谱法的测定。采用该方法使　

奶样中ｃ９，ｔ１　１．ＣＬＡ得到很好的分离，测得牧区自制酸　

奶中ｃ９，ｔｌ　１．ＣＬＡ的含量在０．７８２～１．１９６ｍｇ／ｍｌ酸奶范围　

内。　

该方法能够准确定量测定乳制品中ｃ９，ｔｌ　１－ＣＬＡ的含　

量，而且该方法样品用量少，前处理简单，建立的实　

验条件准确可靠，不仅可以用来测定乳制品中ＣＬＡ的含　

量，而且对于乳制品中所含的其他脂肪酸的分析测定也　

具有指导意义。　

参考文献：　

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