2024年2月27日发(作者：濮阳向雁)
第七章 重组克隆的筛选与鉴定
一、填空题
1． 重组体的筛选有两层涵义，一是将------------------------------，二
是将--------------------------------。
2． 目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。
大致可以分为： (1)—------------—(2)—------------—(3)——---------------
(4)———————————等。
3． 噬菌斑形成选择法有两种判断标准，一是—---------------------------—，二是--------------------------------。
4． PCR扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于—------------—
5． 核酸杂交探针可分为两大类： DNA探针和RNA探针。其中DNA探针又分为一-----探针和————————————探针。
6． 如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生3’突出的黏性末端，则可以用-------进行3’末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3’突出的黏性末端，可以用—----------—进行3’末端标记。
7． 单链DNA探针的标记可以采用下列方法：(1)—--------—(2)—-----------—(3)—-----------—。
8． 根据Northern杂交的结果可以说明：——-------------。
9． 差示杂交(differential hybridization)技术需要—------------—。
10．RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜(尼龙膜)上，同一放射DNA探针杂交的技术称--------------——。
11．在——-----------技术中，DNA限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上，然后与放射性的DNA探针杂交。
12．—-------------—使用核酸探针检测细胞和组织中特定核苷酸序列的位置。
13．为了鉴定某一具有特殊功能蛋白质的结构，可以用一个容易检测的报告蛋白制备——，然后跟踪报告蛋白在细胞中的行为即可。
14．可用T4DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有——----和—-------—的活性。
15．硝酸纤维素膜(NC)结合DNA的能力为——，尼龙膜(Nylon)为
16．如果对一个克隆的基因进行遗传操作，使互补的链转录，会产生同正常的RNA转录物互补的—----------—分子。
17．在Southern印迹中，DNA转移的速度取决于--------------------------------和—---------------—.
18．根据噬菌斑的清晰程度筛选重组体主要是cI基因的一------------——.
19．用不对称PCR合成单链DNA探针时，两个引物的浓度比为：—---------------—.
20．微细胞是一种E．coli的突变体，通常只有正常细胞的——，而且不含——------.
21．点杂交的主要缺点是—----------------------—.
22．根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素： (1)——-------(2)—--------------—(3)——-------------------。
23．阻断翻译杂交法是—------------—同—----------------—的杂交。
24．在切口移位标记探针时，DNAaseI处理DNA的温度应控制在—---------------—，
温度过高，—-------------------—，不利于标记.
25． Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别：
(1)—-------------—
(2)—---------------—.
26．放射免疫筛选的原理基于以下三点： (1)------------------——
(2)—---------—(3)—-----------—。
二、判断题
1． 以λ噬菌体为载体的筛选方法比较简便，凡能形成噬菌斑的就一定是重组体o
2． 核酸杂交探针就是带有放射性标记的DNA分子.
3． 在Northern杂交中，为了防止RNA形成部分环状发夹结构，影响迁移率，所以要用变性缓冲液进行电泳。
4． 探针的离体标记实际上是酶法标记。
5． 切口移位法(nicktranslation)只能标记线性双链DNA不能标记环状双链DNA.
6． 通过原位菌落杂交得到的阳性克隆即是重组体，但不能判断插入的外源基因是否进行了表达。
7． 尼龙膜(nylon membrane)是核酸杂交的一种固体支持物，具有同DNA结合能力强、韧性强，可反复洗脱使用，并且杂交信号本底低等优点，就是成本高。
8． 如果DNA序列的某种变异在群体中是稀有的，称为突变；若是普遍的，则称为多态性。
9． 用寡聚DNA进行高度严紧的杂交可用于胎儿遗传病的诊断，可检测到因单个核苷
酸变化而造成的基因突变。
10．由于基因家族中成员之间是密切相关的，因此可以用其中一个成员作为探针进行高
度严紧的杂交来检测其他成员。
11．通过用化学标记法取代放射性标记法，并采用一种抗体来特异性地识别这种化学修饰，使得原位杂交的分辨率大大提高。
12．在杂交之前先用凝胶电泳将粗提取物中的RNA或DNA分子进行分离，假定杂交后只有一种或少数几种大小的片段被探针杂交上了，就能肯定这种杂交是特异性的。
13．根据某一感兴趣蛋白质的序列、抗原性以及配基结合性质制备探针，可从DNA文库中筛选到相应的基因。
14．如果用其他的方法对某种蛋白质已进行过鉴定，那么要确定某一克隆是否含有该蛋
白编码基因就相当容易了。
15．用DNA探针进行杂交反应非常敏感并具有选择性，可用来测定某一特定DNA序列在细胞基因组中的拷贝数。
16．双重药物选择法富集哺乳动物细胞中稀有重组体的原理是： 一种药物用于选择以任意方式整合外源DNA的细胞，第二种药物杀死带有随机整合DNA的细胞。
17．就像对培养中的鼠胚性干细胞进行遗传操作获得突变鼠一样，用DNA转染培养中的单个植物细胞，能够创造转基因植物。
18． NC(硝酸纤维素膜)和尼龙膜都可作为电转移DNA支持物。
19．单克隆抗体是淋巴细胞和瘤细胞杂交后形成的单个杂交瘤细胞经无性繁殖而产生的特异性抗体。
20．用免疫化学法筛选重组体不需要外源基因的表达。
21．用DNA探针同RNA分子杂交在测定一已知基因在某一细胞中是否表达时是很有用的，但不能用于检测转录起始位点、终止位点或内含子的位置。
22．核酸杂交的原理是根据DNA分子间互补。
23．突出的3’末端或凹缺的3’末端都可以用Klenow大片段酶进行末端标记。
24．用多核苷酸激酶进行5’末端标记前，DNA必须进行脱磷酸，否则无法标记。
25． X-gal显色反应的基本原理是使载体上与受体互补的α肽失活。
26． Northern印迹和Southern印迹的基本原理是一样的，都是用于检测结构基因的表达。
27．在液相—液相和液相—固相杂交中，它们的杂交效率都是一样的。
三、选择题(单选或多选)
1． 下列各项中，需要进行液相杂交的是( )
(a)Southern印迹 (b)Northern印迹
(c)Slot印迹 (d)S1作图
2． 下面关于用T4多核苷酸激酶标记5’端制备探针的描述中( )是不正确的。
(a)既能标记DNA，又能标记RNA
(b)既能标记双链DNA又能标记单链DNA
(c)只能标记突出的5’端不能标记其他类型末端
(d)DNA或RNA必须有5'-OH的存在
3． Southern印迹的DNA探针( )杂交。
(a)只与完全相同的片段
(b)可与任何含有相同序列的DNA片段
(c)可与任何含有互补序列的DNA片段
(d)可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段
(e)以上都是
4． 用下列方法进行重组体的筛选，只有( )说明外源基因进行了表达。
(a)Southern印迹杂交 (b)Northern印迹杂交
(c)Western印迹 (d)原位菌落杂交
5．下列哪一个不是Southern印迹法的步骤?( )
(a)用限制酶消化DNA
(b)DNA与载体的连接
(c)用凝胶电泳分离DNA片段
(d)DNA片段转移至硝酸纤维素膜上
(e)用一个标记的探针与膜杂交
6． 报告基因( )
(a)以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列
(b)以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区
(c)能用于检测启动子的活性
(d)能用于确定启动子何时何处有活性
7． 当用过量的RNA与有限的DNA杂交时，( )
(a)所有的RNA杂交
(b)所有的DNA杂交
(c)50％的RNA杂交
(d)50％的DNA杂交
(e)没有RNA杂交，所有的DNA复性为双链DNA
8． 在利用lacZ失活的显色反应筛选法中，IPTG的作用是( )
(a)诱导宿主的α肽的合成
(b)诱导宿主的ω肽的合成
(c)作为酶的作用底物
(d)作为显色反应的指示剂
9． 用菌落杂交法筛选重组体时，( )
(a)需要外源基因的表达 (b)不需要外源基因的表达
(c)要根据克隆基因同探针的同源性 (d)上述说法都正确
10． 微细胞是一种大肠杆菌突变体，( )
(a)它不带任何DNA
(b)它的体积为正常细胞的1／10
(c)它带有染色体DNA，但不能表达
(d)它带有质粒DNA，可以表达
11．切口移位是指在( )作用下，使( )带上放射性标记。
(a)DNA聚合酶I，RNA (b)DNA聚合酶I，DNA
(c)DNA聚合酶Ⅲ，RNA (d)DNA聚合酶Ⅲ，DNA
12．用于核酸分子杂交的探针可以是放射性标记的( )
(a)DNA (b)RNA (c)抗体 (d)抗原
13．下面关于细菌人工染色体(BAC)的特点描述，除了( )外都是正确的。
(a)通过电激法将大质粒转化大肠杆菌比酵母的转化率提高了10～100倍
(b)BAC载体在细胞中以环型超螺旋状态存在，使分离操作起来相对容易
(c)BAC载体在大肠杆菌宿主保持高拷贝
(d)克隆到BAC载体上的外源片段可以直接进行测序以获得末端序列
14．用免疫化学法筛选重组体的原理是( )
(a)根据外源基因的表达 (b)根据载体基因的表达
(c)根据mRNA同DNA的杂交 (d)根据DNA同DNA的杂交
15．随机引物标记探针，下列各项中哪一项是不正确的?( )
(a)双链DNA、单链DNA、RNA都是可以标记的
(b)不需要用DNaseI预处理
(C)反应时可用Klenow酶
(d)反应时可用DNA聚合酶I
16．在切口移位标记DNA探针时只能使用( )
(a)Klenow酶 (b)DNA聚合酶I
(c)DNA聚合酶Ⅱ (d)DNA聚合酶Ⅲ
17．要对一双链的DNA分子进行3’末端标记，可用( )
(a)Klenow酶 (b)DNA聚合酶I
(c)T4DNA聚合酶 (d)T7DNA聚合酶
18．关于噬菌斑筛选法的原理，下面哪一种说法不正确?( )
(a)噬菌斑颜色变化 (b)cI基因失活造成的噬菌斑的变化
(c)对IPTG的分解能力 (d)对X-gal的分解与否
19．下列筛选重组体的方法中，不属于遗传学的方法是：( )
(a)插入失活法 (b)显色反应选择法
(c)噬菌斑选择法 (d)R环分析法
四、简答题
1． 点印迹与Southern印迹相比，有何优点和缺点?
2． 你在做Southern印迹分析，并且刚完成了凝胶电泳这一步。根据方案，下面一步骤是用NaOH溶液浸泡凝胶，使DNA变性为单链。为了节省时间，你略过了这一步，直接将DNA从凝胶转至硝酸纤维素膜上。然后用标记探针杂交，最后发现放射自显影片是空白。错在哪里?
3． 切口移位(nicktranslation)标记探针的主要步骤有哪些?
4． 插入失活和插入表达法筛选重组体的主要差别是什么?
5． 一个携带有氨苄和卡那霉素抗性基因的质粒被仅在卡那霉素基因中有识别位点的EcoRI消化。消化物与酵母DNA连接后转化对两种抗生素都敏感的正coli菌株。
(1)利用哪一种抗生素抗性选择接受了质粒的细胞?
(2)怎样区分接受了插入酵母DNA的质粒的克隆?
6． 用EcoRI和HindⅢ分别切割同一来源的染色体DNA，并进行克隆，在前者的克隆中筛选到A基因，但在后者的克隆中未筛选到A基因，请说明原因。
7． 什么是Western印迹?它与Southern印迹有什么不同?
8． 用一限制性内切核酸酶切割LacTet的质粒载体，已知该酶识别的是4个碱基序列，并产生有两个碱基突出的单链末端，该酶在lac基因内有切割位点，并在第二个氨基酸密码子内，该位点可以被任何氨
+R
基酸所取代而不影响酶活性。用该酶切割后，用DNA聚合酶将单链末端补齐为双链的平末端，然后重新连接成环，转化LacTet受体菌，筛选Tet转化子，问：Lac的基因型是什么?并说明原因。
9． 严紧杂交实验是如何控制的?
10．RNA与基因组DNA复性已被广泛用于检测不同类DNA的转录。DNA驱动的复性头验与RNA驱动的复性实验有何不同?
11．在基因工程中，为了在细菌细胞中表达真核生物的基因产物，为什么通常要用cDNA
而不用基因组DNA?为什么要在cDNA前加上细菌的启动子?
五、问答题
1． 什么是遗传学检测法?
2．以pBR322 DNA为载体，从四环素抗性基因区克隆外源DNA时，可采用环丝氨酸富集法筛选重组体，说明其基本原理和基本操作过程。
3． 放射性抗体检测法(radioactive antibody test)的基本原理是什么?
4． 何谓液相杂交?举例说明在分子生物学中的应用。
5． 什么是活体标记法(in vivo labeling)?
6． 单链RNA作为探针，具有哪些单链DNA探针所没有的优点?
7． 什么是随机引物(random primer)?如何标记DNA?
8． 良好的固相支持物必须具备哪些优良特性?
-Sr9.以硝酸纤维滤膜(nitrocellulose filter membrane)作为杂交的固相支持物具有哪些
优点？
10．什么是印迹(blotting)杂交?
11．什么是斑点杂交(dot hybridization)与狭缝杂交(slot hybridization)?
12．什么是原位菌落杂交(colony hybridization)?
13．说明Southern杂交的原理和方法。
14．Northern印迹与Southern印迹有什么不同?
15．建立了一个基因文库后，如何鉴定一个携带目的基因的克隆?
2024年2月27日发(作者：濮阳向雁)
第七章 重组克隆的筛选与鉴定
一、填空题
1． 重组体的筛选有两层涵义，一是将------------------------------，二
是将--------------------------------。
2． 目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。
大致可以分为： (1)—------------—(2)—------------—(3)——---------------
(4)———————————等。
3． 噬菌斑形成选择法有两种判断标准，一是—---------------------------—，二是--------------------------------。
4． PCR扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于—------------—
5． 核酸杂交探针可分为两大类： DNA探针和RNA探针。其中DNA探针又分为一-----探针和————————————探针。
6． 如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生3’突出的黏性末端，则可以用-------进行3’末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3’突出的黏性末端，可以用—----------—进行3’末端标记。
7． 单链DNA探针的标记可以采用下列方法：(1)—--------—(2)—-----------—(3)—-----------—。
8． 根据Northern杂交的结果可以说明：——-------------。
9． 差示杂交(differential hybridization)技术需要—------------—。
10．RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜(尼龙膜)上，同一放射DNA探针杂交的技术称--------------——。
11．在——-----------技术中，DNA限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上，然后与放射性的DNA探针杂交。
12．—-------------—使用核酸探针检测细胞和组织中特定核苷酸序列的位置。
13．为了鉴定某一具有特殊功能蛋白质的结构，可以用一个容易检测的报告蛋白制备——，然后跟踪报告蛋白在细胞中的行为即可。
14．可用T4DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有——----和—-------—的活性。
15．硝酸纤维素膜(NC)结合DNA的能力为——，尼龙膜(Nylon)为
16．如果对一个克隆的基因进行遗传操作，使互补的链转录，会产生同正常的RNA转录物互补的—----------—分子。
17．在Southern印迹中，DNA转移的速度取决于--------------------------------和—---------------—.
18．根据噬菌斑的清晰程度筛选重组体主要是cI基因的一------------——.
19．用不对称PCR合成单链DNA探针时，两个引物的浓度比为：—---------------—.
20．微细胞是一种E．coli的突变体，通常只有正常细胞的——，而且不含——------.
21．点杂交的主要缺点是—----------------------—.
22．根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素： (1)——-------(2)—--------------—(3)——-------------------。
23．阻断翻译杂交法是—------------—同—----------------—的杂交。
24．在切口移位标记探针时，DNAaseI处理DNA的温度应控制在—---------------—，
温度过高，—-------------------—，不利于标记.
25． Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别：
(1)—-------------—
(2)—---------------—.
26．放射免疫筛选的原理基于以下三点： (1)------------------——
(2)—---------—(3)—-----------—。
二、判断题
1． 以λ噬菌体为载体的筛选方法比较简便，凡能形成噬菌斑的就一定是重组体o
2． 核酸杂交探针就是带有放射性标记的DNA分子.
3． 在Northern杂交中，为了防止RNA形成部分环状发夹结构，影响迁移率，所以要用变性缓冲液进行电泳。
4． 探针的离体标记实际上是酶法标记。
5． 切口移位法(nicktranslation)只能标记线性双链DNA不能标记环状双链DNA.
6． 通过原位菌落杂交得到的阳性克隆即是重组体，但不能判断插入的外源基因是否进行了表达。
7． 尼龙膜(nylon membrane)是核酸杂交的一种固体支持物，具有同DNA结合能力强、韧性强，可反复洗脱使用，并且杂交信号本底低等优点，就是成本高。
8． 如果DNA序列的某种变异在群体中是稀有的，称为突变；若是普遍的，则称为多态性。
9． 用寡聚DNA进行高度严紧的杂交可用于胎儿遗传病的诊断，可检测到因单个核苷
酸变化而造成的基因突变。
10．由于基因家族中成员之间是密切相关的，因此可以用其中一个成员作为探针进行高
度严紧的杂交来检测其他成员。
11．通过用化学标记法取代放射性标记法，并采用一种抗体来特异性地识别这种化学修饰，使得原位杂交的分辨率大大提高。
12．在杂交之前先用凝胶电泳将粗提取物中的RNA或DNA分子进行分离，假定杂交后只有一种或少数几种大小的片段被探针杂交上了，就能肯定这种杂交是特异性的。
13．根据某一感兴趣蛋白质的序列、抗原性以及配基结合性质制备探针，可从DNA文库中筛选到相应的基因。
14．如果用其他的方法对某种蛋白质已进行过鉴定，那么要确定某一克隆是否含有该蛋
白编码基因就相当容易了。
15．用DNA探针进行杂交反应非常敏感并具有选择性，可用来测定某一特定DNA序列在细胞基因组中的拷贝数。
16．双重药物选择法富集哺乳动物细胞中稀有重组体的原理是： 一种药物用于选择以任意方式整合外源DNA的细胞，第二种药物杀死带有随机整合DNA的细胞。
17．就像对培养中的鼠胚性干细胞进行遗传操作获得突变鼠一样，用DNA转染培养中的单个植物细胞，能够创造转基因植物。
18． NC(硝酸纤维素膜)和尼龙膜都可作为电转移DNA支持物。
19．单克隆抗体是淋巴细胞和瘤细胞杂交后形成的单个杂交瘤细胞经无性繁殖而产生的特异性抗体。
20．用免疫化学法筛选重组体不需要外源基因的表达。
21．用DNA探针同RNA分子杂交在测定一已知基因在某一细胞中是否表达时是很有用的，但不能用于检测转录起始位点、终止位点或内含子的位置。
22．核酸杂交的原理是根据DNA分子间互补。
23．突出的3’末端或凹缺的3’末端都可以用Klenow大片段酶进行末端标记。
24．用多核苷酸激酶进行5’末端标记前，DNA必须进行脱磷酸，否则无法标记。
25． X-gal显色反应的基本原理是使载体上与受体互补的α肽失活。
26． Northern印迹和Southern印迹的基本原理是一样的，都是用于检测结构基因的表达。
27．在液相—液相和液相—固相杂交中，它们的杂交效率都是一样的。
三、选择题(单选或多选)
1． 下列各项中，需要进行液相杂交的是( )
(a)Southern印迹 (b)Northern印迹
(c)Slot印迹 (d)S1作图
2． 下面关于用T4多核苷酸激酶标记5’端制备探针的描述中( )是不正确的。
(a)既能标记DNA，又能标记RNA
(b)既能标记双链DNA又能标记单链DNA
(c)只能标记突出的5’端不能标记其他类型末端
(d)DNA或RNA必须有5'-OH的存在
3． Southern印迹的DNA探针( )杂交。
(a)只与完全相同的片段
(b)可与任何含有相同序列的DNA片段
(c)可与任何含有互补序列的DNA片段
(d)可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段
(e)以上都是
4． 用下列方法进行重组体的筛选，只有( )说明外源基因进行了表达。
(a)Southern印迹杂交 (b)Northern印迹杂交
(c)Western印迹 (d)原位菌落杂交
5．下列哪一个不是Southern印迹法的步骤?( )
(a)用限制酶消化DNA
(b)DNA与载体的连接
(c)用凝胶电泳分离DNA片段
(d)DNA片段转移至硝酸纤维素膜上
(e)用一个标记的探针与膜杂交
6． 报告基因( )
(a)以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列
(b)以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区
(c)能用于检测启动子的活性
(d)能用于确定启动子何时何处有活性
7． 当用过量的RNA与有限的DNA杂交时，( )
(a)所有的RNA杂交
(b)所有的DNA杂交
(c)50％的RNA杂交
(d)50％的DNA杂交
(e)没有RNA杂交，所有的DNA复性为双链DNA
8． 在利用lacZ失活的显色反应筛选法中，IPTG的作用是( )
(a)诱导宿主的α肽的合成
(b)诱导宿主的ω肽的合成
(c)作为酶的作用底物
(d)作为显色反应的指示剂
9． 用菌落杂交法筛选重组体时，( )
(a)需要外源基因的表达 (b)不需要外源基因的表达
(c)要根据克隆基因同探针的同源性 (d)上述说法都正确
10． 微细胞是一种大肠杆菌突变体，( )
(a)它不带任何DNA
(b)它的体积为正常细胞的1／10
(c)它带有染色体DNA，但不能表达
(d)它带有质粒DNA，可以表达
11．切口移位是指在( )作用下，使( )带上放射性标记。
(a)DNA聚合酶I，RNA (b)DNA聚合酶I，DNA
(c)DNA聚合酶Ⅲ，RNA (d)DNA聚合酶Ⅲ，DNA
12．用于核酸分子杂交的探针可以是放射性标记的( )
(a)DNA (b)RNA (c)抗体 (d)抗原
13．下面关于细菌人工染色体(BAC)的特点描述，除了( )外都是正确的。
(a)通过电激法将大质粒转化大肠杆菌比酵母的转化率提高了10～100倍
(b)BAC载体在细胞中以环型超螺旋状态存在，使分离操作起来相对容易
(c)BAC载体在大肠杆菌宿主保持高拷贝
(d)克隆到BAC载体上的外源片段可以直接进行测序以获得末端序列
14．用免疫化学法筛选重组体的原理是( )
(a)根据外源基因的表达 (b)根据载体基因的表达
(c)根据mRNA同DNA的杂交 (d)根据DNA同DNA的杂交
15．随机引物标记探针，下列各项中哪一项是不正确的?( )
(a)双链DNA、单链DNA、RNA都是可以标记的
(b)不需要用DNaseI预处理
(C)反应时可用Klenow酶
(d)反应时可用DNA聚合酶I
16．在切口移位标记DNA探针时只能使用( )
(a)Klenow酶 (b)DNA聚合酶I
(c)DNA聚合酶Ⅱ (d)DNA聚合酶Ⅲ
17．要对一双链的DNA分子进行3’末端标记，可用( )
(a)Klenow酶 (b)DNA聚合酶I
(c)T4DNA聚合酶 (d)T7DNA聚合酶
18．关于噬菌斑筛选法的原理，下面哪一种说法不正确?( )
(a)噬菌斑颜色变化 (b)cI基因失活造成的噬菌斑的变化
(c)对IPTG的分解能力 (d)对X-gal的分解与否
19．下列筛选重组体的方法中，不属于遗传学的方法是：( )
(a)插入失活法 (b)显色反应选择法
(c)噬菌斑选择法 (d)R环分析法
四、简答题
1． 点印迹与Southern印迹相比，有何优点和缺点?
2． 你在做Southern印迹分析，并且刚完成了凝胶电泳这一步。根据方案，下面一步骤是用NaOH溶液浸泡凝胶，使DNA变性为单链。为了节省时间，你略过了这一步，直接将DNA从凝胶转至硝酸纤维素膜上。然后用标记探针杂交，最后发现放射自显影片是空白。错在哪里?
3． 切口移位(nicktranslation)标记探针的主要步骤有哪些?
4． 插入失活和插入表达法筛选重组体的主要差别是什么?
5． 一个携带有氨苄和卡那霉素抗性基因的质粒被仅在卡那霉素基因中有识别位点的EcoRI消化。消化物与酵母DNA连接后转化对两种抗生素都敏感的正coli菌株。
(1)利用哪一种抗生素抗性选择接受了质粒的细胞?
(2)怎样区分接受了插入酵母DNA的质粒的克隆?
6． 用EcoRI和HindⅢ分别切割同一来源的染色体DNA，并进行克隆，在前者的克隆中筛选到A基因，但在后者的克隆中未筛选到A基因，请说明原因。
7． 什么是Western印迹?它与Southern印迹有什么不同?
8． 用一限制性内切核酸酶切割LacTet的质粒载体，已知该酶识别的是4个碱基序列，并产生有两个碱基突出的单链末端，该酶在lac基因内有切割位点，并在第二个氨基酸密码子内，该位点可以被任何氨
+R
基酸所取代而不影响酶活性。用该酶切割后，用DNA聚合酶将单链末端补齐为双链的平末端，然后重新连接成环，转化LacTet受体菌，筛选Tet转化子，问：Lac的基因型是什么?并说明原因。
9． 严紧杂交实验是如何控制的?
10．RNA与基因组DNA复性已被广泛用于检测不同类DNA的转录。DNA驱动的复性头验与RNA驱动的复性实验有何不同?
11．在基因工程中，为了在细菌细胞中表达真核生物的基因产物，为什么通常要用cDNA
而不用基因组DNA?为什么要在cDNA前加上细菌的启动子?
五、问答题
1． 什么是遗传学检测法?
2．以pBR322 DNA为载体，从四环素抗性基因区克隆外源DNA时，可采用环丝氨酸富集法筛选重组体，说明其基本原理和基本操作过程。
3． 放射性抗体检测法(radioactive antibody test)的基本原理是什么?
4． 何谓液相杂交?举例说明在分子生物学中的应用。
5． 什么是活体标记法(in vivo labeling)?
6． 单链RNA作为探针，具有哪些单链DNA探针所没有的优点?
7． 什么是随机引物(random primer)?如何标记DNA?
8． 良好的固相支持物必须具备哪些优良特性?
-Sr9.以硝酸纤维滤膜(nitrocellulose filter membrane)作为杂交的固相支持物具有哪些
优点？
10．什么是印迹(blotting)杂交?
11．什么是斑点杂交(dot hybridization)与狭缝杂交(slot hybridization)?
12．什么是原位菌落杂交(colony hybridization)?
13．说明Southern杂交的原理和方法。
14．Northern印迹与Southern印迹有什么不同?
15．建立了一个基因文库后，如何鉴定一个携带目的基因的克隆?