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水稻全生育期稻瘟病抗性遗传及其基因定位研究
2024年3月7日发(作者：廉昊苍)
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分子植物育种，２００８年，第６卷，第５期，第８２５—８２９页 Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，２００８，Ｖｏ１．６，Ｎｏ．５，８２５—８２９ 研究报告 Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｒｅｐｏｒｔ 水稻全生育期稻瘟病抗性遗传及其基因定位研究 高冠军 李桂菊２包亮 何予卿－． １华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室，武汉，４３００７０；２湖北省宜昌市农业科学研究所，宜昌，４４３００４ 通讯作者，ｙｑｈｅ＠ｍａｉｌ．ｈｚａｕ．ｅｄｕ．ｅｎ 摘 要稻瘟病是最严重的世界性水稻病害之一。本实验利用高抗稻瘟病品种１９４—３和珍汕９７Ｂ构建的重 组自交系群体，通过自然诱发实验，在两个年度重复的情况下，全生育期调查水稻生长的３个关键时期一分 蘖期叶瘟、抽穗期叶瘟和成熟期穗颈瘟的抗性表现，通过集团分离分析法（ｂｕｌｋｅｄ ｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ，ＢＳＡ） 初步定位稻瘟病主效抗性基因。结果表明分蘖期和抽穗期的叶瘟、以及穗颈瘟的抗性表型频率均呈双峰分 布，说明控制水稻叶瘟和穗颈瘟均表现为一对主效基因控制；全基因组分子标记分析将该稻瘟病抗性基因定 位于水稻第６染色体上，处于分子标记ＡＰ２２和ＲＭ１９７６６之间。该抗性基因来源于重组自交系的抗性亲本 １９４—３，并命名为Ｒ６。本实验为稻瘟病的持久抗性分子标记辅助选择育种和基因克隆提供了基因资源。 关键词 水稻。稻瘟病，基因定位，分子标记 Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｒｉｃｅ Ｂｌａｓｔ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ｇｅｎｅｓ Ｔｈｒｏｕｇｈｏｕｔ ａｌｌ Ｓｔａｇｅｓ ｉｎ Ｒｉｃｅ Ｇａｏ Ｇｕａｎｊｕｎ Ｌｉ Ｇｕｉｊｕ Ｂａｏ Ｌｉａｎｇ Ｈｅ Ｙｕｑｉｎｇ ’ １ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｃｒｏｐ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｇｅｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ，４３００７０；２ Ｙｉｃｈａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｙｉｃｈａｎｇ，４４３００４ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ．ｙｑｈｅ＠ｍａｉｌ．ｈｚａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｒｉｃｅ ｂｌａｓｔ ｉｓ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｐｒｅｖａｉｌｉｎｇ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ．Ａ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｉｎｂｒｅｄ ｌｉｎｅｓ，ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ａ ｃｒｏｓｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ａ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｃｕｌｔｉｖａｒ １ ９４—３ ａｎｄ ａ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ ｃｕｌｔｉｖａｒ Ｚｈｅｎｓｈａｎ ９７Ｂ，ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄ ｆｏｒ ｉｔｓ ｂｌａｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｕｎｄｅｒ ｎａｔｕｒａｌ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍａｐｐｅｄ ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ ｂｙ ｂｕｌｋｅｄ ｓｅｇｒｅｇａｔｅ ａｎａｌｙｓｉｓ（ＢＳＡ）．Ｏｎｅ ｇｅｎｅ，Ｒ６，ｗａｓ ｌｏｃａｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｇｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｗｏ ｍａｒｋｅｒｓ ＡＰ２２ ａｎｄ ＲＭ１９７６６ ｏｎ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ６．Ｔｈｅ ｍａｊｏｒ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｒｆｏｍ ｔｈｅ ｒｅｓｉｓａｔｎｔ ｃｕｌｔｉｖａｒ １９４—３．Ｔｈｉｓ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｓｈｏｗ— ｉｎｇ ｔｏ ｒｅｓｉｓｔ ｌｅａｆｂｌａｓｔ ａｎｄ ｎｅｃｋ ｂｌａｓｔ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｗｈｏｌｅ ｄｕｒａｔｉｏｎ ａｔ ｔｈｅ ｎａｔｕｒａｌ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ｏｕｒ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｉｌｌ ｂｅ ｕｓｅｆｕ１ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｕｒａｂｌｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｐｒｏｇｒａｍ ｂｙ ｍａｒｋｅｒ—ａｓｓｉｓｔｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｅｎｅ ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆｔｈｅ Ｒ６． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ｒｉｃｅ，Ｂｌａｓｔ，Ｇｅｎｅ ｍａｐｐｉｎｇ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒ 稻瘟病是一种真菌性病害，由稻瘟病菌Ｐｖｒ ｃｕ— 杂性和生理小种为适应环境的迅速变异的特点，导 ｌａｒｉａ ｇｒｉｓｅａ Ｓａｃｃａｒｄｏ（有性态称为（ｈｅｂｅｒｔ）Ｂａｒｒ）引起 致生产上推广的品种抗性很快减弱或丧失。因此，寻 的，是世界性的水稻病害。稻瘟病菌可在水稻的整个 找广谱持久的抗性基因是克服水稻稻瘟病品种的一 生育期危害水稻，依据感染的部位不同可以分为：叶 种有效方法。 瘟，节瘟，穗颈瘟和谷粒瘟等。其中穗颈瘟的危害大 水稻对稻瘟病的抗性一般可以分为两种类型， 于叶瘟和其它的危害，严重时可以导致颗粒无收 完全抗性和不完全抗性；完全抗性由单基因控制，具 （Ｚｈｕａｎｇ ｅｔ ａ１．，２００２）。实践证明，选育和利用抗病品 有质量效应和小种专化抗性，抗性容易丧失；不完全 种是控制稻瘟病最经济有效的方法之一ｆ李落叶和 抗性，又称为持久抗性或田间抗性，由微效多基因控 井金学，２００６）。由于稻瘟病菌本身具有种群的遗传复 制，具有数量效应和非小种专化抗性。但是也有单个 基金项目：本研究由科技部８６３项目（２００６ＡＡ１００１０１）、９７３项目（２００７ＣＢｌ０９０００）和国家自然科学基金（３０６７１１１４）资助
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分子植物育种 ８２６ Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ Ｐｌａ】１ｔ 主效抗性基因表现持久抗性的报道，如脚 Ｊ ）和 级。穗颈瘟的考察是在整个家系内（１０株）考察穗颈 在Ｃｈｕｂｕ３２定位到的一个主效基因（Ｚｅｎｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａ１．， 瘟率：穗颈瘟率＝感病穗数／家系总穗数。 ２００２）。另外利用分子标记技术已经定位了五十多个 稻瘟病抗性基因位点（Ｌｉｕ ｅｔ ａ１．，２００７），大多数抗性 １．４ ＢＳＡ法和遗传分析 基因都集中在第６、第１１和第１２染色体上，并且成 根据各个时期的表型调查结果，分别在分蘖期， 簇分布（Ｄｅｎｇ ｅｔ ａ１．，２００６）。 抽穗期和成熟期各选择抗性家系和感病家系各１５ 本实验通过由抗稻瘟病材料构建的重组自交系 株，将其ＤＮＡ混合成抗病池（Ｒ）和感病池（Ｓ），共计３ 群体，通过在自然生态条件下全生育期诱发稻瘟病， 个抗病ＤＮＡ池和３个感病ＤＮＡ池。利用在水稻ｌ２ 结合构建的分子标记遗传连锁图谱，目的在于寻找 条染色体上平均分布的１８９个ＳＳＲ引物在Ｒ和ｓ池 全生育期具有广谱抗稻瘟病基因，为水稻稻瘟病的 中筛选多态性标记。利用ＢＳＡ法（ｂｕｌｋｓ ｏｆｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎ 抗病育种提供理论依据和基因资源。 ａｎａｌｙｓｉｓ）（Ｍｉｃｈｅｌｍｏｒｅ ｅｔ ａ１．，１９９１）初步定位ＲＩＬ群体 的主效抗稻瘟病基因。其中，ＳＳＲ标记的引物序列来 １材料与方法 源于Ｔｅｍｎｙｋｈ等（２０００；２００１）。 １．１材料 ２结果分析 本研究所用的重组自交系（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｉｎｂｒｅｄ ｌｉｎｅｓ，ＲＩＬｓ）是由高抗稻瘟病品种１９４—３和珍汕９７Ｂ ２．１亲本和Ｉ 群体的抗稻瘟病表现 杂交通过单粒传法（ＳＳＤ）构建而成，该重组自交系Ｆ 表１是各个家系与亲本的比较差异，从表１ 代共包括１７１个家系。１９４—３由宜昌地区农科所提 中可以看出两个亲本１９４－３和珍汕９７Ｂ在抗性级 供，该材料在湖北省宜昌远安经过多年鉴定，表现为 别上有明显差异，１９４—３表现高抗稻瘟病，珍汕 持久高抗稻瘟病，珍汕９７Ｂ是一个优良的杂交水稻 ９７Ｂ表现感病。群体各个家系的抗性级别也在抗 保持系，表现感稻瘟。用于诱发稻瘟病材料Ｃ０３９是 性范围上有明显的差异。图１是重组自交系群体 从国际水稻所引进的高感稻瘟病品种。 内家系在２００６年和２００７年的３个不同生育期的 １．２田间种植 抗性级别分布，从中可以看出，２００６年和２００７年 分蘖时期和抽穗期的叶瘟抗性分布均呈现出明显 实验材料于２００６年和２００７年连续两年种植于 的双峰分布，说明在抽穗期前有一个主效抗叶瘟 湖北省宜昌市远安县望家乡，该实验点是湖北省水稻 基因。２００６年和２００７年的穗颈瘟抗性分布也呈现 区域实验稻瘟病抗性自然诱发鉴定点，海拔５４０ ｍ， 出明显的双峰分布，同样说明在抽穗期有一个主 平均气温接近２５￣Ｃ，空气湿度大，该小气候非常适合 效穗颈瘟抗性基因。 稻瘟病的自然发生。 ａＸＥｓ的田间种植：每个家系一行１０株，株行间 表ｌ重组自交系群体的亲本及家系在２００６年和２００７年的表 距为１６．５ ｅｍ￣２６．５ ｃｍ。为了充分诱发稻瘟病，材料 型值统计 Ｔａｂｌｅ １ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｂｌａｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｒａｉｔｓ ｉｎ ｐａｒｅｎｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ 的四周种上ＣＯ３９作保护行和诱发材料。其田间管 ＲｍＳ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ２００６ ａｎｄ ２００７ 理按当地丰产田标准管理，治虫不治病，禁用杀菌剂 （Ｌｉ ｅｔ ａ１．，２００７）。 １．３稻瘟病的数据调查 根据Ｂｏｎｍａｎ等（１９８６）￣０定的标准，叶瘟采用 ０～５级抗性分级，其中０￣３为抗病，４～５为感病：穗颈 瘟采用百分比抗性分级，抗性分级采用ＩＲＲＩ的０、１、 ３、５、７、９级标准，其中穗瘟率０￣２５％为抗性，２６％～ １００％为感病。叶瘟抗性调查分别在群体的分蘖期和 抽穗期每隔３０ ｄ调查１次，在距离成熟期一周前考 注：ＦＹ：分蘖期叶瘟；ＣＹ：抽穗期叶瘟：ＳＷ：成熟期穗颈瘟 察各个家系的穗颈瘟抗性。叶瘟考察是选取每个家 Ｎｏｔｅ：ＦＹ：Ｌｅａｆ ｂｌａｓｔ ａｔ ｆｉｌｌｅｔｉｎｇ ｓｔａｇｅ；ＣＹ：Ｌｅａｆ ｂｌａｓｔ ａｔ ｈｅａｄｉｎｇ 系中间的８株鉴定新长出来的叶片上的病斑作为等 ｓｔａｇｅ；ＳＷ：Ｎｅｃｋｂｌａｓｉａｔ ｒｅａｐｉｎｇ ｓｔａｇｅ
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水稻全生育期稻瘟病抗性遗传及其基因定位研究 … Ｇｅｎｅｉｔｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆＲｉｃｅ Ｂｌａｓｔ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆＲｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ｇｅｎｅｓ Ｔｈｒｏｕｇｈｏｕｔ ａｌｌ璺 ！ ６Ｏ ：：： 的位置，在ＲＭ１９７６６附近又筛选了几个标记，结果 发现共有３个标记（ＲＭ２７６、ＡＰ２２和Ｃ５３１２）在抗感 ＤＮＡ池有多态性，引物序列见表３。 ５０ 籁望４０ ＜－－芎３０ ２０ 将这３个标记筛选ＲＩＬ群体，从基因型与表型 的对应分析（表４）可以看出：在３个时期调查的性 状，ＲＭ２７６的Ｒ／Ｒ基因型和Ｚ／Ｚ基因型所对应的表 型差异小于ＲＭ１９７６６的ＲｆＲ基因型与Ｚ／Ｚ基因型 ｌＯ ０ ０．０ Ｏ．５ １．０ １．５ ２．０ ２．５ ３．０ ３．５ ４．０ ４．５ ５．０ 抗性级别 Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｌｅｖｅｌ ５０ 所对应的表型差异，因此可以断定３个时期的抗性 基因的位置必定偏向标记Ｉ １９７６６的一侧；对于分 螯４０ ＜－－亏３０ ２０ ｌＯ ０ … 。 ．蘖期的叶瘟（ＦＹ），可以看出两个年度的差异结果都 『１Ｉ． 。『１Ｉ。『１Ｉ． ．ｒＪＩ．厂＿ 抗性级别 是标记Ｃ５３１２＞ＡＰ２２＞ＲＭ１９７６６，由此认为控制分蘖 期叶瘟的抗性基因可以被定位在标记ＡＰ２２和 ＲＭ１９７６６之间，Ｃ５３１２附近；对于抽穗期的叶瘟 （ＣＹ），２００６年度的３个标记的结果是Ｃ５３１２ ＡＰ２２＞ＲＭ１９７６６，２００７年度３个标记结果是Ｃ５３ １２＞ ＡＰ２２＞ＲＭ１９７６６，结果说明控制抽穗期叶瘟的抗性 表２双因素方差分析３个时期表型在两个年度的遗传效应 Ｔａｂｌｅ ２ Ｓｕｍｍａｒｙ ｏｆｅｆｆｅｃｔｓ ｒｅｓｏｌｖｅｄ ｂｙ ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ ｏｆｔｈｅ ｔｈｒｅｅｔｒａｉｔｓ ｏｆｔｈｅＲＩＬｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｍｅａｓｕｒｅｄｉｎｔｗｏｙｅａｒｓ ０．０ ０．５ １．０ １．５ ２．０ ２．５ ３．０ ３．５ ４．０ ４．５ ５．０ Ｄａｍａｇｅ ｓｃｏｒｅ ４５ ４０ 餐． ３３０５ ＜－－垛． ２５ 。２０ ＿１５ １０ ５ ０ ０ １０ ２０ ３０ ４０ ５０ ６０ ７０ ８０ ９０ ｌ００ 穗颈瘟率（％） Ｒａｔｅｏｆｎｅｃｋｂｌａｓｔ（％） 图ｌ重组自交系在两年度３个时期表型值的频率分布图 注：ＦＹ：分蘖期叶瘟：ＣＹ：抽穗期叶瘟；ＳＷ：成熟期穗颈瘟 Ｆｉｇｕｒｅ １ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｂｌａｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｒａｉｔｓ ａｔ ｔｈｒｅｅ ｓｔａｇｅｓ ｉｎ ２ ｙｅａｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｌＥｓ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ Ｎｏｔｅ：ＦＹ：Ｌｅａｆ ｂｌａｓｔ ａｔ ｆｉｌｌｅｔｉｎｇ ｓｔａｇｅ；ＣＹ：Ｌｅａｆ ｂｌａｓｔ ａｔ ｈｅａｄｉｎｇ ｓｔａｇｅ；ＳＷ：Ｎｅｃｋ ｂｌａｓｔ ｔ ｒａｅａｐｉｎｇ ｓｔａｇｅ ２．２稻瘟病的遗传和环境遗传效应分析 表２列出２００６年和２００７年度稻瘟病在不同时 注：Ｇ：遗传效应；Ｅ：环境效应 期的遗传和环境方差分析，结果表明，除抽穗期的环 Ｎｏｔｅ：Ｇ：Ｇｅｎｅｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ；Ｅ：Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｅｆｆｅｃｔ 境方差对叶瘟影响不显著外，所有时期的遗传方差 表３ ＳＳＲ标记引物的序列 和环境方差均表现极显著水平，充分说明了在稻瘟 Ｔａｂｌｅ ３ Ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆｔｈｅ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ 病的发生受遗传和环境因子共同作用的结果，既有 稻瘟病基因的作用也表明该稻瘟病自然诱发点也适 标记名称 Ｍａｒｋｅｒ Ｃ５３１２ 正向（５’一３’） Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ（５’－÷３’） ＡＴＣＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＧＴＴＧＣＡＣ ＧＴＧＣＡＴＧＡＧＴＣＣＡＧＣＴＣＡＡＡ ＴＴＣＴＣＣＧＴＣＧＡＡＧＧＡＴＴＣＣＡＡＣＣ 合于稻瘟病的遗传鉴定。 ２．３定位结果 ＡＰ２２ ＲＭ１９７６６ 通过集团分离体分析法，在全基因组上筛选多 标记名称 态性标记，在抗感池筛选１８９个标记时，筛选到一个 Ｍａｒｋｅｒ 在抗感ＤＮＡ池有多态性的标记ＲＭ１９７６６，该标记 Ｃ５３ｌ２ ＡＰ２２ 反向ｆ５’一３３ ． Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ（５’ ３’） ＣＧＧＣＡＡ．Ｉ１ｌＧＣＣＡＣＧＡＴＧＡＴＡ ＧＴＧＴＡＣＴＣＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＴＣ ＡＣＴＴＣＣＡＣＣＴＣＣＣＡＣＴＣＴＣＡＴＣＧ 位于第６染色体上。将该标记筛选ＲＩＬ群体，结果发 现跟基因型标记符合。为了进一步确定该主效基因 ＲＭ１９７６６
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注：Ｒ／Ｒ：１９４—３的基因型：Ｚ／Ｚ：珍汕９７Ｂ的基因型 Ｎｏｔｅ：Ｒ／Ｒ：Ｔｈｅ ｇｅｎｏｔｙｐｉｃ ｖａｌｕｅ ｏｆ“１ ９４—３’’：Ｚ／Ｚ：Ｇｅｎｏｔｙｐｉｃ ｖａｌｕｅ ｏｆ“ＺＳ９７Ｂ’’ 基因依然是被定位在标记ＡＰ２２和ＲＭ１９７６６之间， 各种条件容易控制。本实验是在自然接种的条件下 Ｃ５３１２附近；对于穗颈瘟（Ｓ ，２００６年和２００７年的 完成的，当地的小气候也保证了稻瘟病致病群体的 数据都表明，３个标记的结果是Ｃ５３１２＞ＡＰ２２＞ 遗传稳定性。 ＲＭ１９７６６，因此可以推测，控制穗颈瘟的抗性基因也是 本研究利用重组自交系在水稻的３个关键生育 被定位在标记ＡＰ２２和ＲＭ１９７６６之间，Ｃ５３ １２附近。 期分别定位到一个抗叶瘟和穗颈瘟的主效基因，各个 ３讨论 时期的抗性基因都位于第６染色体上的ＳＳＲ标记 ＲＭ１９７６６和ＡＰ２２之间。目前，在该位点已经定位的 稻瘟病是世界性的最严重的水稻病害之一，利 基因有 ２、１９ｉ９、Ｐｉ２５（ｔ）、Ｐｉ２６（ｔ）和Ｐｉｇ．（ｔ），其中Ｐｉ２和 用抗病基因并结合分子标记辅助选择育种是快速解 Ｐｉ９已经被克隆，Ｐｉｅ（ｔ）与Ｐｉ２或Ｐｉ９紧密连锁或者等 决稻瘟病病害的一种最经济有效的方法。但目前对 位（Ｚｈｏｕ ｅｔ ａ１．，２００６；Ｑｕ ｅｔ ａ１．，２００６；Ｄｅｎｇ ｅｔ ａ１．，２００６）。 抗性基因的研究主要是针对水稻生育期的某个阶 在该位点抗性基因是成簇分布，基因成簇分布在抗病 段，尤其是在苗期。同时，并没有确切的证据证明叶 基因中是一个普遍的现象，如抗水稻白叶枯病基因 瘟抗性与穗颈瘟存在一定的正相关。因此，往往存在 簇和拟南芥的抗性基因尺ｐ 基因簇等（Ｓｏｎｇ ｅｔ 着同一主效基因在水稻不同的生育时期抗性不一致 ａ１．，１９９５；Ｂｏｔｅｌｌａ ｅｔ ａ１．，１９９８）。有研究证明，成簇分布 的问题（Ｚｈｕａｎｇ ｅｔ ａ１．，２００２）。本实验在自然诱发的条 的抗性基因会对多个病原菌或者单个病原菌的多个 件下，对水稻的整个生育期进行稻瘟病自然诱发鉴 生理小种提供抗性（ｖａｎ ｄｅｒ Ｖｏｓｓｅｎ ｅｔ ａ１．，２０００），这从 定，通过全基因组分子标记定位研究，并最终将主效 某方面也解释了品种的广谱持久抗性。本实验所定位 基因定位在标记ＡＰ２２和ＲＭ１９７６６之间，Ｃ５３１２附 的基因是否为已经克隆或定位的等位基因，需要进一 近，并且暂时命名为Ｒ６。尽管不能确定３个时期的 步用等位性测验或测序的方法证明。 抗性基因是否同一个基因，但是仍然可以通过分子 本研究的群体亲本之一，珍汕９７Ｂ是我国应用 标记辅助选择（ｍａｒｋｅｒ．ａｓｓｉｓｔｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ＭＡＳ）来改 面积最大，使用最广泛的水稻雄性不育系珍汕９７Ａ 良感病品种，这将会有效的解决不同生育期抗性不 的保持系，在生产上具有重要的应用价值。因此可以 同的问题。 选取含有抗性基因并且农艺性状类似珍汕９７Ｂ的优 生产上一般认为，穗颈瘟比叶瘟具有更重要的 良家系作为育种的中间材料，这将会加快育种进程。 研究价值。然而目前的大多数研究都主要集中在叶 本实验在２００６年和２００７年的通过考察整个群体的 瘟抗性的研究上，一个可能的原因就是人工接种的 表型，均发现表现高抗稻瘟病的家系并且同时与标
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水稻全生育期稻瘟病抗性遗传及其基因定位研究 Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆＲｉｃｅ Ｂｌａｓｔ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆＲｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ｇｅｎｅｓ Ｔｈｒｏｕｇｈｏｕｔ ａｌｌ Ｓｔａｇｅｓ ｉｎＲｉｃ８２９ ｅ 记ＡＰ２２，Ｃ５３２１和ＲＭ１９７６６紧密连锁，具有极好的 ａｎｄ Ｗａｎｇ Ｇ．Ｌ．，２００６，Ｔｈｅ ｂｒｏａｄ－ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｂｌａｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ 广谱田间抗性，其株型和产量表型都和珍汕９７Ｂ接 ｇｅｎｅ Ｐ／９ ｅｎｃｏｄｅｓ ａｎ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ－－ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ・・ｌｅｕｃｉｎｅ・－ｉｒｃｈ ｒｅ－－ 近，这将是极有价值的育种中间材料。 ｐｅａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｉｓ ａ ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ｈｔｅ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｆａｍｉｌｙ ｉｎ ｒｉｃｅ， Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１７２：１９０１—１９１４ 参考文献 Ｓｏｎｇ Ｗ．Ｙ．，Ｗａｎｇ Ｇ．Ｌ．，Ｃｈｅｎ Ｌ．Ｌ．，Ｋｉｍ Ｈ．Ｓ．，Ｐｉ Ｌ．Ｙ．，Ｈｏｌｓｔｅｎ Ｔ．， Ｇａｒｄｎｅｒ Ｊ．，Ｗａｎｇ Ｂ．，Ｚｈａｉ Ｗ．Ｘ．，Ｚｈｕ Ｌ．Ｈ．，Ｆａｕｑｕｅｔ Ｃ．，ａｎｄ Ｂｏｎｍａｎ Ｊ．Ｍ．，Ｖｅｒｇｅｌ Ｄ．，Ｄｉｏｓ Ｔ．Ｉ．，ａｎｄ Ｋｈｉｎ Ｍ．Ｍ．，１ ９８６，Ｐｈｙｓｉ・ Ｒｏｎａｌｄ Ｐ．，１ ９９５，Ａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｋｉｎａｓｅ－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｎｃｏｄｅｄ ｂｙ ｏｌｏｇｉｃ ｓｐｅｃｉａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ ｏｒｙｚａｅ ｉｎ ｔｈｅ Ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｓ， ｒｉｃｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ ｊ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７０：１８０４—１８０６ Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓ．，７０：７６７－７６９ Ｔｅｎｍｙｋｈ Ｓ．，Ｄｅｃｌｅｒｃｋ Ｇ．，Ｌｕａｓｈｏｖａ Ａ．，Ｌｉｐｏｖｉｃｈ Ｌ．，Ｃａｒｔｉｎｈｏｕｒ Ｓ．， ＢｏｔｅｌｌａＭＡ．，ＰａｒｋｅｒＪ…Ｅ ＦｒｏｓｔＬ．Ｎ．，Ｂｉｔｔｎｅｒ－ＥｄｄｙＰ…Ｄ ＢｅｙｎｏｎＪ＿Ｌ， ａｎｄ ＭｃＣｏｕｃｈ Ｓ．Ｒ．，２００１，Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ａｎｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｄａｎｉｅｌｓ Ｍ．Ｊ．，Ｈｏｌｕｂ Ｅ．Ｂ．，ａｎｄ Ｊｏｎｅｓ Ｊ．Ｄ．，１ ９９８，ｎ ｅ ｇｅｎｅｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅｓ ｉｎ ｉｒｃｅ（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．），ｆｆｅｑｕｅｎ－ ｏｆｔｈｅ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ＲＰＰｌ ｃｏｍｐｌｅｘ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｌｏｃｕｓ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅ ｃｙ，ｌｅｎｇｔｈ ｖａｒｉａｔｉｏｎ，ｔｒａｎｓｐｏｓｏｎ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ，ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔｉｎｃｔ Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ ａｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ， ｍａｒｋｅｒ ｐｏｔｅｎｔｉａ１．Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．．１ｌ：１４４１．１４５２ Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌ１．１０：１８４７—１８６０ Ｔｅｎｍｙｋｈ Ｓ．，Ｐａｒｋ Ｗ．Ｄ．，Ａｙｒｅｓ Ｎ．，Ｃａｒｔｉｈｏｕｒ Ｓ．，Ｈａｕｃｋ Ｎ．， Ｄｅｎｇ Ｙ．，Ｚｈｕ Ｘ．，Ｓｈｅｎ Ｙ．，ａｎｄ Ｈｅ Ｚ．，２００６，Ｇｅｎｅｔｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉ— Ｌｉｐｏｖｉｃｈ Ｌ，Ｃｈｏ Ｙ．Ｇ．，Ｉｓｈｉｉ Ｔ．，ａｎｄ ＭｃＣｏｕｃｈ Ｓ－Ｒ，２０００，Ｍ印・ ｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｆｎｅ ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆｔｈｅ ｂｌａｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｌｏｃｕｓ Ｐ／ｇｍ『ｆＪ ｐｉｎｇ ａｎｄ ｇｅｎｏｍｅ ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｉｎ ｔｉｇｈｔｌｙ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ Ｐ／２ ａｎｄ Ｐ／９ ｉｎ ａ ｂｒｏａｄ—ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｉｒｃｅ（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．），Ｔｈｅｏｒ．Ａｐｐ１．Ｇｅｎｅｔ．，１００：６９７－７１２ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｖａｒｉｅｔｙ，Ｔｈｅｏｒ．Ａｐｐ１．Ｇｅｎｅｔ．，１ １３：７０５—７１３ ｖａｎ ｄｅｒ Ｖｏｓｓｅｎ Ｅ．Ａ．Ｇ．，ｖａｎ ｄｅｒ Ｖｏｏｒｔ Ｊ．Ｎ．Ａ．Ｍ．Ｒ．，Ｋａｎｙｕｋａ Ｋ．， Ｌｉ Ｌ．Ｙ．，ａｎｄ Ｊｉｎｇ Ｊ．Ｘ．，２００６，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｌｏｎｉｎｇ Ｂｅｎｄａｈｍａｎｅ Ａ．，Ｓａｎｄｂｒｉｎｋ Ｈ．，Ｂａｕｌｃｏｍｂｅ Ｄ．Ｃ．，Ｂａｋｋｅｒ Ｊ．， ｏｆ ｉｒｃｅ ｂｌａｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅｓ，Ｚｈｏｎｇｇｕｏ Ｎｏｎｇｘｕｅ Ｔｏｎｇｂａｏ Ｓｔｉｅｋｅｍａ Ｗ．Ｊ．，ａｎｄ Ｋ１ｅｉｎ—Ｌａｎｋｈｏｒｓｔ Ｒ．Ｍ．，２０００，Ｈｏｍｏ— （Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ），２２（１）：４９—５３（李落 ｌｏｇｕｅｓ ｏｆ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ ｃｌｕｓｔｅｒ ｉｎ ｐｏｔａｔｏ ｃｏｎｆｅｒ ｒｅ— 叶，井金学，２００６，稻瘟病抗性基因的分子定位及克隆，中 ｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ：ａ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ ａ ｎｅｍａｔｏｄｅ，Ｐｌａｎｔ 国农学通报，２２（１）：４９—５３） Ｊ．，２３（５）：５６７—５７６ Ｌｉ Ｙ．Ｂ．，Ｗｕ Ｃ．Ｊ．，Ｊｉａｎｇ Ｇ．Ｈ．，Ｗａｎｇ Ｌ．Ｑ．，ａｎｄ Ｈｅ Ｙ．Ｑ．，２００７， Ｚｅｎｂａｙａｓｈｉ Ｋ．，Ａｓｈｉｚａｗａ Ｔ．，Ｔａｎｉ Ｔ．，ａｎｄ Ｋｏｉｚｕｍｉ Ｓ．，２００２， Ｄｙｎａｍｉｃ ａｎａｌｙｓｅｓ ｏｆ ｉｒｃｅ ｂｌａｓｔ ｒｅｓｉｓｔｎａｃｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ＱＴＬ（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｔｒａｉｔ ｌｏｃｕｓ）ｃｏｎｆｅｒｒｉｎｇ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ａｎｄ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ，Ｐｌａｎｔ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，１２６： ｐａｒｔｉａｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｌｅａｆｂｌａｓｔ ｎｉ ｒｉｃｅ ｃｕｌｔｉｖａｒ Ｃｈｕｂｕ ３２，Ｔｈｅ— ５４１．５４７ ｏｒ．Ａｐｐ１．Ｇｅｎｅｔ．，１０４（４）：５４７—５５２ Ｌｉｕ Ｘ．Ｑ．，Ｙａｎｇ Ｑ．ｚ．，Ｌｉｎ Ｆ．，Ｈｕａ Ｌ．Ｘ．，Ｗａｎｇ Ｃ．Ｔ．，Ｗａｎｇ Ｌ．，ａｎｄ Ｚｈｏｕ Ｂ．，Ｑｕ Ｓ．Ｈ．，Ｌｉｕ Ｇ…Ｆ Ｄｏｌａｎ Ｍ．，Ｓａｋａｉ Ｈ．，Ｌｕ Ｇ．Ｄ．，Ｂｅｌ－ Ｐａｎ Ｑ．Ｈ．，２００７，Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｆｎｅ ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆＰｉ３９（ｔ），ａ ｌｉｚｚｉ Ｍ．，ａｎｄ Ｗａｎｇ Ｇ．Ｌ．，２００６，Ｔｈｅ ｅｉｇｈｔ ａｍｉｎｏ・ａｃｉｄ ｄｉｆｅｒ－ ｍａｊｏｒ ｇｅｎｅ ｃｏｎｆｅｒｒｉｎｇ ｔｈｅ ｂｒｏａｄ－ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｅｎｃｅｓ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｒｅｅ ｌｅｕｃｉｎｅ—ｉｒｃｈ ｒｅｐｅａｔｓ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｐ／２ ａｎｄ舷 Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｏｒｙｚａｅ，Ｍｏ１．Ｇｅｎｅｔ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，２７８：４０３－４１０ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｔｏ Ｍｉｃｈｅｌｍｏｒｅ Ｒ．Ｗ．，Ｐａｒａｎ Ｉ．，ａｎｄ Ｋｅｓｓｅｌｉ Ｒ．Ｖ．，１９９１，Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａ－ Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｅ口，Ｍｏ１．Ｐｌａｎｔ－Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔ．，１９（１１）： ｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｒｋｅｒｓ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ ｄｉｓｅａｓｅ．ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ｂｙ ｂｕｌｋｅｄ １２１６．１２２８ ｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ ｒａｐｉｄ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ Ｚｈｕａｎｇ Ｊ．Ｙ．，Ｍａ Ｗ．Ｂ．，Ｗｕ Ｊ．Ｌ．，Ｃｈａｉ ＲＹ．，Ｌｕ Ｊ．，Ｆａｎ Ｙ…Ｙ Ｊｉｎ Ｍ．Ｚ．， ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｇｅｎｏｍｉｃ ｒｅｇｉｏｎｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ， Ｌｅｕｎｇ Ｈ．，ａｎｄ Ｚｈｅｎｇ Ｋ．Ｌ．，２００２，Ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ｌｅａｆ ａｎｄ ｎｅｃｋ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ１．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８８：９８２８—９８３２ ｂｌａｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ｗｉｈｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ ａｎａｌｏｇ，ＲＡＰＤ Ｑｕ Ｓ．Ｈ．，Ｌｉｕ Ｇ．Ｆ．，Ｚｈｏｕ Ｂ．，Ｂｅｌｌｉｚｚｉ Ｍ．，Ｚｅｎｇ Ｌ．，Ｄａｉ Ｌ．Ｙ．，Ｈａｎ Ｂ．， ａｎｄ ＲＦＬＰ ｉｎ ｒｉｃｅ，Ｅｕｐｈｙｔｉｃａ，１２８：３６３－３７０
2024年3月7日发(作者：廉昊苍)
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分子植物育种，２００８年，第６卷，第５期，第８２５—８２９页 Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，２００８，Ｖｏ１．６，Ｎｏ．５，８２５—８２９ 研究报告 Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｒｅｐｏｒｔ 水稻全生育期稻瘟病抗性遗传及其基因定位研究 高冠军 李桂菊２包亮 何予卿－． １华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室，武汉，４３００７０；２湖北省宜昌市农业科学研究所，宜昌，４４３００４ 通讯作者，ｙｑｈｅ＠ｍａｉｌ．ｈｚａｕ．ｅｄｕ．ｅｎ 摘 要稻瘟病是最严重的世界性水稻病害之一。本实验利用高抗稻瘟病品种１９４—３和珍汕９７Ｂ构建的重 组自交系群体，通过自然诱发实验，在两个年度重复的情况下，全生育期调查水稻生长的３个关键时期一分 蘖期叶瘟、抽穗期叶瘟和成熟期穗颈瘟的抗性表现，通过集团分离分析法（ｂｕｌｋｅｄ ｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ，ＢＳＡ） 初步定位稻瘟病主效抗性基因。结果表明分蘖期和抽穗期的叶瘟、以及穗颈瘟的抗性表型频率均呈双峰分 布，说明控制水稻叶瘟和穗颈瘟均表现为一对主效基因控制；全基因组分子标记分析将该稻瘟病抗性基因定 位于水稻第６染色体上，处于分子标记ＡＰ２２和ＲＭ１９７６６之间。该抗性基因来源于重组自交系的抗性亲本 １９４—３，并命名为Ｒ６。本实验为稻瘟病的持久抗性分子标记辅助选择育种和基因克隆提供了基因资源。 关键词 水稻。稻瘟病，基因定位，分子标记 Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｒｉｃｅ Ｂｌａｓｔ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ｇｅｎｅｓ Ｔｈｒｏｕｇｈｏｕｔ ａｌｌ Ｓｔａｇｅｓ ｉｎ Ｒｉｃｅ Ｇａｏ Ｇｕａｎｊｕｎ Ｌｉ Ｇｕｉｊｕ Ｂａｏ Ｌｉａｎｇ Ｈｅ Ｙｕｑｉｎｇ ’ １ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｃｒｏｐ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｇｅｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ，４３００７０；２ Ｙｉｃｈａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｙｉｃｈａｎｇ，４４３００４ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ．ｙｑｈｅ＠ｍａｉｌ．ｈｚａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｒｉｃｅ ｂｌａｓｔ ｉｓ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｐｒｅｖａｉｌｉｎｇ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ．Ａ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｉｎｂｒｅｄ ｌｉｎｅｓ，ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ａ ｃｒｏｓｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ａ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｃｕｌｔｉｖａｒ １ ９４—３ ａｎｄ ａ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ ｃｕｌｔｉｖａｒ Ｚｈｅｎｓｈａｎ ９７Ｂ，ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄ ｆｏｒ ｉｔｓ ｂｌａｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｕｎｄｅｒ ｎａｔｕｒａｌ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍａｐｐｅｄ ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ ｂｙ ｂｕｌｋｅｄ ｓｅｇｒｅｇａｔｅ ａｎａｌｙｓｉｓ（ＢＳＡ）．Ｏｎｅ ｇｅｎｅ，Ｒ６，ｗａｓ ｌｏｃａｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｇｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｗｏ ｍａｒｋｅｒｓ ＡＰ２２ ａｎｄ ＲＭ１９７６６ ｏｎ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ６．Ｔｈｅ ｍａｊｏｒ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｒｆｏｍ ｔｈｅ ｒｅｓｉｓａｔｎｔ ｃｕｌｔｉｖａｒ １９４—３．Ｔｈｉｓ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｓｈｏｗ— ｉｎｇ ｔｏ ｒｅｓｉｓｔ ｌｅａｆｂｌａｓｔ ａｎｄ ｎｅｃｋ ｂｌａｓｔ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｗｈｏｌｅ ｄｕｒａｔｉｏｎ ａｔ ｔｈｅ ｎａｔｕｒａｌ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ｏｕｒ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｉｌｌ ｂｅ ｕｓｅｆｕ１ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｕｒａｂｌｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｐｒｏｇｒａｍ ｂｙ ｍａｒｋｅｒ—ａｓｓｉｓｔｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｅｎｅ ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆｔｈｅ Ｒ６． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ｒｉｃｅ，Ｂｌａｓｔ，Ｇｅｎｅ ｍａｐｐｉｎｇ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒ 稻瘟病是一种真菌性病害，由稻瘟病菌Ｐｖｒ ｃｕ— 杂性和生理小种为适应环境的迅速变异的特点，导 ｌａｒｉａ ｇｒｉｓｅａ Ｓａｃｃａｒｄｏ（有性态称为（ｈｅｂｅｒｔ）Ｂａｒｒ）引起 致生产上推广的品种抗性很快减弱或丧失。因此，寻 的，是世界性的水稻病害。稻瘟病菌可在水稻的整个 找广谱持久的抗性基因是克服水稻稻瘟病品种的一 生育期危害水稻，依据感染的部位不同可以分为：叶 种有效方法。 瘟，节瘟，穗颈瘟和谷粒瘟等。其中穗颈瘟的危害大 水稻对稻瘟病的抗性一般可以分为两种类型， 于叶瘟和其它的危害，严重时可以导致颗粒无收 完全抗性和不完全抗性；完全抗性由单基因控制，具 （Ｚｈｕａｎｇ ｅｔ ａ１．，２００２）。实践证明，选育和利用抗病品 有质量效应和小种专化抗性，抗性容易丧失；不完全 种是控制稻瘟病最经济有效的方法之一ｆ李落叶和 抗性，又称为持久抗性或田间抗性，由微效多基因控 井金学，２００６）。由于稻瘟病菌本身具有种群的遗传复 制，具有数量效应和非小种专化抗性。但是也有单个 基金项目：本研究由科技部８６３项目（２００６ＡＡ１００１０１）、９７３项目（２００７ＣＢｌ０９０００）和国家自然科学基金（３０６７１１１４）资助
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分子植物育种 ８２６ Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ Ｐｌａ】１ｔ 主效抗性基因表现持久抗性的报道，如脚 Ｊ ）和 级。穗颈瘟的考察是在整个家系内（１０株）考察穗颈 在Ｃｈｕｂｕ３２定位到的一个主效基因（Ｚｅｎｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａ１．， 瘟率：穗颈瘟率＝感病穗数／家系总穗数。 ２００２）。另外利用分子标记技术已经定位了五十多个 稻瘟病抗性基因位点（Ｌｉｕ ｅｔ ａ１．，２００７），大多数抗性 １．４ ＢＳＡ法和遗传分析 基因都集中在第６、第１１和第１２染色体上，并且成 根据各个时期的表型调查结果，分别在分蘖期， 簇分布（Ｄｅｎｇ ｅｔ ａ１．，２００６）。 抽穗期和成熟期各选择抗性家系和感病家系各１５ 本实验通过由抗稻瘟病材料构建的重组自交系 株，将其ＤＮＡ混合成抗病池（Ｒ）和感病池（Ｓ），共计３ 群体，通过在自然生态条件下全生育期诱发稻瘟病， 个抗病ＤＮＡ池和３个感病ＤＮＡ池。利用在水稻ｌ２ 结合构建的分子标记遗传连锁图谱，目的在于寻找 条染色体上平均分布的１８９个ＳＳＲ引物在Ｒ和ｓ池 全生育期具有广谱抗稻瘟病基因，为水稻稻瘟病的 中筛选多态性标记。利用ＢＳＡ法（ｂｕｌｋｓ ｏｆｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎ 抗病育种提供理论依据和基因资源。 ａｎａｌｙｓｉｓ）（Ｍｉｃｈｅｌｍｏｒｅ ｅｔ ａ１．，１９９１）初步定位ＲＩＬ群体 的主效抗稻瘟病基因。其中，ＳＳＲ标记的引物序列来 １材料与方法 源于Ｔｅｍｎｙｋｈ等（２０００；２００１）。 １．１材料 ２结果分析 本研究所用的重组自交系（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｉｎｂｒｅｄ ｌｉｎｅｓ，ＲＩＬｓ）是由高抗稻瘟病品种１９４—３和珍汕９７Ｂ ２．１亲本和Ｉ 群体的抗稻瘟病表现 杂交通过单粒传法（ＳＳＤ）构建而成，该重组自交系Ｆ 表１是各个家系与亲本的比较差异，从表１ 代共包括１７１个家系。１９４—３由宜昌地区农科所提 中可以看出两个亲本１９４－３和珍汕９７Ｂ在抗性级 供，该材料在湖北省宜昌远安经过多年鉴定，表现为 别上有明显差异，１９４—３表现高抗稻瘟病，珍汕 持久高抗稻瘟病，珍汕９７Ｂ是一个优良的杂交水稻 ９７Ｂ表现感病。群体各个家系的抗性级别也在抗 保持系，表现感稻瘟。用于诱发稻瘟病材料Ｃ０３９是 性范围上有明显的差异。图１是重组自交系群体 从国际水稻所引进的高感稻瘟病品种。 内家系在２００６年和２００７年的３个不同生育期的 １．２田间种植 抗性级别分布，从中可以看出，２００６年和２００７年 分蘖时期和抽穗期的叶瘟抗性分布均呈现出明显 实验材料于２００６年和２００７年连续两年种植于 的双峰分布，说明在抽穗期前有一个主效抗叶瘟 湖北省宜昌市远安县望家乡，该实验点是湖北省水稻 基因。２００６年和２００７年的穗颈瘟抗性分布也呈现 区域实验稻瘟病抗性自然诱发鉴定点，海拔５４０ ｍ， 出明显的双峰分布，同样说明在抽穗期有一个主 平均气温接近２５￣Ｃ，空气湿度大，该小气候非常适合 效穗颈瘟抗性基因。 稻瘟病的自然发生。 ａＸＥｓ的田间种植：每个家系一行１０株，株行间 表ｌ重组自交系群体的亲本及家系在２００６年和２００７年的表 距为１６．５ ｅｍ￣２６．５ ｃｍ。为了充分诱发稻瘟病，材料 型值统计 Ｔａｂｌｅ １ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｂｌａｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｒａｉｔｓ ｉｎ ｐａｒｅｎｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ 的四周种上ＣＯ３９作保护行和诱发材料。其田间管 ＲｍＳ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ２００６ ａｎｄ ２００７ 理按当地丰产田标准管理，治虫不治病，禁用杀菌剂 （Ｌｉ ｅｔ ａ１．，２００７）。 １．３稻瘟病的数据调查 根据Ｂｏｎｍａｎ等（１９８６）￣０定的标准，叶瘟采用 ０～５级抗性分级，其中０￣３为抗病，４～５为感病：穗颈 瘟采用百分比抗性分级，抗性分级采用ＩＲＲＩ的０、１、 ３、５、７、９级标准，其中穗瘟率０￣２５％为抗性，２６％～ １００％为感病。叶瘟抗性调查分别在群体的分蘖期和 抽穗期每隔３０ ｄ调查１次，在距离成熟期一周前考 注：ＦＹ：分蘖期叶瘟；ＣＹ：抽穗期叶瘟：ＳＷ：成熟期穗颈瘟 察各个家系的穗颈瘟抗性。叶瘟考察是选取每个家 Ｎｏｔｅ：ＦＹ：Ｌｅａｆ ｂｌａｓｔ ａｔ ｆｉｌｌｅｔｉｎｇ ｓｔａｇｅ；ＣＹ：Ｌｅａｆ ｂｌａｓｔ ａｔ ｈｅａｄｉｎｇ 系中间的８株鉴定新长出来的叶片上的病斑作为等 ｓｔａｇｅ；ＳＷ：Ｎｅｃｋｂｌａｓｉａｔ ｒｅａｐｉｎｇ ｓｔａｇｅ
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水稻全生育期稻瘟病抗性遗传及其基因定位研究 … Ｇｅｎｅｉｔｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆＲｉｃｅ Ｂｌａｓｔ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆＲｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ｇｅｎｅｓ Ｔｈｒｏｕｇｈｏｕｔ ａｌｌ璺 ！ ６Ｏ ：：： 的位置，在ＲＭ１９７６６附近又筛选了几个标记，结果 发现共有３个标记（ＲＭ２７６、ＡＰ２２和Ｃ５３１２）在抗感 ＤＮＡ池有多态性，引物序列见表３。 ５０ 籁望４０ ＜－－芎３０ ２０ 将这３个标记筛选ＲＩＬ群体，从基因型与表型 的对应分析（表４）可以看出：在３个时期调查的性 状，ＲＭ２７６的Ｒ／Ｒ基因型和Ｚ／Ｚ基因型所对应的表 型差异小于ＲＭ１９７６６的ＲｆＲ基因型与Ｚ／Ｚ基因型 ｌＯ ０ ０．０ Ｏ．５ １．０ １．５ ２．０ ２．５ ３．０ ３．５ ４．０ ４．５ ５．０ 抗性级别 Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｌｅｖｅｌ ５０ 所对应的表型差异，因此可以断定３个时期的抗性 基因的位置必定偏向标记Ｉ １９７６６的一侧；对于分 螯４０ ＜－－亏３０ ２０ ｌＯ ０ … 。 ．蘖期的叶瘟（ＦＹ），可以看出两个年度的差异结果都 『１Ｉ． 。『１Ｉ。『１Ｉ． ．ｒＪＩ．厂＿ 抗性级别 是标记Ｃ５３１２＞ＡＰ２２＞ＲＭ１９７６６，由此认为控制分蘖 期叶瘟的抗性基因可以被定位在标记ＡＰ２２和 ＲＭ１９７６６之间，Ｃ５３１２附近；对于抽穗期的叶瘟 （ＣＹ），２００６年度的３个标记的结果是Ｃ５３１２ ＡＰ２２＞ＲＭ１９７６６，２００７年度３个标记结果是Ｃ５３ １２＞ ＡＰ２２＞ＲＭ１９７６６，结果说明控制抽穗期叶瘟的抗性 表２双因素方差分析３个时期表型在两个年度的遗传效应 Ｔａｂｌｅ ２ Ｓｕｍｍａｒｙ ｏｆｅｆｆｅｃｔｓ ｒｅｓｏｌｖｅｄ ｂｙ ｔｗｏ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ ｏｆｔｈｅ ｔｈｒｅｅｔｒａｉｔｓ ｏｆｔｈｅＲＩＬｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｍｅａｓｕｒｅｄｉｎｔｗｏｙｅａｒｓ ０．０ ０．５ １．０ １．５ ２．０ ２．５ ３．０ ３．５ ４．０ ４．５ ５．０ Ｄａｍａｇｅ ｓｃｏｒｅ ４５ ４０ 餐． ３３０５ ＜－－垛． ２５ 。２０ ＿１５ １０ ５ ０ ０ １０ ２０ ３０ ４０ ５０ ６０ ７０ ８０ ９０ ｌ００ 穗颈瘟率（％） Ｒａｔｅｏｆｎｅｃｋｂｌａｓｔ（％） 图ｌ重组自交系在两年度３个时期表型值的频率分布图 注：ＦＹ：分蘖期叶瘟：ＣＹ：抽穗期叶瘟；ＳＷ：成熟期穗颈瘟 Ｆｉｇｕｒｅ １ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｂｌａｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｒａｉｔｓ ａｔ ｔｈｒｅｅ ｓｔａｇｅｓ ｉｎ ２ ｙｅａｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｌＥｓ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ Ｎｏｔｅ：ＦＹ：Ｌｅａｆ ｂｌａｓｔ ａｔ ｆｉｌｌｅｔｉｎｇ ｓｔａｇｅ；ＣＹ：Ｌｅａｆ ｂｌａｓｔ ａｔ ｈｅａｄｉｎｇ ｓｔａｇｅ；ＳＷ：Ｎｅｃｋ ｂｌａｓｔ ｔ ｒａｅａｐｉｎｇ ｓｔａｇｅ ２．２稻瘟病的遗传和环境遗传效应分析 表２列出２００６年和２００７年度稻瘟病在不同时 注：Ｇ：遗传效应；Ｅ：环境效应 期的遗传和环境方差分析，结果表明，除抽穗期的环 Ｎｏｔｅ：Ｇ：Ｇｅｎｅｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ；Ｅ：Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｅｆｆｅｃｔ 境方差对叶瘟影响不显著外，所有时期的遗传方差 表３ ＳＳＲ标记引物的序列 和环境方差均表现极显著水平，充分说明了在稻瘟 Ｔａｂｌｅ ３ Ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆｔｈｅ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ 病的发生受遗传和环境因子共同作用的结果，既有 稻瘟病基因的作用也表明该稻瘟病自然诱发点也适 标记名称 Ｍａｒｋｅｒ Ｃ５３１２ 正向（５’一３’） Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ（５’－÷３’） ＡＴＣＣＡＡＡＣＣＣＧＴＴＧＴＴＧＣＡＣ ＧＴＧＣＡＴＧＡＧＴＣＣＡＧＣＴＣＡＡＡ ＴＴＣＴＣＣＧＴＣＧＡＡＧＧＡＴＴＣＣＡＡＣＣ 合于稻瘟病的遗传鉴定。 ２．３定位结果 ＡＰ２２ ＲＭ１９７６６ 通过集团分离体分析法，在全基因组上筛选多 标记名称 态性标记，在抗感池筛选１８９个标记时，筛选到一个 Ｍａｒｋｅｒ 在抗感ＤＮＡ池有多态性的标记ＲＭ１９７６６，该标记 Ｃ５３ｌ２ ＡＰ２２ 反向ｆ５’一３３ ． Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ（５’ ３’） ＣＧＧＣＡＡ．Ｉ１ｌＧＣＣＡＣＧＡＴＧＡＴＡ ＧＴＧＴＡＣＴＣＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＴＣ ＡＣＴＴＣＣＡＣＣＴＣＣＣＡＣＴＣＴＣＡＴＣＧ 位于第６染色体上。将该标记筛选ＲＩＬ群体，结果发 现跟基因型标记符合。为了进一步确定该主效基因 ＲＭ１９７６６
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注：Ｒ／Ｒ：１９４—３的基因型：Ｚ／Ｚ：珍汕９７Ｂ的基因型 Ｎｏｔｅ：Ｒ／Ｒ：Ｔｈｅ ｇｅｎｏｔｙｐｉｃ ｖａｌｕｅ ｏｆ“１ ９４—３’’：Ｚ／Ｚ：Ｇｅｎｏｔｙｐｉｃ ｖａｌｕｅ ｏｆ“ＺＳ９７Ｂ’’ 基因依然是被定位在标记ＡＰ２２和ＲＭ１９７６６之间， 各种条件容易控制。本实验是在自然接种的条件下 Ｃ５３１２附近；对于穗颈瘟（Ｓ ，２００６年和２００７年的 完成的，当地的小气候也保证了稻瘟病致病群体的 数据都表明，３个标记的结果是Ｃ５３１２＞ＡＰ２２＞ 遗传稳定性。 ＲＭ１９７６６，因此可以推测，控制穗颈瘟的抗性基因也是 本研究利用重组自交系在水稻的３个关键生育 被定位在标记ＡＰ２２和ＲＭ１９７６６之间，Ｃ５３ １２附近。 期分别定位到一个抗叶瘟和穗颈瘟的主效基因，各个 ３讨论 时期的抗性基因都位于第６染色体上的ＳＳＲ标记 ＲＭ１９７６６和ＡＰ２２之间。目前，在该位点已经定位的 稻瘟病是世界性的最严重的水稻病害之一，利 基因有 ２、１９ｉ９、Ｐｉ２５（ｔ）、Ｐｉ２６（ｔ）和Ｐｉｇ．（ｔ），其中Ｐｉ２和 用抗病基因并结合分子标记辅助选择育种是快速解 Ｐｉ９已经被克隆，Ｐｉｅ（ｔ）与Ｐｉ２或Ｐｉ９紧密连锁或者等 决稻瘟病病害的一种最经济有效的方法。但目前对 位（Ｚｈｏｕ ｅｔ ａ１．，２００６；Ｑｕ ｅｔ ａ１．，２００６；Ｄｅｎｇ ｅｔ ａ１．，２００６）。 抗性基因的研究主要是针对水稻生育期的某个阶 在该位点抗性基因是成簇分布，基因成簇分布在抗病 段，尤其是在苗期。同时，并没有确切的证据证明叶 基因中是一个普遍的现象，如抗水稻白叶枯病基因 瘟抗性与穗颈瘟存在一定的正相关。因此，往往存在 簇和拟南芥的抗性基因尺ｐ 基因簇等（Ｓｏｎｇ ｅｔ 着同一主效基因在水稻不同的生育时期抗性不一致 ａ１．，１９９５；Ｂｏｔｅｌｌａ ｅｔ ａ１．，１９９８）。有研究证明，成簇分布 的问题（Ｚｈｕａｎｇ ｅｔ ａ１．，２００２）。本实验在自然诱发的条 的抗性基因会对多个病原菌或者单个病原菌的多个 件下，对水稻的整个生育期进行稻瘟病自然诱发鉴 生理小种提供抗性（ｖａｎ ｄｅｒ Ｖｏｓｓｅｎ ｅｔ ａ１．，２０００），这从 定，通过全基因组分子标记定位研究，并最终将主效 某方面也解释了品种的广谱持久抗性。本实验所定位 基因定位在标记ＡＰ２２和ＲＭ１９７６６之间，Ｃ５３１２附 的基因是否为已经克隆或定位的等位基因，需要进一 近，并且暂时命名为Ｒ６。尽管不能确定３个时期的 步用等位性测验或测序的方法证明。 抗性基因是否同一个基因，但是仍然可以通过分子 本研究的群体亲本之一，珍汕９７Ｂ是我国应用 标记辅助选择（ｍａｒｋｅｒ．ａｓｓｉｓｔｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ＭＡＳ）来改 面积最大，使用最广泛的水稻雄性不育系珍汕９７Ａ 良感病品种，这将会有效的解决不同生育期抗性不 的保持系，在生产上具有重要的应用价值。因此可以 同的问题。 选取含有抗性基因并且农艺性状类似珍汕９７Ｂ的优 生产上一般认为，穗颈瘟比叶瘟具有更重要的 良家系作为育种的中间材料，这将会加快育种进程。 研究价值。然而目前的大多数研究都主要集中在叶 本实验在２００６年和２００７年的通过考察整个群体的 瘟抗性的研究上，一个可能的原因就是人工接种的 表型，均发现表现高抗稻瘟病的家系并且同时与标
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水稻全生育期稻瘟病抗性遗传及其基因定位研究 Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆＲｉｃｅ Ｂｌａｓｔ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆＲｅｓｉｓｔａｎｃｅ Ｇｅｎｅｓ Ｔｈｒｏｕｇｈｏｕｔ ａｌｌ Ｓｔａｇｅｓ ｉｎＲｉｃ８２９ ｅ 记ＡＰ２２，Ｃ５３２１和ＲＭ１９７６６紧密连锁，具有极好的 ａｎｄ Ｗａｎｇ Ｇ．Ｌ．，２００６，Ｔｈｅ ｂｒｏａｄ－ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｂｌａｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ 广谱田间抗性，其株型和产量表型都和珍汕９７Ｂ接 ｇｅｎｅ Ｐ／９ ｅｎｃｏｄｅｓ ａｎ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ－－ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ・・ｌｅｕｃｉｎｅ・－ｉｒｃｈ ｒｅ－－ 近，这将是极有价值的育种中间材料。 ｐｅａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｉｓ ａ ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ｈｔｅ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｆａｍｉｌｙ ｉｎ ｒｉｃｅ， Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１７２：１９０１—１９１４ 参考文献 Ｓｏｎｇ Ｗ．Ｙ．，Ｗａｎｇ Ｇ．Ｌ．，Ｃｈｅｎ Ｌ．Ｌ．，Ｋｉｍ Ｈ．Ｓ．，Ｐｉ Ｌ．Ｙ．，Ｈｏｌｓｔｅｎ Ｔ．， Ｇａｒｄｎｅｒ Ｊ．，Ｗａｎｇ Ｂ．，Ｚｈａｉ Ｗ．Ｘ．，Ｚｈｕ Ｌ．Ｈ．，Ｆａｕｑｕｅｔ Ｃ．，ａｎｄ Ｂｏｎｍａｎ Ｊ．Ｍ．，Ｖｅｒｇｅｌ Ｄ．，Ｄｉｏｓ Ｔ．Ｉ．，ａｎｄ Ｋｈｉｎ Ｍ．Ｍ．，１ ９８６，Ｐｈｙｓｉ・ Ｒｏｎａｌｄ Ｐ．，１ ９９５，Ａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｋｉｎａｓｅ－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｎｃｏｄｅｄ ｂｙ ｏｌｏｇｉｃ ｓｐｅｃｉａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ ｏｒｙｚａｅ ｉｎ ｔｈｅ Ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｓ， ｒｉｃｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ ｊ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７０：１８０４—１８０６ Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓ．，７０：７６７－７６９ Ｔｅｎｍｙｋｈ Ｓ．，Ｄｅｃｌｅｒｃｋ Ｇ．，Ｌｕａｓｈｏｖａ Ａ．，Ｌｉｐｏｖｉｃｈ Ｌ．，Ｃａｒｔｉｎｈｏｕｒ Ｓ．， ＢｏｔｅｌｌａＭＡ．，ＰａｒｋｅｒＪ…Ｅ ＦｒｏｓｔＬ．Ｎ．，Ｂｉｔｔｎｅｒ－ＥｄｄｙＰ…Ｄ ＢｅｙｎｏｎＪ＿Ｌ， ａｎｄ ＭｃＣｏｕｃｈ Ｓ．Ｒ．，２００１，Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ａｎｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｄａｎｉｅｌｓ Ｍ．Ｊ．，Ｈｏｌｕｂ Ｅ．Ｂ．，ａｎｄ Ｊｏｎｅｓ Ｊ．Ｄ．，１ ９９８，ｎ ｅ ｇｅｎｅｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅｓ ｉｎ ｉｒｃｅ（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．），ｆｆｅｑｕｅｎ－ ｏｆｔｈｅ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ＲＰＰｌ ｃｏｍｐｌｅｘ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｌｏｃｕｓ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅ ｃｙ，ｌｅｎｇｔｈ ｖａｒｉａｔｉｏｎ，ｔｒａｎｓｐｏｓｏｎ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ，ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔｉｎｃｔ Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ ａｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ， ｍａｒｋｅｒ ｐｏｔｅｎｔｉａ１．Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．．１ｌ：１４４１．１４５２ Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌ１．１０：１８４７—１８６０ Ｔｅｎｍｙｋｈ Ｓ．，Ｐａｒｋ Ｗ．Ｄ．，Ａｙｒｅｓ Ｎ．，Ｃａｒｔｉｈｏｕｒ Ｓ．，Ｈａｕｃｋ Ｎ．， Ｄｅｎｇ Ｙ．，Ｚｈｕ Ｘ．，Ｓｈｅｎ Ｙ．，ａｎｄ Ｈｅ Ｚ．，２００６，Ｇｅｎｅｔｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉ— Ｌｉｐｏｖｉｃｈ Ｌ，Ｃｈｏ Ｙ．Ｇ．，Ｉｓｈｉｉ Ｔ．，ａｎｄ ＭｃＣｏｕｃｈ Ｓ－Ｒ，２０００，Ｍ印・ ｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｆｎｅ ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆｔｈｅ ｂｌａｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｌｏｃｕｓ Ｐ／ｇｍ『ｆＪ ｐｉｎｇ ａｎｄ ｇｅｎｏｍｅ ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｉｎ ｔｉｇｈｔｌｙ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ Ｐ／２ ａｎｄ Ｐ／９ ｉｎ ａ ｂｒｏａｄ—ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｉｒｃｅ（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．），Ｔｈｅｏｒ．Ａｐｐ１．Ｇｅｎｅｔ．，１００：６９７－７１２ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｖａｒｉｅｔｙ，Ｔｈｅｏｒ．Ａｐｐ１．Ｇｅｎｅｔ．，１ １３：７０５—７１３ ｖａｎ ｄｅｒ Ｖｏｓｓｅｎ Ｅ．Ａ．Ｇ．，ｖａｎ ｄｅｒ Ｖｏｏｒｔ Ｊ．Ｎ．Ａ．Ｍ．Ｒ．，Ｋａｎｙｕｋａ Ｋ．， Ｌｉ Ｌ．Ｙ．，ａｎｄ Ｊｉｎｇ Ｊ．Ｘ．，２００６，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｌｏｎｉｎｇ Ｂｅｎｄａｈｍａｎｅ Ａ．，Ｓａｎｄｂｒｉｎｋ Ｈ．，Ｂａｕｌｃｏｍｂｅ Ｄ．Ｃ．，Ｂａｋｋｅｒ Ｊ．， ｏｆ ｉｒｃｅ ｂｌａｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅｓ，Ｚｈｏｎｇｇｕｏ Ｎｏｎｇｘｕｅ Ｔｏｎｇｂａｏ Ｓｔｉｅｋｅｍａ Ｗ．Ｊ．，ａｎｄ Ｋ１ｅｉｎ—Ｌａｎｋｈｏｒｓｔ Ｒ．Ｍ．，２０００，Ｈｏｍｏ— （Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ），２２（１）：４９—５３（李落 ｌｏｇｕｅｓ ｏｆ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ ｃｌｕｓｔｅｒ ｉｎ ｐｏｔａｔｏ ｃｏｎｆｅｒ ｒｅ— 叶，井金学，２００６，稻瘟病抗性基因的分子定位及克隆，中 ｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ：ａ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ ａ ｎｅｍａｔｏｄｅ，Ｐｌａｎｔ 国农学通报，２２（１）：４９—５３） Ｊ．，２３（５）：５６７—５７６ Ｌｉ Ｙ．Ｂ．，Ｗｕ Ｃ．Ｊ．，Ｊｉａｎｇ Ｇ．Ｈ．，Ｗａｎｇ Ｌ．Ｑ．，ａｎｄ Ｈｅ Ｙ．Ｑ．，２００７， Ｚｅｎｂａｙａｓｈｉ Ｋ．，Ａｓｈｉｚａｗａ Ｔ．，Ｔａｎｉ Ｔ．，ａｎｄ Ｋｏｉｚｕｍｉ Ｓ．，２００２， Ｄｙｎａｍｉｃ ａｎａｌｙｓｅｓ ｏｆ ｉｒｃｅ ｂｌａｓｔ ｒｅｓｉｓｔｎａｃｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ＱＴＬ（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｔｒａｉｔ ｌｏｃｕｓ）ｃｏｎｆｅｒｒｉｎｇ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ａｎｄ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ，Ｐｌａｎｔ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，１２６： ｐａｒｔｉａｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｌｅａｆｂｌａｓｔ ｎｉ ｒｉｃｅ ｃｕｌｔｉｖａｒ Ｃｈｕｂｕ ３２，Ｔｈｅ— ５４１．５４７ ｏｒ．Ａｐｐ１．Ｇｅｎｅｔ．，１０４（４）：５４７—５５２ Ｌｉｕ Ｘ．Ｑ．，Ｙａｎｇ Ｑ．ｚ．，Ｌｉｎ Ｆ．，Ｈｕａ Ｌ．Ｘ．，Ｗａｎｇ Ｃ．Ｔ．，Ｗａｎｇ Ｌ．，ａｎｄ Ｚｈｏｕ Ｂ．，Ｑｕ Ｓ．Ｈ．，Ｌｉｕ Ｇ…Ｆ Ｄｏｌａｎ Ｍ．，Ｓａｋａｉ Ｈ．，Ｌｕ Ｇ．Ｄ．，Ｂｅｌ－ Ｐａｎ Ｑ．Ｈ．，２００７，Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｆｎｅ ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆＰｉ３９（ｔ），ａ ｌｉｚｚｉ Ｍ．，ａｎｄ Ｗａｎｇ Ｇ．Ｌ．，２００６，Ｔｈｅ ｅｉｇｈｔ ａｍｉｎｏ・ａｃｉｄ ｄｉｆｅｒ－ ｍａｊｏｒ ｇｅｎｅ ｃｏｎｆｅｒｒｉｎｇ ｔｈｅ ｂｒｏａｄ－ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｅｎｃｅｓ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｒｅｅ ｌｅｕｃｉｎｅ—ｉｒｃｈ ｒｅｐｅａｔｓ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｐ／２ ａｎｄ舷 Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｏｒｙｚａｅ，Ｍｏ１．Ｇｅｎｅｔ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，２７８：４０３－４１０ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｔｏ Ｍｉｃｈｅｌｍｏｒｅ Ｒ．Ｗ．，Ｐａｒａｎ Ｉ．，ａｎｄ Ｋｅｓｓｅｌｉ Ｒ．Ｖ．，１９９１，Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａ－ Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｅ口，Ｍｏ１．Ｐｌａｎｔ－Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔ．，１９（１１）： ｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｒｋｅｒｓ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ ｄｉｓｅａｓｅ．ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ｂｙ ｂｕｌｋｅｄ １２１６．１２２８ ｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ ｒａｐｉｄ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ Ｚｈｕａｎｇ Ｊ．Ｙ．，Ｍａ Ｗ．Ｂ．，Ｗｕ Ｊ．Ｌ．，Ｃｈａｉ ＲＹ．，Ｌｕ Ｊ．，Ｆａｎ Ｙ…Ｙ Ｊｉｎ Ｍ．Ｚ．， ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｇｅｎｏｍｉｃ ｒｅｇｉｏｎｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ， Ｌｅｕｎｇ Ｈ．，ａｎｄ Ｚｈｅｎｇ Ｋ．Ｌ．，２００２，Ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ｌｅａｆ ａｎｄ ｎｅｃｋ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ１．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８８：９８２８—９８３２ ｂｌａｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ｗｉｈｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ ａｎａｌｏｇ，ＲＡＰＤ Ｑｕ Ｓ．Ｈ．，Ｌｉｕ Ｇ．Ｆ．，Ｚｈｏｕ Ｂ．，Ｂｅｌｌｉｚｚｉ Ｍ．，Ｚｅｎｇ Ｌ．，Ｄａｉ Ｌ．Ｙ．，Ｈａｎ Ｂ．， ａｎｄ ＲＦＬＰ ｉｎ ｒｉｃｅ，Ｅｕｐｈｙｔｉｃａ，１２８：３６３－３７０