2024年3月8日发(作者：虢痴旋)
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２３８４ 实用医学杂志２００８年第２４卷第ｌ４期 三磷酸肌醇和ｂａｘ基因表达变化在ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ抑制 裸鼠肝癌增长中的作用 黄熙张继红 摘 要 目的：探讨三磷酸肌醇（Ｉ ）和ｂａｘ基因表达变化在ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ治疗裸鼠移植人肝癌中的作用。方 法：以裸鼠移植人肝癌为对照．对照组腹腔注入含０．０４％ＤＭＳＯ的ＲＰＭＩ １６４０培养基０．０５ ｍＬ／ｇ，Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ治疗组 腹腔注入ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ ｌ ｍｇ／（ｋｇ・ｄ），３周后观察肝癌增长情况，并应用同位素试剂盒检测肝癌组织ＩＰ３含量，ＲＴ—ＰＣＲ 分析癌组织ｂａｘ ｍＲＮＡ表达．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析肝癌组织ｂａｘ蛋白表达。结果：Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ治疗组肝癌体积和重量 均显著低于对照组［体积（１２．６±ｌ１．６）ｍｍ’ｕｓ（５２．３±２６．５）ｍｍ ，重量（４２．７±２７．８）ｍｇ ｕｓ（９１．３±３１．４）ｍｇ），Ｐ＜ ０．０１］，ＩＰ３含量显著低于对照组［（１３．４±１．４）ｐｍｏｌ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ５（３５．３±６．６）ｐｍｏｌ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ，Ｐ＜０．０１］，ｂａｘ ｍＲＮＡ表达显著高于对照组『灰度与面积之积的相对强度（ＲＩ）０．８８±０．２１ ｕｓ ０．５６±０．１５，Ｐ＜０．０５］，ｂａｘ蛋白表达显 著高于对照组［ＲＩ ２．８６±０．８０ ｕｓ １．３７±０．４８，Ｐ＜０．０５］。结论：Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ能减少ＩＰ３生成，上调肝癌组织ｂａｘ基因表 达．抑制裸鼠移植人肝癌增长。 关键词癌．肝细胞染料木黄酮ｂａｘ基因 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ ｏｎ ｔｒｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｉｎｏｓｉｔｏｌ ａｎｄ ｂａｘ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｍｕｄｅ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ＨＵＡＮＧ Ｘｉ ，ＺＨＡＮＧ 一ｈｏｎｇ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙＳｕｒｇｅｒｙ，ＳｈｅｎｚｈｅｎＨｏｓｐｉｔｄｏｆＢｅｉｎｇＵｎｉｒｖｅｒｃｉｔｙ，Ｓｈｅｎｚｈｅｎ ５１８０３６，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＺＨＡ ＮＧ 一ｈｏｎｇ Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｈｊｉｈｏｎｇ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｎ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｐｒｏｂｅ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ ｏｎ １，４，５－ｔｒｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｉｎｏｓｉｔｏｌ（ＩＰ３）ａｎｄ ｂａｘ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｍｕｄｅ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｉｇｈｔｅｅｎ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｅｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｇｒｏｕｐ Ｃ，ｎ＝９）ａｎｄ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ（Ｇｒｏｕｐ Ｇ，ｎ＝９）．Ｇｒｏｕｐ Ｇ ｗａｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ １ ｍｇ／（ｋｇ・ｄ）（ｉｐ）ａｎｄ Ｇｒｏｕｐ Ｃ ｗｉｔｈ Ｏ．０４％ＤＭＳＯ ＲＰＭＩ １６４０ ｍｅｄｉｕｍ Ｏ．０５ ｍＬ／ｇ ｆｏｒ ３ ｗｅｅｋｓ．Ｔｈｅ ｖｏｌｕｍｅ ａｎｄ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｗａｓ ｔｈｅｎ ｍｅａｓｕｒｅｄ，ＩＰ３，ｂａｘ ｍＲＮＡ ａｎｄ ｂａｘ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｍａｔｉｃ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｅｒｅ ａｓｓａｙｅｄ ｂｙ ＩＰ３一［ Ｈ］ Ｂｉａｒａｋ ａｓｓａｙ，ＲＴ—ＰＣＲ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ ａｎｄ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ａｎｉｍａｌｓ ｗａｓ ｌｏｗｅｒ ｉｎ Ｇｒｏｕｐ Ｇ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ Ｇｒｏｕｐ Ｃ［（１２．６±１１．６）ｍｍ ｓ（５２．３±２６．５）ｍｉｌｌ ，（４２．７土２７．８）ｍｇ ｓ（９１．３土３１．４）ｍｇ），Ｐ＜ Ｏ．Ｏ１］，ＩＰ３ ｃｏｎｔｅｎｔ ｗａｓ ｌｏｗｅｒ ｉｎ Ｇｒｏｕｐ Ｇ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ Ｇｒｏｕｐ Ｃ［（１３．４±１．４）ｐｍｏｌ／ｍｇ ｐｒｏ ｓ（３５．３±６．６）ｐｍｏｌ／ｍｇ ｐｒｏ，Ｐ ＜Ｏ．０１］，ｂａｘ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ Ｇｒｏｕｐ Ｇ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ Ｇｒｏｕｐ Ｃ［Ｒ１ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｔｈｅ ｇｒａｙ ｄｅｇｒｅｅ ｍｕｌｔｉｐｌｙ ａｒｅａ ｏｆ ｂａｘ／ｔｈｅ ｒａｙｇ ｄｅｇｒｅｅ ｍｕｌｔｉｐｌｙ ａｒｅａ ｏｆ １３－ａｃｔｉｎ Ｏ．８８±０．２ ｕｓ Ｏ．５６±０．１５，Ｐ＜Ｏ．０５］，ｂａｘ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ Ｇｒｏｕｐ Ｇ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ Ｇｒｏｕｐ Ｃ（２．８６±０．８Ｏ ｓ １．３７±０．４８．Ｐ＜０．Ｏ５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ ｃａｎ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｔａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｉｎｔｏ ｌｉｖｅｒ ｏｆ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ ｂｙ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ＩＰ３ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｂａｘ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ・ 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ Ｂａｘ ｇｅｎｅ 介导细胞增殖与凋亡的信号转导通路的发现是 恶性肿瘤研究的一大进展。通过干预细胞信号转导可 以达到抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡，实现治疗恶性肿 瘤的目的．而基因表达变化在其中起着极为重要的作 用。本研究探讨应用能抑制磷酸肌醇通路信号转导通 路关键酶活性的ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ能否调节裸鼠移植人肝癌细 胞ｂａｘ基因表达．抑制肝癌增长，为临床应用磷酸肌醇 信号通路抑制剂治疗肝细胞癌提供理论和实验依据。 １材料与方法 １．１实验材料肝癌ＨｅｐＧ２细胞株（中山大学动物 基金项目：广东药学院科研启动基金；广东省医学科学基金立项课 题（编号：Ａ２００４５３７）；深圳市科技计划项目资助课题（编号：２００６０２０５４） 作者单位：５１８０３６广东省深圳市． Ｅ京大学深圳医院肝胆外科 实验中心细胞库），ＲＰＭＩ １６４０培养基（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公 司），新生牛血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ公司），ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ（美国Ｓｉｇｍａ 公司，分析纯），ＩＰ］一［ Ｈ］ Ｂｉｒｔｒａｋ Ａｓｓａｙ试剂盒 （Ａｍｅｒｓｈａｍ公司），ＲＮＡ ｌａｔｅｒ（Ａｍｂｉｏｎ公司），Ｔｒｉｚｏｌ Ｒｅａｇｅｎｔ（ＭＲＣ公司），ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩ逆转录酶（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ公司），Ｔａｑ酶（Ｔａｋａｒａ公司），ＲＮａｓｅ抑制剂（上海 生物工程技术服务有限公司），胰酶（Ｓｉｍａ公司），ｇ Ｏｌｉｇｏ ｄ（Ｔ）１８（上海生物工程技术服务有限公司）； ｄＮＴＰ（上海生物工程技术服务有限公司），ＳＤＳ（Ｒｏｃｈｅ 公司），Ｓｐａｎｉｓｈ低熔点琼脂糖（Ｂｉｏｗｅｓｔ公司），Ｔｒｉｓ、 ＥＤＴＡ（Ｓｉｇｍａ公司），ｂａｘ鼠抗人单克隆抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ公司），ｐ—ａｃｔｉｎ鼠抗人单克隆抗体（Ｎｅｏｍａｒｋｅｒ公 司），带化学发光物的抗小鼠ＩｇＧ（二抗）试剂盒（武汉 博士德公司）．ＰＶＤＦ膜（Ｒｏｃｈｅ公司）．其他试剂均为 分析纯。流式细胞仪（美国Ｂｅｃｋｍａｎ—Ｃｏｕｈｅｒ公司，机 （黄熙）；５１０２２４ 广州市，广东药学院临床医学院（张继红） 通讯作者：张继红Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｊｉｈｏｎｇ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｎｌ
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实用医学杂志２０ｏ８年第２４卷第１４期 ２３８５ 剂盒测定蛋白浓度，最后根据蛋白质浓度求出每毫克 ＰＣＲ引物合成：上海生物工程技术服务有限公 蛋白质组织中ＩＰ３含量（ｐｍｏｌ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆｔｉｓｓｕｅ）。 司。 １．２．５ ＲＴ—ＰＣＲ检测ｂａｘ ｍＲＮＡ表达 采用Ｔｒｉｚｏｌ １．２方法 Ｒｅａｇｅｎｔ提取法进行ＲＮＡ提取，离心、沉淀ＲＮＡ，ＲＮＡ １．２．１ 裸鼠肝原位移植人肝癌模型制作从中山大 样品用ｌ％琼脂凝胶电泳检测检测ＲＮＡ完整性。ＲＮＡ 学医学动物实验中心购买稳定表达ｂａｘ基因的肝癌 定量后取总ＲＮＡ ２ ｔｚｇ进行逆转录反应，之后５Ｏ Ｌ ＨｅｐＧ２细胞株，将ＨｅｐＧ２细胞加人含１０％ｄｘ牛血清、 反应体系进行体外ＰＣＲ扩增。Ｂａｘ上游引物：５ 一 青霉素１００ Ｕ／ｍＬ、链霉素１００ Ｉ￣ｇ／ｍＬ的ＲＰＭＩ １６４０ ＣＣＡＣＣＡＧ ＣＴＣＴＧＡＡＣＡＧＴＩ＇ＣＡＴＧＡ．．３。下游引物：５ 一 培养基中传代培养。当细胞传代到足够制造模型数量 ＴｃＡＧｃｃｃＡＴｃＴＴｃＴＴｃｃＡＧＡＴＧＧＴ一３ 。扩增产物长度 时，将肝癌ＨｅｐＧ２细胞株制成５×１０７／ｍＬ细胞悬液， ５０７ ｂｐ。ＤＮＡ热循环仪（美国ＰＥ公司）扩增，扩增条 分别取０．２ ｍＬ含１×１０’个细胞的悬液接种于４只裸 件：９４℃变性５ ｍｉｎ，９４℃６０ Ｓ，５５℃４５ Ｓ，７２℃６０ Ｓ，２８ 鼠皮下。皮下肿瘤长至１ ｅｍ，后用于模型制作的瘤 个循环，最后７２℃延伸１０ ｍｉｎ。Ｂ—ａｃｔｉｎ上游引物：５ 一 源。模型制作时，处死皮下荷瘤动物，无菌状态下完整 ＧＴＧＧＧＧＣＧＣＣＣＣＡＧＧＣＡＣＣＡ一３ ；下游引物：５ 一 取除肿瘤，剔除周围结缔组织，将边缘生长旺盛的肿 ＣＴＣＣ仉 ＡＴＧＴＣＡＣＧＣＡＣＧＡ，ｒ】ｒ】ｒＣ一３ 。 扩增产物长 瘤组织切割成直径２ ｍｍ的瘤块放人无菌生理盐水 度５４８ ｂｐ，扩增条件：９４℃变性５ ｍｉｎ，９４℃６０ Ｓ，５８ｏＣ 中备用。选取４～６周龄的裸鼠ｌ８只，雌雄不拘，１０％ ６０ Ｓ，７２ｏＣ ６０ Ｓ，３５个循环，最后７２￣Ｃ延伸１０ ｍｉｎ。反 水合氯醛（４３０ ｍｇ／ｋｇ）腹腔注射麻醉后腹中线切口开 应产物在凝胶中以１００ Ｖ电泳后于凝胶成像仪中观 腹，用７号针头戳开肝实质，将直径２ ｍｍ瘤组织块 察拍照。在图像分析仪上经Ｇｅｎｅ Ｔｏｏｌｓ软件进行半定 移植到裸鼠肝实质，关腹，即已建立裸鼠肝原位移植 量分析，将测出各条带灰度与面积之积除以Ｂ—ａｃｔｉｎ 人肝癌模型。所有裸鼠在标准超净环境下饲养２周后 的灰度与面积之积，得到一相对强度（ｒｅｌａｔｉｖｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ，ＲＩ），通过各浓度组和各时相组的ＲＩ值比较 开始治疗研究。 １．２．２模型动物分组与处理 Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ １０ ｍｇ加 可得出基因表达的量变规律。ＤＭＳＯ ２ ｍＬ。ＲＰＭＩ １６４０培养基加至５００ ｍＬ即配制成 １．２．６ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ方法测定ｂａｘ蛋白表达取各 ｎ。上清进 ０．０２ ｍｇ／ｍＬ的ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ溶液，注射时每１ ｇ动物取 时组细胞，ＳＤＳ匀浆、离心，上清液煮沸５ ｍｉ０．０５ ｍＬ即相当于１ ｍｇ／ｋｇ的剂量。ＤＭＳＯ浓度为 行聚丙烯酰胺凝胶电泳。将凝胶完整取下，于转移缓 ０．０４％。肝癌动物模型制成饲养２周后，将荷瘤模型动 冲液中转膜。取出ＰＶＤＦ膜，封闭，加人一抗ｂａｘ鼠抗 ａｃｔｉｎ单克隆抗体为内参，４℃轻 物随机分为两组（每组９只）：（１）对照组腹腔注人含 人单克隆抗体，以Ｂ—０．０４％ＤＭＳＯ的ＲＰＭＩ１６４０培养基０．０５ ｍＬ／ｇ，与 摇过夜。洗去ＰＶＤＦ膜上未结合的抗体，加人二抗（抗 Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ治疗组溶剂量及ＤＭＳＯ量均等同。（２） 小鼠ＩｇＧ）室温下共同孵育２ ｈ后，采用化学发光试 Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ治疗组腹腔注人ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ １ ｍｇ／（ｋｇ・ｄ），动 剂显色．电子计算机图像分析仪成像并进行半定量分 物均在标准超净环境下饲养３周后进行以下实验。 析。 ３统计学处理数据均以 ±ｓ表示，采用ＳＰＳＳ １．２．３肿瘤大小测定和标本采集迅速处死动物，腹 １．中线切口开腹，游离肝脏，观察肿瘤生长、浸润情况， １３．０软件进行统计学分析，采用两个独立样本ｔ检 切除肿瘤，去除周围结缔组织后电子微量天平称重， 验。游标卡尺测量肿瘤最长径（口）和最短径（６），根据公式 ２结果 Ｖ（ｍｍ３）＝，ｒｒａｂＶ６计算肿瘤的体积，分割肿瘤组织，分 ２．１动物模型各动物经ＨｅｐＧ２细胞团移植人肝脏 别取材用于病理检查、细胞Ｉ 检测、ＲＴ—ＰＣＲ和 后。均见肿瘤生长，经常规病理切片证实符合肝细胞 Ｗｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析。病理检查者用１０％福尔马林固 癌。对照组动物在观察过程中精神较差，但观察期内 定，用于ＲＮＡ检测者应用ＲＮＡ ｌａｔｅｒ保存，其余标本 无明显体重减轻现象。开腹后观察见：对照组动物肝 脏移植肿瘤生长良好，瘤体较大，但观察期内未发现 贮存于一７０￣Ｃ冰箱备检。 ｓｔｅｉｎ治疗组肿瘤生长体 １．２．４ ＩＰ３一［ Ｈ］Ｂｉｒｔｒａｋ Ａｓｓａｙ检测ＩＰ３含量 动物肝 腹水、肿瘤转移等现象；Ｇｅｎｉ癌组织准备：全程保持低温进行。将肝癌组织块置于 积和重量明显小于对照组，观察期内亦未发现腹水、 匀浆试管中，按１０％（ｗ／ｖ）加人１０％高氯酸在冰浴 肿瘤转移等现象。 中冷却后匀浆。４℃下２ ０００ ｘｇ离心１５ ｍｉｎ以沉淀蛋 ２．２移植瘤大小见表１，Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ治疗组动物移植 白质。取上清液用１０ ｍｏｌ／Ｌ ＫＯＨ中和至ｐＨ７．５± 瘤体积和重量均显著低于对照组（Ｐ＜０．０１）。根据抑 ０．１，４￣Ｃ下２ ０００ ｘｇ离心１５ ｍｉｎ，去除ＫＣ１０４沉淀，取 瘤率公式：抑瘤率＝（对照组瘤重一治疗组瘤重）／对照 上清液按ＩＰ３一［，Ｈ］Ｂｉｒｔｒａｋ Ａｓｓａｙ试剂盒操作说明测定 组瘤重×１００％，计算得出Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ治疗组抑瘤率为 三磷酸肌醇（ＩＰ，）含量，应用ＢＣＡ蛋白质定量检测试 ５６．５％ 器型号ＥＬＩＴＥ。激光波长４８８ ｎｍ。功率１５ ｍＷ）。
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实用医学杂志２００８年第２４卷第ｌ４期 ２．３ ＩＰ３含量见表１，Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ治疗组动物移植肝 癌细胞内ＩＰ，含量显著低于对照组（Ｐ＜０．０１）。 ２．４ ＲＴ．ＰＣＲ分析结果见图１、表１，Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ治疗 组动物移植肝癌组织ｂａｘ ｍＲＮＡ表达较对照组明显 增加，经图像分析仪进行半定量分析显示显著高于对 照组（Ｐ＜０．０５）。 ２．５ Ｗｅｓｔｅｒｎ．ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析结果如图２、表１．Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ 治疗组动物移植肝癌组织ｂａｘ蛋白表达较对照组明 显增加。经图像分析仪进行半定量分析显示显著高 于对照组（Ｐ＜０．０５）。 ± 表１各组动物移植瘤体积、重量和瘤组织Ｉ 含量 注：与对照组相比，★★尸＜Ｏ．Ｏｌ，★尸＜Ｏ．０５ 成饲养２周后，应用磷酸肌醇信号通路抑制剂 ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ能降低裸鼠移植人肝癌细胞内ＩＰ，含量，从 ｍＲＮＡ和蛋白质水平上调ｂａｘ基因表达，显著抑制裸 图１动物肝癌组织ｂａｘ ｍＲＮＡ表达情况 Ｃ１ Ｃ２ Ｃ３ Ｇ１ Ｇ２ Ｇ３ Ｅ三三三三三 Ｂ ￣Ｉ－ａｃｔｉｎ 图２动物肝癌组织ｂａｘ蛋白表达情况 ３讨论 细胞信号转导在应答环境刺激和调节基因表达、 生理反应的同时，维持着细胞正常代谢，并最终决定 细胞增殖、生长、分化、衰老和死亡等生命基本现象。 即信号转导最终决定基因表达与细胞增殖和凋亡…。 细胞增殖、分化、凋亡三者之间的平衡失调与肝癌的 发生发展密切相关【 ］。失控性生长和增殖及细胞凋 亡受阻是恶性肿瘤细胞的重要特征 。因此。通过改 变细胞信号转导状态以调节基因表达，最终到达抑制 细胞增殖或（和）诱导细胞凋亡的方法将达到治疗肝 癌的目的。磷酸肌醇通路信号转导异常增强，表现为 催化这一通路的生化反应关键酶磷脂酰肌醇 （ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏ１）激酶、磷脂酰肌醇一磷酸 （ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏ１．４．ｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＰＩＰ）激酶活性增强 和第二信使分子ＩＰ３（ｉｎｏｓｉｔｏｌ １，４，５－ｔｒｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ）和 二酰基甘油（ｄｉａｃｙｌ ｇｌｙｃｅｒｏ１）产生增加，在肝细胞癌的 生长、增殖和演进中起重要作用［５－６］。Ｂａｘ基因表达 产物上调有促进肿瘤细胞凋亡的作用，反之则抑制 凋亡［７］。我们在体外实验证实能抑制ＰＩＰ激酶活性的 ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ［６，。圳能上调肝癌细胞ｂａｘ基因表达．诱导凋 亡。 鼠肝内移植人肝癌增长，抑瘤率在５０％以上。提示 ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ能抑制磷酸肌醇信号通路信号转导，在一定 程度上调节与肝癌细胞凋亡有关的ｂａｘ基因表达，有 效抑制动物肝原位移植人肝细胞癌的增长。由于ｂｃ１．２ 基因家族的表达和调控是影响细胞凋亡的关键因素 之一，在细胞凋亡信号转导途径中发挥重要作用ｆ加ｊ， 其中ｂａｘ增高促进细胞凋亡 。结合体外实验结果提 示：ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ抑制肝癌增长与抑制磷酸肌醇通路信号 转导．上调ｂａｘ基因表达，促进细胞凋亡有关。 由于信号转导最终决定基因表达与细胞增殖和 凋亡…。因此，ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ通过抑制磷酸肌醇通路信号转 导而上调ｂａｘ基因表达、诱导细胞凋亡可能是其抑制 肝癌增长的机制之一。但要完全证实抑制磷酸肌醇通 路信号转导可以上调ｂａｘ基因表达、诱导细胞凋亡， 尚需进一步研究抑制和增强磷酸肌醇通路信号转导 与ｂａｘ基因表达的变化规律。 细胞增殖、分化、凋亡三者之间的平衡失调与肝 癌的发生发展密切相关［２－３］，肝癌组织细胞增殖和凋 亡速度均较正常肝组织明显增加，但细胞增殖和凋亡 平衡失调，增殖速度总是超过凋亡速度，在肝癌发生 发展中起重要作用［１１－１２］。由于ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ既可抑制细胞 增殖［９１，又可诱导细胞凋亡，抑制肝癌增长，今后可在 临床上开展应用ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ治疗肝癌的研究，并可进一 步开展其他特异性磷酸肌醇通路信号抑制剂治疗肝 细胞癌的研究。 ４参考文献 ［１］ 孙大业，郭艳林，马力耕．细胞信号转导［Ｍ］．２版．北京：科学出 版社，２０００：１－９． ［２ ３ Ｄｕａｎ Ｘ Ｘ，Ｏｕ Ｊ Ｓ，Ｌｉ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｄｙｎａｍｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ— ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ ｄｕｒｉｎｇ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｈｅｐａｔｏｅｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ， ２００５，１１（３０）：４７４０－４７４４． ［３］ Ｋｏｕｎｔｏｕｒａｓ Ｊ， Ｚａｖｏｓ Ｃ， Ｃｈａｔｚｏｐｏｕｌｏｓ Ｄ．Ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ａｎｄ ａｎｔｉ— ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ａｎｄ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｓｕｒｇ Ｏｎｃｏｌ，２００５，９０（４）：２４９－５９． ［４］ Ｂａｓｋｉｎ—Ｂｅｙ Ｅ Ｓ，Ｇｏｒｅｓ Ｇ Ｊ．Ｃａｓｐａｓｅ一８，ｄｅａｔｈ—ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ， 本实验结果显示．在裸鼠肝内移植人肝癌模型制
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实用医学杂志２００８年第２４卷第ｌ４期 ａｎｄ ｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ：ｔｈｅ Ｆａｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｆｕｒｉｏｕｓ ［Ｊ］． ２３８７ ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ［Ｊ］．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９９７，６０ （２４）：２１５７－２１６３． Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００５，１２９（５）：１７９０－１７９２． ［５］ Ｓｉｎｇｈａｌ Ｒ Ｌ，Ｌｏｏｋ Ｋ Ｙ，Ｙｅｈ Ｙ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｅｎｚｙｍｅｓ ＰＩ ｋｉｎａｓｅ ｎｄ ａＰＩＰ ｋｉｎａｓｅ ［９］Ｗｅｂｅｒ Ｇ，Ｓｈｅｎ Ｆ，Ｐｒａｊｄａ Ｎ，ｅｔ １ａ．Ｒｅｕｌｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｉｎａｇｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｐｒｏｇｒａｍ ｂｙ ｄｒｕｇｓ［Ｊ］．Ａｄｖ Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇｕｌ，１９９７，３７： ３５—５５． ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｌｉｆｅ ｓＳｃｉｅｎｃｅｓ，１９９４，５５（１９）：１４８７－ １４９２． ［１Ｏ］连君，曹雪涛，于益芝．Ｂｃｌ一２，ｂａｘ与肿瘤细胞凋亡［Ｊ］．中国生物 治疗杂志，２００３，１０（３）：２３２—２３４． ［６］ Ｓｈｅｎ Ｆ，Ｘｕｅ Ｘ，Ｗｅｂｅｒ Ｇ．Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ ｎｄａ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｄｏｗｎ—ｒｅｇｕｌａｔｅ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ—ｎｅｇａｔｉｖｅ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ＭＤＡ—ＭＢ－４３５ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］． Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１９９９．１９（３Ａ）：１６５７—１６６２． ［１１］Ｓｃｈｕｈｅ—Ｈｅｒｍａｎｎ Ｒ，Ｂｕｒｓｃｈ Ｗ，Ｌｏｗ—Ｂａｓｅｌｌｉ Ａ，ｅｔ １ａ．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｏｌｅ ｉｎ ｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ， １９９７，１３（４－５）：３３９—３４８． ［７］ Ｙａｎｇ Ｅ，Ｚｈａ Ｊ，Ｊｏｃｋｅｌ Ｊ，ｅｔ １ａ．Ｂａｄ，ａ ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｉｒｃ ｐａ￣ｎｅｒ ｆｏｒ Ｂｃｌ—ＸＬ ａｎｄ Ｂｃｌ一２，ｄｉｓｐｌａｃｅｓ Ｂａｘ ａｎｄ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ， １９９５，８０（２）：２８５—２９１． ［１２］Ｇｒａｓｌ－Ｋｒａｕｐｐ Ｂ，Ｒｕｔｔｋａｙ—Ｎｅｄｅｃｋｙ Ｂ，Ｍｕｌｌａｕｅｒ Ｌ，ｅｔ １．Ｉａｎｈｅｒｅｎｔ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｔｕｍｏｒｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９７，２５（４）：９０６—９１２． （收稿：２００７—１２—１９） ［８］Ｃｓｏｋａｙ Ｂ，Ｐｒａｊｄａ Ｎ，Ｗｅｂｅｒ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ 急性痘疮样糠疹样二期梅毒疹１例 华海燕叶静静马丽俐 １］。有文献［２－３］报道二期梅毒常易误诊 患者女，５２岁，已婚，工人。因全身皮 １：３２，梅毒螺旋体血球凝集试验（ＴＰＨＡ） 者［ 疹伴瘙痒１周，于２００７年７月来我科就 阳性。抗艾滋病人免疫缺陷病毒抗体阴 为玫瑰糠疹、药物疹、银屑病，环状红斑、诊。２００７年７月初，患者无明显诱因下躯 性。诊断：二期梅毒。 干、四肢出现散在蚕豆大小的淡红色斑、 丘疹，压之褪色，部分中央有水疱，伴瘙 痒，无疼痛。当时未予特殊诊治。此后皮疹 生殖器疱疹等。本例患者为急性痘疮样 糠疹样梅毒疹实属少见。患者虽否认有 非婚性行为．但实验室检查证实为二期 梅毒。后经检查，其丈夫亦患有梅毒 （ＲＰＲ １：６４阳性，ＴＰＨＡ阳性），予以相同 逐渐扩大增多．搔抓后水疱破溃渗出明 显。起病以来患者全身一般情况可，无发 热、头痛、头晕、关节疼痛等，纳食、睡眠可， 大小便无特殊。既往健康，否认药物及食 物过敏史。否认非婚性接触史及输血史。 体格查体：Ｔ ３６．８￣Ｃ，Ｐ ７５次／ｍｉｎ。ＢＰ １ １４／６８ ｍｍＨｇ（１ ｍｍＨｇ＝０．１３３ ｋＰａ）。体形 治疗。本例提示，此例为二期梅毒所表现 的少数特殊的皮疹，体现了二期梅毒皮 损复杂多样的特点。急性痘疮样糠疹皮 损以躯干、四肢屈面多见，好发于青年男 性［４］。此女性患者发疹迅速，短时间内遍 布全身．并且二期梅毒一般客观症状明 中等，一般情况可，咽部未见充血，扁桃 注：大腿内侧见圆形淡红色斑丘疹，中央有 显而主观症状轻微，大多无瘙痒，但本例 患者皮损瘙痒明显，似乎难以鉴别。因此 体未见肿大，心、肺无特殊，肝内囊肿，胆 水疱 图１二期梅毒患者大腿内侧皮损 相关实验室检查至关重要，这样才能与 囊炎．双乳腺增生伴结节，左侧肾脏囊 肿。皮肤专科检查：头部无脱发，面部、口 腔未见皮疹．躯干四肢散在分布蚕豆大 其他皮肤病加以区别。以免误诊误治。 治疗：给予苄星青霉素２４０万Ｕ。分 参考文献 ．北京：人民卫 小的淡红色斑块、丘疹，部分中央有水疱 两侧臀部肌内注射。每周１次，共３次， ［１］张学军．皮肤性病学［Ｍ］生出版社．２００４：２０８—２１４． ｄ后复诊。治疗３ ｄ后，患 （图１），数目多，不融合。皮疹压之褪色， 并要求患者３ 蔡润学．银屑病样二期梅毒１例 触之无压痛。阴部、肛周无皮疹。双手掌， 者部分皮疹开始消退。瘙痒消失。无新发 ［２］陶庆杰，足跖部未见皮疹。全身淋巴结无肿大。血 皮疹出现。１周后皮疹基本消退，少数遗 常规：中性粒细胞百分数０．７０３。尿常规： 留色素沉着斑。现仍在随访中。［Ｊ］．中国麻风皮肤病杂志，２００２，ｌ８ （２）：１６２． 酮体（＋），蛋白质弱阳性，胆红素（＋）。粪 讨论近年来．梅毒发病率又呈上 ［３］ 童燕芳．环状红斑样二期梅毒１例［Ｊ］． 临床皮肤科杂志。２００４，３３（１１）：６９１— ６９２． 常规、肝肾功能无异常，乙肝三系正常。 升趋势。二期梅毒皮损表现多样化，常呈 快速血浆反应素试验（ＲＰＲ）阳性，滴度 泛发性、对称性分布，无特异性。易与其 它多种皮肤病相混淆。造成诊断困难，甚 作者单位：３１００００杭州市，浙江中医药 ［４］ 高冬．二期梅毒疹误诊为玫瑰糠疹７例 分析［Ｊ］．中国麻风皮肤病杂志，２００２， １８（１）：７４． 至误诊。皮损常见为斑疹、丘疹、溃疡 等，脓疱性梅毒疹少见，多见于体质衰弱 大学附属第一医院皮肤科 （收稿：２００７—１１＿０５）
2024年3月8日发(作者：虢痴旋)
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２３８４ 实用医学杂志２００８年第２４卷第ｌ４期 三磷酸肌醇和ｂａｘ基因表达变化在ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ抑制 裸鼠肝癌增长中的作用 黄熙张继红 摘 要 目的：探讨三磷酸肌醇（Ｉ ）和ｂａｘ基因表达变化在ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ治疗裸鼠移植人肝癌中的作用。方 法：以裸鼠移植人肝癌为对照．对照组腹腔注入含０．０４％ＤＭＳＯ的ＲＰＭＩ １６４０培养基０．０５ ｍＬ／ｇ，Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ治疗组 腹腔注入ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ ｌ ｍｇ／（ｋｇ・ｄ），３周后观察肝癌增长情况，并应用同位素试剂盒检测肝癌组织ＩＰ３含量，ＲＴ—ＰＣＲ 分析癌组织ｂａｘ ｍＲＮＡ表达．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析肝癌组织ｂａｘ蛋白表达。结果：Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ治疗组肝癌体积和重量 均显著低于对照组［体积（１２．６±ｌ１．６）ｍｍ’ｕｓ（５２．３±２６．５）ｍｍ ，重量（４２．７±２７．８）ｍｇ ｕｓ（９１．３±３１．４）ｍｇ），Ｐ＜ ０．０１］，ＩＰ３含量显著低于对照组［（１３．４±１．４）ｐｍｏｌ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ５（３５．３±６．６）ｐｍｏｌ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ，Ｐ＜０．０１］，ｂａｘ ｍＲＮＡ表达显著高于对照组『灰度与面积之积的相对强度（ＲＩ）０．８８±０．２１ ｕｓ ０．５６±０．１５，Ｐ＜０．０５］，ｂａｘ蛋白表达显 著高于对照组［ＲＩ ２．８６±０．８０ ｕｓ １．３７±０．４８，Ｐ＜０．０５］。结论：Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ能减少ＩＰ３生成，上调肝癌组织ｂａｘ基因表 达．抑制裸鼠移植人肝癌增长。 关键词癌．肝细胞染料木黄酮ｂａｘ基因 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ ｏｎ ｔｒｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｉｎｏｓｉｔｏｌ ａｎｄ ｂａｘ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｍｕｄｅ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ＨＵＡＮＧ Ｘｉ ，ＺＨＡＮＧ 一ｈｏｎｇ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙＳｕｒｇｅｒｙ，ＳｈｅｎｚｈｅｎＨｏｓｐｉｔｄｏｆＢｅｉｎｇＵｎｉｒｖｅｒｃｉｔｙ，Ｓｈｅｎｚｈｅｎ ５１８０３６，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＺＨＡ ＮＧ 一ｈｏｎｇ Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｈｊｉｈｏｎｇ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｎ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｐｒｏｂｅ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ ｏｎ １，４，５－ｔｒｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｉｎｏｓｉｔｏｌ（ＩＰ３）ａｎｄ ｂａｘ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｍｕｄｅ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｉｇｈｔｅｅｎ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｅｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｇｒｏｕｐ Ｃ，ｎ＝９）ａｎｄ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ（Ｇｒｏｕｐ Ｇ，ｎ＝９）．Ｇｒｏｕｐ Ｇ ｗａｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ １ ｍｇ／（ｋｇ・ｄ）（ｉｐ）ａｎｄ Ｇｒｏｕｐ Ｃ ｗｉｔｈ Ｏ．０４％ＤＭＳＯ ＲＰＭＩ １６４０ ｍｅｄｉｕｍ Ｏ．０５ ｍＬ／ｇ ｆｏｒ ３ ｗｅｅｋｓ．Ｔｈｅ ｖｏｌｕｍｅ ａｎｄ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｗａｓ ｔｈｅｎ ｍｅａｓｕｒｅｄ，ＩＰ３，ｂａｘ ｍＲＮＡ ａｎｄ ｂａｘ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｍａｔｉｃ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｅｒｅ ａｓｓａｙｅｄ ｂｙ ＩＰ３一［ Ｈ］ Ｂｉａｒａｋ ａｓｓａｙ，ＲＴ—ＰＣＲ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ ａｎｄ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ａｎｉｍａｌｓ ｗａｓ ｌｏｗｅｒ ｉｎ Ｇｒｏｕｐ Ｇ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ Ｇｒｏｕｐ Ｃ［（１２．６±１１．６）ｍｍ ｓ（５２．３±２６．５）ｍｉｌｌ ，（４２．７土２７．８）ｍｇ ｓ（９１．３土３１．４）ｍｇ），Ｐ＜ Ｏ．Ｏ１］，ＩＰ３ ｃｏｎｔｅｎｔ ｗａｓ ｌｏｗｅｒ ｉｎ Ｇｒｏｕｐ Ｇ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ Ｇｒｏｕｐ Ｃ［（１３．４±１．４）ｐｍｏｌ／ｍｇ ｐｒｏ ｓ（３５．３±６．６）ｐｍｏｌ／ｍｇ ｐｒｏ，Ｐ ＜Ｏ．０１］，ｂａｘ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ Ｇｒｏｕｐ Ｇ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ Ｇｒｏｕｐ Ｃ［Ｒ１ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｔｈｅ ｇｒａｙ ｄｅｇｒｅｅ ｍｕｌｔｉｐｌｙ ａｒｅａ ｏｆ ｂａｘ／ｔｈｅ ｒａｙｇ ｄｅｇｒｅｅ ｍｕｌｔｉｐｌｙ ａｒｅａ ｏｆ １３－ａｃｔｉｎ Ｏ．８８±０．２ ｕｓ Ｏ．５６±０．１５，Ｐ＜Ｏ．０５］，ｂａｘ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ Ｇｒｏｕｐ Ｇ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ Ｇｒｏｕｐ Ｃ（２．８６±０．８Ｏ ｓ １．３７±０．４８．Ｐ＜０．Ｏ５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ ｃａｎ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｔａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｉｎｔｏ ｌｉｖｅｒ ｏｆ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ ｂｙ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ＩＰ３ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｂａｘ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ・ 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ Ｂａｘ ｇｅｎｅ 介导细胞增殖与凋亡的信号转导通路的发现是 恶性肿瘤研究的一大进展。通过干预细胞信号转导可 以达到抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡，实现治疗恶性肿 瘤的目的．而基因表达变化在其中起着极为重要的作 用。本研究探讨应用能抑制磷酸肌醇通路信号转导通 路关键酶活性的ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ能否调节裸鼠移植人肝癌细 胞ｂａｘ基因表达．抑制肝癌增长，为临床应用磷酸肌醇 信号通路抑制剂治疗肝细胞癌提供理论和实验依据。 １材料与方法 １．１实验材料肝癌ＨｅｐＧ２细胞株（中山大学动物 基金项目：广东药学院科研启动基金；广东省医学科学基金立项课 题（编号：Ａ２００４５３７）；深圳市科技计划项目资助课题（编号：２００６０２０５４） 作者单位：５１８０３６广东省深圳市． Ｅ京大学深圳医院肝胆外科 实验中心细胞库），ＲＰＭＩ １６４０培养基（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公 司），新生牛血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ公司），ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ（美国Ｓｉｇｍａ 公司，分析纯），ＩＰ］一［ Ｈ］ Ｂｉｒｔｒａｋ Ａｓｓａｙ试剂盒 （Ａｍｅｒｓｈａｍ公司），ＲＮＡ ｌａｔｅｒ（Ａｍｂｉｏｎ公司），Ｔｒｉｚｏｌ Ｒｅａｇｅｎｔ（ＭＲＣ公司），ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩ逆转录酶（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ公司），Ｔａｑ酶（Ｔａｋａｒａ公司），ＲＮａｓｅ抑制剂（上海 生物工程技术服务有限公司），胰酶（Ｓｉｍａ公司），ｇ Ｏｌｉｇｏ ｄ（Ｔ）１８（上海生物工程技术服务有限公司）； ｄＮＴＰ（上海生物工程技术服务有限公司），ＳＤＳ（Ｒｏｃｈｅ 公司），Ｓｐａｎｉｓｈ低熔点琼脂糖（Ｂｉｏｗｅｓｔ公司），Ｔｒｉｓ、 ＥＤＴＡ（Ｓｉｇｍａ公司），ｂａｘ鼠抗人单克隆抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ公司），ｐ—ａｃｔｉｎ鼠抗人单克隆抗体（Ｎｅｏｍａｒｋｅｒ公 司），带化学发光物的抗小鼠ＩｇＧ（二抗）试剂盒（武汉 博士德公司）．ＰＶＤＦ膜（Ｒｏｃｈｅ公司）．其他试剂均为 分析纯。流式细胞仪（美国Ｂｅｃｋｍａｎ—Ｃｏｕｈｅｒ公司，机 （黄熙）；５１０２２４ 广州市，广东药学院临床医学院（张继红） 通讯作者：张继红Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｊｉｈｏｎｇ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｎｌ
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实用医学杂志２０ｏ８年第２４卷第１４期 ２３８５ 剂盒测定蛋白浓度，最后根据蛋白质浓度求出每毫克 ＰＣＲ引物合成：上海生物工程技术服务有限公 蛋白质组织中ＩＰ３含量（ｐｍｏｌ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆｔｉｓｓｕｅ）。 司。 １．２．５ ＲＴ—ＰＣＲ检测ｂａｘ ｍＲＮＡ表达 采用Ｔｒｉｚｏｌ １．２方法 Ｒｅａｇｅｎｔ提取法进行ＲＮＡ提取，离心、沉淀ＲＮＡ，ＲＮＡ １．２．１ 裸鼠肝原位移植人肝癌模型制作从中山大 样品用ｌ％琼脂凝胶电泳检测检测ＲＮＡ完整性。ＲＮＡ 学医学动物实验中心购买稳定表达ｂａｘ基因的肝癌 定量后取总ＲＮＡ ２ ｔｚｇ进行逆转录反应，之后５Ｏ Ｌ ＨｅｐＧ２细胞株，将ＨｅｐＧ２细胞加人含１０％ｄｘ牛血清、 反应体系进行体外ＰＣＲ扩增。Ｂａｘ上游引物：５ 一 青霉素１００ Ｕ／ｍＬ、链霉素１００ Ｉ￣ｇ／ｍＬ的ＲＰＭＩ １６４０ ＣＣＡＣＣＡＧ ＣＴＣＴＧＡＡＣＡＧＴＩ＇ＣＡＴＧＡ．．３。下游引物：５ 一 培养基中传代培养。当细胞传代到足够制造模型数量 ＴｃＡＧｃｃｃＡＴｃＴＴｃＴＴｃｃＡＧＡＴＧＧＴ一３ 。扩增产物长度 时，将肝癌ＨｅｐＧ２细胞株制成５×１０７／ｍＬ细胞悬液， ５０７ ｂｐ。ＤＮＡ热循环仪（美国ＰＥ公司）扩增，扩增条 分别取０．２ ｍＬ含１×１０’个细胞的悬液接种于４只裸 件：９４℃变性５ ｍｉｎ，９４℃６０ Ｓ，５５℃４５ Ｓ，７２℃６０ Ｓ，２８ 鼠皮下。皮下肿瘤长至１ ｅｍ，后用于模型制作的瘤 个循环，最后７２℃延伸１０ ｍｉｎ。Ｂ—ａｃｔｉｎ上游引物：５ 一 源。模型制作时，处死皮下荷瘤动物，无菌状态下完整 ＧＴＧＧＧＧＣＧＣＣＣＣＡＧＧＣＡＣＣＡ一３ ；下游引物：５ 一 取除肿瘤，剔除周围结缔组织，将边缘生长旺盛的肿 ＣＴＣＣ仉 ＡＴＧＴＣＡＣＧＣＡＣＧＡ，ｒ】ｒ】ｒＣ一３ 。 扩增产物长 瘤组织切割成直径２ ｍｍ的瘤块放人无菌生理盐水 度５４８ ｂｐ，扩增条件：９４℃变性５ ｍｉｎ，９４℃６０ Ｓ，５８ｏＣ 中备用。选取４～６周龄的裸鼠ｌ８只，雌雄不拘，１０％ ６０ Ｓ，７２ｏＣ ６０ Ｓ，３５个循环，最后７２￣Ｃ延伸１０ ｍｉｎ。反 水合氯醛（４３０ ｍｇ／ｋｇ）腹腔注射麻醉后腹中线切口开 应产物在凝胶中以１００ Ｖ电泳后于凝胶成像仪中观 腹，用７号针头戳开肝实质，将直径２ ｍｍ瘤组织块 察拍照。在图像分析仪上经Ｇｅｎｅ Ｔｏｏｌｓ软件进行半定 移植到裸鼠肝实质，关腹，即已建立裸鼠肝原位移植 量分析，将测出各条带灰度与面积之积除以Ｂ—ａｃｔｉｎ 人肝癌模型。所有裸鼠在标准超净环境下饲养２周后 的灰度与面积之积，得到一相对强度（ｒｅｌａｔｉｖｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ，ＲＩ），通过各浓度组和各时相组的ＲＩ值比较 开始治疗研究。 １．２．２模型动物分组与处理 Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ １０ ｍｇ加 可得出基因表达的量变规律。ＤＭＳＯ ２ ｍＬ。ＲＰＭＩ １６４０培养基加至５００ ｍＬ即配制成 １．２．６ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ方法测定ｂａｘ蛋白表达取各 ｎ。上清进 ０．０２ ｍｇ／ｍＬ的ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ溶液，注射时每１ ｇ动物取 时组细胞，ＳＤＳ匀浆、离心，上清液煮沸５ ｍｉ０．０５ ｍＬ即相当于１ ｍｇ／ｋｇ的剂量。ＤＭＳＯ浓度为 行聚丙烯酰胺凝胶电泳。将凝胶完整取下，于转移缓 ０．０４％。肝癌动物模型制成饲养２周后，将荷瘤模型动 冲液中转膜。取出ＰＶＤＦ膜，封闭，加人一抗ｂａｘ鼠抗 ａｃｔｉｎ单克隆抗体为内参，４℃轻 物随机分为两组（每组９只）：（１）对照组腹腔注人含 人单克隆抗体，以Ｂ—０．０４％ＤＭＳＯ的ＲＰＭＩ１６４０培养基０．０５ ｍＬ／ｇ，与 摇过夜。洗去ＰＶＤＦ膜上未结合的抗体，加人二抗（抗 Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ治疗组溶剂量及ＤＭＳＯ量均等同。（２） 小鼠ＩｇＧ）室温下共同孵育２ ｈ后，采用化学发光试 Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ治疗组腹腔注人ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ １ ｍｇ／（ｋｇ・ｄ），动 剂显色．电子计算机图像分析仪成像并进行半定量分 物均在标准超净环境下饲养３周后进行以下实验。 析。 ３统计学处理数据均以 ±ｓ表示，采用ＳＰＳＳ １．２．３肿瘤大小测定和标本采集迅速处死动物，腹 １．中线切口开腹，游离肝脏，观察肿瘤生长、浸润情况， １３．０软件进行统计学分析，采用两个独立样本ｔ检 切除肿瘤，去除周围结缔组织后电子微量天平称重， 验。游标卡尺测量肿瘤最长径（口）和最短径（６），根据公式 ２结果 Ｖ（ｍｍ３）＝，ｒｒａｂＶ６计算肿瘤的体积，分割肿瘤组织，分 ２．１动物模型各动物经ＨｅｐＧ２细胞团移植人肝脏 别取材用于病理检查、细胞Ｉ 检测、ＲＴ—ＰＣＲ和 后。均见肿瘤生长，经常规病理切片证实符合肝细胞 Ｗｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析。病理检查者用１０％福尔马林固 癌。对照组动物在观察过程中精神较差，但观察期内 定，用于ＲＮＡ检测者应用ＲＮＡ ｌａｔｅｒ保存，其余标本 无明显体重减轻现象。开腹后观察见：对照组动物肝 脏移植肿瘤生长良好，瘤体较大，但观察期内未发现 贮存于一７０￣Ｃ冰箱备检。 ｓｔｅｉｎ治疗组肿瘤生长体 １．２．４ ＩＰ３一［ Ｈ］Ｂｉｒｔｒａｋ Ａｓｓａｙ检测ＩＰ３含量 动物肝 腹水、肿瘤转移等现象；Ｇｅｎｉ癌组织准备：全程保持低温进行。将肝癌组织块置于 积和重量明显小于对照组，观察期内亦未发现腹水、 匀浆试管中，按１０％（ｗ／ｖ）加人１０％高氯酸在冰浴 肿瘤转移等现象。 中冷却后匀浆。４℃下２ ０００ ｘｇ离心１５ ｍｉｎ以沉淀蛋 ２．２移植瘤大小见表１，Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ治疗组动物移植 白质。取上清液用１０ ｍｏｌ／Ｌ ＫＯＨ中和至ｐＨ７．５± 瘤体积和重量均显著低于对照组（Ｐ＜０．０１）。根据抑 ０．１，４￣Ｃ下２ ０００ ｘｇ离心１５ ｍｉｎ，去除ＫＣ１０４沉淀，取 瘤率公式：抑瘤率＝（对照组瘤重一治疗组瘤重）／对照 上清液按ＩＰ３一［，Ｈ］Ｂｉｒｔｒａｋ Ａｓｓａｙ试剂盒操作说明测定 组瘤重×１００％，计算得出Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ治疗组抑瘤率为 三磷酸肌醇（ＩＰ，）含量，应用ＢＣＡ蛋白质定量检测试 ５６．５％ 器型号ＥＬＩＴＥ。激光波长４８８ ｎｍ。功率１５ ｍＷ）。
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实用医学杂志２００８年第２４卷第ｌ４期 ２．３ ＩＰ３含量见表１，Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ治疗组动物移植肝 癌细胞内ＩＰ，含量显著低于对照组（Ｐ＜０．０１）。 ２．４ ＲＴ．ＰＣＲ分析结果见图１、表１，Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ治疗 组动物移植肝癌组织ｂａｘ ｍＲＮＡ表达较对照组明显 增加，经图像分析仪进行半定量分析显示显著高于对 照组（Ｐ＜０．０５）。 ２．５ Ｗｅｓｔｅｒｎ．ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析结果如图２、表１．Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ 治疗组动物移植肝癌组织ｂａｘ蛋白表达较对照组明 显增加。经图像分析仪进行半定量分析显示显著高 于对照组（Ｐ＜０．０５）。 ± 表１各组动物移植瘤体积、重量和瘤组织Ｉ 含量 注：与对照组相比，★★尸＜Ｏ．Ｏｌ，★尸＜Ｏ．０５ 成饲养２周后，应用磷酸肌醇信号通路抑制剂 ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ能降低裸鼠移植人肝癌细胞内ＩＰ，含量，从 ｍＲＮＡ和蛋白质水平上调ｂａｘ基因表达，显著抑制裸 图１动物肝癌组织ｂａｘ ｍＲＮＡ表达情况 Ｃ１ Ｃ２ Ｃ３ Ｇ１ Ｇ２ Ｇ３ Ｅ三三三三三 Ｂ ￣Ｉ－ａｃｔｉｎ 图２动物肝癌组织ｂａｘ蛋白表达情况 ３讨论 细胞信号转导在应答环境刺激和调节基因表达、 生理反应的同时，维持着细胞正常代谢，并最终决定 细胞增殖、生长、分化、衰老和死亡等生命基本现象。 即信号转导最终决定基因表达与细胞增殖和凋亡…。 细胞增殖、分化、凋亡三者之间的平衡失调与肝癌的 发生发展密切相关【 ］。失控性生长和增殖及细胞凋 亡受阻是恶性肿瘤细胞的重要特征 。因此。通过改 变细胞信号转导状态以调节基因表达，最终到达抑制 细胞增殖或（和）诱导细胞凋亡的方法将达到治疗肝 癌的目的。磷酸肌醇通路信号转导异常增强，表现为 催化这一通路的生化反应关键酶磷脂酰肌醇 （ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏ１）激酶、磷脂酰肌醇一磷酸 （ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏ１．４．ｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＰＩＰ）激酶活性增强 和第二信使分子ＩＰ３（ｉｎｏｓｉｔｏｌ １，４，５－ｔｒｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ）和 二酰基甘油（ｄｉａｃｙｌ ｇｌｙｃｅｒｏ１）产生增加，在肝细胞癌的 生长、增殖和演进中起重要作用［５－６］。Ｂａｘ基因表达 产物上调有促进肿瘤细胞凋亡的作用，反之则抑制 凋亡［７］。我们在体外实验证实能抑制ＰＩＰ激酶活性的 ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ［６，。圳能上调肝癌细胞ｂａｘ基因表达．诱导凋 亡。 鼠肝内移植人肝癌增长，抑瘤率在５０％以上。提示 ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ能抑制磷酸肌醇信号通路信号转导，在一定 程度上调节与肝癌细胞凋亡有关的ｂａｘ基因表达，有 效抑制动物肝原位移植人肝细胞癌的增长。由于ｂｃ１．２ 基因家族的表达和调控是影响细胞凋亡的关键因素 之一，在细胞凋亡信号转导途径中发挥重要作用ｆ加ｊ， 其中ｂａｘ增高促进细胞凋亡 。结合体外实验结果提 示：ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ抑制肝癌增长与抑制磷酸肌醇通路信号 转导．上调ｂａｘ基因表达，促进细胞凋亡有关。 由于信号转导最终决定基因表达与细胞增殖和 凋亡…。因此，ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ通过抑制磷酸肌醇通路信号转 导而上调ｂａｘ基因表达、诱导细胞凋亡可能是其抑制 肝癌增长的机制之一。但要完全证实抑制磷酸肌醇通 路信号转导可以上调ｂａｘ基因表达、诱导细胞凋亡， 尚需进一步研究抑制和增强磷酸肌醇通路信号转导 与ｂａｘ基因表达的变化规律。 细胞增殖、分化、凋亡三者之间的平衡失调与肝 癌的发生发展密切相关［２－３］，肝癌组织细胞增殖和凋 亡速度均较正常肝组织明显增加，但细胞增殖和凋亡 平衡失调，增殖速度总是超过凋亡速度，在肝癌发生 发展中起重要作用［１１－１２］。由于ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ既可抑制细胞 增殖［９１，又可诱导细胞凋亡，抑制肝癌增长，今后可在 临床上开展应用ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ治疗肝癌的研究，并可进一 步开展其他特异性磷酸肌醇通路信号抑制剂治疗肝 细胞癌的研究。 ４参考文献 ［１］ 孙大业，郭艳林，马力耕．细胞信号转导［Ｍ］．２版．北京：科学出 版社，２０００：１－９． ［２ ３ Ｄｕａｎ Ｘ Ｘ，Ｏｕ Ｊ Ｓ，Ｌｉ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｄｙｎａｍｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ— ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ ｄｕｒｉｎｇ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｈｅｐａｔｏｅｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ， ２００５，１１（３０）：４７４０－４７４４． ［３］ Ｋｏｕｎｔｏｕｒａｓ Ｊ， Ｚａｖｏｓ Ｃ， Ｃｈａｔｚｏｐｏｕｌｏｓ Ｄ．Ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ａｎｄ ａｎｔｉ— ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ａｎｄ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｓｕｒｇ Ｏｎｃｏｌ，２００５，９０（４）：２４９－５９． ［４］ Ｂａｓｋｉｎ—Ｂｅｙ Ｅ Ｓ，Ｇｏｒｅｓ Ｇ Ｊ．Ｃａｓｐａｓｅ一８，ｄｅａｔｈ—ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ， 本实验结果显示．在裸鼠肝内移植人肝癌模型制
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实用医学杂志２００８年第２４卷第ｌ４期 ａｎｄ ｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ：ｔｈｅ Ｆａｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｆｕｒｉｏｕｓ ［Ｊ］． ２３８７ ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ［Ｊ］．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９９７，６０ （２４）：２１５７－２１６３． Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００５，１２９（５）：１７９０－１７９２． ［５］ Ｓｉｎｇｈａｌ Ｒ Ｌ，Ｌｏｏｋ Ｋ Ｙ，Ｙｅｈ Ｙ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｅｎｚｙｍｅｓ ＰＩ ｋｉｎａｓｅ ｎｄ ａＰＩＰ ｋｉｎａｓｅ ［９］Ｗｅｂｅｒ Ｇ，Ｓｈｅｎ Ｆ，Ｐｒａｊｄａ Ｎ，ｅｔ １ａ．Ｒｅｕｌｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｉｎａｇｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｐｒｏｇｒａｍ ｂｙ ｄｒｕｇｓ［Ｊ］．Ａｄｖ Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇｕｌ，１９９７，３７： ３５—５５． ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｌｉｆｅ ｓＳｃｉｅｎｃｅｓ，１９９４，５５（１９）：１４８７－ １４９２． ［１Ｏ］连君，曹雪涛，于益芝．Ｂｃｌ一２，ｂａｘ与肿瘤细胞凋亡［Ｊ］．中国生物 治疗杂志，２００３，１０（３）：２３２—２３４． ［６］ Ｓｈｅｎ Ｆ，Ｘｕｅ Ｘ，Ｗｅｂｅｒ Ｇ．Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ ｎｄａ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｄｏｗｎ—ｒｅｇｕｌａｔｅ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ—ｎｅｇａｔｉｖｅ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ＭＤＡ—ＭＢ－４３５ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］． Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１９９９．１９（３Ａ）：１６５７—１６６２． ［１１］Ｓｃｈｕｈｅ—Ｈｅｒｍａｎｎ Ｒ，Ｂｕｒｓｃｈ Ｗ，Ｌｏｗ—Ｂａｓｅｌｌｉ Ａ，ｅｔ １ａ．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｏｌｅ ｉｎ ｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ， １９９７，１３（４－５）：３３９—３４８． ［７］ Ｙａｎｇ Ｅ，Ｚｈａ Ｊ，Ｊｏｃｋｅｌ Ｊ，ｅｔ １ａ．Ｂａｄ，ａ ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｉｒｃ ｐａ￣ｎｅｒ ｆｏｒ Ｂｃｌ—ＸＬ ａｎｄ Ｂｃｌ一２，ｄｉｓｐｌａｃｅｓ Ｂａｘ ａｎｄ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ， １９９５，８０（２）：２８５—２９１． ［１２］Ｇｒａｓｌ－Ｋｒａｕｐｐ Ｂ，Ｒｕｔｔｋａｙ—Ｎｅｄｅｃｋｙ Ｂ，Ｍｕｌｌａｕｅｒ Ｌ，ｅｔ １．Ｉａｎｈｅｒｅｎｔ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｔｕｍｏｒｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９７，２５（４）：９０６—９１２． （收稿：２００７—１２—１９） ［８］Ｃｓｏｋａｙ Ｂ，Ｐｒａｊｄａ Ｎ，Ｗｅｂｅｒ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ 急性痘疮样糠疹样二期梅毒疹１例 华海燕叶静静马丽俐 １］。有文献［２－３］报道二期梅毒常易误诊 患者女，５２岁，已婚，工人。因全身皮 １：３２，梅毒螺旋体血球凝集试验（ＴＰＨＡ） 者［ 疹伴瘙痒１周，于２００７年７月来我科就 阳性。抗艾滋病人免疫缺陷病毒抗体阴 为玫瑰糠疹、药物疹、银屑病，环状红斑、诊。２００７年７月初，患者无明显诱因下躯 性。诊断：二期梅毒。 干、四肢出现散在蚕豆大小的淡红色斑、 丘疹，压之褪色，部分中央有水疱，伴瘙 痒，无疼痛。当时未予特殊诊治。此后皮疹 生殖器疱疹等。本例患者为急性痘疮样 糠疹样梅毒疹实属少见。患者虽否认有 非婚性行为．但实验室检查证实为二期 梅毒。后经检查，其丈夫亦患有梅毒 （ＲＰＲ １：６４阳性，ＴＰＨＡ阳性），予以相同 逐渐扩大增多．搔抓后水疱破溃渗出明 显。起病以来患者全身一般情况可，无发 热、头痛、头晕、关节疼痛等，纳食、睡眠可， 大小便无特殊。既往健康，否认药物及食 物过敏史。否认非婚性接触史及输血史。 体格查体：Ｔ ３６．８￣Ｃ，Ｐ ７５次／ｍｉｎ。ＢＰ １ １４／６８ ｍｍＨｇ（１ ｍｍＨｇ＝０．１３３ ｋＰａ）。体形 治疗。本例提示，此例为二期梅毒所表现 的少数特殊的皮疹，体现了二期梅毒皮 损复杂多样的特点。急性痘疮样糠疹皮 损以躯干、四肢屈面多见，好发于青年男 性［４］。此女性患者发疹迅速，短时间内遍 布全身．并且二期梅毒一般客观症状明 中等，一般情况可，咽部未见充血，扁桃 注：大腿内侧见圆形淡红色斑丘疹，中央有 显而主观症状轻微，大多无瘙痒，但本例 患者皮损瘙痒明显，似乎难以鉴别。因此 体未见肿大，心、肺无特殊，肝内囊肿，胆 水疱 图１二期梅毒患者大腿内侧皮损 相关实验室检查至关重要，这样才能与 囊炎．双乳腺增生伴结节，左侧肾脏囊 肿。皮肤专科检查：头部无脱发，面部、口 腔未见皮疹．躯干四肢散在分布蚕豆大 其他皮肤病加以区别。以免误诊误治。 治疗：给予苄星青霉素２４０万Ｕ。分 参考文献 ．北京：人民卫 小的淡红色斑块、丘疹，部分中央有水疱 两侧臀部肌内注射。每周１次，共３次， ［１］张学军．皮肤性病学［Ｍ］生出版社．２００４：２０８—２１４． ｄ后复诊。治疗３ ｄ后，患 （图１），数目多，不融合。皮疹压之褪色， 并要求患者３ 蔡润学．银屑病样二期梅毒１例 触之无压痛。阴部、肛周无皮疹。双手掌， 者部分皮疹开始消退。瘙痒消失。无新发 ［２］陶庆杰，足跖部未见皮疹。全身淋巴结无肿大。血 皮疹出现。１周后皮疹基本消退，少数遗 常规：中性粒细胞百分数０．７０３。尿常规： 留色素沉着斑。现仍在随访中。［Ｊ］．中国麻风皮肤病杂志，２００２，ｌ８ （２）：１６２． 酮体（＋），蛋白质弱阳性，胆红素（＋）。粪 讨论近年来．梅毒发病率又呈上 ［３］ 童燕芳．环状红斑样二期梅毒１例［Ｊ］． 临床皮肤科杂志。２００４，３３（１１）：６９１— ６９２． 常规、肝肾功能无异常，乙肝三系正常。 升趋势。二期梅毒皮损表现多样化，常呈 快速血浆反应素试验（ＲＰＲ）阳性，滴度 泛发性、对称性分布，无特异性。易与其 它多种皮肤病相混淆。造成诊断困难，甚 作者单位：３１００００杭州市，浙江中医药 ［４］ 高冬．二期梅毒疹误诊为玫瑰糠疹７例 分析［Ｊ］．中国麻风皮肤病杂志，２００２， １８（１）：７４． 至误诊。皮损常见为斑疹、丘疹、溃疡 等，脓疱性梅毒疹少见，多见于体质衰弱 大学附属第一医院皮肤科 （收稿：２００７—１１＿０５）