2024年3月27日发(作者：单于博瀚)
西安长安医院
检 验 科
甲胎蛋白(AFP )测定
(化学发光法)
文件编号：CA-JY-CZ-MY
第 二 版
执行日期：2010-1-4
共5页 第1页
１ 原理
AFP是胚胎时期的重要血清成分，由内黄囊和肝细胞合成，胎儿出
生后其浓度急剧下降，几个月至一年可降至正常水平，正常值小于
20ng/ml。本检验科使用日本东曹AIA-1800型全自动免疫发光分析仪进
行 测定，采用微粒子捕捉酶免疫分析技术(MEIA)。
AFP测定利用双抗体夹心法原理：已包被了抗体的塑料微珠试剂中，加
入待测标本后，经温育，再加入碱性磷酸酶标记的抗体、形成“抗体－
抗原－酶标记抗体复合物”。然后将其转移到玻璃纤维柱上，用缓冲液
洗涤，没有结合的抗原、酶标抗体被洗掉，结合抗原抗体的塑料微珠则
被保留在纤维柱滤膜的上方。这时再加入底物：4-甲基伞型酣磷酸盐
(4-Mup)。酶标抗体上的碱性磷酸酶将4-Mup分解,脱磷酸后形成甲基伞
型酣(4-Mu)，它在365nm激发光的照射下，发出448nm的荧光，经过
荧光读数仪的记录、放大，计算出所测物质的含量。
2 标本采集与处理
2.1 原始样本类型：血清、血浆或全血（应用抗凝剂为肝素钠、枸橼酸钠、
ACD、CPDA-1或EDTA）、尿液(晨尿、随即尿、24小时尿等)或其他
体液(羊水等)。
2.2 样本量：根据不同项目样本量不等（83μl-238μl）。
2.3患者准备：严禁使用接受过鼠单克隆抗体诊断或治疗的病人样本，引起
体内含有人抗鼠抗体（HAMA），当这些样品在使用含鼠单克隆抗体分
析试剂进行测试时，引起结果升高或降低。
2.4 样本采集方法：一般采用静脉采血。
样本采集要求：
避免过度溶血，必须在无菌体条件下采集；
确保离心速度（10000转/分钟）和时间（10分钟），避免颗粒物质的干扰。
避免样品的反复冻融，溶解后的样品需低速震荡或轻轻颠倒混匀已获得
稳定的结果。若样品中有颗粒物质，红血球或浑浊物质必须离心使其澄
清后再进行测试。
2.5样品的稳定期和保存：上机3小时内完成检测；2℃-8℃标本可保存1-14
天；若需长期保存（1年内），必须将血清分离出来，冷冻保存（-10℃或
更冷）。
3 试剂
3.1 所有试剂均购自日本东曹公司
TOSOH
Ⅱ
相关校准品
TOSOH
Ⅱ
相关校准品1
TOSOH
Ⅱ
相关校准品2
TOSOH
Ⅱ
样本稀释液
TOSOH
Ⅱ基质：
4-
甲基伞形酮酰磷酸
TOSOH
Ⅱ基质溶解液
TOSOH
Ⅱ清洗液
TOSOH
Ⅱ缓冲液
3.2 试剂准备与检查：
从冰箱中取出1号液（底物液）放入仪器
从冰箱中取出相关测试试剂放入仪器
检查所有试剂和缓冲液是否在有效期内，超过有效期的试剂不可使用
检查所有试剂和缓冲液是否足够
检查所有消耗品（纤维杯或反应杯）是否足够，废液或废物是否清空
3.3 试剂保存条件：
试剂盒、标准品、质控品在2℃-8℃保存。
3.4 试剂性能可接受性：
按测定项目资料手册中质量控制章节所规定内容进行质量控制，结果必
须在实验室规定的可接受范围内。
4 操作步骤
1 开机前检查
a 察看电源是否正常安全通电
b 推主机下部的前门，打开后检查洗净水与分注液的用量是否满足当日
用量
2 开机
废试样杯与废吸嘴是否丢弃
a更换75%酒精，放置基质液
b 打开电脑主机及AIA-1800电源, 点击主业面进入root
c 试样吸嘴的设置及酶标识试剂，检体稀释液的设置，按主机操作版面
Reagent/Tip键，LED指示灯变为绿色，打开试剂吸嘴护罩，将酶
标识试剂
标识面朝前
，检体稀释液设置在试剂托架上，将条形码
d 试剂杯的设置，按主机操作版面的Cup Sorter键，LED指示灯
变为绿色，拉开分类器抽屉将试剂托盘设置在分类器托盘上，将分类器
抽屉推到底
3 开机日检
4 日检通过后，进行标本检测，在树形菜单上进入界面设置标
本检测项目，Assay键点击开始测定
5 测定完毕后，按主机操作版面的Cup Sorter及Reagent/Tip键，LED指
示灯变为绿色，打开试剂吸嘴护罩及分类器抽屉，收集试剂放入冰箱，
更换基质液，放置75%酒精
6 点击
源
关机，待窗口消失，关闭AIA-1800电源，在关闭电脑及主电
5 质量控制：
每批试剂都要使用东曹公司标准品作质量控制，请参见AIA-1800仪器操作
手册。
6 结果计算（定量分析）
：
利用点对点数据产生方法来产生标准曲线，并根据标准曲线机器会自动计
算最终样品浓度；
7 报告格式
：
各种定量单位通常采用ug/L
8 参考值：
0-10.9ug/L
9 临床意义：
原发性肝癌患者血清AFP约有75%－80%的阳性率。一般认为
AFP>350时对原发性肝癌有较高的诊断价值。
胃癌或胰腺癌时血中AFP含量也可升高。
病毒性肝炎、肝硬变时AFP也有不同程度的升高，但其水平常在100ng/ml
以下。
妊娠妇女的不同时期血清中AFP亦有不同程度的上升。
10 方法学性能:
精密度：采用NCCLS中的EPS-T2标准，测
WithinRun,BetweenRun,Re-tweenDay和Total四个方面进行精密度的评价，
检测方案为：测6套以上的血清盘，（每套3个以上的样品），在3-4个试
验点，每天分两个时间段，每个样品做复管（每个样品累计测80次以上），
连续测20天以上，使用一个以上批号试剂和标准曲线。总的CV%值控制
在8%以内。
正确度（准确度）：采用与东曹原有的商品化试剂或市售的其他经
典的商品化试剂（如：HPLC或RIA）进行相关性的比较，回归方式一般
采用Least Squares Linear Regression和/或Passing-Bablok Linear
Regression方式，比较Intercept（截距），Slope(斜率)和Correlation Coefficient
（相关参数）等参数，并注明参与比较的样品类型，数量和样品的浓度范
围。
编写者：李 伟 审批者：闵金凤 审批日期：2010-1-4
复审人： 复审结果： 复审日期：
2024年3月27日发(作者：单于博瀚)
西安长安医院
检 验 科
甲胎蛋白(AFP )测定
(化学发光法)
文件编号：CA-JY-CZ-MY
第 二 版
执行日期：2010-1-4
共5页 第1页
１ 原理
AFP是胚胎时期的重要血清成分，由内黄囊和肝细胞合成，胎儿出
生后其浓度急剧下降，几个月至一年可降至正常水平，正常值小于
20ng/ml。本检验科使用日本东曹AIA-1800型全自动免疫发光分析仪进
行 测定，采用微粒子捕捉酶免疫分析技术(MEIA)。
AFP测定利用双抗体夹心法原理：已包被了抗体的塑料微珠试剂中，加
入待测标本后，经温育，再加入碱性磷酸酶标记的抗体、形成“抗体－
抗原－酶标记抗体复合物”。然后将其转移到玻璃纤维柱上，用缓冲液
洗涤，没有结合的抗原、酶标抗体被洗掉，结合抗原抗体的塑料微珠则
被保留在纤维柱滤膜的上方。这时再加入底物：4-甲基伞型酣磷酸盐
(4-Mup)。酶标抗体上的碱性磷酸酶将4-Mup分解,脱磷酸后形成甲基伞
型酣(4-Mu)，它在365nm激发光的照射下，发出448nm的荧光，经过
荧光读数仪的记录、放大，计算出所测物质的含量。
2 标本采集与处理
2.1 原始样本类型：血清、血浆或全血（应用抗凝剂为肝素钠、枸橼酸钠、
ACD、CPDA-1或EDTA）、尿液(晨尿、随即尿、24小时尿等)或其他
体液(羊水等)。
2.2 样本量：根据不同项目样本量不等（83μl-238μl）。
2.3患者准备：严禁使用接受过鼠单克隆抗体诊断或治疗的病人样本，引起
体内含有人抗鼠抗体（HAMA），当这些样品在使用含鼠单克隆抗体分
析试剂进行测试时，引起结果升高或降低。
2.4 样本采集方法：一般采用静脉采血。
样本采集要求：
避免过度溶血，必须在无菌体条件下采集；
确保离心速度（10000转/分钟）和时间（10分钟），避免颗粒物质的干扰。
避免样品的反复冻融，溶解后的样品需低速震荡或轻轻颠倒混匀已获得
稳定的结果。若样品中有颗粒物质，红血球或浑浊物质必须离心使其澄
清后再进行测试。
2.5样品的稳定期和保存：上机3小时内完成检测；2℃-8℃标本可保存1-14
天；若需长期保存（1年内），必须将血清分离出来，冷冻保存（-10℃或
更冷）。
3 试剂
3.1 所有试剂均购自日本东曹公司
TOSOH
Ⅱ
相关校准品
TOSOH
Ⅱ
相关校准品1
TOSOH
Ⅱ
相关校准品2
TOSOH
Ⅱ
样本稀释液
TOSOH
Ⅱ基质：
4-
甲基伞形酮酰磷酸
TOSOH
Ⅱ基质溶解液
TOSOH
Ⅱ清洗液
TOSOH
Ⅱ缓冲液
3.2 试剂准备与检查：
从冰箱中取出1号液（底物液）放入仪器
从冰箱中取出相关测试试剂放入仪器
检查所有试剂和缓冲液是否在有效期内，超过有效期的试剂不可使用
检查所有试剂和缓冲液是否足够
检查所有消耗品（纤维杯或反应杯）是否足够，废液或废物是否清空
3.3 试剂保存条件：
试剂盒、标准品、质控品在2℃-8℃保存。
3.4 试剂性能可接受性：
按测定项目资料手册中质量控制章节所规定内容进行质量控制，结果必
须在实验室规定的可接受范围内。
4 操作步骤
1 开机前检查
a 察看电源是否正常安全通电
b 推主机下部的前门，打开后检查洗净水与分注液的用量是否满足当日
用量
2 开机
废试样杯与废吸嘴是否丢弃
a更换75%酒精，放置基质液
b 打开电脑主机及AIA-1800电源, 点击主业面进入root
c 试样吸嘴的设置及酶标识试剂，检体稀释液的设置，按主机操作版面
Reagent/Tip键，LED指示灯变为绿色，打开试剂吸嘴护罩，将酶
标识试剂
标识面朝前
，检体稀释液设置在试剂托架上，将条形码
d 试剂杯的设置，按主机操作版面的Cup Sorter键，LED指示灯
变为绿色，拉开分类器抽屉将试剂托盘设置在分类器托盘上，将分类器
抽屉推到底
3 开机日检
4 日检通过后，进行标本检测，在树形菜单上进入界面设置标
本检测项目，Assay键点击开始测定
5 测定完毕后，按主机操作版面的Cup Sorter及Reagent/Tip键，LED指
示灯变为绿色，打开试剂吸嘴护罩及分类器抽屉，收集试剂放入冰箱，
更换基质液，放置75%酒精
6 点击
源
关机，待窗口消失，关闭AIA-1800电源，在关闭电脑及主电
5 质量控制：
每批试剂都要使用东曹公司标准品作质量控制，请参见AIA-1800仪器操作
手册。
6 结果计算（定量分析）
：
利用点对点数据产生方法来产生标准曲线，并根据标准曲线机器会自动计
算最终样品浓度；
7 报告格式
：
各种定量单位通常采用ug/L
8 参考值：
0-10.9ug/L
9 临床意义：
原发性肝癌患者血清AFP约有75%－80%的阳性率。一般认为
AFP>350时对原发性肝癌有较高的诊断价值。
胃癌或胰腺癌时血中AFP含量也可升高。
病毒性肝炎、肝硬变时AFP也有不同程度的升高，但其水平常在100ng/ml
以下。
妊娠妇女的不同时期血清中AFP亦有不同程度的上升。
10 方法学性能:
精密度：采用NCCLS中的EPS-T2标准，测
WithinRun,BetweenRun,Re-tweenDay和Total四个方面进行精密度的评价，
检测方案为：测6套以上的血清盘，（每套3个以上的样品），在3-4个试
验点，每天分两个时间段，每个样品做复管（每个样品累计测80次以上），
连续测20天以上，使用一个以上批号试剂和标准曲线。总的CV%值控制
在8%以内。
正确度（准确度）：采用与东曹原有的商品化试剂或市售的其他经
典的商品化试剂（如：HPLC或RIA）进行相关性的比较，回归方式一般
采用Least Squares Linear Regression和/或Passing-Bablok Linear
Regression方式，比较Intercept（截距），Slope(斜率)和Correlation Coefficient
（相关参数）等参数，并注明参与比较的样品类型，数量和样品的浓度范
围。
编写者：李 伟 审批者：闵金凤 审批日期：2010-1-4
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