2024年3月27日发(作者：奇甘泽)
附件3
化妆品用化学原料体外兔角膜上皮细胞短时暴露试验
Short Time Exposure In Vitro Test Method (STE)
1 范围
本方法规定了化妆品用化学原料体外兔角膜上皮细胞短时暴露试
验的范围、试验目的、术语和定义、试验原理、试验材料与试剂、试
验步骤、结果判定标准。
本方法适用于化妆品用化学原料眼刺激性的检测。
2 试验目的
预测和评价化妆品用化学原料对眼睛是否具有刺激作用或腐蚀作
用。
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本方法。
3.1 眼睛刺激性eye irritation
眼球表面接触受试物后所产生的可逆性炎性变化。
3.2 眼睛腐蚀性eye corrosion
眼球表面接触受试物后引起的不可逆性组织损伤。
3.3 细胞活性cell viability
在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，活细胞所占细
胞总数的百分比称为细胞活性。参数的选择及其数值取决于测定的终
点和试验所用的设计方案。
3.4 相对细胞活性 relative cell viability
通过与溶剂（阴性）对照组的相关性来表达的细胞活性，对照组
除了未经受试化学物质处理外，整个试验过程与试验组一样。
4 试验原理
化合物直接作用于角膜引起的刺激作用类似于细胞毒性损伤作用，
通过检测细胞毒性指标，可反映角膜损伤的程度。试验采用体外培养
的兔角膜上皮细胞（SIRC），短时暴露于化妆品用化学原料，模拟急
性角膜刺激作用，通过计算细胞相对存活率来预测化妆品用化学原料
引起的眼睛损伤。
5 试验材料与试剂
5.1 细胞株
采用SIRC兔角膜上皮细胞，该细胞为贴壁生长。要求：来源清晰，
代数明确（<25代）。
5.2 培养基
采用MEM培养基，加入10%胎牛血清、2mmol/L谷氨酰胺和适量抗
生素（终浓度为青霉素50～100IU/mL，链霉素50～100μg/mL）。
5.3 溶液的配制
0.5mg/ mL噻唑蓝（MTT）溶液：称取MTT 50mg，溶于100 mL的
磷酸盐缓冲液或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤除菌，放4℃避
光保存，最好现用现配。在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸
包住。
0.04N酸化异丙醇：异丙醇中加入HCl使其最终达0.04mol/L。
磷酸盐缓冲液(PBS)：氯化钠9.00g、七水磷酸氢二钠0.73g、无水磷
酸二氢钾0.21g，去离子水定容至1000 mL，调pH=7.2～7.4，高压灭菌。
5.4 溶剂的选择
2024年3月27日发(作者：奇甘泽)
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化妆品用化学原料体外兔角膜上皮细胞短时暴露试验
Short Time Exposure In Vitro Test Method (STE)
1 范围
本方法规定了化妆品用化学原料体外兔角膜上皮细胞短时暴露试
验的范围、试验目的、术语和定义、试验原理、试验材料与试剂、试
验步骤、结果判定标准。
本方法适用于化妆品用化学原料眼刺激性的检测。
2 试验目的
预测和评价化妆品用化学原料对眼睛是否具有刺激作用或腐蚀作
用。
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本方法。
3.1 眼睛刺激性eye irritation
眼球表面接触受试物后所产生的可逆性炎性变化。
3.2 眼睛腐蚀性eye corrosion
眼球表面接触受试物后引起的不可逆性组织损伤。
3.3 细胞活性cell viability
在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，活细胞所占细
胞总数的百分比称为细胞活性。参数的选择及其数值取决于测定的终
点和试验所用的设计方案。
3.4 相对细胞活性 relative cell viability
通过与溶剂（阴性）对照组的相关性来表达的细胞活性，对照组
除了未经受试化学物质处理外，整个试验过程与试验组一样。
4 试验原理
化合物直接作用于角膜引起的刺激作用类似于细胞毒性损伤作用，
通过检测细胞毒性指标，可反映角膜损伤的程度。试验采用体外培养
的兔角膜上皮细胞（SIRC），短时暴露于化妆品用化学原料，模拟急
性角膜刺激作用，通过计算细胞相对存活率来预测化妆品用化学原料
引起的眼睛损伤。
5 试验材料与试剂
5.1 细胞株
采用SIRC兔角膜上皮细胞，该细胞为贴壁生长。要求：来源清晰，
代数明确（<25代）。
5.2 培养基
采用MEM培养基，加入10%胎牛血清、2mmol/L谷氨酰胺和适量抗
生素（终浓度为青霉素50～100IU/mL，链霉素50～100μg/mL）。
5.3 溶液的配制
0.5mg/ mL噻唑蓝（MTT）溶液：称取MTT 50mg，溶于100 mL的
磷酸盐缓冲液或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤除菌，放4℃避
光保存，最好现用现配。在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸
包住。
0.04N酸化异丙醇：异丙醇中加入HCl使其最终达0.04mol/L。
磷酸盐缓冲液(PBS)：氯化钠9.00g、七水磷酸氢二钠0.73g、无水磷
酸二氢钾0.21g，去离子水定容至1000 mL，调pH=7.2～7.4，高压灭菌。
5.4 溶剂的选择