2024年4月1日发(作者：童天空)
DC在机体免疫监视机制中起着哨兵作用，它能对肿瘤抗原进行识别、处理和提呈，从
而启动机体对肿瘤的特异性免疫应答。目前制备的以DC为基础的肿瘤疫苗就是利用DC这
一特性，因此有效地在体外扩增培养DC是制备DC肿瘤疫苗的重要前提。以下我们将就
DC前体细胞选择以及DC培养所需细胞因子进行介绍。
一、DC前体细胞的选择
1.直接分离骨髓、脐带血或外周血中DC：
DC在组织中含量甚微，在血液中仅占单个核细胞总数的0.5％～1.0％，难以分离、纯
化，且呈高度分化状，体外不易长期培养，更难建系。因此该分离方法目前仅用于DC免疫
活性，表面标志及DC亚型功能差异的研究；
2.从人骨髓或脐带血的CD34+造血干细胞诱导DC：
我们通常所指的DC均为髓系DC，其来源于人CD34
+
造血干细胞。CD34
+
造血干细胞
是具有多向分化潜能和大量增生能力的细胞，其可从人骨髓或脐带血中分离，在体外通过联
合GM—CSF、SCF、IL—6、IL—3等多种细胞因子培养，诱导扩增生成大量的DC，但其
缺点在于取材不方便，不利于广泛使用；
3.分离外周血中CDl4+单核细胞：
此方法为目前最常选用的分离获取DC前体细胞的途径。通过淋巴细胞分离液分离外周
血单个核细胞，利用免疫磁珠分选出CDl4
+
单核细胞，采用GM—CSF与IL—4(或IL—13，
其与IL—4具有相似性质)联合培养体系，经7～10天即可诱导出大量的典型的DC；
4.由高度纯化的中性粒细胞前体细胞诱导DC：
利用高度纯化乳铁蛋白阳性的中性粒细胞前体细胞，在培养体系中加入6MCSF，IL—4
和TNF—d，可得到DC样形态及具有DC相关表面分子的细胞。从功能上比较，这些中性
粒细胞诱生的DC特征与经典DC的群体相似；
5.从人外周血或脐血CD34+前体细胞诱导DC：
由于CD34
+
造血干细胞含量非常少，因此应用受到限制。为克服这一难点，有人即采
取分离外周血或脐血中含量较高的CD34
+
前体细胞联合细胞因子大量培养扩增，诱导生成
DC；
6.由白血病细胞诱导分化生成DC：
目前的研究发现，可将白血病细胞诱导分化为功能成熟的DC，且这些白血病细胞来源
的DC可提供大量的白血病相关抗原并进行肿瘤抗原呈递，而无需体外预激过程，从而减少
了污染的机会，这种体外扩增的方法在临床治疗应用上极具吸引力。
二、DC体外培养所需细胞因子
1.经典细胞因子组合最经典的体外扩增培养的细胞因子组合为：
粒／巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)、白介素4(IL—4)。GM-CSF可以促进髓系细
胞发育，是维持、诱导DC发育和分化的最根本的细胞因子；IL—4可以抑制粒细胞和巨噬
++
细胞生长，从而使CD34前体细胞或CDl4单核细胞向DC方向发展。该细胞因子组合培
养的DC，纯度高达95％以上，但诱导生成的DC多为不成熟的DC。
只有在加入一些刺激物，如：1)细菌菌体或其产物：LPS、SPA等；2)某些炎症介质作
用的细胞因子：TNF—a、PGE2、IL—β、IFN—β、IFN—Y等；3)某些刺激信号如CD40
配体转染；4)单核细胞条件培养液，方可使非成熟DC转化为成熟的DC。这些刺激物可阻
止粒系的分化而刺激DC的成熟并有提高DC数量的协同。
—d和6M—CSF或Flt3L和TGF-β 1无血清培养系体外培养：
该培养方法可以与GM—csF和IL—4同样有效的从外周血单个核细胞诱导产生DC。
所得DC在数量和功能上与传统方法产生的DC无明显区别。但只有少数细胞表达CD83和
CDla，说明所产生的大多数DC属于不成熟DC，较GM—CSF和IL—4诱导产生的DC，
其成熟分化程度更低。在无TNF—a或其它DC启动剂作用下，主要生成不成熟的DC。目
前国内己推行该种培养方法，但由于其相对于传统的牛血清培养，费用较为昂贵，因此未普
遍使用。
3.钙离子载体(CI或A23187，离子毒素)：
经典的DC培养方法周期较长，一般需要7～14天，因此研究者们不断寻找更快速、
高效的诱导方法，从而发现钙离子在DC的诱导和成熟中具有重要作用。将外周血单个核细
胞(mononuclearcell，Mo)分离出来，用钙离子载体(calciumionophore，CI)处理，发现经过
20h～40h后，细胞表现出树突状形态，细胞表面CDl4抗原表达下降，且大量表达MHC—I、
MHC—II类分子和共刺激分子CD83等，且证明该法诱导的DC较细胞因子诱导的DC刺激
T细胞增生的能力更强。
4.佛波醇酯(phorbol myri state acetate，PhIA)：
作为蛋白激酶C(PKC)的强大激活剂，佛波醇酯(PMA)可以通过激活PKC来活化细胞
内信号传导，从而诱导CD34造血干细胞(HPc)向成熟DCs方向分化。通过细胞因子
+
GM—CSF、TNF—d、PMA(联用或单用)诱导CD34细胞及粒单核白血病细胞系KGI，分
化成树突样细胞，免疫表型分析证明该种来源的DC细胞表面高表达MHC—I、MHC—II
类分子和共刺激分子，且具备较强激活静息T细胞的功能。
+
5.活化的CD8+T细胞：
将活化的CD8T细胞与外周血单核细胞共同孵育可诱导单核细胞向DC分化，并检测
+
其免疫表型为CDl4—CDla。同时这些DC在混合淋巴细胞反应及诱导细胞毒性反应时，
表现出强大的刺激功能。故认为活化的CP8+T细胞能提供单核细胞刺激信号，诱导其向
DC分化且增加其免疫刺激能力。
+
2024年4月1日发(作者：童天空)
DC在机体免疫监视机制中起着哨兵作用，它能对肿瘤抗原进行识别、处理和提呈，从
而启动机体对肿瘤的特异性免疫应答。目前制备的以DC为基础的肿瘤疫苗就是利用DC这
一特性，因此有效地在体外扩增培养DC是制备DC肿瘤疫苗的重要前提。以下我们将就
DC前体细胞选择以及DC培养所需细胞因子进行介绍。
一、DC前体细胞的选择
1.直接分离骨髓、脐带血或外周血中DC：
DC在组织中含量甚微，在血液中仅占单个核细胞总数的0.5％～1.0％，难以分离、纯
化，且呈高度分化状，体外不易长期培养，更难建系。因此该分离方法目前仅用于DC免疫
活性，表面标志及DC亚型功能差异的研究；
2.从人骨髓或脐带血的CD34+造血干细胞诱导DC：
我们通常所指的DC均为髓系DC，其来源于人CD34
+
造血干细胞。CD34
+
造血干细胞
是具有多向分化潜能和大量增生能力的细胞，其可从人骨髓或脐带血中分离，在体外通过联
合GM—CSF、SCF、IL—6、IL—3等多种细胞因子培养，诱导扩增生成大量的DC，但其
缺点在于取材不方便，不利于广泛使用；
3.分离外周血中CDl4+单核细胞：
此方法为目前最常选用的分离获取DC前体细胞的途径。通过淋巴细胞分离液分离外周
血单个核细胞，利用免疫磁珠分选出CDl4
+
单核细胞，采用GM—CSF与IL—4(或IL—13，
其与IL—4具有相似性质)联合培养体系，经7～10天即可诱导出大量的典型的DC；
4.由高度纯化的中性粒细胞前体细胞诱导DC：
利用高度纯化乳铁蛋白阳性的中性粒细胞前体细胞，在培养体系中加入6MCSF，IL—4
和TNF—d，可得到DC样形态及具有DC相关表面分子的细胞。从功能上比较，这些中性
粒细胞诱生的DC特征与经典DC的群体相似；
5.从人外周血或脐血CD34+前体细胞诱导DC：
由于CD34
+
造血干细胞含量非常少，因此应用受到限制。为克服这一难点，有人即采
取分离外周血或脐血中含量较高的CD34
+
前体细胞联合细胞因子大量培养扩增，诱导生成
DC；
6.由白血病细胞诱导分化生成DC：
目前的研究发现，可将白血病细胞诱导分化为功能成熟的DC，且这些白血病细胞来源
的DC可提供大量的白血病相关抗原并进行肿瘤抗原呈递，而无需体外预激过程，从而减少
了污染的机会，这种体外扩增的方法在临床治疗应用上极具吸引力。
二、DC体外培养所需细胞因子
1.经典细胞因子组合最经典的体外扩增培养的细胞因子组合为：
粒／巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)、白介素4(IL—4)。GM-CSF可以促进髓系细
胞发育，是维持、诱导DC发育和分化的最根本的细胞因子；IL—4可以抑制粒细胞和巨噬
++
细胞生长，从而使CD34前体细胞或CDl4单核细胞向DC方向发展。该细胞因子组合培
养的DC，纯度高达95％以上，但诱导生成的DC多为不成熟的DC。
只有在加入一些刺激物，如：1)细菌菌体或其产物：LPS、SPA等；2)某些炎症介质作
用的细胞因子：TNF—a、PGE2、IL—β、IFN—β、IFN—Y等；3)某些刺激信号如CD40
配体转染；4)单核细胞条件培养液，方可使非成熟DC转化为成熟的DC。这些刺激物可阻
止粒系的分化而刺激DC的成熟并有提高DC数量的协同。
—d和6M—CSF或Flt3L和TGF-β 1无血清培养系体外培养：
该培养方法可以与GM—csF和IL—4同样有效的从外周血单个核细胞诱导产生DC。
所得DC在数量和功能上与传统方法产生的DC无明显区别。但只有少数细胞表达CD83和
CDla，说明所产生的大多数DC属于不成熟DC，较GM—CSF和IL—4诱导产生的DC，
其成熟分化程度更低。在无TNF—a或其它DC启动剂作用下，主要生成不成熟的DC。目
前国内己推行该种培养方法，但由于其相对于传统的牛血清培养，费用较为昂贵，因此未普
遍使用。
3.钙离子载体(CI或A23187，离子毒素)：
经典的DC培养方法周期较长，一般需要7～14天，因此研究者们不断寻找更快速、
高效的诱导方法，从而发现钙离子在DC的诱导和成熟中具有重要作用。将外周血单个核细
胞(mononuclearcell，Mo)分离出来，用钙离子载体(calciumionophore，CI)处理，发现经过
20h～40h后，细胞表现出树突状形态，细胞表面CDl4抗原表达下降，且大量表达MHC—I、
MHC—II类分子和共刺激分子CD83等，且证明该法诱导的DC较细胞因子诱导的DC刺激
T细胞增生的能力更强。
4.佛波醇酯(phorbol myri state acetate，PhIA)：
作为蛋白激酶C(PKC)的强大激活剂，佛波醇酯(PMA)可以通过激活PKC来活化细胞
内信号传导，从而诱导CD34造血干细胞(HPc)向成熟DCs方向分化。通过细胞因子
+
GM—CSF、TNF—d、PMA(联用或单用)诱导CD34细胞及粒单核白血病细胞系KGI，分
化成树突样细胞，免疫表型分析证明该种来源的DC细胞表面高表达MHC—I、MHC—II
类分子和共刺激分子，且具备较强激活静息T细胞的功能。
+
5.活化的CD8+T细胞：
将活化的CD8T细胞与外周血单核细胞共同孵育可诱导单核细胞向DC分化，并检测
+
其免疫表型为CDl4—CDla。同时这些DC在混合淋巴细胞反应及诱导细胞毒性反应时，
表现出强大的刺激功能。故认为活化的CP8+T细胞能提供单核细胞刺激信号，诱导其向
DC分化且增加其免疫刺激能力。
+