β-环糊精、羟丙基-β-环糊精对川芎挥发油的包合行为差异性研究

2024年5月5日发(作者：荣晓彤)

.14 .

中药与临床

Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica 202;12(2)

•地制制利•

P -环糊精、羟丙基-卩-环糊精对川芎挥发油的包合行为差异性研究

杨玉婷

，刘云华2,黄志芳2，刘玉红2，陈燕2,易进海12*

[

摘要]目的

：比较

-环糊精（

)、羟丙基-

-环糊精（

)对川芎挥发油（川芎油）的包合行为差异性。

方法：制备川芎油

、

包合物，以川芎油中主要成分洋川芎内酯

和藁本内酯为模型药物，相溶解度法考察

包合物的平衡常数

和增溶倍数，并进一步考察其热稳定性：结果：在

~15

mmol

范围内，川芎油中洋川芎内酯

和藁

本内酯的溶解度随着

浓度的增加呈线性增加，包合类型为

型，随着

浓度增加呈非线性增加，包合类型为

型。6(

条件下，两种包合物均能提高川芎油的稳定性，

包合物中洋川芎内酯

和藁本内酯10天稳定性的相对保

留率分别为100%，98.66%，

包合物相对保留率分别为96.59%，90.36%。结论：川芎油与(

、

的包合

行为存在差异，

能明显增加川芎油溶解度，（3-

包合物的稳定性优于

包合物。

[关键词]川芎挥发油；

;

;相溶解度；平衡常数；稳定性

[

中图分类号

3.1

[

文献标识码

[

文章编号

674-926

(2〇2

)〇2-0〇4-〇4

Difference in inclusion behavior of p-cyclodextrin and hydroxypropyl-p-cvclodextrin with Chuanxiong volatile oil/

YANG Yu-ting 2, LIU Yun-hua', HUANG Zhi-fang2, LIU Yu-hong2, CHEN Yan2, YI Jin-hai 2//( of Pharmacy, Chengdu

University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137, Sichuan;n Provincial Key Laboratory of Quality and

Innovation Research of Chinese Material Medica, Sichuan Academy of Chinese Medicine Sciences, Chengdu 610041, Sichuan)

[Abstract] Objective: To compare the inclusion behavior difference of p-cyclodextrin (P-CD) and hydroxypropyl-(3-cyclodextrin

(HP-P-CD) to Chuanxiong volatile oil (Chuanxiong oil). Method: The P-CD and HP-P-CD inclusion complexes of Chuanxiong oil

were prepared. The main components of Chuanxiong oil, Ligustride A and Ligustilide, were regarded as model drugs, to investigate

the equilibrium constant K and solubilization multiple of the inclusion complex with phase solubility method, and further investigate

the thermal stability.

Result: In the range of 0〜15 mmol/L，the solubility of Ligustride A and Ligustilide in Chuanxiong oil increased

linearly with the increase of HP-P-CD concentration showing the inclusion type of AL, and non-linearly increased with the increase of

P-CD concentration showing the inclusion type of AL. AN 60°C, both inclusion complex could improve the stability of Chuanxiong

oil. The relative retention rates of 10-day stability of Ligustride A and Ligustilide in P~CD inclusion complex were 100% and 98.66%.

The relative retention rates of HP-p-CD inclusion complex were 96.59% and 90.36%. Conclusion: There is difference in the inclusion

behavior of Chuanxiong oil with (3-CD and HP-P-CD. HP-P-CD could significantly increase the solubility of Chuanxiong oil. The

stability of P-CD inclusion complex was better than that of HP-p-CD inclusion complex.

|Key words] Chuanxiong volatile oil

；

p~CD; HP-p-CD; phase solubility; equilibrium constant; stability

川弯为伞形科藁本属植物

于胸痹心痛，跌扑肿痛，月经不调，癥瘕腹痛，风湿

痹痛等症[11。川芎油是川芎的重要有效组分之一，主

要有效成分为藁本内酯，具有很强的解痉、平喘、

镇静等作用[2]。但藁本内酯的化学性质不稳定，易发

生脱氢、氧化、水解、降解等多种异构化反应W。此

外，川芎油水溶性低及口服生物利用度较差，极大

地限制了其在临床上的应用。

为解决川芎油溶解度及稳定性问题，本文以川

芎油中主要成分洋川芎内酯

和藁本内酯为模型药

物，分别以

、

-(3-

为包合材料进行包合，

采用相溶解度法，以包合物平衡常数、增溶倍数为

评价指标，研究不同包合材料的包合行为，并进一

步考察其稳定性，以期为提高川芎油溶解度及稳定

Hort

.的干燥根茎，其味辛、微苦、性温，具有活血

行气、祛风止痛等功效，被喻为“血中之气药'用

[

基金项目

]

四川省科技厅基本科研业务专项（

-2020

-26，

-2018

-10)

[

作者单位

]

1.成都中医药大学药学院，四川成都611137,

2.四川省中医药科学院中药材品质及创新中药研

究四川省重点实验室，四川成都610041

[

作者简介

]

杨玉婷（1994-),女，在读硕士研究生，主要从

事中药有效成分分析应用研究

Tel

: 178****8700

738321024@

com

[

通讯作者

]

易进海（1963-)，男，研究员，主要从事中药化

学成分与质量评价

[

收稿日期

]

2020-12-19

中药与临床

Phannacy and Clinics of Chinese Materia Medica 2Q2;12(2)

• 15 •

性提供参考。

i仪器与材料

Agilent

1200高效液相色谱仪（美国

Agilent

公

司）；

-300

超声波清洗器（昆山市超声仪器有

限公司）；

ZKF

035型电热真空干燥箱（上海实验

仪器厂有限公司）；

SOP

型电子天平（赛多利斯科

学仪器（北京）有限公司）；

Milli

QIntegral

3型超

纯水机（美国

Millipore

公司）；

DNP

-%52型电热

恒温培养箱（上海精宏实验设备有限公司

）；IKA

MAGHS

7型加热磁力搅拌器（德国

IKA

公司）；

SoRVALL

高速离心机（美国赛默飞世尔科技

公司）；

-85型气浴恒温振荡器（常州国宇仪器制

造有限公司）。

川芎油（实验室自制，洋川芎内酯

、藁本内

醋的含量分别为16.77%和50.30%) ,

P-CD

(批号:

20190625山东滨州智源生物科技有限公司）；

P-CD

(批号：

20200313山东滨州智源生物科技

有限公司）；对照品丁苯酞（批号：101035-201903

中国食品药品检定研究院）；对照品藁本内酯（批

号：

DST

1903 15-007成都德思特生物技术有限公

司）；对照品洋川芎内酯

(批号

：DST

180508-008

成都德思特生物技术有限公司无水乙醇（分析

纯，成都市科龙化工试剂厂）；甲醇（分析纯，成

都市科龙化工试剂厂）；石油醚（分析纯，成都市

科龙化工试剂厂）；甲醇（色谱纯，赛默飞世尔科

技（中国）有限公司）；水（超纯水，超纯水机制

得）。

2方法与结果

2.1包合物的制备

2.1.1

P-CD

包合物的制备[4]按川芎油和

的质量

比为1:10,称取

溶于20倍蒸馏水中，边超声边

搅拌的条件下，将川芎油（用等量95%乙醇稀释）

缓慢滴加至

水溶液中，混合均匀，磁力搅拌2

(温度5〇-

，速度750

rpm

min

)，冷却至室温，于

4 °

条件下冷藏24

,离心（8000

min

, 10

min

室温），将上清液倾出，底部沉淀转移至蒸发皿

中，7(

减压干燥。取出，研磨过80目筛，得乳白

色粉末状包合物，备用。

2.1.2

P-CD

物理混合物的制备称取

P-CD

适量于研钵

中，缓慢加入适量川芎油，轻轻研匀，得淡黄色物

理混合物粉末，备用。

2.1.3

p-CD

包合物的制备[5]按川芎油和

的质量比为1:10，称取

溶于3倍95%乙醇

中，将川芎油滴加至

乙醇溶液中，混合均

匀，减压回收乙醇，7(

减压干燥。取出，研磨过

80目筛，得淡黄色粉末状包合物，备用。

2.1.4

p-CD

物理混合物的制备称取

适

量于研钵中，缓慢加人适量川芎油，轻轻研匀，得

淡黄色物理混合物粉末，备用。

2.2方法学考察

采用本课题组建立报道的方法[6]，以丁苯酞为对

照品，一测多评法测定川芎油中藁本内酯和洋川芎

内酯

的含量，藁本内酯、洋川芎内酯

对丁苯酞的

校正因子分别为0.226 3, 0.490 7。

2.2.1色谱条件采用

Agilent

Eclipse

XDB-C

丨

8色谱

柱（4.6

mmx

150

, 5

);流动相为甲醇-水

(52 : 48);柱温35 •(：;检测波长280

;流速1.0

min

;进样量 5

。

2.2.2对照品溶液的制备精密称取丁苯酞对照品

29.91

,置25

棕色量瓶中，加无水乙醇溶解并

定容至刻度，摇匀，即得丁苯酞对照品储备液；精

密称取藁本内酯对照品12.10

，置25

棕色量瓶

中，加无水乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得藁

本内酯对照品储备液；精密称取洋川芎内酯

对照

品6.52

,置25

掠色量瓶中，加无水乙醇溶解

并定容至刻度，摇匀，即得洋川芎内酯

对照品储备

液；分别精密量取上述对照品储备液各

lmL

，置同

一 10

棕色量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即

得混合对照品溶液。

2.2.3供试品溶液的制备精密称取包合物约100

于100

锥形瓶中，定量加人70%乙醇25

,具

塞，称定重量，超声处理30

min

，冷却至室温，用

70%乙醇补足减失的重量，摇匀

，

0.45

微孔滤膜

滤过，取续滤液，即得。

2.2.4阴性对照溶液的配制精密称取环糊精约100

于100

锥形瓶中，定量加入70%乙醇25

其余均按供试品溶液的制备方法进行操作，即得。

2.2.5专属性考察分别吸取混合对照品溶液、供试

品溶液及阴性对照溶液适量，按“2.2.1”项下色谱条

件测定。结果见图1，表明空白

、

不会

干扰洋川芎内酯

、藁本内酯的测定，建立的分析方

法具有良好的专属性。

■ 16 •

中药与临床

and C//m_cs o/C/j/zzese Maten’a Mecfea 2021; 12(2)

图

混合对照品溶液（

川考油

P-CD

包合物（

川芎油

HP-P-CD

包合物（

C) . p-CD

阴性对照（

D),

、

HP-P-CD

阴性对照（

的

HPLC

图

注：

洋川芎内酯

A 2.

丁苯酞

.藁本内酯

2.2.6线性关系考察精密吸取“2.2.2”项下3种对照

品溶液适量，用无水乙醇制成不同稀释浓度的系

列溶液按“2.2.1”项下色谱条件进样，记录峰面积，

以进样浓度

(

)为横坐标，峰面积

为纵

坐标，进行线性回归，得丁苯酞线性回归方程为

= 13529

- 0.4201，线性范围0.03739〜1.196

(

=0.9999);藁本内醋线性回归方程为

148046

+ 4.7208,线性范围0.01513〜0.4840

mg/mL

(

=0.9999);洋川芎内酯

线性回归方程为

126726

- 0.6444,线性范围0.00815〜0.2608

mg/mL

(

=0.9999)。

2.2.7精密度试验取“2.2.2”项下3种对照品溶液，按

“2.2.1”项下色谱条件连续进样6次，记录峰面积，丁

苯酞、洋川芎内酯和藁本内酯

峰面积的

RSD

分别为

0.11%、0.34%、0.99%，表明仪器精密度良好。

2.2.8稳定性试验取“2.2.2”项下3种对照品溶液，室

温下放置，分别在〇、2、4、6、8、24

进样测定峰

面积，丁苯酞、洋川芎内酯

和藁本内酯峰面积的

RSD

分别为0.21%、丨.26%、1.09%，表明溶液在24

内稳定性良好。

2.2.9重复性试验精密称取川芎油

P-CD

包合物、

-(3

-CD

包合物约100

,共6份，按“2.2.3”项下

方法制备样品，按“2.2.1”项下色谱条件测定，川芎

油

P-CD

包合物洋川芎内酯

和藁本内酯的平均含量

分别为25.70

、65.35

RSD

分别为2.10%、

1.40%;川芎油

包合物洋川芎内酯

和藁

本内酯的平均含量分别为

5.56

、43.08

ing

RSD

分别为1.28%、1.24%,表明该方法的重复性良

好。

2.3

相溶解度法

精密称取适量

、

,加蒸馏水分别

配制为〇.〇，2_5，5.0，7.5，10.0，12.5，15.0

mmol

；1

的溶液各10

,加入过量川芎油，于35 °

，120

min

气浴恒温振荡器振摇48

。待溶液平衡，离心

(12000

rpm

min

, 10

min

,常温），上清液0.45

微

孔滤膜滤过，取续滤液进样。以卩-

、

浓

度（

mmol

)为横坐标，洋川芎内酯

和藁本内酯

的浓度（

mmol

)为纵坐标作图，绘制相溶解度曲

线，分别见图2和图3。对曲线进行线性回归，得回

归方程。根据

Higuchi

和

Connors

提出的理论m，计算

平衡常数

和增溶倍数，结果见表1和表2。

由相溶解度曲线判断，在试验选取的浓度范围

内，洋川芎内酯

、藁本内酯浓度随着

浓

度呈线性增长，回归方程及平衡常数见表1，包合类

型为/

型，可形成摩尔比为1:1的可溶性包合物；而

相溶解度图呈非线性增长，无法进行线性回归

和计算

值，包合类型为

型，可形成摩尔比1:

的包合物。随着环糊精浓度的增加，

对川

芎油中洋川芎内酯

和藁本内酯的增溶倍数较

P-CD

有显著提升，增溶作用更强。

中

与临床

Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica 2Q2.

，

2(2)

• 17 .

增溶倍数=丄、〜

(5)

分别称取适量川芎油、

包合物、

物理

混合物、

包合物和

物理混合物于

密闭洁净容器中，摊成矣5

厚的薄层。置于6

(TC

恒温培养箱中，考察10天，于第〇天、5天、10天取

样，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，计算各样

品与第0天的相对保留率。结果见表3,

、

^ 斜率

一（1 —斜韵

式中

为川芎油在环糊精溶液中的溶解度，

。为

川芎油在水中的饱和溶解度。

表1回归方程及平衡常数

包合材料回归方程

包合物相比物理混合物和川芎油的稳定性均有显

0.9982

尺

著改善，川弯油

包合物的稳定性较

更

佳。

HP-P-CD

洋川芎内酯

Ay = 0.1058x +0.6681

藁本内酯

227.73

230.58y = 0.1091x +0.73490.9951

表

不同浓度

P-CD. HP-p-CD

对洋川芎内酯

和藁本内酯的增溶倍数

包合材料浓度

P-CD

洋川芎内酯

HP-P-CD

藁本内酯洋川芎内酯

藁本内酯

/mmol/l

2.5

7.5

12.5

1.99

2.43

2.95

2.94

2.96

2.95

1.86

2.04

2.30

2.34

2.35

2.36

1.75

2.33

2.82

3.37

3.85

4.29

1.80

2.48

2.97

3.47

3.98

4.39

埘

^----▲

-洋川芎内酯

.藁本内酯

崁

蓉

摇

2.5 5 7.5 10 12.5

p-CD

浓度

mmol/L

1517.5

图

川苟油

p-CD

相溶解度图

崧

蓉

起

2.4

加速热稳定性试验

川芎油在储存过程中不稳定，温度、氧气、

和

光照均对其稳定性有影响，温度为主要影响因素^1。

由于氧气、

和光照不是其主要影响因素且在后期

生产包装上可尽量避免，而温度因素在制剂的长期

储存中影响较大，为此，对包合物的热稳定性进行

考察。

H rii ffi

匕

1517.5

0.0

2.5 5 7.5 10 12.5

HP-p-CD

浓度

mmol/L

图

川苟油

HP-p-CD

相溶解度图

表3川芎油包合物热稳定性试验结果

相对保留率％

t/d

川芎油

洋川芎内酯

藁本内酯

P-CD

包合物

P-CD

物理混合物

HP-P-CD

包合物

HP-P-CD

物理混合物

洋川芎内酯

藁本内酯

洋川芎内酯

藁本内酯

洋川芎内酯

藁本内酯

洋川芎内酯

藁本内酯

100

80.44

64.95

100

89.55

80.99

100

98.66

100

92.75

62.60

100

80.64

41.56

100

99.54

96.59

100

97.22

90.36

100

92.54

62.69

100

81.23

43.03

讨论

藁本内酯和洋川芎内酯

尚无法定的含量测定用

为评价指标，对制备方法进行筛选，最终采用饱和

水溶液法制备

包合物，于边超声边搅拌的情况

下包合率更高。采用单相法制备

包合物，

川芎油一次性加人

的乙醇溶液中，且无需

研磨、搅拌或超声处理，直接减压回收、干燥即得

包合物，该方法更简便可行，适合于工业化大生

产。

川芎油

相溶解度曲线在一定浓度范围

内呈线性增长，而

相溶解度曲线呈非线性增

(下转第29页）

对照品，且不稳定，对照品纯度标定和保存困难，

故本课题组前期建立报道了以丁苯酞为对照品，一

测多评法测定川芎油中藁本内酯和洋川芎内醋

的含

量，该方法简便可行[6]。

文献报道的包合物制备方法主要有饱和水溶液

法，研磨法和单相法等。经预实验研究，以包合率

中药与临床

Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica 2Q2]2(2)

• 29 .

细胞是高度特化的、终末分化的上皮细胞，是肾小

球滤过屏障不可分割的组成部分，在阻止血浆蛋白

渗透到尿液中起着至关重要的作用181。本实验电镜结

果表明，各干预组与模型组相比较，足突融合或消

失有所减轻，其中激素组的足突缓解最为明显，其

次为激素+补肾活血袪风方组，而补肾活血祛风方组

的疗效在缓解足细胞损伤方面疗效较差于其他干预

组。联系大鼠各组24

蛋白尿定量，其结果与足细胞

受损情况成正比，即足细胞受损越严重则24

蛋白尿

越高。此外，各干预治疗对阿霉素肾病大鼠的蛋白

尿有达到减轻作用。虽然，补肾活血风方组的疗

效弱于其他干预组，但是我们的其他研究表明，补

肾活血风方在缓解胆固醇及甘油三酯方面疗效显

著，并且能逆转由激素引起的脂质代谢紊乱。有研

究表明[91,中药可调节足细胞肌动蛋白骨架，对维持

足细胞完整性有一定作用。那么补肾活血祛风方是

否可以也可以调节足细胞相关蛋白，维持足细胞稳

态，达到缓解蛋白尿的作用，这将是我们日后实验

研究的方向。

综上所述，补肾活血祛风方在缓解蛋白尿及

维持足细胞细稳态方面具有一定疗效，而激素治疗

在缓解蛋白尿和足细胞稳态方面疗效最为显著，但

是大量的研究表明其副作用亦是不可忽视的存在。

虽然补肾活血祛风方疗效较差于激素，但其副总用

小，疗效确切，具有研究和开发价值。

(上接第17页）

长，

对川芎油的增溶作用更强，若增大

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(责任编辑：陈思敏）

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的浓度至60

mmol

1,洋川芎内酯

和藁本内酯

的的增溶倍数可达10.80、15.57，原因为

是

由

与环氧丙烷缩合得到的亲水性衍生物，由于

的羟丙基化破坏了其分子内氢键，

水

溶性显著提高（75%

) 11<)]。川芎油

包合物

粉末较疏松，呈乳白色，稳定性较好。

-(3-

包

合物粉末致密，呈淡黄色，川芎油

包合物稳定

性优于

包合物。川芎油

、

包

合物的生物利用度及药效活性等有待进一步实验研

允。

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