2024年5月16日发(作者：燕友易)
第２０卷第１期
四川解剖学杂志
ＶＯＩ．２Ｏ ＮＯ．１
２０１２年３月
ＳＩＣＨＵＡＮ ＪＯＵＲＮＡＬ ｏＦ ＡＮＡＴＯＭＹ
Ｍａｒｃｈ ２０１１
一
种用５＇－Ｎａｓｅ—ＡＬＰａｓｅ染色观察大鼠胰腺组织的方法
郭海旺
（河南护理职业学院，安阳４５５０００）
【摘要】 目的 观察大鼠胰腺组织血管淋巴管分布特点。方法 通过５ 一核苷酸酶和碱性磷酸酶组织化学双重染
色相对比，光镜观察大鼠胰腺组织脉管结构。结果光镜显示，血管显示碱性磷酸酶强阳性蓝色反应，淋巴管呈现
５，＿核苷酸酶强阳性褐色反应。在腺泡之间和胰岛内部，存在丰富的毛细血管；毛细淋巴管只见于胰岛的周围。结
论胰岛的淋巴引流，可能是通过淋巴管前通路实现的。
【关键词】胰腺；染色；血管；淋巴管；大鼠
【中图分类号】Ｒ３２９ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１００５—１４５７（２０１２）０１—８５—０２
目前，人们对于胰腺内脉管系构筑特点，有多种
（２）冷冻切片机冷冻室平衡１０ ｍｉｎ；
观察方法。本文以大鼠胰腺组织为例，介绍一种利 （３）连续切片，片厚７ ｍ，贴于ＡＰＥＳ防脱片处
用酶组织化学双重染色法制备组织切片，从而对大
理的载玻片上，切片室温干燥１０ ｍｉｎ；
鼠胰腺组织中血管和淋巴管进行光镜下形态学观察 （４）预冷４％多聚甲醛（二甲砷酸缓冲液配制，
的方法。
ｐＨ ７．４），固定２０ ｍｉｎ后，相邻的组织切片，进行５，－
１材料与方法
核苷酸酶和碱性磷酸酶（５ 一Ｎａｓｅ～ＡＬＰａｓｅ）酶组织化
学双重染色。
１．１ 材料
１．２．２ ５，＿核苷酸酶一碱性磷酸酶（５ ｒ＿Ｎａｓｅ—ＡＬＰａｓｅ）
１．１．１ 实验动物 选用健康成年雄性ＳＤ大鼠，体
酶组织化学双重染色方法
重２５０￣３００ ｇ。
（１）孵育液配制
１．１．２取材所用实验动物，均采用腹腔注射２
５＇－核苷酸酶（５＇－ｎｕｃｌｅｏｔｉｄａｓｅ，５＇－Ｎａｓｅ）反应孵
戊巴比妥钠溶液（３Ｏ～３５ ｍｇ／ｋｇ）麻醉，开腹切取整
育液配制（５０ ｍｔ反应液包含）：０．２ Ｍ Ｔｒｉｓ—Ｍａｌｅａｔｅ
个胰腺，迅速在预冷的生理盐水中清洗。用锡纸包
ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ７．２）２０ ｍｌ；Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ５ 一Ｍｏｎｐｈｏｓｐｈａｔｅ
裹，放置于液氮内速冻３０ ｍｉｎ后，移置一８０℃超低温
２５ ｍｇ；０．１ Ｍ ＭｇＳＯ４ ５ ｍｌ；蔗糖３ ｇ；蒸馏水２２ ｍｌ；
冰箱内保存备用。
２ 硝酸铅３ ｍｌ；Ｌ－Ｔｅｔｒａｍｉｚｏｌｅ ２Ｏ ｍｇ；
１．１．３主要试剂
碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＬＰａｓｅ）反
Ｍａｌｅａｔｅ ａｃｉｄ、Ｌ—Ｔｅｔｒａｍｉｚｏｌｅ、Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ５ 一
应孵育液配制（４２ ｍｌ反应液包含）：Ａ液：０．１ Ｍ
ｍｏｎｐｈｏｓｐｈａｔｅ、Ｆａｓｔ ｂｌｕｅ ＢＢ、Ｎａｐｈｔｏｌ ＡＳ—ＭＸ
Ｔｒｉｓ—ＨＣ１ ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ ８．５）４０ ｍｌ；Ｆａｓｔ ｂｌｕｅ ＢＢ ４０
ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、Ｎ，Ｎ—ｄｉｍｅｔｈｙｆｏｒｍａｍｉｄｅ、二甲砷酸、硫
ｍｇ；Ｂ液：Ｎ，Ｎ－ｄｉｍｅｔｈｙｆｏｒｍａｍｉｄｅ ２ ｍｌ；Ｎａｐｈｔｏｌ
化氨、水溶性封片剂ＧＶＡ、ＯＣＴ
ＡＳ－ＭＸ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ４０ ｍｇ；使用前，Ａ液与Ｂ液混合
１．１．４主要仪器
后过滤，取过滤液。
液氮罐、超低温冰箱、冷冻切片机、恒温水浴箱、
（２）取与普通ＨＥ染色切片相邻的切片经预冷
光学显微镜、超薄切片机、电子分析天平
４ 多聚甲醛（二甲砷酸缓冲液配制，ｐＨ ７．４）固定
１．２方法
２Ｏ ｍｉｎ后，用蒸馏水清洗５ ｍｉｎ，３次；
１．２．１ 冷冻切片样品制备
（３）５ＣＮａｓｅ反应液孵育，３７℃水浴，２ ｈ；
（１）从超低温冰箱取出胰腺新鲜组织标本，ＯＣＴ
（４）蒸馏水清洗５ ｍｉｎ，３次；
包埋；
（５）０．６ 硫化氨显色１ ｍｉｎ；
（６）蒸馏水清洗５ ｍｉｎ，３次；
作者简介：郭海１￣（１９７０一），河南林州人，河南护理职业学院解剖学讲
（７）ＡＬＰａｓｅ反应液孵育，室温，３０ ｍｉｎ；
师，解剖学硕士，通讯地址：河南省安阳市盘庚街６７号学生处，邮编：
（８）双蒸水清洗５ ｍｉｎ，３次；
４５５０００。
（９）水溶性封片剂ＧＶＡ封片；
2024年5月16日发(作者：燕友易)
第２０卷第１期
四川解剖学杂志
ＶＯＩ．２Ｏ ＮＯ．１
２０１２年３月
ＳＩＣＨＵＡＮ ＪＯＵＲＮＡＬ ｏＦ ＡＮＡＴＯＭＹ
Ｍａｒｃｈ ２０１１
一
种用５＇－Ｎａｓｅ—ＡＬＰａｓｅ染色观察大鼠胰腺组织的方法
郭海旺
（河南护理职业学院，安阳４５５０００）
【摘要】 目的 观察大鼠胰腺组织血管淋巴管分布特点。方法 通过５ 一核苷酸酶和碱性磷酸酶组织化学双重染
色相对比，光镜观察大鼠胰腺组织脉管结构。结果光镜显示，血管显示碱性磷酸酶强阳性蓝色反应，淋巴管呈现
５，＿核苷酸酶强阳性褐色反应。在腺泡之间和胰岛内部，存在丰富的毛细血管；毛细淋巴管只见于胰岛的周围。结
论胰岛的淋巴引流，可能是通过淋巴管前通路实现的。
【关键词】胰腺；染色；血管；淋巴管；大鼠
【中图分类号】Ｒ３２９ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１００５—１４５７（２０１２）０１—８５—０２
目前，人们对于胰腺内脉管系构筑特点，有多种
（２）冷冻切片机冷冻室平衡１０ ｍｉｎ；
观察方法。本文以大鼠胰腺组织为例，介绍一种利 （３）连续切片，片厚７ ｍ，贴于ＡＰＥＳ防脱片处
用酶组织化学双重染色法制备组织切片，从而对大
理的载玻片上，切片室温干燥１０ ｍｉｎ；
鼠胰腺组织中血管和淋巴管进行光镜下形态学观察 （４）预冷４％多聚甲醛（二甲砷酸缓冲液配制，
的方法。
ｐＨ ７．４），固定２０ ｍｉｎ后，相邻的组织切片，进行５，－
１材料与方法
核苷酸酶和碱性磷酸酶（５ 一Ｎａｓｅ～ＡＬＰａｓｅ）酶组织化
学双重染色。
１．１ 材料
１．２．２ ５，＿核苷酸酶一碱性磷酸酶（５ ｒ＿Ｎａｓｅ—ＡＬＰａｓｅ）
１．１．１ 实验动物 选用健康成年雄性ＳＤ大鼠，体
酶组织化学双重染色方法
重２５０￣３００ ｇ。
（１）孵育液配制
１．１．２取材所用实验动物，均采用腹腔注射２
５＇－核苷酸酶（５＇－ｎｕｃｌｅｏｔｉｄａｓｅ，５＇－Ｎａｓｅ）反应孵
戊巴比妥钠溶液（３Ｏ～３５ ｍｇ／ｋｇ）麻醉，开腹切取整
育液配制（５０ ｍｔ反应液包含）：０．２ Ｍ Ｔｒｉｓ—Ｍａｌｅａｔｅ
个胰腺，迅速在预冷的生理盐水中清洗。用锡纸包
ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ７．２）２０ ｍｌ；Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ５ 一Ｍｏｎｐｈｏｓｐｈａｔｅ
裹，放置于液氮内速冻３０ ｍｉｎ后，移置一８０℃超低温
２５ ｍｇ；０．１ Ｍ ＭｇＳＯ４ ５ ｍｌ；蔗糖３ ｇ；蒸馏水２２ ｍｌ；
冰箱内保存备用。
２ 硝酸铅３ ｍｌ；Ｌ－Ｔｅｔｒａｍｉｚｏｌｅ ２Ｏ ｍｇ；
１．１．３主要试剂
碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＬＰａｓｅ）反
Ｍａｌｅａｔｅ ａｃｉｄ、Ｌ—Ｔｅｔｒａｍｉｚｏｌｅ、Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ５ 一
应孵育液配制（４２ ｍｌ反应液包含）：Ａ液：０．１ Ｍ
ｍｏｎｐｈｏｓｐｈａｔｅ、Ｆａｓｔ ｂｌｕｅ ＢＢ、Ｎａｐｈｔｏｌ ＡＳ—ＭＸ
Ｔｒｉｓ—ＨＣ１ ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ ８．５）４０ ｍｌ；Ｆａｓｔ ｂｌｕｅ ＢＢ ４０
ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、Ｎ，Ｎ—ｄｉｍｅｔｈｙｆｏｒｍａｍｉｄｅ、二甲砷酸、硫
ｍｇ；Ｂ液：Ｎ，Ｎ－ｄｉｍｅｔｈｙｆｏｒｍａｍｉｄｅ ２ ｍｌ；Ｎａｐｈｔｏｌ
化氨、水溶性封片剂ＧＶＡ、ＯＣＴ
ＡＳ－ＭＸ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ４０ ｍｇ；使用前，Ａ液与Ｂ液混合
１．１．４主要仪器
后过滤，取过滤液。
液氮罐、超低温冰箱、冷冻切片机、恒温水浴箱、
（２）取与普通ＨＥ染色切片相邻的切片经预冷
光学显微镜、超薄切片机、电子分析天平
４ 多聚甲醛（二甲砷酸缓冲液配制，ｐＨ ７．４）固定
１．２方法
２Ｏ ｍｉｎ后，用蒸馏水清洗５ ｍｉｎ，３次；
１．２．１ 冷冻切片样品制备
（３）５ＣＮａｓｅ反应液孵育，３７℃水浴，２ ｈ；
（１）从超低温冰箱取出胰腺新鲜组织标本，ＯＣＴ
（４）蒸馏水清洗５ ｍｉｎ，３次；
包埋；
（５）０．６ 硫化氨显色１ ｍｉｎ；
（６）蒸馏水清洗５ ｍｉｎ，３次；
作者简介：郭海１￣（１９７０一），河南林州人，河南护理职业学院解剖学讲
（７）ＡＬＰａｓｅ反应液孵育，室温，３０ ｍｉｎ；
师，解剖学硕士，通讯地址：河南省安阳市盘庚街６７号学生处，邮编：
（８）双蒸水清洗５ ｍｉｎ，３次；
４５５０００。
（９）水溶性封片剂ＧＶＡ封片；