2024年5月26日发(作者：鄞思洁)
饲料中维生素
A
和维生素
E
含量的
测定
1-
原理 将具有代表性
的样品皂化井用己烷抽提后，用
HPLC
分析。维生素
E
在
292nm
测
定，维生素
A
在
325nm
测定
2-
安全措施 全部过程中
必须戴护目镜 特别应注意
:
-
溶剂的挥发性气体，应在通风橱内工作
-
具腐蚀性的试剂，例如强
酸和强碱
3-
试剂 全部使用分析
纯试剂
;
水必须是蒸馏水或相当品质
3.1-
氮气
3.2-
粒状氢氧化钾
3.2.1 -50%（
质量
/
质量
）
氢氧化钾水溶液
3.3-
乙醇
3.4-
己烷
3.5-
硫酸，密度
=1.83
3.5.1 -80%（
质量
/
质量
）
硫酸溶液
3.6-
无水硫酸钠
3.7-
碳酸氢钠
3.7.1 -5%
碳酸氢钠水溶液
3.8-
3.9-
HPLC
级己烷
HPLC
级
2-
丙醇
3.10-
全反式维生素
A
标准物
3.1l-
维生素
E
醇类
（a-
生育酚
）
标准物，例如，
FLUKA
公司标准 物
.95 240
4-
仪器
-
可在
325nm
处测定的紫外分光光度汁
-
常规实验室玻璃器皿和用具
-
专用特制玻璃器皿
（
附图
-HPLC
，装备有泵，自动取样器，进样器和能在
325nm
处进行检测的
检测系统
-
旋转蒸发仪
-
水浴锅
5-
步骤 注意
:
不能在
自然光，荧光或氖灯下操作，而且要隔绝与空气的接触
（
抽提是在
充氮条件下进行，玻璃器皿为可吸收紫外线的棕色器皿，照明 为白
炽灯，或在窗户上装备了紫外滤光屏卜
5.1-
制备溶液
5.1.1 -
维生素
A
醇标准液
-
精确地
（
土
0.01
毫克
）
称取约含有
25
，侧灿的维生素
A
乙酸酷
（3.10） -
将维生素
A
乙酸酷转移至
1
叨毫升的沸腾管
（
见附图
1）
中
;
-
加入
25
毫升乙醇
(3.3)
和
3
毫升氢氧化钾溶液
(3.2.1); -
在沸腾管
「加上冷凝管，在水浴锅上沸腾叨分钟
10-15 IU/
毫升
;
;
-
冷却，用己烷
(3.4)
抽提数次
.
用己烷
(3.4)
稀释，使最终浓度达
-
准确测定该溶液所含有的视黄醇浓度，测定方法是用光径为
1
厘
米的
石英比色怀测定此溶液在
325
皿处的光吸收值
(A)
，用已烷
(3.
·
4)
作 空白对照
:
用公式计算
:
含量
C(m/
毫升卜
Axl8
·
3
5.1.2 -
维生索
E
醇标准物溶液
-
精确地称取
25
毫克
=0
，
01
毫克的维生素
E
醇
(3.11
放入
50
毫开容
量瓶
;
-
用已烷
(3.4)
定容至刻度
;
-
用取液器取该溶液
5
毫升，放入另一个
50
毫升容量瓶中
-
用已烷
(3.4)
定容至刻度
;
5.1.3 -
待测样品液
-
溶液
A
和溶液
E -
称取研磨的极细的样品
200
克
+-0.1
克，放人
2
升的容量瓶中
;
-
加入
1
升乙醇
(3.3)
和
100
毫升氢氧化钾溶液
(3.2.1); -
把容量瓶称
重
;
-
记录质量
M1 ;
-
摇动
;
-
在容量瓶「加上水流冷凝管
.
将其放在容量瓶加热器上加热，煮沸
25
分钟
;
-
用水流冷却至溶液平静为止
;
-
加入乙醇
(3.3)
使其质量重新达到
MI -
取上清液
50
毫升放人沸腾管
(
附图
1)
中
;
-
加入
40
毫升水月
4x30
毫升已烷
(3.4)
抽提
;
-
将抽提物放人分液漏
-
斗，用
2x100
毫升冰洗涤至中性
; -
在无水硫
酸钠
(3.6)
上过滤
-
蒸发毛干燥，迅速溶解于
25
毫开己烷
;
-
取
5
毫升该溶液用于维生素
A
的测定
:
该溶液为溶液
A.
-
在剩下的
20
毫升溶液中加入
20
毫升已烷，转移至
100
毫升沸腾管
中
; -
加入
10
毫升
80%
硫酸溶液
(3.5.1);
-
振荡完全
;
-
待溶液完全静止后，将巳烷层转移至分液漏斗
;
-
用
4x30
毫升巳烷
(3.4)
抽提硫酸层
-
把所有己烷抽提液放人分液漏斗中·用
5
毫升无水碳酸氧钠溶液
(3.7.1)
冲洗，然后用
2x200
毫升水冲洗直至中性
;
-
在无水硫酸钠上过滤
;
-
蒸发至干燥，然后迅速用准确容量的己烷
(Ve)
溶解
(
记录
Ve)
使最
终维 生素
E
醇类的浓度约为
0.05
毫克
/
毫升
:
该溶液为溶液
E. 5.2-
色谱分析
-
维生素
A
-
按附图
2
所示加入标准液
（5.1.1）
不溶液
A. -
维生素
E
-
按附图
2
所述注入标准液
A（5.1.2）
和溶液
E
6-
计算结果
维生素
A（IU/
克
）
变量
:
C=
标准液
（5
·
1
·
1）
的浓度含量，弟位为因际单位
IU
叨
/
毫开
Ar（
反式
）=
朋标准液
（5
·
1
·
1）
所得到的全反式视黄醇的蜂的面
积
Ae（
反式
）=
溶液
A
所得到的反式视黄醇的峰的面积
Ae（
顺式
）=
溶液
A
所得到的顺式视黄醇的峰的面积
Ve =
待测液的最终体积
25
毫升
）
Me =
样品的质量，单位为克
1.087 =13-
顺式视黄醇的响应参数
1100 =
皂化反应中的总体积
50 =
抽提所用的体积
C[Ae（
反式
）+1.087xAe（
顺式
）lx Ve
x1100
维生素
A
含量
（IU/
克
） =
Ar（
反式
）x 50 xMe
维生素
E
乙酸醋
（
毫
/
肘克
）
变量
:
P=
维生素
E
醇类标准液
（3.11）
的浓度含量
Mr （
反式
）
二溶液
（5.1.2）
中所含的维生素邱 享类标准物的质量，
单位为毫克
Ae =
待测溶液
E
所得到的维生素
E
的峰的面积
Ve =
侍测溶液酣 勺最终体积
Vr =
际准液
（5
·
1
·
2）
的最终体积
（
通常为
5
叨毫升
）
Ar=
用际准液
（5
·
1
·
2）
所得到的维生素
E
醇类物的峰的面积
Me=
样品的质最，兑位为克
1100 =
皂化反应中的总体积
50 =
抽提所用的体积
1.25 =
纯化之前的体积与硫酸抽提体积之比，本文中应为
25:20
□·
25
1.1 =
分子最的校正系数
（
维生素
E
乙酸酯
/
维生素
E
醇类
）
P x Mr x Ae x Ve x 1100 x 1 25 x 1.1
·
维生素
E
含最
（
毫克
/
克
）
Vr x Ar x Me x 50
2024年5月26日发(作者：鄞思洁)
饲料中维生素
A
和维生素
E
含量的
测定
1-
原理 将具有代表性
的样品皂化井用己烷抽提后，用
HPLC
分析。维生素
E
在
292nm
测
定，维生素
A
在
325nm
测定
2-
安全措施 全部过程中
必须戴护目镜 特别应注意
:
-
溶剂的挥发性气体，应在通风橱内工作
-
具腐蚀性的试剂，例如强
酸和强碱
3-
试剂 全部使用分析
纯试剂
;
水必须是蒸馏水或相当品质
3.1-
氮气
3.2-
粒状氢氧化钾
3.2.1 -50%（
质量
/
质量
）
氢氧化钾水溶液
3.3-
乙醇
3.4-
己烷
3.5-
硫酸，密度
=1.83
3.5.1 -80%（
质量
/
质量
）
硫酸溶液
3.6-
无水硫酸钠
3.7-
碳酸氢钠
3.7.1 -5%
碳酸氢钠水溶液
3.8-
3.9-
HPLC
级己烷
HPLC
级
2-
丙醇
3.10-
全反式维生素
A
标准物
3.1l-
维生素
E
醇类
（a-
生育酚
）
标准物，例如，
FLUKA
公司标准 物
.95 240
4-
仪器
-
可在
325nm
处测定的紫外分光光度汁
-
常规实验室玻璃器皿和用具
-
专用特制玻璃器皿
（
附图
-HPLC
，装备有泵，自动取样器，进样器和能在
325nm
处进行检测的
检测系统
-
旋转蒸发仪
-
水浴锅
5-
步骤 注意
:
不能在
自然光，荧光或氖灯下操作，而且要隔绝与空气的接触
（
抽提是在
充氮条件下进行，玻璃器皿为可吸收紫外线的棕色器皿，照明 为白
炽灯，或在窗户上装备了紫外滤光屏卜
5.1-
制备溶液
5.1.1 -
维生素
A
醇标准液
-
精确地
（
土
0.01
毫克
）
称取约含有
25
，侧灿的维生素
A
乙酸酷
（3.10） -
将维生素
A
乙酸酷转移至
1
叨毫升的沸腾管
（
见附图
1）
中
;
-
加入
25
毫升乙醇
(3.3)
和
3
毫升氢氧化钾溶液
(3.2.1); -
在沸腾管
「加上冷凝管，在水浴锅上沸腾叨分钟
10-15 IU/
毫升
;
;
-
冷却，用己烷
(3.4)
抽提数次
.
用己烷
(3.4)
稀释，使最终浓度达
-
准确测定该溶液所含有的视黄醇浓度，测定方法是用光径为
1
厘
米的
石英比色怀测定此溶液在
325
皿处的光吸收值
(A)
，用已烷
(3.
·
4)
作 空白对照
:
用公式计算
:
含量
C(m/
毫升卜
Axl8
·
3
5.1.2 -
维生索
E
醇标准物溶液
-
精确地称取
25
毫克
=0
，
01
毫克的维生素
E
醇
(3.11
放入
50
毫开容
量瓶
;
-
用已烷
(3.4)
定容至刻度
;
-
用取液器取该溶液
5
毫升，放入另一个
50
毫升容量瓶中
-
用已烷
(3.4)
定容至刻度
;
5.1.3 -
待测样品液
-
溶液
A
和溶液
E -
称取研磨的极细的样品
200
克
+-0.1
克，放人
2
升的容量瓶中
;
-
加入
1
升乙醇
(3.3)
和
100
毫升氢氧化钾溶液
(3.2.1); -
把容量瓶称
重
;
-
记录质量
M1 ;
-
摇动
;
-
在容量瓶「加上水流冷凝管
.
将其放在容量瓶加热器上加热，煮沸
25
分钟
;
-
用水流冷却至溶液平静为止
;
-
加入乙醇
(3.3)
使其质量重新达到
MI -
取上清液
50
毫升放人沸腾管
(
附图
1)
中
;
-
加入
40
毫升水月
4x30
毫升已烷
(3.4)
抽提
;
-
将抽提物放人分液漏
-
斗，用
2x100
毫升冰洗涤至中性
; -
在无水硫
酸钠
(3.6)
上过滤
-
蒸发毛干燥，迅速溶解于
25
毫开己烷
;
-
取
5
毫升该溶液用于维生素
A
的测定
:
该溶液为溶液
A.
-
在剩下的
20
毫升溶液中加入
20
毫升已烷，转移至
100
毫升沸腾管
中
; -
加入
10
毫升
80%
硫酸溶液
(3.5.1);
-
振荡完全
;
-
待溶液完全静止后，将巳烷层转移至分液漏斗
;
-
用
4x30
毫升巳烷
(3.4)
抽提硫酸层
-
把所有己烷抽提液放人分液漏斗中·用
5
毫升无水碳酸氧钠溶液
(3.7.1)
冲洗，然后用
2x200
毫升水冲洗直至中性
;
-
在无水硫酸钠上过滤
;
-
蒸发至干燥，然后迅速用准确容量的己烷
(Ve)
溶解
(
记录
Ve)
使最
终维 生素
E
醇类的浓度约为
0.05
毫克
/
毫升
:
该溶液为溶液
E. 5.2-
色谱分析
-
维生素
A
-
按附图
2
所示加入标准液
（5.1.1）
不溶液
A. -
维生素
E
-
按附图
2
所述注入标准液
A（5.1.2）
和溶液
E
6-
计算结果
维生素
A（IU/
克
）
变量
:
C=
标准液
（5
·
1
·
1）
的浓度含量，弟位为因际单位
IU
叨
/
毫开
Ar（
反式
）=
朋标准液
（5
·
1
·
1）
所得到的全反式视黄醇的蜂的面
积
Ae（
反式
）=
溶液
A
所得到的反式视黄醇的峰的面积
Ae（
顺式
）=
溶液
A
所得到的顺式视黄醇的峰的面积
Ve =
待测液的最终体积
25
毫升
）
Me =
样品的质量，单位为克
1.087 =13-
顺式视黄醇的响应参数
1100 =
皂化反应中的总体积
50 =
抽提所用的体积
C[Ae（
反式
）+1.087xAe（
顺式
）lx Ve
x1100
维生素
A
含量
（IU/
克
） =
Ar（
反式
）x 50 xMe
维生素
E
乙酸醋
（
毫
/
肘克
）
变量
:
P=
维生素
E
醇类标准液
（3.11）
的浓度含量
Mr （
反式
）
二溶液
（5.1.2）
中所含的维生素邱 享类标准物的质量，
单位为毫克
Ae =
待测溶液
E
所得到的维生素
E
的峰的面积
Ve =
侍测溶液酣 勺最终体积
Vr =
际准液
（5
·
1
·
2）
的最终体积
（
通常为
5
叨毫升
）
Ar=
用际准液
（5
·
1
·
2）
所得到的维生素
E
醇类物的峰的面积
Me=
样品的质最，兑位为克
1100 =
皂化反应中的总体积
50 =
抽提所用的体积
1.25 =
纯化之前的体积与硫酸抽提体积之比，本文中应为
25:20
□·
25
1.1 =
分子最的校正系数
（
维生素
E
乙酸酯
/
维生素
E
醇类
）
P x Mr x Ae x Ve x 1100 x 1 25 x 1.1
·
维生素
E
含最
（
毫克
/
克
）
Vr x Ar x Me x 50