2024年10月7日发(作者：屠谷兰)
・
ｌ３６
中国免疫学杂志２０１０年第２６卷
・
遗传免疫学・
湖南地区强直性脊柱炎患者中ＴＮＦ．Ｉ）‘．２３８位点的多态性研究
王敏杜世杰①李先平
Ｒ３９２．１１
彭文峰②曹
文献标识码
虹
Ａ
陈进伟②（中南大学湘雅二医院检验科，长沙４１００１１）
文章编号１０００．４８４Ｘ（２０１０）０２－０１３６－０６ 中国图书分类号
［摘要］ 目的：通过分析湖南地区强直性脊柱炎汉族患者ＤＮＡ中ＴＮＦ＿ａ－２３８位点的多态性，研究湖南地区汉族人群中
Ｆ＿ａ．２３８位点基因多态性与强直性脊柱炎发病的相关性。方法：应用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性法（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）
对患者和正常人ＤＮＡ中ＴＮＦ－ａ－２３８位点进行基因分型检测，采用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测１００例强直性脊柱炎患者和９ｏ
例正常人血清中ＴＮＦ－ａ的水平，｝Ⅱｌ｜Ａ—Ｂ２７分型采用流式细胞仪检测。用统计学方法分析两组中基因型、等位基因频率、ＴＮＦ－ａ
水平、ＨＪ 一１３２７阳性率及其组问差异。结果：１００例患者中ＴＮＦ－￣－２３８位点Ｇ／Ｇ基因型９５例（９５％），Ｇ／Ａ基因型５例（５％），９０
例正常人中ＴＮＦ－ａ－２３８位点Ｇ／Ｇ基因型８８例（９７．８％），Ｇ／Ａ基因型２例（２．２％）。ＡＳ组的ＴＮＦ－ａ一２３８位点Ｇ频率（９７．５％）低于
正常对照组（９８．９％），Ａ频率（２．５％）高于对照组（１．１％）；两组均未发现Ａ／Ａ基因型；ＡＳ组患者血清中 Ⅱ的平均水平比正
常人明显增高［（１０．１６ ４－１．１９）ｐｇ／ｍｌ ｖｓ．（５．６４±１．１８）ｐｇ／ｍ１］，且Ｇ／Ａ基因型患者血清中ＴＮＦ－ａ的平均水平比Ｇ／Ｇ基因型患者
高［（１３．４９±１．２７）ｐｇ／ｍｌ ｖｓ．（９．４４ ４－１．２９ ｐｇ／ｍ１）］；ＨＬＡ－Ｂ２７阳性率在湖南地区ＡＳ组和正常对照组中的分布差异极其显著（ ＝
１１４．９７５，Ｐ＝０．０００）。对ＨＬＡ－Ｂ２７和ＴＮＦ－ａ－２３８两位点的基因分析表明，与单独ＨＩＡ—Ｂ２７阳性比较，ＴＮＦ－ａ－２３８位点基因型为
Ｇ／Ｇ时比数比（ＯＲ值）明显增加。结论：湖南地区汉族人群中ＴＮＦ－ａ－２３８位点多态性与强直性脊柱炎发病可能没有相关性，但
基因型为Ｇ／Ｇ时Ａｓ的患病风险可能增高。
［关键词］强直性脊柱炎；肿瘤坏死因子；基因多态性；相关性
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｏｆ ＴＮＦ－．］‘－２３８ ｉｎ Ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ Ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ（ＡＳ）ｐａ－
ｔｉｅｎｔｓ ｉｎ Ｈｕｎａｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ
ＷＡＮＧ Ｍｉｎ，ＤＵ Ｓｈｉ－Ｊｉｅ，ＬＩ Ｘｉａｎ—Ｐ ，ＰＥＮＧ Ｗｅｎ一 ，ｌｇ，ＣＡＯ舶，２ｇ，ＣＨＥＮ Ｊｉｎ一耽 ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏ—
ｒ），， Ｓｅｃｏｎｄ Ｘｉａｎｇｙａ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｆ ｏＣｅｎｔｒａｌ Ｓｏｕｔｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ ４１００１ｌ，Ｃｈｉｎａ
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＴＮＦ－ｃｔ－２３８ ｓｉｔｅ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｏｎｓｅｔ ｏｆ Ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ Ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ（ＡＳ）ｉｎ
Ｈｕｎａｎ Ｈａｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：１００ ＡＳ ｓａｍｐｌｅｓ（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｗｈｏｌｅ ｂｌｏｏｄ）ｗｅｒｅ ｅｏＨｅｅｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ｎｄ ａ
Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｅｃｏｎｄ Ｘｉａｎｇｙａ ｈｏｓｐｉｔａｌ ｆｒｏｍ Ｍａｙ ２００８ ｔｏ Ｊａｎ ２００９ ａｎｄ ９０ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ｐｅｏｐｌｅ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ａｓ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．Ｗｅ
ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｔｈｅ ＴＮＦ－ａ－２３８ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｏｆ ｈｅｔｓｅ ｓｕｂｊｅｃ￣ｂｙ ｕｓｉｎｇ ＰＣＲ－ＲＦＬＰ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｔｈｅ ＴＮＦ－ａ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｌＭｌｎ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｍｅａ—
ｓｕｒｅｄ ｂｙ ＥＬＩＳＡ ａｎｄ ＨＬＡ—Ｂ２７ ａｎｔｉｇｅｎ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｆｌｏｗ ｅｙｔｏｍｅｔｒｙ（ＦＣＭ）．Ｔｈｅｎ ａｌｌ ｏｆ ｔｈｅ ｄａｔａ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＳＰＳＳ１３．０ ｓｏｆｔｗａｒｅ．Ｒｅ－
ｓｕｉｔｓ：Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ９５ ｅａｓｅｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＴＮＦ－ａ－２３８ Ｇ／Ｇ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｉｎ １００ ＡＳ ｐａｔｉｅｎｔｓ，５ ｅａｓｅｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｇ／Ａ ｇｅｎｏｔｙｐｅ．Ｗｈｉｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，
ＴＮＦ－￣一２３８ Ｇ／Ｇ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ａｎｄ Ｇ／Ａ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｗｅＩ－ｅ ８８ ｅａｓｅｓ ａｎｄ ２ ｅａｓｅｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｒＮＦ．Ｑ一２３８ Ａ／Ａ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｉｎ ｂｏｔｈ ｇｒｏｕｐｓ．
ｈｅＴ ｌａｌｅｌｅ ｆｒｅｕｅｎｃｉｑｅｓ ｏｆ Ｇ ｉｎ Ｓ Ａｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（９８．９％ｖｓ．９７．５％），ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ａｌｌｅｌｅ ｆｒｅｕｅｎｃｉｑｅｓ ｏｆ Ａ ｉｎ ＡＳ
ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｌｏｗｅｒ ｈｔｎ ａｉｎ ｈｔｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（１．１％ｖｓ．２．５％）．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｈｅｒｔｅ ｗｅｒｅ ｎｏ ｓｉｇｎｉｉｆｃｎｔａ ｉｄｆｅｒｅｎｃｅ ｏｔｂｈ Ａ ａｌｌｅｌｅ ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ ｎｄ ａＧ ｌ—ａ
ｌｅｌｅ ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ（Ｐ＞０．０５）．Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ，ｈｔｅ ａｖｅｒａｇｅＴＮＦ－ｃｔｌｅｖｅｌｉｎＡＳ ｇｒｏｕｐｗａｓ ｈｉｈｅｇｒｔｈａｎｉｎｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ（１０．１６４－１．１９
ｒｅｃ＇ｎ￣ｖｓ．５．４４６－１．１８ ｐｇ，／ｍ１）．Ａｎｄ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ忡ａ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ＡＳ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｏｆ Ｇ／Ａ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｇ／Ｇ
ｇｅｎｏｔｙｐｅ（１３．４９ ４－１．２７ ｐｇ／ｍｌ ｖｓ．９．４４４－１．２９ ｐｇ／ｍ１）．Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ａ ｖｅｒｙ ｌａｒｇｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆｔｈｅ ｐｏｓｉｉｔｖｅ ｒａｔｉｏ ｏｆＨＬＡ・Ｂ２７ ｂｅｔｗｅｅｎ ｗｏ ｇｒｔｏｕｐｓ
（ １１４．９７５，Ｐ＝０．０００）．Ａｆｔｅｒ ｇｅｎｅ ｎａａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＨＩＪＡ＿Ｂ２７ａｎｄ ＴＮＦ－ａ－２３８，ｔｈｅ ｏｄｄｓ ｒａｔｉｏ（ＯＲ）ｗａｓ ｈｉｈｅｒｇ ｉｎ ｏｔｂｈ Ｇ／Ｇ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ａｎｄ ｍＡ－
Ｂ２７ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｔｈａｎ ＨＩＡ—Ｂ２７ ｌｏｎｅｌｙ．Ｃｏｎｄｕｓｌｏｎ：Ｔｈｅｒｅ ｉｓ ｐｒｏｂａｂｌｙ ｎｏ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｏｆ ＴＮＦ－ｃｔ一２３８ ｓｉｔｅ ａｎｄ ｔｈｅ
ｏｎｓｅｔ ｏｆ ＡＳ ｂｕｔ ｔｈｅ Ｇ／Ｇ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｏｆ ＴＮＦ－ａ一２３８ ｍａｙ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｓｉｃｋｅｎ ｒｉｓｋ ｏｆ ＡＳ ｉｎ Ｈｕｎａｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．
［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ Ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ；ＴＮＦ；Ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ；Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ
①中南大学湘雅医学院医学检验系２０Ｏ４级，长沙４１００１３
②中南大学湘雅二医院风湿免疫科，长沙４１００１ １
作者简介：王敏（１９７６年一），女，博士，主管检验师，主要从事微生物学和免疫学研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｍｉｎ００００＠ｙａｈｏｏ．ＣＯＢ．ｃｎ；
通讯作者及指导教师：陈进伟（１９５４年一），女，主任医师，教授，主要从事风湿性疾病多药耐药及其逆转机制的研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｍｌｉ２００７＠ｙａｈｏｏ．ｃｎ。
王敏等 湖南地区强ｆ［性脊柱炎患者中ＴＮＦ１０－２３８化点的多态性研究第２期
强直性脊柱炎（ＡＳ）是一种慢性全身性、进行
性的自身免疫性疾病，主要侵犯中轴骨骼，以骶髂关
节炎为标志，儿乎全部累及骶髂关节、肋椎关节、脊
柱关节及周嘲组织，多以腰骶部不适为首发症状，晚
异。研究对象的基本实验室检查情况见表１。
１．１．２ 主要仪器和试剂 外周血ＤＮＡ提取试剂
盒、２×Ｔａｑ ＰＣＲ ＭａｓｔｅｒＭｉｘ、ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ Ｉ均为北京天
根生化科技有限公司产品；ＥＢ替代品染料为Ｇｏｌｄ
期可因椎间盘纤维环钙化、骨性融合及其附近韧带
钙化形成脊柱强直。Ａｓ的发病易感因素主要有遗
ｖｉｅｗ核酸染料；ＭｓｐＩ（Ｈｐａ １Ｉ）（１０ ｕ／ １）购自ＭＢＩ Ｆｅｒ—
ｍｅｎｔａｓ公司；人ＴＮＦ—ａ ＥＬＩＳＡ检测试剂盒购自武汉博
士德生物工程有限公司；ＰＣＲ扩增仪、电泳仪均为德
国Ｂｉｏｍｅｔｒａ公司产品；凝胶成像系统为美国伯乐公
司产品。
传和环境两大因素，以遗传因素为主。近年利用基
因多态性对ＡＳ的发病候选基因进行研究已经成为
最有前景的分子遗传学研究方法＿１， 。
全基因扫描、连锁和关联分析结果提示ＨＬＡ基
因区是ＡＳ的主要遗传易感位点，其中ＨＬＡ—Ｂ２７基
因与ＡＳ强相关，越来越多的研究提示除ＨＬＡ—Ｂ２７
１．２方法
１．２．１人外周血白细胞ＤＮＡ的提取将所收集的
血标本室温冻融，然后按照北京天根生化科技有限
公司提供的外周血ＤＮＡ提取试剂盒操作说明书进
行ＤＮＡ的提取。
以外，在ＨＬＡ区内外均存在其它ＡＳ的易感基因，而
ＴＮＦ—ａ的基因多态性是目前公认的ＡＳ发病中的重
要致炎因子 ｊ，该区域有众多位点存在单核苷酸多
态性，其中多数为Ｇ—Ａ的变化，研究最多的是一３０８
１．２．２引物设计根据ＧｅｎｅＢａｎｋ公布的ＴＮＦ—ａ的
序列（Ｍ１６４４１），参照文献［６］于上海生工生物技术有
限服务公司合成一对引物，其特性见表２。
１．２．３ ＰＣＲ反应体系和条件取ＤＮＡ模板１ Ｖ１，依
次加入２×Ｔａｑ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ １０ ｔｄ，１０ ｔｍａｏｌ／Ｌ的
位点，其它位点如一２３８、一８５０、一８６３报道较少ｌ４ Ｊ。因此
本研究应用ＰＣＲ—ＲＦＬＰ方法分析湖南地区汉族人群
中ＡＳ患者与正常人群在ＴＮＦ—ａ一２３８位点的多态性，
探讨湖南地区汉族人群巾ＴＮＦ廿２３８基因位点的多
态性与ＡＳ易感相关性。
上、下游引物各１ ｌ，灭菌ｄｄＨ２Ｏ补齐至２０ ｌ。按下
列程序进行扩增循环：首先９４℃４分钟预变性，然
后９４℃变性３Ｏ秒，５５ｃｃ退火３０秒，７２￣Ｃ延伸３０秒，
共３０个循环，最后７２￣Ｃ延伸１０分钟。
１材料与方法
１．１材料
１．２．４琼脂糖凝胶电泳分析
Ａｓ组：符合１９８４年纽约
取酶切产物５ ，分别
１．１．１研究对象与分组
与６×Ｌｏａｄｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ １ 充分混匀后点样于样品孑Ｌ
内，并以５ ｌ小分子量ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ Ｉ为参照。１４０ Ｖ
电泳２０分钟后，在凝胶成像仪中观察结果并照相。
１．２．５ ＰＣＲ产物酶切及聚丙烯酰胺凝胶电泳分析
取ＰＣＲ产物１５ ｌ，ＭｓｐＩ １ Ｖ１，１０×Ｂｕｆｉｅｒ ２ ｔｄ，０．１％
修订标准确诊的ＡＳ患者共１００例＿５ ，均选自２００８
年５月～２００９年１月在中南大学湘雅二医院风湿免
疫科门诊或住院的湖南地区汉］ｊｊ、、 患者，其中男
性８３例，平均年龄（２７．６８±９．９８）岁；女性ｌ７例，平
均年龄（２７．１２±９．６９）岁。排除标准：在入选前３个
月内有服用激素及其他免疫抑制药物治疗史；合并
有心血管疾病、脑血管疾病；有血栓、栓塞性疾病病
史；糖尿病；病毒性肝炎，肝硬化，严重肝肾功能不
全；严重营养不良；甲状腺疾病；妊娠；接受器官移植
等疾患者以及活动性结核病。
对照组：共９０例，均为中南大学湘雅二医院门
诊体检的健康汉族人。其中男性７２例， 均年龄
（３０．２４±４．５２）岁；女性１８例，平均年龄（３２．０３±５．４５）
岁。对照纰和ＡＳ组在性别、年龄分布 无统计学差
表２ ＰＣＲ引物序列及其限制・性内切酶
Ｔａｂ．２ Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ａｎｄ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｓ
ＢＳＡ ２ ｌ，加无菌ｄｄＨ２０至２０ ｌ，３７￣Ｃ水浴消化ｌ４小
时后加１０×Ｌｏａｄｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ ２ ｌ终止酶切反应。酶切
产物非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）：以１×ＴＢＥ
表１研究对象的基本情况
Ｔａｂ．１ Ｂａｓｅｌｉｎｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｏｆ ｔｈｅ ＡＳ ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｎｄ
ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ
为电解缓冲液，每管酶切产物取５ ｌ，分别与１０×
Ｌｏａｄｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ １／ｚｌ充分混匀后点样于样品孑Ｌ内，并
以６ １小分子量２０ ｂｐ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ为参照。电压设
为８ Ｖ／ｃｍ，约３小时以后终止电泳。将胶剥离行硝
酸银染色。
１．２．６验证性测序取ＰＣＲ产物送上海生工生物
技术有限公司测序部。在ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ３７３０全自动测
序仪测序。用ＮＣＢＩ上的ＢＬＡＳＴ分析将测序结果与
ＧｅｎｅＢａｎｋ中的Ｍ１６４４１的相应等位基因核苷酸序列
比较。
１．２．７ ＥＬＩＳＡ测定研究对象血清中ＴＮＦ ｏ＝水平取
不同稀释度的标准品（１ ０００、５００、２５０、１２５、６２．５、
３１．３、１５．６ ｐｇ／ｍ１）和样本各１００ ｔｔｌ加入酶标孑Ｌ，３７￣Ｃ
温育９０分钟，加入１：１００稀释的生物素抗人 ｒＮＦ—ａ
抗体，３７℃６０分钟后用０．０１ ｍｏｌ／Ｌ ＰＢＳ洗涤３次。
再加入ＨＲＰ标记的亲和素３７￣Ｃ反应３Ｏ分钟，四甲
基联苯胺显色系统（１１ＩⅥＢ）显色，以４５０Ⅲｎ为测量波
长，６２０ ｎ／ｎ为参考波长判读各孔的ＯＤ值，并计算各
检测样本ＴＮＦ．ａ的浓度。
１．２．８ ＨＩＡ．Ｂ２７位点的检测采用美国ＢＤ公司生
产的ＦＡＣＳ ｃａｌｉｂｕｒ流式细胞仪及ＨＬＡ．Ｂ２７配套试剂
盒，采用流式细胞仪常规检测方法，自动分析获取结
果，ＨＩＪＡ—Ｂ２７＋／ＨＬＡ．Ｂ２７．表达率大于９０％判定为阳
性，其余为阴性。
１．２．９统计学处理所有的数据均用ＳＰＳＳ１３．０统
计软件包进行处理分析。等位基因、基因型频率采
用直接计数法；等位基因、基因频率比较、ＨＬＡ—Ｂ２７
阳性率比较采用卡方检验，基因型分布进行Ｈａｒｄｙ．
Ｗｅｉｎｂｅｒｇ（Ｈ．ｗ）遗传平衡检验；计算各等位基因、基
因型的比数比（Ｏｄｄｓ ｒａｔｉｏ，ＯＲ）及双侧９５％的可信区
问（９５％ＣＩ）。ＴＮＦ．ｄ水平用ｙ－±ｓ表示，组问比较采
用ｔ检验。Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。
２结果
２．１扩增产物分析以ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ Ｉ为相对分子
质量标准，取５ ｌ扩增产物点样于２％琼脂糖凝胶，
１４０ Ｖ电泳２０分钟后，凝胶成像仪中观察结果并照
相，见图１，可见ＴＮＦ．ａ．２３８扩增后出现１５２ ｂｐ大小
的ＤＮＡ片段。
２．２ ＰＣＲ．ＲＦＬＰ结果分析ＴＮＦ心２３８ Ｇ／Ｇ纯合子
因含有能被ＭｓｐＩ识别的而完整酶切的序列显示出
两条带（１３２和２０ ｂｐ），ＴＮＦ ２３８ Ｇ／Ａ杂合子显示出
三条带（１３２、２０和１５２ ｂｐ），其序列中有部分不能被
ＭｓｐＩ识别的而酶切，其中２０ ｂｐ因片段较小，在
ＰＡＧＥ上显示不清晰。ＴＮＦ心２３８ Ａ／Ａ纯合子显示
中国免疫学杂志２０１０年第２６卷
出一条带（１５２ ｂｐ），因其序列中不含能被ＭｓｐＩ识别
片段不能酶切，图２。
２．３ Ｆ心２３８ ＰＣＲ—ＲＦＬＰ分型精确性的测序鉴定
结果将扩增的产物送上海生工生物技术有限公司
进行测序，测序结果经与Ｍ１６４４１标准序列进行对
比分析后，证实了ＰＣＲ—ＲＦＬＰ分型的精确性。图３
为经ＰＣＲ．ＲＦＬＰ分型方法分型后，根据酶切结果选
取的部分标本进行的测序验证。
２．４各组ＴＮＦ心２３８位点基因型及等位基因频率
检测结果 １（）（）例Ａｓ患者基因分型结果提示ＴＮＦ．
６００
５００
４００
３００
２００
１Ｏ０
瑚啪 啪啪舳 ∞
图１ ＴＮＦ－￣－２３８扩增产物琼脂糖凝胶电泳分析
Ｆｉｇ．１ Ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＰＣＲ ｆｏｒ忡
２３８
Ｎｏｔｅ：Ｍ．ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ Ｉ：１—９．ＰＣＲ ａｍｐｌｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｏｆＴＮＦ－ａ一２３８．
图２ ＴＮＦ．ｎ．２３８多态位点的ＲＦＬＰ分型结果
Ｆｉｇ．２ Ｅｉｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ＲＦＬＰ－ＰＣＲ ｆｏｒ ＴＮＦ－ｃｔ－２３８
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ
Ｎｏｔｅ：Ｍ．２０ ｂｐ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ；２－４，６，８．Ｇ／Ｇ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ；１，５，７．Ｇ／Ａ ｇｅｎｏ－
ｔｙｐｅｓ．
Ａ
Ｂ
图３ ＴＮＦ－０ｔ．３２８位点ＰＣＲ扩增产物纯化后测序图谱
Ｆｉｇ．３ Ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｍａｐ ｏｆ ＴＮＦ－￣－２３８
Ｎｏｔｅ：Ａ．Ｇ／Ｇ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ；Ｂ．Ｇ／Ａ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ．
王敏等湖南地区强直性脊柱炎患者巾１＇Ｎ ａ一２３８位点的多态性研究第２期
ａ．２３８ Ｇ／Ｇ基因型９５例，Ｇ／Ａ型５例，Ａ／Ａ基因型０
例，９Ｏ例健康对照组ＴＮＦ心２３８ Ｇ／Ｇ基因型８８例，
Ｇ／Ａ型基因２例，Ａ／Ａ基因型０例（表３）。
２．５ Ｈａｒｄｙ—Ｗｅｎｉｂｅｒｇ遗传平衡检验结果 用 检
验法分别将ＡＳ组和正常对照组进行了ＨａＭｙ—ｗｅｉｎ—
ｂｅｒｇ遗传平衡检验，结果显示，两组人群均符合
Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ遗传平衡（ｄｆ＝１，Ｐ＞０．０５），说明这
两个研究人群来自大的群体，不存在明显的自然选
择、迁移等因素对遗传平衡的影响，适合进行群体遗
传学研究，见表４。
２．６ ＡＳ患者与正常对照ＴＮＦ心２３８ Ｇ和Ａ等位基
因及基因型相关性分析 ＡＳ患者与健康对照组
ＴＮＦ心２３８ Ｇ和Ａ等位基因频率比较：ＡＳ组Ａ等位
基因的频率高于正常对照组（２．５％ＶＳ．１．１％），但无
统计学意义。ＡＳ组与对照组ＴＮＦＩａ－２３８ Ｇ／Ｇ和Ｇ／Ａ
基因型频率比较：ＡＳ组Ｇ／Ａ基因型频率同样较对
照组高（５．Ｏ％ＶＳ．２．２％），也无显著差异，见表５。
２．７ ＥＬＩＳＡ法测定血清中ＴＮＦ—Ｑ水平ＡＳ患者的
血清ＴＮＦ—ａ水平显著高于正常对照组［（１０．１６±
１．１９）ｐｇ／ｍｌ ＶＳ．（５．６４±１．１８）ｐｇ／ｍｌ，Ｐ＜０．０５）Ｊ，
ＴＮＦ－ａ一２３８ Ｇ／Ｇ基因型血清ＴＮＦ—ｏ【水平（９．４４±
１．２９）ｐｇ／ｍｌ显著低于Ｇ／Ａ基因型［（１３．４９±１．２７）
ｐｇ／ｍ１］，Ｐ＜０．０５；而对照组Ｇ／Ｇ和Ｇ／Ａ基因型血清
ＴＮＦ—ａ水平无明显差异（表６）。
表３ ＴＮＦ－￣ｔ－２３８基因型及等位基因频率检测结果（％）
Ｔａｂ．３ Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ａｌｌｅｌｅｓ ｉｎ ＴＮＦ－ｃｔ－２３８（％）
表４ ＴＮＦ－ｃｔ－２３８位点Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ遗传平衡检验结果
Ｔａｂ．４ Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ｉｎ ＴＮＦ－￣ｔ－２３８
表５ ＴＮＦ－ｃｔ－２３８等位基因和基因型的分布
Ｔａｂ．５ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓ ａｎｄ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｉｎ ｒｒＮＦ ０ ２３８
ＴＮＦＡｌｌｅｌｅｓ（％） Ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ（％）
ａ－２３８ 。
Ｇ
。‘‘ 。 。。。 。。。。。。。。。。。。。。 。。。。。。。。。。。。。。。——’ ’’ 。’
ｅ，℃
ｅ，ｋ
。 。 。‘——
ＡＳ １９５（９７．５） ５（２．５） ９５（９５） ５（５） ｏ（ｏ）
Ｃｏｎｔｒｏｌ １７８（９８．９） ２（１．１）８８（９７．８） ２（２．２） ｏ（ｏ）
７２＝１
．
０ｌ Ｐ＝０．３２ ７２＝１
０３ Ｐ＝０．３１
．
０Ｒ ０．９８６ ２．２５０ ０．９７ ２．２５
９５％Ｃ１ ０．９６一１．０ｌ３ ０．４４２—１１．４５４ ０．９２—１．∞０．４５～１１．３１
表６ ＡＳ患者和对照组血清１Ｔ ａ水平（ｐｇ／ｍ１）的比较
（ ±Ｓ）
Ｔａｂ．６ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍＴＮＦ－￣ｌｅｖｅｌ（ｐｇ／ｍＩ）ｉｎＡＳ ｐａ・
ｔｉｅｎｔｓ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（ ±ｓ）
Ｎｏｔｅ：１）Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｏｒｌ，ＡＳ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｈａｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｅｌｅｖａｔｅｄ
ｓｅｒｕｍ １＇ＮＦ－Ｑ ｌｅｖｅｌ，ａ ｖａｌｕｅ ｏｆ Ｐ＜０．０５；２）Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ＴＮＦ－ｃｃ一２３８
Ｇ／Ｇ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｉｎ ＡＳ ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｇ／Ａ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｈａｄ ｅｌｅｖａｔｄｅ ｓｅｎｌｎｌ ＴＮＦ－Ｇｔ
ｌｅｖｅ１．ａ ｖａｌｕｅ ｏｆ Ｐ＜０．０５．
表７ ＨＬＡ．Ｂ２７和ＴＮＦ－ｃｔ－２３８两位点之间的基因分析
Ｔａｂ．７ Ｔｈｅ ｇｅｎｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ＨＬＡ－Ｂ２７ ａｎｄ ＴＮＦ－ｃｔ－２３８
２．８ ＨＬＡ—Ｂ２７在湖南地区Ａｓ患者中的分布流式
细胞仪检测ＡＳ患者和随机挑取的３５位正常对照人
ＨＩＡ—Ｂ２７抗原，ＡＳ组中ＨＬＡ—Ｂ２７阳性率为９８％，正
常对照组中ＨＬＡ—Ｂ２７阳性率为５．７１％， 。检验后发
现，ＨＬＡ．Ｂ２７阳性和ＨＬ ．Ｂ２７阴性在湖南地区Ａｓ
组和正常对照组中的分布差异极显著性意义（ ＝
１１４．９７５，Ｐ＝０．０００）。
２．９ ＴＮＦ廿２３８和ＨＬＡ—Ｂ２７的基因分析对ＴＮＦ＿ｄ一
２３８位点的基因型和ＨＩＪＡ．Ｂ２７进行分析，发现与单
独ＨＬＡ．Ｂ２７阳性比较，ＨＬＡ．Ｂ２７阳性同时Ｇ／Ｇ基因
型阳性的ＯＲ值是１．９３９，大于Ｇ／Ａ基因型的ＯＲ值
（０．０６１），表明ＴＮＦ一０：一２３８基因型为Ｇ／Ｇ时ＡＳ的患
病风险可能增高（表７）。
３讨论
ｒＮＦ．ａ主要由活化的单核／巨噬细胞、抗原刺激
的Ｔ细胞、活化的ＮＫ细胞和肥大细胞分泌，在炎症
反应、免疫调节中起重要作用。ＴＮＦ．ａ基因全长约
２ ６７６ ｂｐ，包含４个外显子和３个内含子，位于６号
染色体Ｐ２１区域内，包含于ＨＬＡⅢ基因中。由于
ＴＮＦ—ａ不是预先存在于细胞内，而是细胞在受到刺
激时合成的，因此，基因启动子区域中的单核苷酸多
态性具有重要的意义＿７． 。
ＴＮＦ．ａ基因多态性包括．８６３、．８５７、．３７６、．３０８、
一
２４４、一２３８、一１６３和＋７０等，主要为鸟嘌呤（Ｇ）一腺
嘌呤（Ａ）的变化，其中研究最多的是ＴＮＦ廿２３８ Ｇ／Ａ
及．３０８Ｇ／Ａ位点的基因多态性。研究发现，ＴＮＦ．ａ基
因启动子一３０８位点，处于与转录调控的活化蛋白
ＡＰ－２相结合的共同序列中，而ＴＮＦ．ａ基因启动子．
２３８位点，处于转录调控的Ｙ—ｂｏｘ区。目前，该２个
位点基因多态性已应用于慢性乙肝、类风湿性关节
炎、直肠癌等的研究 。在ＡＳ疾病中，则多见于．
３０８位点的多态性研究¨】 。
本文对湖南地区汉族人群的ＴＮＦ一“一２３８位点的
多态性研究发现，不论是ＡＳ组或正常对照组， ｒＮＦ—
ａ．２３８位点基因型以Ｇ／Ｇ型为主。正常对照组Ｇ／Ｇ
基因型频率为９７．８％，Ｇ／Ａ型频率仅为２．２％。李
永念等 研究贵州三个民族人群中＿ｒＮＦ心２３８位点
基因型，结果ＴＮＦ Ｇ／Ｇ型频率和ＴＮＦ Ｇ／Ａ型频率分
别为：汉族（Ｇ／Ｇ型９６％、Ｇ／Ａ型０％），苗族（Ｇ／Ｇ型
８４％、Ｇ／Ａ型２％），布依族（Ｇ／Ｇ型８６％、Ｇ／Ａ型
０％）。陈秉朴等ｌｌ ｊ研究广西地区汉族人群ｒｒＮＦ廿
２３８位点多态性，结果显示ＴＮＦ Ｇ／Ｇ型和ＴＮＦ Ｇ／Ａ
型频率分别为９５．９％、４．１％，并与荷兰人、西班牙
人、意大利人群ＴＮＦ—ａ基因多态性的研究结果比较，
存在显著差异（Ｐ＜０．０５）。由此说明不同种族不同
地区间ＴＮＦ—ａ基因型分布和等位基因携带频率存在
差异。而ＡＳ组Ｇ／Ｇ型频率为９５％，Ｇ／Ａ型频率为
５％，与正常对照组相比，卡方检验无统计学意义，与
国内杨波等 的研究结果相近。Ｈａｒｔ等 也发现
ＴＮＦ—ａ－２３８位点多态性与强直性脊柱炎发病易感性
无相关性。以上结果均提示ＴＮＦ心２３８位点多态性
与强直性脊柱炎发病可能不相关。但国外学者Ｍｅ—
Ｇａｒｒｙ等ｌ＂Ｊ将苏格兰西部ＨＬＡ．Ｂ２７阳性ＡＳ病人
（ｎ＝１６７）与阳性正常对照相比发现ＴＮＦ心２３８等位
基因频率显著性的增高（Ｐ＜０．０５）。这可能是由于
研究对象来自不同种族或者不同地域，以致ＴＮＦ１０—
２３８基因型分布和等位基因携带频率均存在一定的
差异。此次研究未发现ｒｒＮＦ Ａ／Ａ型，向萍霞ｌ１ ８＿等和
陈秉朴等＿１ Ｊ分别研究湖北地区和广西地区汉族人
群ＴＮＦ－Ⅱ－２３８位点多态性，均未检测到ＴＮＦ Ａ／Ａ 。
这一方面可能是因为ＴＮＦ Ａ／Ａ型确实较罕见，也可
能是由于样本量过小，以致未发现ＴＮＦ Ａ／Ａ基
因型。
研究发现 ｒＮＦ—ａ各基因位点多态性的Ｇ与Ａ
的替换，能导致 ｒＮＦ转录活性的变化，影响ＴＮＦ—ａ水
平＿１ ，进而影响疾病的发展。因此我们进一步采用
ＥＬＩＳＡ法分别榆测ＡＳ组和对照组血清中ＴＮＦ—ａ水
平，发现未经治疗的ＡＳ患者普遍要高于正常对照
组，且基因型为Ｇ／Ａ的患者ＴＮＦ— 水平更高， 刘
巧红等＿Ｉ９＿研究结果相同；但也有文献报道早期Ａｓ
中同免疫学杂志２０１０年第２６卷
患者血清ＴＮＦ—ａ水平与健康人群无差别，但中晚期
Ａｓ患者血清中ｒｒＮＦ—ａ水平要显著高于健康人群的
ＴＮＦ 水平ｌ 。Ｇｒａｔａｅｏｓ等㈨发现ＡＳ患者血清
ＴＮＦ．ａ水平升高与疾病的活动性有很大的关系。以
上说明ＴＮＦ— 参与了ＡＳ的炎症过程，其水平升高与
ＡＳ的活动性有很大的关系。
ＨｌＪＡ—Ｂ２７是与ＡＳ易感性相关最密切的一类抗
原，在所有种族中ＨＬＡ—Ｂ２７皆与ＡＳ发病相关。本
实验中，ＨＩＪＡ．Ｂ２７阳性率在Ａｓ组和正常对照组中的
分布差异具有极统计学意义（ ＝１１４．９７５，Ｐ＝
０．０００），进一步验证了ＨＬＡ—Ｂ２７与ＡＳ的密切关系。
结合ＴＮＦＩａ＿２３８位点基因型和ＨＬＡ．Ｂ２７进行分析，
发现与单独ＨＩＡ—Ｂ２７阳性比较，ＨＬＡ。Ｂ２７阳性同时
Ｇ／Ｇ基因型阳性的ＯＲ值大于Ｇ／Ａ基因型的ＯＲ
值，但由于仅对３５名正常人进行ＨｌＡ—Ｂ２７抗原分
析，结果可能存在偏差。因此推测当ＴＮＦ心２３８基
因 为Ｇ／Ｇ时ＡＳ的患病风险可能增高。
综上，本实验结果显示ＴＮＦ心２３８位点各基因
型频率和ＴＮＦ Ｇ、Ａ等位基因频率与对照组相同，基
因型比较无显著性差异，提示湖南地区人群中ＴＮＦ．
ａ一２３８位点多态性与ＡＳ发病可能不相关，但如ＴＮＦ．
～一１ 一
一
ａ．２３８基因型为Ｇ／Ｇ时可能增高ＡＳ的患病风险。
总之，ＡＳ是多因素、多基因导致的免疫性疾病，可能
还有其它基冈参与了发病，其具体机制的阐明有待
于进一步扩大样本量以及对多个基因多态性同时进
行研究
４参考文献
～一２ ～一
寸立波等腺苷对大鼠缰核神经元自发放电活动及ｃ，ｆｏｓ蛋白表达的影响第２期
（７）：３８６—３８８．
－
１４５・
神经元ｃ—ｆ０ｓ蛋白的表达为１．２％±０．７％，对照组为
Ｏ．７％±０．６％，二者相比无显著的统计学差异（Ｐ＞
１３ ＭｃＡｒｔｈｕｒ Ａ Ｊ，Ｈｕｎｔ Ａ Ｅ，Ｇｉｌｌｅｔｔｅ Ｍ Ｕ．Ｍｅｌａｔｏｎｉｎ ａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｉｇｎＥｌ
ｔｒａｎｓｄｕｅｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ ｓｕｐｒａｃｈｉａｓ－ｍａｔｉｃ ｃｉｒｃａｄｉａｎ ｃｌｏｃｋ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ
０．０５），故我们目前不能对茶碱与大鼠睡眠．觉醒机制
的关系得出结论，有关这方面有待进一步研究。
ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉＮＥｓ Ｃ ａｔ ｄｕｓｋ ａｎｄ ｄａｗｎ［Ｊ］．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１９９７；１３８：６２７．
６３４．
１４ Ｋｉｍ Ｓ Ｍ，Ｖｉｍｌｅｓｈ Ｋｕｍａｒ，Ｙｏｎｇ－Ｑｉ Ｌｉｎ ｅｔ ａ１．Ｆｏｓ ａｎｄ Ｊｕｎ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅ ｉｎ—
ｄｉｖｉｄｕａｌ ｒｅｌｅａｓｅ ｓｉｔｅｓ ｎｄ ｍｏｂｉａｌｉｚｅ ｔｈｅ ｒｅｓｅｒｖｅ ｓｙｎａｐｔｉｃ．ｖｅｓｉｃｌｅ ｐｏｏｌ ａｔ ｔｈｅ
４参考文献
１ Ａｎｔｔｉ Ｖａｌｊａｋｋａ．Ｊｕｋｋａ Ｖａｒｔｉａｉｎｅｎ．ｋｅＮＥ ｒｒｕｏｍｉｓｔｏ．Ｔｈｅ ｆａｓｅｉｃｕｌｕｓ ｒｅｔｏｒ１ｆ．
ｅｘｕｓ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｔｈｅ ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ ｏｆ ＲＥＭ ｓｌｅｅｐ ｂｙ ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ ｔｈｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｌａｒｖａｌ ｍｏｔｏｒ ｓｙｎａｐｓｅ￣Ｊ Ｊ．ＰＮＡＳ，２００９；１０６：４０００－４００５．
１５ Ｍｉｚｏｇｕｃｈｉ Ａ，Ｅｇｕｃｈｉ Ｎ，Ｋｉｍｕｒａ Ｋ ｅｔ ａ１．Ｄｏｍｉｎａｎｔ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄ ｉｎ Ｄ２ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｏｎ ａｒａｃｈｎｏｉｄ ｔｒａｂｅｃｕｌｒ ｃｅｉａｌｓ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｂａｓａｌ
ｆｏｒｅｂｒａｉｎａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｎ．．ｒａｐｉｄ ｅｙｅ ｍｏｖｅ．．
ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｔｈｅｔａ ｒｈｙｔｈｍ ａｎｄ ｒａｐｉｄ ｅｙｅ ｍｏｖｅｍｅｎｔｓ ｉｎ ｒａｔｓ［Ｊｊ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅ—
ｓｅａｒｃｈ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ．１９９８；４７（２）：ｌ７１—１８４．
２ Ｉｓａａｃ Ｈ Ｂｉａｎｃｏ，Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｗ Ｗｉｌｓｏｎ．Ｔｈｅ ｈａｂｅｎｕｌａｒ ｎｕｃｌｅｉ：ａ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ
ｍｅｎｔ ｓｌｅｅｐ［ＪＪ．Ｐｒｏｃ Ｎａｉｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２００１；９８：１１６７４—１１６７９．
１６王永中．中枢神经系统腺苷受体［Ｊ］．国外医学・生理、病理科学
与临床分册，２００２；２２（５）：４９０４９３．
１７ Ｃ０ｎｄｅ Ｓ Ｖ．Ｍｏｎｔｅｉｒｏ Ｅ Ｃ．Ｏｂｅｓｅ Ａ ｅｔ ａ１．１ｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ａ ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌｌｙ
ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ ｒｅｌａｙ ｓｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ ｂｒｉａｎｌＪｊ．Ｐｈｉｌ Ｔｒａｎｓ Ｒ Ｓｏｃ Ｂ，
２００９；３６４：１０ｏ５．１０２０．
３林剑萍，赵华．利用褪黑素对缰核神经元单位放电的影响及可
能机制［Ｊ］．中国应用生理学杂志，２００６；２２（３）：２５３—２５６．
４ Ｃｌａｒｅ Ｊ Ｒａｙ．Ｊａｎｉｃｅ Ｍ Ｍａｒｓｈａｌ１．Ｅｌｕｃｉｄａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｌ１ｅ ｒａｔ ０ｆ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ
ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ａｎｄ Ａ２Ａ．．ｒｃｅｐｔｅｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒａｅｍｉａ ｏｆ ｔｗｉｔｃｈ ａｎｄ ｔｅｔｎｉａｃ ｃｏｎ．．
ｏｖｅｒｌｏｏｋｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌｅ［ＪＪ．Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ，２００９；６４８：１４５．１５９．
１８ Ｈａｙａｉｓｈｉ Ｏ．Ｐｒｏｓｔａｇｌｎｄｉａｎｓ ａｎｄ ｓｌｅｅｐ［Ｊ Ｊ．Ｎｉｐｐｏｎ Ｒｉｎｓｈｏ，１９９８；５６：２８５—
２８９．
１９陈爽，张小雪，何瑞荣ｅｌ ａ１．窦内压升高和灌流腺苷激活颈动
脉窦压力感受器时延髓内ｃ．ｆｏｓ蛋白的表达［Ｊ］．生理学报，１９９９；
５１（２）：１９３．１９８．
２０ Ｍａｒｋｓ Ｇ Ａ，Ｂｉｒａｂｉｌ Ｃ Ｇ．Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｒａｐｉｄ ｅｙｅ ｍｏｖｅｍｅｎｔ ｓｌｅｅｐ ｉｎ
ｈｅ ｒａｔｔ ｂｙ ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ ａｎｄ ａｄｅｎｏｓｉｎｅｒｇｉｃ ａｇｏｎｉｓｔｓ ｉｆｕｓｅｄ ｉｎｎｔｏ ｔｈｅ ｐｏｎｔｉｎｅ
ｔｒａｃｔｉｏｎｓ［Ｊｊ．Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００９；５８７：１５６５一ｌ５７８．
５ ＬＧ Ｅｃｋｅｒｌｅ．Ｍ Ｌｕｃａｓｓｅｎ．Ｔ Ｈｉｉｓｅ ｅｔ ａ１．Ｐ６ｒｔｎｅｒ Ｃｏｌｄ ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ
ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｃｏｍｍｏｎ ｅｅｌｐｏｕｔ（Ｚｏａｒｃｅｓ ｖｉｖｉｐａｍｓ）：ａ ｒｏｌｅ ｉｎ ｍｅｄｕ—
ｌａｔｉｎｇ ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｃ ｏｘｉｄａｓｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌ Ｊｊ．Ｊ Ｅｘｐ Ｂｉｏｌ，２００８；２１１：１２６２—
１２６９．
６ Ｂａｓｈｅｅｒ Ｒ，Ｈａｌｌｄｎｅｒ Ｌ，Ａｌａｎｋｏ Ｌ ｅｔ ａ１．Ｏｐｐｏｓｉｔｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ａｄｅｎｏｓｉｎｅ Ａｊ
ｒｅｔｉｃｕｌｒ ａｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１９９８；８６：２９ ３７．
２１霍艳，李经菜，江岩ｅｔ ｏ１．褪黑素对小鼠视交叉上核ｃ． 基
因表达的影响［Ｊ］．中国药理通报，２０００；１６（３）：２６１．２６４．
２２ Ｇｅｓｓｉ Ｓ，Ｍｅｒｌｇｈｉ Ｓ，Ｖａｒｎｉａ Ｋ ｅｔ ．ｈｅ Ａ３ ａｄｅｎｏｓｉＴｎｅ ｒｅｃ即ｔｏｒ：Ａｎ ｅｎｉｇ．
ｎｄ Ａ２Ａ ｒａｅｃｅｐｔｏｒ ｍＲＮＡ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｓｌｅｅｐ ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎｌＪ Ｊ．Ｎｅｕ—
ｏｒｒｅｐｏｒｔ，２００１；１２：１５７７—１８０．
ｍａｔｉｃ ｐｌａｙｅｒ ｉｎ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ［Ｊ Ｊ．Ｐｈａｍｍｃｏｌ＆Ｔｈｅｒａｐ，２００８；ｌ１７：１２３—
１０．４
７ Ｒｅｂｏ Ｎ，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ Ｒ Ｊ，ｌｏｐｅｓ Ｌ Ｖ ｅｔ ａ１．ＡｄｅｎｏｓｉｎｅＡ（１）ａｎｄＡ（２Ａ）ｒｅ—
ｃｅｐｔｏｒｓ ａｒｅ ｃｏ－－ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｐｙｒａｍｉｄａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ ａｎｄ ｃｏ－－ｌｏｃａｌｉｚｅｄ ｉｎ ｇｌｕｔａ－・
２３ Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ Ｒ Ｓ．Ｓｈｉｒａｈａｔａ Ｍ，Ｗａｎｇ Ｈ Ｙ ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ａｄｅｎｃｓｉｎｅ
ｏｎ ｔｈｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ，ｄｏｐａｍｉｎｅ，ａｎｄ ｎｏｒｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ ｆｒｏｍ ｔｈｅ
ｍａｔｅｒｇｉｃ ｎｅｒｖｅ ｔｅｒｍｉｎａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｔ ｈｉｐｐｏｃｍｎｐｕｓｌＪｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，２００５；
１３３（１）：７９—８３．
ｅａｔ ｃａｒｏｔｉｄ ｂｏｄｙＩ Ｊ １．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ，２ＯＯ４；３６７：３０４—３０８．
８王任烨，狄枫．腺苷及其受体在神经系统中的生物学作用［Ｊ］．
国外医学药学分册，２００６；３３（４）：２７９—２８２．
９钱忠名，肖德生，徐斌．ｃ．ｆｂｓ表达与心理应激脑机制的研究［Ｊ］．
生理科学进展，１９９７；２８（１）：５２—５４．
１０ Ｔｊｉｎｇ－ＴｊｉｎｇＨｕ．Ａｒｍｅｌｉｅｓ Ｌａｅｒｅｍａｎｓ．ＵｌｆＴ．Ｅｙｓｅｌ ｅｔ ａ１．ｎａｌＡｙｓｉｓ ｏｆｃ－ ｓ
ｎｄ ｚｉａｔ２６８ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｒｅｖｅａｌｓ ｔｉｍｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｓｉｄｅ
ｎｄ ｏｕｔａｓｉｄｅ ｔｈｅ ｌｓｉｅｏｎ ｐｒｏｊ’ｃｔｅｉｏｎ ｚｏｎｅ ｉｎ ａｄｕｌｔ ｃａｔ ａｒｅａ １７ ａｆｔｅｒ ｒｅｔｉｎａｌ
２４陈爽，范振中，何瑞荣．腺苷对颈动脉窦压力感受器反射的易
化作用［Ｊ］．生理学报，１９９８；５０（３）：２９６—３０２．
２５ Ｋｏｎｇ Ｔ，Ｗｅｓｔｅｒｍａｎ Ｋ Ａ，Ｆａｉｇｌｅ Ｍ ｅｔ ａ１．ＨＩＦ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ
ａｄｅｎｏｓｉｎｅ Ａ２Ｂ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ｈｙｐｏｘｉａ［Ｊｊ．ＦＡｓＥＢ Ｊ，２００６；２０：２２４２－２２５０．
２６ Ｏｒｔｉｚ Ｇ Ａ，Ｂｉｎｃｈｉａ Ｎ Ａ，Ｔｉｅｄｅ Ｍ Ｐ ｅｔ ａ１．Ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ Ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ｅｎ．
ｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ａｆｔｅｒ ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｃａｆｆｅｉｎｅ ｆｏｒ ｐｏｓｔ—ｌｕｍｂａｒ ｐｕｎｃ．
ｔｕｒｅ ｈｅａｄａｃｈｅｓｌＪｊ．ＡＪＮＲ Ａｍ Ｊ Ｎｅｕｒｏｒｄｉａｏｌ，２０ｏ９；３０：５８６—５８７．
ｌｓｉｅｏｎｓ［Ｊ］．Ｃｅｒｅｂ Ｃｏｒｔｅｘ，２００９；１９：２９８２．２９９２．
１ｌ马秀英，张连珊，何瑞荣．心外膜应用腺苷时ｃ．ｆｏｓ在脊髓、延髓
和丘脑中的表达［Ｊ］．生理学报，１９９７；４９（４）：３９５—３９９．
１２王琳 睡眠机制的研究进展［Ｊ］．中国实用内科杂志，２００３；２３
［收稿２００９—０８—２１修回２００９—１ １－１３］
（编辑张晓舟）
（上接第１４０页）
９ Ｃｂｅｏｎｇ Ｊ Ｙ，Ｃｈｏ ＳＷ，ＨｗａｎｇＩ Ｌ ｅｌ ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｃｈｒｏｎｉｃｂｅｐ—
ａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１０，ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ－ａｌｐｈａ ｇｅｎｅ
ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ【ＪＪ．Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｅｈａｂｉｌｉｔａ—
ｔｉｏｎ．２０ｏ５：９：２５２—２５４．
ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｌ Ｊｊ．Ｊ Ｇａｓｔｏｒｅｎｔｅｍｌ Ｈｅｐａｔｏｌ，２００６；２１：１１６３一
ｌ１６９．
１７ Ｍｅｇａｒｒｙ Ｆ，Ｎｅｉｌｌｙ Ｊ，Ｓｔｕｒｒｏｃｋ Ｒ Ｄ ｅｔ ａ１．Ａ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｗｉ山ｉｎ出ｅ ｉｎｔｅｒ．
１ｅｕｋｉｎ １ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ＩＬ—Ｒ ａ ｇｅｎｅ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｈ ａｎｋｙｌｏｔｓｉｎｇ
１０陈红波，涂胜豪，胡永红．单核苷酸多态性在类风湿关节炎中的
研究进展［Ｊ］，中华风湿学杂志，２００４；８（３）：１７１ １７３．
１１ Ｍａｄａｎｉ Ｓ，ＮｏｏｒｉｎａｙｅｒＢ，ＭａｄａｎｉＨ ｅｔ ａ１．Ｎｏａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎＴＮＦ－ａｌ—
ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ（ＡＳ）［Ｊｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ，２００１；４Ｊ０：１３５９・１３６４．
１８向萍霞，李艳，张平安ｅｔ ａ１．中国汉族人群中肿瘤坏死因子一
２３８位点基因多态性与血糖、血脂关系的研究［Ｊ］．微循环学杂
志，２００４；１４（４）：２４．２６．
１９ Ｇｏｎｚａｌｅｚ Ｓ，Ｒｅｄｒｉｇｏ Ｌ，Ｂｏｒｒａ Ｊ Ｍ ｅｔ ａ１．ＴＮＦ一Ⅱ一３０８Ａ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｐｅｌｙｍｏｒ—
ｐｈｉｓｍ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｄ ｗｉｅ山ｅｎｈａｎｃｅｄ ＴＮＦ．Ｑ ａ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｆｌａｎｍａａｔｏｒｙ
ｐｈａ－２３８ ｐｅｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ａｎｄ ｃｏｌｏｒｃｔｅｌａ ｃａｎｃｅｒ ｉｎ Ｉｒａｎｉａｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊｊ．Ａｃｔａ
Ｏｎｃｏｌ，２００８：４７：４７３４７４．
１２杨宇，苏卓娃，陈群．基因多态性与强直性脊柱炎发病相关
性的研究进展［Ｊ］．热带医学杂志，２００６；６（１０）：１１３８—１１４０．
１３李永念，廉玮晟，左丽．贵州三个主要民族人群ＴＮＦ—ａ基因启
动子区 核苷酸多态性分析［Ｊ］．中国免疫学杂志，２００８；２４（６）：
５４５．５４８．
ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ Ｃｒｏｈｎ’ｓ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｆｉｓｔｕｌｉｚｉｎｇ ｄｉｓｅａｓｅ ｌＪｊ．Ａｍ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎ．
ｔｅｒｏｌｏｇｙ，２００３；９８：１１０１—１１０４．
２Ｏ马文松，朱小弟，杜冀晖ｅｔ ａ１．细胞因子ＴＮＦ．ａ及ＣＤ９５对强直性
脊柱炎影响的研究［Ｊ］．湖北预防医学杂志，２００２；１３（１）：４２ ．
２１ Ｇｒａｔａｃｏｓ Ｊ，Ｃｏｉｌａｄｏ Ａ，Ｆｉｌｌｅｌｌａ Ｘ ｅｔ ａ１．Ｓｅｒｕｍ ｅｙｔｏｋｉｎｅｓ（ＩＬ－６，ＴＮＦ—ａ，
Ｉｌ，ｌＢ ａｎｄ ＩＦＮ—ｒ）ｉｎ ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ ｓｏｎｄｙｌｐｉｔｉｓ：ａ ｃｌｏｓｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ
１４陈秉朴，韦叶生，解继胜ｅｔ ａ１．广西地区汉族人群ＴＮＦ．ｑ基因启
动子２３８ Ｇ／Ａ多态性分布的研究［Ｊ］．中同组织化学与细胞化学
杂志，２００５；１４（５）：９８３．９８５．
ＩＬ－６ａｎｄ ｄｉｅａｓｅ ａｃｔｓｉｖｉｔｙａｎｄ ｓｅｖｅｒｉｔｙ［ＪＪ．Ｂｒ ＪＲｈｅｕｍａｔｏｌ，１９９４；３３：９２７．
９３】．
１５杨波，陈蕊雯，段世伟ｅｔ ａ１．肿瘤坏死因子基因多态性对强赢
性脊柱炎的易感性和临床表现型的影响［Ｊ］．第二军医大学学
报，２００４；２５（２）：１２５．１２８．
１６ Ｈａｎ Ｘ Ｈ，Ｃｈｅｎ Ｒ Ｗ，Ｄｕａｎ Ｓ Ｗ ｅｔ ａ１．Ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ａｌｐｈａ ｇｅｎｅ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｉｎ ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ ｓｐｅｎｄｙｌｉｔｉｓ：ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｉｅａｓｓｅ
［收稿２００９—０７—２５修回２００９—０９—０９］
（编辑张晓舟）
2024年10月7日发(作者：屠谷兰)
・
ｌ３６
中国免疫学杂志２０１０年第２６卷
・
遗传免疫学・
湖南地区强直性脊柱炎患者中ＴＮＦ．Ｉ）‘．２３８位点的多态性研究
王敏杜世杰①李先平
Ｒ３９２．１１
彭文峰②曹
文献标识码
虹
Ａ
陈进伟②（中南大学湘雅二医院检验科，长沙４１００１１）
文章编号１０００．４８４Ｘ（２０１０）０２－０１３６－０６ 中国图书分类号
［摘要］ 目的：通过分析湖南地区强直性脊柱炎汉族患者ＤＮＡ中ＴＮＦ＿ａ－２３８位点的多态性，研究湖南地区汉族人群中
Ｆ＿ａ．２３８位点基因多态性与强直性脊柱炎发病的相关性。方法：应用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性法（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）
对患者和正常人ＤＮＡ中ＴＮＦ－ａ－２３８位点进行基因分型检测，采用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测１００例强直性脊柱炎患者和９ｏ
例正常人血清中ＴＮＦ－ａ的水平，｝Ⅱｌ｜Ａ—Ｂ２７分型采用流式细胞仪检测。用统计学方法分析两组中基因型、等位基因频率、ＴＮＦ－ａ
水平、ＨＪ 一１３２７阳性率及其组问差异。结果：１００例患者中ＴＮＦ－￣－２３８位点Ｇ／Ｇ基因型９５例（９５％），Ｇ／Ａ基因型５例（５％），９０
例正常人中ＴＮＦ－ａ－２３８位点Ｇ／Ｇ基因型８８例（９７．８％），Ｇ／Ａ基因型２例（２．２％）。ＡＳ组的ＴＮＦ－ａ一２３８位点Ｇ频率（９７．５％）低于
正常对照组（９８．９％），Ａ频率（２．５％）高于对照组（１．１％）；两组均未发现Ａ／Ａ基因型；ＡＳ组患者血清中 Ⅱ的平均水平比正
常人明显增高［（１０．１６ ４－１．１９）ｐｇ／ｍｌ ｖｓ．（５．６４±１．１８）ｐｇ／ｍ１］，且Ｇ／Ａ基因型患者血清中ＴＮＦ－ａ的平均水平比Ｇ／Ｇ基因型患者
高［（１３．４９±１．２７）ｐｇ／ｍｌ ｖｓ．（９．４４ ４－１．２９ ｐｇ／ｍ１）］；ＨＬＡ－Ｂ２７阳性率在湖南地区ＡＳ组和正常对照组中的分布差异极其显著（ ＝
１１４．９７５，Ｐ＝０．０００）。对ＨＬＡ－Ｂ２７和ＴＮＦ－ａ－２３８两位点的基因分析表明，与单独ＨＩＡ—Ｂ２７阳性比较，ＴＮＦ－ａ－２３８位点基因型为
Ｇ／Ｇ时比数比（ＯＲ值）明显增加。结论：湖南地区汉族人群中ＴＮＦ－ａ－２３８位点多态性与强直性脊柱炎发病可能没有相关性，但
基因型为Ｇ／Ｇ时Ａｓ的患病风险可能增高。
［关键词］强直性脊柱炎；肿瘤坏死因子；基因多态性；相关性
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｏｆ ＴＮＦ－．］‘－２３８ ｉｎ Ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ Ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ（ＡＳ）ｐａ－
ｔｉｅｎｔｓ ｉｎ Ｈｕｎａｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ
ＷＡＮＧ Ｍｉｎ，ＤＵ Ｓｈｉ－Ｊｉｅ，ＬＩ Ｘｉａｎ—Ｐ ，ＰＥＮＧ Ｗｅｎ一 ，ｌｇ，ＣＡＯ舶，２ｇ，ＣＨＥＮ Ｊｉｎ一耽 ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏ—
ｒ），， Ｓｅｃｏｎｄ Ｘｉａｎｇｙａ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｆ ｏＣｅｎｔｒａｌ Ｓｏｕｔｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ ４１００１ｌ，Ｃｈｉｎａ
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＴＮＦ－ｃｔ－２３８ ｓｉｔｅ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｏｎｓｅｔ ｏｆ Ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ Ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ（ＡＳ）ｉｎ
Ｈｕｎａｎ Ｈａｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：１００ ＡＳ ｓａｍｐｌｅｓ（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｗｈｏｌｅ ｂｌｏｏｄ）ｗｅｒｅ ｅｏＨｅｅｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ｎｄ ａ
Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｅｃｏｎｄ Ｘｉａｎｇｙａ ｈｏｓｐｉｔａｌ ｆｒｏｍ Ｍａｙ ２００８ ｔｏ Ｊａｎ ２００９ ａｎｄ ９０ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ｐｅｏｐｌｅ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ａｓ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．Ｗｅ
ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｔｈｅ ＴＮＦ－ａ－２３８ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｏｆ ｈｅｔｓｅ ｓｕｂｊｅｃ￣ｂｙ ｕｓｉｎｇ ＰＣＲ－ＲＦＬＰ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｔｈｅ ＴＮＦ－ａ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｌＭｌｎ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｍｅａ—
ｓｕｒｅｄ ｂｙ ＥＬＩＳＡ ａｎｄ ＨＬＡ—Ｂ２７ ａｎｔｉｇｅｎ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｆｌｏｗ ｅｙｔｏｍｅｔｒｙ（ＦＣＭ）．Ｔｈｅｎ ａｌｌ ｏｆ ｔｈｅ ｄａｔａ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＳＰＳＳ１３．０ ｓｏｆｔｗａｒｅ．Ｒｅ－
ｓｕｉｔｓ：Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ９５ ｅａｓｅｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＴＮＦ－ａ－２３８ Ｇ／Ｇ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｉｎ １００ ＡＳ ｐａｔｉｅｎｔｓ，５ ｅａｓｅｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｇ／Ａ ｇｅｎｏｔｙｐｅ．Ｗｈｉｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，
ＴＮＦ－￣一２３８ Ｇ／Ｇ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ａｎｄ Ｇ／Ａ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｗｅＩ－ｅ ８８ ｅａｓｅｓ ａｎｄ ２ ｅａｓｅｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｒＮＦ．Ｑ一２３８ Ａ／Ａ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｉｎ ｂｏｔｈ ｇｒｏｕｐｓ．
ｈｅＴ ｌａｌｅｌｅ ｆｒｅｕｅｎｃｉｑｅｓ ｏｆ Ｇ ｉｎ Ｓ Ａｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（９８．９％ｖｓ．９７．５％），ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ａｌｌｅｌｅ ｆｒｅｕｅｎｃｉｑｅｓ ｏｆ Ａ ｉｎ ＡＳ
ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｌｏｗｅｒ ｈｔｎ ａｉｎ ｈｔｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（１．１％ｖｓ．２．５％）．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｈｅｒｔｅ ｗｅｒｅ ｎｏ ｓｉｇｎｉｉｆｃｎｔａ ｉｄｆｅｒｅｎｃｅ ｏｔｂｈ Ａ ａｌｌｅｌｅ ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ ｎｄ ａＧ ｌ—ａ
ｌｅｌｅ ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ（Ｐ＞０．０５）．Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎ，ｈｔｅ ａｖｅｒａｇｅＴＮＦ－ｃｔｌｅｖｅｌｉｎＡＳ ｇｒｏｕｐｗａｓ ｈｉｈｅｇｒｔｈａｎｉｎｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ（１０．１６４－１．１９
ｒｅｃ＇ｎ￣ｖｓ．５．４４６－１．１８ ｐｇ，／ｍ１）．Ａｎｄ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ忡ａ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ＡＳ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｏｆ Ｇ／Ａ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｇ／Ｇ
ｇｅｎｏｔｙｐｅ（１３．４９ ４－１．２７ ｐｇ／ｍｌ ｖｓ．９．４４４－１．２９ ｐｇ／ｍ１）．Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ａ ｖｅｒｙ ｌａｒｇｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆｔｈｅ ｐｏｓｉｉｔｖｅ ｒａｔｉｏ ｏｆＨＬＡ・Ｂ２７ ｂｅｔｗｅｅｎ ｗｏ ｇｒｔｏｕｐｓ
（ １１４．９７５，Ｐ＝０．０００）．Ａｆｔｅｒ ｇｅｎｅ ｎａａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＨＩＪＡ＿Ｂ２７ａｎｄ ＴＮＦ－ａ－２３８，ｔｈｅ ｏｄｄｓ ｒａｔｉｏ（ＯＲ）ｗａｓ ｈｉｈｅｒｇ ｉｎ ｏｔｂｈ Ｇ／Ｇ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ａｎｄ ｍＡ－
Ｂ２７ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｔｈａｎ ＨＩＡ—Ｂ２７ ｌｏｎｅｌｙ．Ｃｏｎｄｕｓｌｏｎ：Ｔｈｅｒｅ ｉｓ ｐｒｏｂａｂｌｙ ｎｏ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｏｆ ＴＮＦ－ｃｔ一２３８ ｓｉｔｅ ａｎｄ ｔｈｅ
ｏｎｓｅｔ ｏｆ ＡＳ ｂｕｔ ｔｈｅ Ｇ／Ｇ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｏｆ ＴＮＦ－ａ一２３８ ｍａｙ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｓｉｃｋｅｎ ｒｉｓｋ ｏｆ ＡＳ ｉｎ Ｈｕｎａｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．
［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ Ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ；ＴＮＦ；Ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ；Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ
①中南大学湘雅医学院医学检验系２０Ｏ４级，长沙４１００１３
②中南大学湘雅二医院风湿免疫科，长沙４１００１ １
作者简介：王敏（１９７６年一），女，博士，主管检验师，主要从事微生物学和免疫学研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｍｉｎ００００＠ｙａｈｏｏ．ＣＯＢ．ｃｎ；
通讯作者及指导教师：陈进伟（１９５４年一），女，主任医师，教授，主要从事风湿性疾病多药耐药及其逆转机制的研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｍｌｉ２００７＠ｙａｈｏｏ．ｃｎ。
王敏等 湖南地区强ｆ［性脊柱炎患者中ＴＮＦ１０－２３８化点的多态性研究第２期
强直性脊柱炎（ＡＳ）是一种慢性全身性、进行
性的自身免疫性疾病，主要侵犯中轴骨骼，以骶髂关
节炎为标志，儿乎全部累及骶髂关节、肋椎关节、脊
柱关节及周嘲组织，多以腰骶部不适为首发症状，晚
异。研究对象的基本实验室检查情况见表１。
１．１．２ 主要仪器和试剂 外周血ＤＮＡ提取试剂
盒、２×Ｔａｑ ＰＣＲ ＭａｓｔｅｒＭｉｘ、ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ Ｉ均为北京天
根生化科技有限公司产品；ＥＢ替代品染料为Ｇｏｌｄ
期可因椎间盘纤维环钙化、骨性融合及其附近韧带
钙化形成脊柱强直。Ａｓ的发病易感因素主要有遗
ｖｉｅｗ核酸染料；ＭｓｐＩ（Ｈｐａ １Ｉ）（１０ ｕ／ １）购自ＭＢＩ Ｆｅｒ—
ｍｅｎｔａｓ公司；人ＴＮＦ—ａ ＥＬＩＳＡ检测试剂盒购自武汉博
士德生物工程有限公司；ＰＣＲ扩增仪、电泳仪均为德
国Ｂｉｏｍｅｔｒａ公司产品；凝胶成像系统为美国伯乐公
司产品。
传和环境两大因素，以遗传因素为主。近年利用基
因多态性对ＡＳ的发病候选基因进行研究已经成为
最有前景的分子遗传学研究方法＿１， 。
全基因扫描、连锁和关联分析结果提示ＨＬＡ基
因区是ＡＳ的主要遗传易感位点，其中ＨＬＡ—Ｂ２７基
因与ＡＳ强相关，越来越多的研究提示除ＨＬＡ—Ｂ２７
１．２方法
１．２．１人外周血白细胞ＤＮＡ的提取将所收集的
血标本室温冻融，然后按照北京天根生化科技有限
公司提供的外周血ＤＮＡ提取试剂盒操作说明书进
行ＤＮＡ的提取。
以外，在ＨＬＡ区内外均存在其它ＡＳ的易感基因，而
ＴＮＦ—ａ的基因多态性是目前公认的ＡＳ发病中的重
要致炎因子 ｊ，该区域有众多位点存在单核苷酸多
态性，其中多数为Ｇ—Ａ的变化，研究最多的是一３０８
１．２．２引物设计根据ＧｅｎｅＢａｎｋ公布的ＴＮＦ—ａ的
序列（Ｍ１６４４１），参照文献［６］于上海生工生物技术有
限服务公司合成一对引物，其特性见表２。
１．２．３ ＰＣＲ反应体系和条件取ＤＮＡ模板１ Ｖ１，依
次加入２×Ｔａｑ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ １０ ｔｄ，１０ ｔｍａｏｌ／Ｌ的
位点，其它位点如一２３８、一８５０、一８６３报道较少ｌ４ Ｊ。因此
本研究应用ＰＣＲ—ＲＦＬＰ方法分析湖南地区汉族人群
中ＡＳ患者与正常人群在ＴＮＦ—ａ一２３８位点的多态性，
探讨湖南地区汉族人群巾ＴＮＦ廿２３８基因位点的多
态性与ＡＳ易感相关性。
上、下游引物各１ ｌ，灭菌ｄｄＨ２Ｏ补齐至２０ ｌ。按下
列程序进行扩增循环：首先９４℃４分钟预变性，然
后９４℃变性３Ｏ秒，５５ｃｃ退火３０秒，７２￣Ｃ延伸３０秒，
共３０个循环，最后７２￣Ｃ延伸１０分钟。
１材料与方法
１．１材料
１．２．４琼脂糖凝胶电泳分析
Ａｓ组：符合１９８４年纽约
取酶切产物５ ，分别
１．１．１研究对象与分组
与６×Ｌｏａｄｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ １ 充分混匀后点样于样品孑Ｌ
内，并以５ ｌ小分子量ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ Ｉ为参照。１４０ Ｖ
电泳２０分钟后，在凝胶成像仪中观察结果并照相。
１．２．５ ＰＣＲ产物酶切及聚丙烯酰胺凝胶电泳分析
取ＰＣＲ产物１５ ｌ，ＭｓｐＩ １ Ｖ１，１０×Ｂｕｆｉｅｒ ２ ｔｄ，０．１％
修订标准确诊的ＡＳ患者共１００例＿５ ，均选自２００８
年５月～２００９年１月在中南大学湘雅二医院风湿免
疫科门诊或住院的湖南地区汉］ｊｊ、、 患者，其中男
性８３例，平均年龄（２７．６８±９．９８）岁；女性ｌ７例，平
均年龄（２７．１２±９．６９）岁。排除标准：在入选前３个
月内有服用激素及其他免疫抑制药物治疗史；合并
有心血管疾病、脑血管疾病；有血栓、栓塞性疾病病
史；糖尿病；病毒性肝炎，肝硬化，严重肝肾功能不
全；严重营养不良；甲状腺疾病；妊娠；接受器官移植
等疾患者以及活动性结核病。
对照组：共９０例，均为中南大学湘雅二医院门
诊体检的健康汉族人。其中男性７２例， 均年龄
（３０．２４±４．５２）岁；女性１８例，平均年龄（３２．０３±５．４５）
岁。对照纰和ＡＳ组在性别、年龄分布 无统计学差
表２ ＰＣＲ引物序列及其限制・性内切酶
Ｔａｂ．２ Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ＰＣＲ ａｎｄ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｓ
ＢＳＡ ２ ｌ，加无菌ｄｄＨ２０至２０ ｌ，３７￣Ｃ水浴消化ｌ４小
时后加１０×Ｌｏａｄｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ ２ ｌ终止酶切反应。酶切
产物非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）：以１×ＴＢＥ
表１研究对象的基本情况
Ｔａｂ．１ Ｂａｓｅｌｉｎｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｏｆ ｔｈｅ ＡＳ ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｎｄ
ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ
为电解缓冲液，每管酶切产物取５ ｌ，分别与１０×
Ｌｏａｄｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ １／ｚｌ充分混匀后点样于样品孑Ｌ内，并
以６ １小分子量２０ ｂｐ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ为参照。电压设
为８ Ｖ／ｃｍ，约３小时以后终止电泳。将胶剥离行硝
酸银染色。
１．２．６验证性测序取ＰＣＲ产物送上海生工生物
技术有限公司测序部。在ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ３７３０全自动测
序仪测序。用ＮＣＢＩ上的ＢＬＡＳＴ分析将测序结果与
ＧｅｎｅＢａｎｋ中的Ｍ１６４４１的相应等位基因核苷酸序列
比较。
１．２．７ ＥＬＩＳＡ测定研究对象血清中ＴＮＦ ｏ＝水平取
不同稀释度的标准品（１ ０００、５００、２５０、１２５、６２．５、
３１．３、１５．６ ｐｇ／ｍ１）和样本各１００ ｔｔｌ加入酶标孑Ｌ，３７￣Ｃ
温育９０分钟，加入１：１００稀释的生物素抗人 ｒＮＦ—ａ
抗体，３７℃６０分钟后用０．０１ ｍｏｌ／Ｌ ＰＢＳ洗涤３次。
再加入ＨＲＰ标记的亲和素３７￣Ｃ反应３Ｏ分钟，四甲
基联苯胺显色系统（１１ＩⅥＢ）显色，以４５０Ⅲｎ为测量波
长，６２０ ｎ／ｎ为参考波长判读各孔的ＯＤ值，并计算各
检测样本ＴＮＦ．ａ的浓度。
１．２．８ ＨＩＡ．Ｂ２７位点的检测采用美国ＢＤ公司生
产的ＦＡＣＳ ｃａｌｉｂｕｒ流式细胞仪及ＨＬＡ．Ｂ２７配套试剂
盒，采用流式细胞仪常规检测方法，自动分析获取结
果，ＨＩＪＡ—Ｂ２７＋／ＨＬＡ．Ｂ２７．表达率大于９０％判定为阳
性，其余为阴性。
１．２．９统计学处理所有的数据均用ＳＰＳＳ１３．０统
计软件包进行处理分析。等位基因、基因型频率采
用直接计数法；等位基因、基因频率比较、ＨＬＡ—Ｂ２７
阳性率比较采用卡方检验，基因型分布进行Ｈａｒｄｙ．
Ｗｅｉｎｂｅｒｇ（Ｈ．ｗ）遗传平衡检验；计算各等位基因、基
因型的比数比（Ｏｄｄｓ ｒａｔｉｏ，ＯＲ）及双侧９５％的可信区
问（９５％ＣＩ）。ＴＮＦ．ｄ水平用ｙ－±ｓ表示，组问比较采
用ｔ检验。Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。
２结果
２．１扩增产物分析以ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ Ｉ为相对分子
质量标准，取５ ｌ扩增产物点样于２％琼脂糖凝胶，
１４０ Ｖ电泳２０分钟后，凝胶成像仪中观察结果并照
相，见图１，可见ＴＮＦ．ａ．２３８扩增后出现１５２ ｂｐ大小
的ＤＮＡ片段。
２．２ ＰＣＲ．ＲＦＬＰ结果分析ＴＮＦ心２３８ Ｇ／Ｇ纯合子
因含有能被ＭｓｐＩ识别的而完整酶切的序列显示出
两条带（１３２和２０ ｂｐ），ＴＮＦ ２３８ Ｇ／Ａ杂合子显示出
三条带（１３２、２０和１５２ ｂｐ），其序列中有部分不能被
ＭｓｐＩ识别的而酶切，其中２０ ｂｐ因片段较小，在
ＰＡＧＥ上显示不清晰。ＴＮＦ心２３８ Ａ／Ａ纯合子显示
中国免疫学杂志２０１０年第２６卷
出一条带（１５２ ｂｐ），因其序列中不含能被ＭｓｐＩ识别
片段不能酶切，图２。
２．３ Ｆ心２３８ ＰＣＲ—ＲＦＬＰ分型精确性的测序鉴定
结果将扩增的产物送上海生工生物技术有限公司
进行测序，测序结果经与Ｍ１６４４１标准序列进行对
比分析后，证实了ＰＣＲ—ＲＦＬＰ分型的精确性。图３
为经ＰＣＲ．ＲＦＬＰ分型方法分型后，根据酶切结果选
取的部分标本进行的测序验证。
２．４各组ＴＮＦ心２３８位点基因型及等位基因频率
检测结果 １（）（）例Ａｓ患者基因分型结果提示ＴＮＦ．
６００
５００
４００
３００
２００
１Ｏ０
瑚啪 啪啪舳 ∞
图１ ＴＮＦ－￣－２３８扩增产物琼脂糖凝胶电泳分析
Ｆｉｇ．１ Ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＰＣＲ ｆｏｒ忡
２３８
Ｎｏｔｅ：Ｍ．ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ Ｉ：１—９．ＰＣＲ ａｍｐｌｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｏｆＴＮＦ－ａ一２３８．
图２ ＴＮＦ．ｎ．２３８多态位点的ＲＦＬＰ分型结果
Ｆｉｇ．２ Ｅｉｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ＲＦＬＰ－ＰＣＲ ｆｏｒ ＴＮＦ－ｃｔ－２３８
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ
Ｎｏｔｅ：Ｍ．２０ ｂｐ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ；２－４，６，８．Ｇ／Ｇ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ；１，５，７．Ｇ／Ａ ｇｅｎｏ－
ｔｙｐｅｓ．
Ａ
Ｂ
图３ ＴＮＦ－０ｔ．３２８位点ＰＣＲ扩增产物纯化后测序图谱
Ｆｉｇ．３ Ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｍａｐ ｏｆ ＴＮＦ－￣－２３８
Ｎｏｔｅ：Ａ．Ｇ／Ｇ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ；Ｂ．Ｇ／Ａ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ．
王敏等湖南地区强直性脊柱炎患者巾１＇Ｎ ａ一２３８位点的多态性研究第２期
ａ．２３８ Ｇ／Ｇ基因型９５例，Ｇ／Ａ型５例，Ａ／Ａ基因型０
例，９Ｏ例健康对照组ＴＮＦ心２３８ Ｇ／Ｇ基因型８８例，
Ｇ／Ａ型基因２例，Ａ／Ａ基因型０例（表３）。
２．５ Ｈａｒｄｙ—Ｗｅｎｉｂｅｒｇ遗传平衡检验结果 用 检
验法分别将ＡＳ组和正常对照组进行了ＨａＭｙ—ｗｅｉｎ—
ｂｅｒｇ遗传平衡检验，结果显示，两组人群均符合
Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ遗传平衡（ｄｆ＝１，Ｐ＞０．０５），说明这
两个研究人群来自大的群体，不存在明显的自然选
择、迁移等因素对遗传平衡的影响，适合进行群体遗
传学研究，见表４。
２．６ ＡＳ患者与正常对照ＴＮＦ心２３８ Ｇ和Ａ等位基
因及基因型相关性分析 ＡＳ患者与健康对照组
ＴＮＦ心２３８ Ｇ和Ａ等位基因频率比较：ＡＳ组Ａ等位
基因的频率高于正常对照组（２．５％ＶＳ．１．１％），但无
统计学意义。ＡＳ组与对照组ＴＮＦＩａ－２３８ Ｇ／Ｇ和Ｇ／Ａ
基因型频率比较：ＡＳ组Ｇ／Ａ基因型频率同样较对
照组高（５．Ｏ％ＶＳ．２．２％），也无显著差异，见表５。
２．７ ＥＬＩＳＡ法测定血清中ＴＮＦ—Ｑ水平ＡＳ患者的
血清ＴＮＦ—ａ水平显著高于正常对照组［（１０．１６±
１．１９）ｐｇ／ｍｌ ＶＳ．（５．６４±１．１８）ｐｇ／ｍｌ，Ｐ＜０．０５）Ｊ，
ＴＮＦ－ａ一２３８ Ｇ／Ｇ基因型血清ＴＮＦ—ｏ【水平（９．４４±
１．２９）ｐｇ／ｍｌ显著低于Ｇ／Ａ基因型［（１３．４９±１．２７）
ｐｇ／ｍ１］，Ｐ＜０．０５；而对照组Ｇ／Ｇ和Ｇ／Ａ基因型血清
ＴＮＦ—ａ水平无明显差异（表６）。
表３ ＴＮＦ－￣ｔ－２３８基因型及等位基因频率检测结果（％）
Ｔａｂ．３ Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ａｌｌｅｌｅｓ ｉｎ ＴＮＦ－ｃｔ－２３８（％）
表４ ＴＮＦ－ｃｔ－２３８位点Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ遗传平衡检验结果
Ｔａｂ．４ Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ｉｎ ＴＮＦ－￣ｔ－２３８
表５ ＴＮＦ－ｃｔ－２３８等位基因和基因型的分布
Ｔａｂ．５ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓ ａｎｄ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｉｎ ｒｒＮＦ ０ ２３８
ＴＮＦＡｌｌｅｌｅｓ（％） Ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ（％）
ａ－２３８ 。
Ｇ
。‘‘ 。 。。。 。。。。。。。。。。。。。。 。。。。。。。。。。。。。。。——’ ’’ 。’
ｅ，℃
ｅ，ｋ
。 。 。‘——
ＡＳ １９５（９７．５） ５（２．５） ９５（９５） ５（５） ｏ（ｏ）
Ｃｏｎｔｒｏｌ １７８（９８．９） ２（１．１）８８（９７．８） ２（２．２） ｏ（ｏ）
７２＝１
．
０ｌ Ｐ＝０．３２ ７２＝１
０３ Ｐ＝０．３１
．
０Ｒ ０．９８６ ２．２５０ ０．９７ ２．２５
９５％Ｃ１ ０．９６一１．０ｌ３ ０．４４２—１１．４５４ ０．９２—１．∞０．４５～１１．３１
表６ ＡＳ患者和对照组血清１Ｔ ａ水平（ｐｇ／ｍ１）的比较
（ ±Ｓ）
Ｔａｂ．６ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍＴＮＦ－￣ｌｅｖｅｌ（ｐｇ／ｍＩ）ｉｎＡＳ ｐａ・
ｔｉｅｎｔｓ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（ ±ｓ）
Ｎｏｔｅ：１）Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｏｒｌ，ＡＳ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｈａｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｅｌｅｖａｔｅｄ
ｓｅｒｕｍ １＇ＮＦ－Ｑ ｌｅｖｅｌ，ａ ｖａｌｕｅ ｏｆ Ｐ＜０．０５；２）Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ＴＮＦ－ｃｃ一２３８
Ｇ／Ｇ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｉｎ ＡＳ ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｇ／Ａ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｈａｄ ｅｌｅｖａｔｄｅ ｓｅｎｌｎｌ ＴＮＦ－Ｇｔ
ｌｅｖｅ１．ａ ｖａｌｕｅ ｏｆ Ｐ＜０．０５．
表７ ＨＬＡ．Ｂ２７和ＴＮＦ－ｃｔ－２３８两位点之间的基因分析
Ｔａｂ．７ Ｔｈｅ ｇｅｎｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ＨＬＡ－Ｂ２７ ａｎｄ ＴＮＦ－ｃｔ－２３８
２．８ ＨＬＡ—Ｂ２７在湖南地区Ａｓ患者中的分布流式
细胞仪检测ＡＳ患者和随机挑取的３５位正常对照人
ＨＩＡ—Ｂ２７抗原，ＡＳ组中ＨＬＡ—Ｂ２７阳性率为９８％，正
常对照组中ＨＬＡ—Ｂ２７阳性率为５．７１％， 。检验后发
现，ＨＬＡ．Ｂ２７阳性和ＨＬ ．Ｂ２７阴性在湖南地区Ａｓ
组和正常对照组中的分布差异极显著性意义（ ＝
１１４．９７５，Ｐ＝０．０００）。
２．９ ＴＮＦ廿２３８和ＨＬＡ—Ｂ２７的基因分析对ＴＮＦ＿ｄ一
２３８位点的基因型和ＨＩＪＡ．Ｂ２７进行分析，发现与单
独ＨＬＡ．Ｂ２７阳性比较，ＨＬＡ．Ｂ２７阳性同时Ｇ／Ｇ基因
型阳性的ＯＲ值是１．９３９，大于Ｇ／Ａ基因型的ＯＲ值
（０．０６１），表明ＴＮＦ一０：一２３８基因型为Ｇ／Ｇ时ＡＳ的患
病风险可能增高（表７）。
３讨论
ｒＮＦ．ａ主要由活化的单核／巨噬细胞、抗原刺激
的Ｔ细胞、活化的ＮＫ细胞和肥大细胞分泌，在炎症
反应、免疫调节中起重要作用。ＴＮＦ．ａ基因全长约
２ ６７６ ｂｐ，包含４个外显子和３个内含子，位于６号
染色体Ｐ２１区域内，包含于ＨＬＡⅢ基因中。由于
ＴＮＦ—ａ不是预先存在于细胞内，而是细胞在受到刺
激时合成的，因此，基因启动子区域中的单核苷酸多
态性具有重要的意义＿７． 。
ＴＮＦ．ａ基因多态性包括．８６３、．８５７、．３７６、．３０８、
一
２４４、一２３８、一１６３和＋７０等，主要为鸟嘌呤（Ｇ）一腺
嘌呤（Ａ）的变化，其中研究最多的是ＴＮＦ廿２３８ Ｇ／Ａ
及．３０８Ｇ／Ａ位点的基因多态性。研究发现，ＴＮＦ．ａ基
因启动子一３０８位点，处于与转录调控的活化蛋白
ＡＰ－２相结合的共同序列中，而ＴＮＦ．ａ基因启动子．
２３８位点，处于转录调控的Ｙ—ｂｏｘ区。目前，该２个
位点基因多态性已应用于慢性乙肝、类风湿性关节
炎、直肠癌等的研究 。在ＡＳ疾病中，则多见于．
３０８位点的多态性研究¨】 。
本文对湖南地区汉族人群的ＴＮＦ一“一２３８位点的
多态性研究发现，不论是ＡＳ组或正常对照组， ｒＮＦ—
ａ．２３８位点基因型以Ｇ／Ｇ型为主。正常对照组Ｇ／Ｇ
基因型频率为９７．８％，Ｇ／Ａ型频率仅为２．２％。李
永念等 研究贵州三个民族人群中＿ｒＮＦ心２３８位点
基因型，结果ＴＮＦ Ｇ／Ｇ型频率和ＴＮＦ Ｇ／Ａ型频率分
别为：汉族（Ｇ／Ｇ型９６％、Ｇ／Ａ型０％），苗族（Ｇ／Ｇ型
８４％、Ｇ／Ａ型２％），布依族（Ｇ／Ｇ型８６％、Ｇ／Ａ型
０％）。陈秉朴等ｌｌ ｊ研究广西地区汉族人群ｒｒＮＦ廿
２３８位点多态性，结果显示ＴＮＦ Ｇ／Ｇ型和ＴＮＦ Ｇ／Ａ
型频率分别为９５．９％、４．１％，并与荷兰人、西班牙
人、意大利人群ＴＮＦ—ａ基因多态性的研究结果比较，
存在显著差异（Ｐ＜０．０５）。由此说明不同种族不同
地区间ＴＮＦ—ａ基因型分布和等位基因携带频率存在
差异。而ＡＳ组Ｇ／Ｇ型频率为９５％，Ｇ／Ａ型频率为
５％，与正常对照组相比，卡方检验无统计学意义，与
国内杨波等 的研究结果相近。Ｈａｒｔ等 也发现
ＴＮＦ—ａ－２３８位点多态性与强直性脊柱炎发病易感性
无相关性。以上结果均提示ＴＮＦ心２３８位点多态性
与强直性脊柱炎发病可能不相关。但国外学者Ｍｅ—
Ｇａｒｒｙ等ｌ＂Ｊ将苏格兰西部ＨＬＡ．Ｂ２７阳性ＡＳ病人
（ｎ＝１６７）与阳性正常对照相比发现ＴＮＦ心２３８等位
基因频率显著性的增高（Ｐ＜０．０５）。这可能是由于
研究对象来自不同种族或者不同地域，以致ＴＮＦ１０—
２３８基因型分布和等位基因携带频率均存在一定的
差异。此次研究未发现ｒｒＮＦ Ａ／Ａ型，向萍霞ｌ１ ８＿等和
陈秉朴等＿１ Ｊ分别研究湖北地区和广西地区汉族人
群ＴＮＦ－Ⅱ－２３８位点多态性，均未检测到ＴＮＦ Ａ／Ａ 。
这一方面可能是因为ＴＮＦ Ａ／Ａ型确实较罕见，也可
能是由于样本量过小，以致未发现ＴＮＦ Ａ／Ａ基
因型。
研究发现 ｒＮＦ—ａ各基因位点多态性的Ｇ与Ａ
的替换，能导致 ｒＮＦ转录活性的变化，影响ＴＮＦ—ａ水
平＿１ ，进而影响疾病的发展。因此我们进一步采用
ＥＬＩＳＡ法分别榆测ＡＳ组和对照组血清中ＴＮＦ—ａ水
平，发现未经治疗的ＡＳ患者普遍要高于正常对照
组，且基因型为Ｇ／Ａ的患者ＴＮＦ— 水平更高， 刘
巧红等＿Ｉ９＿研究结果相同；但也有文献报道早期Ａｓ
中同免疫学杂志２０１０年第２６卷
患者血清ＴＮＦ—ａ水平与健康人群无差别，但中晚期
Ａｓ患者血清中ｒｒＮＦ—ａ水平要显著高于健康人群的
ＴＮＦ 水平ｌ 。Ｇｒａｔａｅｏｓ等㈨发现ＡＳ患者血清
ＴＮＦ．ａ水平升高与疾病的活动性有很大的关系。以
上说明ＴＮＦ— 参与了ＡＳ的炎症过程，其水平升高与
ＡＳ的活动性有很大的关系。
ＨｌＪＡ—Ｂ２７是与ＡＳ易感性相关最密切的一类抗
原，在所有种族中ＨＬＡ—Ｂ２７皆与ＡＳ发病相关。本
实验中，ＨＩＪＡ．Ｂ２７阳性率在Ａｓ组和正常对照组中的
分布差异具有极统计学意义（ ＝１１４．９７５，Ｐ＝
０．０００），进一步验证了ＨＬＡ—Ｂ２７与ＡＳ的密切关系。
结合ＴＮＦＩａ＿２３８位点基因型和ＨＬＡ．Ｂ２７进行分析，
发现与单独ＨＩＡ—Ｂ２７阳性比较，ＨＬＡ。Ｂ２７阳性同时
Ｇ／Ｇ基因型阳性的ＯＲ值大于Ｇ／Ａ基因型的ＯＲ
值，但由于仅对３５名正常人进行ＨｌＡ—Ｂ２７抗原分
析，结果可能存在偏差。因此推测当ＴＮＦ心２３８基
因 为Ｇ／Ｇ时ＡＳ的患病风险可能增高。
综上，本实验结果显示ＴＮＦ心２３８位点各基因
型频率和ＴＮＦ Ｇ、Ａ等位基因频率与对照组相同，基
因型比较无显著性差异，提示湖南地区人群中ＴＮＦ．
ａ一２３８位点多态性与ＡＳ发病可能不相关，但如ＴＮＦ．
～一１ 一
一
ａ．２３８基因型为Ｇ／Ｇ时可能增高ＡＳ的患病风险。
总之，ＡＳ是多因素、多基因导致的免疫性疾病，可能
还有其它基冈参与了发病，其具体机制的阐明有待
于进一步扩大样本量以及对多个基因多态性同时进
行研究
４参考文献
～一２ ～一
寸立波等腺苷对大鼠缰核神经元自发放电活动及ｃ，ｆｏｓ蛋白表达的影响第２期
（７）：３８６—３８８．
－
１４５・
神经元ｃ—ｆ０ｓ蛋白的表达为１．２％±０．７％，对照组为
Ｏ．７％±０．６％，二者相比无显著的统计学差异（Ｐ＞
１３ ＭｃＡｒｔｈｕｒ Ａ Ｊ，Ｈｕｎｔ Ａ Ｅ，Ｇｉｌｌｅｔｔｅ Ｍ Ｕ．Ｍｅｌａｔｏｎｉｎ ａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｉｇｎＥｌ
ｔｒａｎｓｄｕｅｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ ｓｕｐｒａｃｈｉａｓ－ｍａｔｉｃ ｃｉｒｃａｄｉａｎ ｃｌｏｃｋ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ
０．０５），故我们目前不能对茶碱与大鼠睡眠．觉醒机制
的关系得出结论，有关这方面有待进一步研究。
ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉＮＥｓ Ｃ ａｔ ｄｕｓｋ ａｎｄ ｄａｗｎ［Ｊ］．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１９９７；１３８：６２７．
６３４．
１４ Ｋｉｍ Ｓ Ｍ，Ｖｉｍｌｅｓｈ Ｋｕｍａｒ，Ｙｏｎｇ－Ｑｉ Ｌｉｎ ｅｔ ａ１．Ｆｏｓ ａｎｄ Ｊｕｎ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅ ｉｎ—
ｄｉｖｉｄｕａｌ ｒｅｌｅａｓｅ ｓｉｔｅｓ ｎｄ ｍｏｂｉａｌｉｚｅ ｔｈｅ ｒｅｓｅｒｖｅ ｓｙｎａｐｔｉｃ．ｖｅｓｉｃｌｅ ｐｏｏｌ ａｔ ｔｈｅ
４参考文献
１ Ａｎｔｔｉ Ｖａｌｊａｋｋａ．Ｊｕｋｋａ Ｖａｒｔｉａｉｎｅｎ．ｋｅＮＥ ｒｒｕｏｍｉｓｔｏ．Ｔｈｅ ｆａｓｅｉｃｕｌｕｓ ｒｅｔｏｒ１ｆ．
ｅｘｕｓ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｔｈｅ ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ ｏｆ ＲＥＭ ｓｌｅｅｐ ｂｙ ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ ｔｈｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｌａｒｖａｌ ｍｏｔｏｒ ｓｙｎａｐｓｅ￣Ｊ Ｊ．ＰＮＡＳ，２００９；１０６：４０００－４００５．
１５ Ｍｉｚｏｇｕｃｈｉ Ａ，Ｅｇｕｃｈｉ Ｎ，Ｋｉｍｕｒａ Ｋ ｅｔ ａ１．Ｄｏｍｉｎａｎｔ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄ ｉｎ Ｄ２ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｏｎ ａｒａｃｈｎｏｉｄ ｔｒａｂｅｃｕｌｒ ｃｅｉａｌｓ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｂａｓａｌ
ｆｏｒｅｂｒａｉｎａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｎ．．ｒａｐｉｄ ｅｙｅ ｍｏｖｅ．．
ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｔｈｅｔａ ｒｈｙｔｈｍ ａｎｄ ｒａｐｉｄ ｅｙｅ ｍｏｖｅｍｅｎｔｓ ｉｎ ｒａｔｓ［Ｊｊ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅ—
ｓｅａｒｃｈ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ．１９９８；４７（２）：ｌ７１—１８４．
２ Ｉｓａａｃ Ｈ Ｂｉａｎｃｏ，Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｗ Ｗｉｌｓｏｎ．Ｔｈｅ ｈａｂｅｎｕｌａｒ ｎｕｃｌｅｉ：ａ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ
ｍｅｎｔ ｓｌｅｅｐ［ＪＪ．Ｐｒｏｃ Ｎａｉｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２００１；９８：１１６７４—１１６７９．
１６王永中．中枢神经系统腺苷受体［Ｊ］．国外医学・生理、病理科学
与临床分册，２００２；２２（５）：４９０４９３．
１７ Ｃ０ｎｄｅ Ｓ Ｖ．Ｍｏｎｔｅｉｒｏ Ｅ Ｃ．Ｏｂｅｓｅ Ａ ｅｔ ａ１．１ｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ａ ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌｌｙ
ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ ｒｅｌａｙ ｓｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ ｂｒｉａｎｌＪｊ．Ｐｈｉｌ Ｔｒａｎｓ Ｒ Ｓｏｃ Ｂ，
２００９；３６４：１０ｏ５．１０２０．
３林剑萍，赵华．利用褪黑素对缰核神经元单位放电的影响及可
能机制［Ｊ］．中国应用生理学杂志，２００６；２２（３）：２５３—２５６．
４ Ｃｌａｒｅ Ｊ Ｒａｙ．Ｊａｎｉｃｅ Ｍ Ｍａｒｓｈａｌ１．Ｅｌｕｃｉｄａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｌ１ｅ ｒａｔ ０ｆ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ
ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ａｎｄ Ａ２Ａ．．ｒｃｅｐｔｅｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒａｅｍｉａ ｏｆ ｔｗｉｔｃｈ ａｎｄ ｔｅｔｎｉａｃ ｃｏｎ．．
ｏｖｅｒｌｏｏｋｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌｅ［ＪＪ．Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ，２００９；６４８：１４５．１５９．
１８ Ｈａｙａｉｓｈｉ Ｏ．Ｐｒｏｓｔａｇｌｎｄｉａｎｓ ａｎｄ ｓｌｅｅｐ［Ｊ Ｊ．Ｎｉｐｐｏｎ Ｒｉｎｓｈｏ，１９９８；５６：２８５—
２８９．
１９陈爽，张小雪，何瑞荣ｅｌ ａ１．窦内压升高和灌流腺苷激活颈动
脉窦压力感受器时延髓内ｃ．ｆｏｓ蛋白的表达［Ｊ］．生理学报，１９９９；
５１（２）：１９３．１９８．
２０ Ｍａｒｋｓ Ｇ Ａ，Ｂｉｒａｂｉｌ Ｃ Ｇ．Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｒａｐｉｄ ｅｙｅ ｍｏｖｅｍｅｎｔ ｓｌｅｅｐ ｉｎ
ｈｅ ｒａｔｔ ｂｙ ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ ａｎｄ ａｄｅｎｏｓｉｎｅｒｇｉｃ ａｇｏｎｉｓｔｓ ｉｆｕｓｅｄ ｉｎｎｔｏ ｔｈｅ ｐｏｎｔｉｎｅ
ｔｒａｃｔｉｏｎｓ［Ｊｊ．Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００９；５８７：１５６５一ｌ５７８．
５ ＬＧ Ｅｃｋｅｒｌｅ．Ｍ Ｌｕｃａｓｓｅｎ．Ｔ Ｈｉｉｓｅ ｅｔ ａ１．Ｐ６ｒｔｎｅｒ Ｃｏｌｄ ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ
ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｃｏｍｍｏｎ ｅｅｌｐｏｕｔ（Ｚｏａｒｃｅｓ ｖｉｖｉｐａｍｓ）：ａ ｒｏｌｅ ｉｎ ｍｅｄｕ—
ｌａｔｉｎｇ ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｃ ｏｘｉｄａｓｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌ Ｊｊ．Ｊ Ｅｘｐ Ｂｉｏｌ，２００８；２１１：１２６２—
１２６９．
６ Ｂａｓｈｅｅｒ Ｒ，Ｈａｌｌｄｎｅｒ Ｌ，Ａｌａｎｋｏ Ｌ ｅｔ ａ１．Ｏｐｐｏｓｉｔｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ａｄｅｎｏｓｉｎｅ Ａｊ
ｒｅｔｉｃｕｌｒ ａｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１９９８；８６：２９ ３７．
２１霍艳，李经菜，江岩ｅｔ ｏ１．褪黑素对小鼠视交叉上核ｃ． 基
因表达的影响［Ｊ］．中国药理通报，２０００；１６（３）：２６１．２６４．
２２ Ｇｅｓｓｉ Ｓ，Ｍｅｒｌｇｈｉ Ｓ，Ｖａｒｎｉａ Ｋ ｅｔ ．ｈｅ Ａ３ ａｄｅｎｏｓｉＴｎｅ ｒｅｃ即ｔｏｒ：Ａｎ ｅｎｉｇ．
ｎｄ Ａ２Ａ ｒａｅｃｅｐｔｏｒ ｍＲＮＡ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｓｌｅｅｐ ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎｌＪ Ｊ．Ｎｅｕ—
ｏｒｒｅｐｏｒｔ，２００１；１２：１５７７—１８０．
ｍａｔｉｃ ｐｌａｙｅｒ ｉｎ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ［Ｊ Ｊ．Ｐｈａｍｍｃｏｌ＆Ｔｈｅｒａｐ，２００８；ｌ１７：１２３—
１０．４
７ Ｒｅｂｏ Ｎ，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ Ｒ Ｊ，ｌｏｐｅｓ Ｌ Ｖ ｅｔ ａ１．ＡｄｅｎｏｓｉｎｅＡ（１）ａｎｄＡ（２Ａ）ｒｅ—
ｃｅｐｔｏｒｓ ａｒｅ ｃｏ－－ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｐｙｒａｍｉｄａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ ａｎｄ ｃｏ－－ｌｏｃａｌｉｚｅｄ ｉｎ ｇｌｕｔａ－・
２３ Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ Ｒ Ｓ．Ｓｈｉｒａｈａｔａ Ｍ，Ｗａｎｇ Ｈ Ｙ ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ａｄｅｎｃｓｉｎｅ
ｏｎ ｔｈｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ，ｄｏｐａｍｉｎｅ，ａｎｄ ｎｏｒｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ ｆｒｏｍ ｔｈｅ
ｍａｔｅｒｇｉｃ ｎｅｒｖｅ ｔｅｒｍｉｎａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｔ ｈｉｐｐｏｃｍｎｐｕｓｌＪｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，２００５；
１３３（１）：７９—８３．
ｅａｔ ｃａｒｏｔｉｄ ｂｏｄｙＩ Ｊ １．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ，２ＯＯ４；３６７：３０４—３０８．
８王任烨，狄枫．腺苷及其受体在神经系统中的生物学作用［Ｊ］．
国外医学药学分册，２００６；３３（４）：２７９—２８２．
９钱忠名，肖德生，徐斌．ｃ．ｆｂｓ表达与心理应激脑机制的研究［Ｊ］．
生理科学进展，１９９７；２８（１）：５２—５４．
１０ Ｔｊｉｎｇ－ＴｊｉｎｇＨｕ．Ａｒｍｅｌｉｅｓ Ｌａｅｒｅｍａｎｓ．ＵｌｆＴ．Ｅｙｓｅｌ ｅｔ ａ１．ｎａｌＡｙｓｉｓ ｏｆｃ－ ｓ
ｎｄ ｚｉａｔ２６８ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｒｅｖｅａｌｓ ｔｉｍｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｓｉｄｅ
ｎｄ ｏｕｔａｓｉｄｅ ｔｈｅ ｌｓｉｅｏｎ ｐｒｏｊ’ｃｔｅｉｏｎ ｚｏｎｅ ｉｎ ａｄｕｌｔ ｃａｔ ａｒｅａ １７ ａｆｔｅｒ ｒｅｔｉｎａｌ
２４陈爽，范振中，何瑞荣．腺苷对颈动脉窦压力感受器反射的易
化作用［Ｊ］．生理学报，１９９８；５０（３）：２９６—３０２．
２５ Ｋｏｎｇ Ｔ，Ｗｅｓｔｅｒｍａｎ Ｋ Ａ，Ｆａｉｇｌｅ Ｍ ｅｔ ａ１．ＨＩＦ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ
ａｄｅｎｏｓｉｎｅ Ａ２Ｂ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ｈｙｐｏｘｉａ［Ｊｊ．ＦＡｓＥＢ Ｊ，２００６；２０：２２４２－２２５０．
２６ Ｏｒｔｉｚ Ｇ Ａ，Ｂｉｎｃｈｉａ Ｎ Ａ，Ｔｉｅｄｅ Ｍ Ｐ ｅｔ ａ１．Ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ Ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ｅｎ．
ｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ａｆｔｅｒ ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｃａｆｆｅｉｎｅ ｆｏｒ ｐｏｓｔ—ｌｕｍｂａｒ ｐｕｎｃ．
ｔｕｒｅ ｈｅａｄａｃｈｅｓｌＪｊ．ＡＪＮＲ Ａｍ Ｊ Ｎｅｕｒｏｒｄｉａｏｌ，２０ｏ９；３０：５８６—５８７．
ｌｓｉｅｏｎｓ［Ｊ］．Ｃｅｒｅｂ Ｃｏｒｔｅｘ，２００９；１９：２９８２．２９９２．
１ｌ马秀英，张连珊，何瑞荣．心外膜应用腺苷时ｃ．ｆｏｓ在脊髓、延髓
和丘脑中的表达［Ｊ］．生理学报，１９９７；４９（４）：３９５—３９９．
１２王琳 睡眠机制的研究进展［Ｊ］．中国实用内科杂志，２００３；２３
［收稿２００９—０８—２１修回２００９—１ １－１３］
（编辑张晓舟）
（上接第１４０页）
９ Ｃｂｅｏｎｇ Ｊ Ｙ，Ｃｈｏ ＳＷ，ＨｗａｎｇＩ Ｌ ｅｌ ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｃｈｒｏｎｉｃｂｅｐ—
ａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１０，ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ－ａｌｐｈａ ｇｅｎｅ
ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ【ＪＪ．Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｅｈａｂｉｌｉｔａ—
ｔｉｏｎ．２０ｏ５：９：２５２—２５４．
ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｌ Ｊｊ．Ｊ Ｇａｓｔｏｒｅｎｔｅｍｌ Ｈｅｐａｔｏｌ，２００６；２１：１１６３一
ｌ１６９．
１７ Ｍｅｇａｒｒｙ Ｆ，Ｎｅｉｌｌｙ Ｊ，Ｓｔｕｒｒｏｃｋ Ｒ Ｄ ｅｔ ａ１．Ａ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｗｉ山ｉｎ出ｅ ｉｎｔｅｒ．
１ｅｕｋｉｎ １ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ＩＬ—Ｒ ａ ｇｅｎｅ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｈ ａｎｋｙｌｏｔｓｉｎｇ
１０陈红波，涂胜豪，胡永红．单核苷酸多态性在类风湿关节炎中的
研究进展［Ｊ］，中华风湿学杂志，２００４；８（３）：１７１ １７３．
１１ Ｍａｄａｎｉ Ｓ，ＮｏｏｒｉｎａｙｅｒＢ，ＭａｄａｎｉＨ ｅｔ ａ１．Ｎｏａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎＴＮＦ－ａｌ—
ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ（ＡＳ）［Ｊｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ，２００１；４Ｊ０：１３５９・１３６４．
１８向萍霞，李艳，张平安ｅｔ ａ１．中国汉族人群中肿瘤坏死因子一
２３８位点基因多态性与血糖、血脂关系的研究［Ｊ］．微循环学杂
志，２００４；１４（４）：２４．２６．
１９ Ｇｏｎｚａｌｅｚ Ｓ，Ｒｅｄｒｉｇｏ Ｌ，Ｂｏｒｒａ Ｊ Ｍ ｅｔ ａ１．ＴＮＦ一Ⅱ一３０８Ａ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｐｅｌｙｍｏｒ—
ｐｈｉｓｍ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｄ ｗｉｅ山ｅｎｈａｎｃｅｄ ＴＮＦ．Ｑ ａ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｆｌａｎｍａａｔｏｒｙ
ｐｈａ－２３８ ｐｅｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ａｎｄ ｃｏｌｏｒｃｔｅｌａ ｃａｎｃｅｒ ｉｎ Ｉｒａｎｉａｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊｊ．Ａｃｔａ
Ｏｎｃｏｌ，２００８：４７：４７３４７４．
１２杨宇，苏卓娃，陈群．基因多态性与强直性脊柱炎发病相关
性的研究进展［Ｊ］．热带医学杂志，２００６；６（１０）：１１３８—１１４０．
１３李永念，廉玮晟，左丽．贵州三个主要民族人群ＴＮＦ—ａ基因启
动子区 核苷酸多态性分析［Ｊ］．中国免疫学杂志，２００８；２４（６）：
５４５．５４８．
ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ Ｃｒｏｈｎ’ｓ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｆｉｓｔｕｌｉｚｉｎｇ ｄｉｓｅａｓｅ ｌＪｊ．Ａｍ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎ．
ｔｅｒｏｌｏｇｙ，２００３；９８：１１０１—１１０４．
２Ｏ马文松，朱小弟，杜冀晖ｅｔ ａ１．细胞因子ＴＮＦ．ａ及ＣＤ９５对强直性
脊柱炎影响的研究［Ｊ］．湖北预防医学杂志，２００２；１３（１）：４２ ．
２１ Ｇｒａｔａｃｏｓ Ｊ，Ｃｏｉｌａｄｏ Ａ，Ｆｉｌｌｅｌｌａ Ｘ ｅｔ ａ１．Ｓｅｒｕｍ ｅｙｔｏｋｉｎｅｓ（ＩＬ－６，ＴＮＦ—ａ，
Ｉｌ，ｌＢ ａｎｄ ＩＦＮ—ｒ）ｉｎ ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ ｓｏｎｄｙｌｐｉｔｉｓ：ａ ｃｌｏｓｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ
１４陈秉朴，韦叶生，解继胜ｅｔ ａ１．广西地区汉族人群ＴＮＦ．ｑ基因启
动子２３８ Ｇ／Ａ多态性分布的研究［Ｊ］．中同组织化学与细胞化学
杂志，２００５；１４（５）：９８３．９８５．
ＩＬ－６ａｎｄ ｄｉｅａｓｅ ａｃｔｓｉｖｉｔｙａｎｄ ｓｅｖｅｒｉｔｙ［ＪＪ．Ｂｒ ＪＲｈｅｕｍａｔｏｌ，１９９４；３３：９２７．
９３】．
１５杨波，陈蕊雯，段世伟ｅｔ ａ１．肿瘤坏死因子基因多态性对强赢
性脊柱炎的易感性和临床表现型的影响［Ｊ］．第二军医大学学
报，２００４；２５（２）：１２５．１２８．
１６ Ｈａｎ Ｘ Ｈ，Ｃｈｅｎ Ｒ Ｗ，Ｄｕａｎ Ｓ Ｗ ｅｔ ａ１．Ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ａｌｐｈａ ｇｅｎｅ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｉｎ ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ ｓｐｅｎｄｙｌｉｔｉｓ：ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｉｅａｓｓｅ
［收稿２００９—０７—２５修回２００９—０９—０９］
（编辑张晓舟）