2024年2月21日发(作者：公叔又青)
・２５２・新乡医学院学报Ｊｏｕｍａｌ０ｆ）（ｉｎｘｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌＣ０ｎｅｇｅｖ０１．２１№．４Ｊｕ１．２００４基质金属蛋白酶一２、一９在大鼠肝纤维化中的表达及意义曹名波（西安交通大学第一医院内科，陕西西安７１００６１）目的探讨基质金属蛋白酶、２（＾低倒Ｐ－２）、基质金属蛋白酶．９（Ｍ＾伊一９）与肝纤维化的摘要：关系。方法用皮下注射四氯化碳的方法建立大鼠化学性肝纤维化模型，并在第４周、８周、１２周末处死大鼠，采用免疫组织化学方法分别检测肝组织中＾ｎ伊一２、＾心压Ｐ－９的表达。结果ｈｎ艘一２主要位于血管内皮细胞、肝窦内皮细胞及肝窦细胞的胞浆，ｎｎ伊一９主要位于静脉周围的肝窦细胞的胞浆。肝纤维化组Ｍ＾厦Ｐ－２、ＭＭＰ－９免疫组化阳性表达面积明显高于对照组（Ｐ＜０．０５），并随造模时间延长而进行性增加。结论Ｍ＾伊．２和Ｍ＾压Ｐ－９参与了肝纤维化的进展。关键词：基质金属蛋白酶；肝纤维化；肝窦内皮细胞；库普弗细胞；免疫组织化学；大鼠中图分类号：Ｑ５５６＋．５文献标识码：Ａ文章编号：１００４—７２３９（２００４）０４—０２５２—０３Ｅｘｐｒｅｓｓｉ蚰ａｎｄｓｉ妒ｉｆｉ伽ｃｅｏｆ删嗡ｔｒｉｘｍ制ｌｏｐＩⅥｔｅｉＩＩａｓｅ－２甜Ｉｄ－９ｗｉｔｈｉｎｒａｔｈｅ阳ｔｉｃｆｉｂ阳ｓｉｓＣＡｏＭｉｎｇ．ｂｏ（Ｄ伽ｎｍｅ挖￡盯黝ｉｃｉ扎８，ｆ矗ＰＡｂ帜ｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ（Ｍ＾但一２）ａｎｄｈ心＾Ｐ－９ｉｎＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｆ磁您ｆＨ却ｉ纽Ｚ衫Ｘｉ’口竹－，缸。幻喇｝渤ｉ馏掩ｉ锣，艇’ｎｎ７１００６１，（硫ｉ咒ｎ）ｄ”枷ｃｃｈａｎｇｅａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍａｔｄｘｍｅｔａｌｌ叩ｒｏｔｅｉｎａｓｅｌ２ａｎｄｒａｔ谢ｔｈｅ）【ｐ商ｍｅｎｔａｌｃｈ锄ｉｃａｌｈｅｐａｔｉｃｆｉｂｒｏｓｉｓ，ａＩｌｄｅ）【ｐｌ（）ｒｅｔｈｅｒＯｌｅｏｆＭ＾嗄Ｐ一２ａｎｄ＾哇ＭＰ一９ｉｎｌｉｖｅｒｆｉｂｒ０６ｉｓ．Ｍｅｔｌ的ｄＲａｔｍ。ｄｄｓｏｆｅｘｐｅｄｍｅｎｔａｌａｎｄｃｈｅｍｉｃａｌｈｅｐａｔｉｃｆｉｂｒｏｓｉｓｗｅｒｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｉｎｔｒａｐｅ＾ｔｏｎｅａＵｙｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈｃａ．ｒｂｏｎｆｉｃｅｄａｔｔｅｔｒａｃｈｌ商ｄｅ．Ｔｈｅｓｅｒａｔｓｗｅｒｅｒｅｓｐｅｃｖｉｅｌｙｓａｃｎ—ｔｈｅ∞ｄｏｆ４ｔｈ，８ｔｈａｎｄ１２ｔｈｗｅｅｋｓｄ血ｎｇｔｈｅＳｔｕｄｙ．Ｔ１１ｅＩｅｖｄｓａｎｄ雠ｐ∞ｅｓｓｉｏｎｏｆＭ＾ｄＰ－２ａｎｄｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＭ＾一Ｐ一９啪ｓｓ．ｎｕ鲥ｄ，ａｎｄｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｒＩｌｉｓｔ呵ｄｕｒｉｎｇｄｉｆｆｅｒ∞ｔｓｔａｇｅｓ．Ｒ悠ｌｌｌｂＢｙｉｎｍｌｕｎｏｈｉ蛐０ｃｈｅ—ｍｉｓｔｒｙ，＾心，ＩＰ．２ｗａｓ１１１ａｉｎｌｙｅ）【ｐｒ瞍划ｉｎｓｉｎｕ鲥ｄａｌｅｎｄｏｔｈｅＩｉａｌｃｄｌＳ，ｖａｓｃｕＬａｒ印曲ｔｈｄｉａｌｃｅｌｌｓａｎｄｃｄｌＳｉｎｔｈｅＭＭＰ９ｗａｓｍａ；Ｊ１ｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｔｈｅｃｙｔｏｐｌ８ｓＩｌｌ０ｆＳｉｎ喇ｄａｌｃｅｌｌｓ㈣ｄｅｒｅａｖｅｉｎ．Ｔｈｅｒｅ一“ｔｓｏｆｍｍｕ∞ｈｉｓｔｏｃｈｄｎｉｃａｌＳｔ撕１１９ｓｋ帅ｔｈａｔｈｉｇｈｅｒｉｎｒａｔｓｔｈｅｐ０６ｉｔｉｖｅｓ协ｍＩｌｇｏｆ＾删肚２ａＩｌｄⅦ以Ｐ－９ｗａｓｓｔａｎ—ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｇｅｒｅａｏｆｍＯｃＩｄ鼢ｌｐｔｈａｎｔｋ）ｓｅ０ｆ００ｎｔｒ０Ｉｇ删ｐ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄｔｈｅｐｏｓｉｔｉＶｅｉｎｃｒｅａｓｅｄ、＾，ｉｔｈｔｈｅ舯３９ｒｅ鹤ｏｆｈｅ阳ｔｉｃｆｉｂｌｌ。甑ｓ．ｆｉｂｒｏｓｉｓ．洲暖ｉ帅ＭＭＰ－２ａｎｄ一９ｍｉｇｈｔｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｈ印ａｔｉｃ１【ｅｙｗｏｎｂ：ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ；ｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓ；Ｓｉｎｕ幽ｄａｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ；Ｋｕｐｆｆｅｒｃｅｌｌｓ；ｉｍ—ｍｕｎ０＿ｈｉｓｔｏｃｈａ“ｓｔｒｙ；ｒａｔ肝纤维化（ｈｅｐａｔｉｃｆｉｂ硒ｉｓ，ＨＦ）是指各种致病因子引起的肝脏损害和炎症，进而导致纤维结缔组织广泛增生和沉积。其本质是肝脏对各种损害的一种愈合反应。但这种反应的结果导致肝脏功能受损¨Ｊ。在这个进行性的病理过程中，涉及多种细胞与分子因素的作用，引起细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｎｌａｔｒｉｘ，ＥＣＭ）合成与降解过程调节机制上的改变，这种改变有利于促进ＥＣＭ合成、沉积增多，而降解相对减少甚至抑制，其结果是肝细胞功能进一步受损、肝脏结构破坏而最终导致肝硬化。其中心过程是肝星状细胞（ｈｅｐａｔｉｃＳａｔｅｌｌｉｔｅｃｅｌｌｓ，ＨＳＣ）的活化而合成大量的ＥＣＭ，特别是Ｉ、Ⅲ型胶原的产生与沉积。在肝内参与ＥＣＭ降解的主要是基质金属蛋白类（ｍａｔｒｉｘｒｎｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ，ＭＩ＼但ｓ），它包括明胶酶、间质型胶原酶、基质溶解酶和膜型基质金属酶４类。间质型胶原酶ＭＭＰ—ｌ可以降解Ｉ、Ⅲ型胶原，收稿日期：２００４—０２一１１作者简介：曹名波（１９７３一），男，河南信阳人，讲师，硕士在读，礤｝究＿方向：旰病及消化系统疾病。万方数据
新乡医学院学报ＪｏｕｍａｌｏｆｘｉｎｘｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌ（Ｈｌｅｇｅｖ０１．２１Ｎｏ．４Ｊｕ１．２００４・２５３・预防或逆转肝纤维化；明胶酶ＭＭＰ．２、＾，ＩＭＰ．９降解Ⅸ蝎显色、脱水、透明、中性树胶封固。以肝细胞胞Ⅳ型胶原，可以降解正常肝脏的内皮下基质，破坏肝浆内有棕色颗粒为阳性，用病理图像分析仪分析。脏的正常结构，诱发或加剧肝纤维化。因此本研究每张切片选取５个高倍（１０×４０）视野，读取阳性细动态观察了化学性肝纤维化动物模型在肝纤维化过胞数，１０倍物镜下测定阳性反应面积百分比（阳性程中Ｉ＼，ＩＩ＼ｄＰ一２、ＭＭＰ．９的表达，并探讨了ＭＭＰ．２、厩积／肝组织面积×１００％），取平均值。ＭＭＰ一９与肝纤维化的可能关系，旨在阐明ＭＭＰ一２、１．４统计学处理数据经ＳＰＳｓ７．０作方差分析ＭＭＰ一９与肝纤维化的作用。（多样本均数的两两比较）和相关分析及ｑ检验。ｌ材料与方法２结果１．１动物及分组清洁级雄性ＳＤ大鼠５４只，购２．１大鼠肝脏组织病理学改变模型组大鼠４周、８自西普尔一必凯公司，体重１４０～１８０ｇ，随机分组：周、１２周未髓及Ｍａｓｓｏｎ染色可见肝细胞逐渐出正常对照组１８只，模型组３６只。模型组大鼠给予现灶性或片状坏死，大量炎细胞浸润及胶原纤维进４０％四氯化碳花生油混合液，以１．２“・ｋｇｏ体重行性增多，胶原纤维沿汇管区或炎症坏死区向外延皮下多点注射，每周２次，共１２周。对照组以等量伸，形成厚薄不一的纤维间隔分割包绕肝小叶，１２花生油同样方法注射。于４、８、１２周末随机分别处周时局部有假小叶形成。Ｍａｓｓｏｎ染色病理图像分死每组大鼠，模型组每次１２只，对照组每次６只。析：模型组胶原含量明显高于对照组（Ｐ＜Ｏ．０５），且麻醉后剖腹取肝脏，置于中性福尔马林液固定，进行随造模时间延长其含量进行性增加（Ｐ＜０．０５）。各病理学及免疫组化检测。期对照组大鼠肝脏组织学差异均无显著意义１．２主要试剂四氯化碳由西安化学试剂厂生产，（Ｐ＞０．０５）。见表ｌ。ＭＭＰ一２、ＭＭＰ一９多克隆抗体为美国ｓａｎｔａＣｒｕｚ公表ｌ两组大鼠组织胶原纤维面积比（％）司产品，ＳＰ试剂盒购于北京中山生物技术有限公Ｔａｂ．１Ｒａｔｉｏｏｆａ嗽０ｆ酬ｌａｇｅ舯峪ｎｂ瑚ｉｓｉｎｌｉｖｅｒｔｉｓ锄司。一ｉｎｔｗｏ殍岬（％）１．３免疫组化检测肝组织经中性福尔马林固定，组别ｎ４周８周１２周石蜡包埋，常规陋染色及ＭａｓＳｏｎ三色胶原染色。对照组６５．４２±２．１０９．８２±９．２９５．７８±１．７８ＭａｓＳｏｎ染色结果用病理图像分析仪分析。每张切模型组１２１４．８５±１２．０４ａ２３．３９±２４．２ｌ幽２７．０３±１６。７６妇片选四周及中央５个区域，取胶原纤维含量最多的与对照组相比８Ｐ＜Ｏ．０５；与４周相比６Ｐ＜０．０５；与８周视野（每个视野包括汇管区），１０倍物镜下测定胶原比较。Ｐ＜Ｏ．０５面积百分比（胶原纤维面积／肝组织面积×１００％），２．２舯．２、ＭＭＰ．９在肝组织中的表达ＭＭＰ一取平均值。肝组织经固定后，３０％蔗糖溶液中４℃２、Ｍ＾，ＩＰ一９在肝组织中表达的阳性物质呈棕黄色，过夜。免疫组化染色采用ＳＰ法。冰冻组织切片４ｌ、心俾．２主要位于肝窦内皮细胞、血管内皮细胞及肝肛ｍ，切片常规脱蜡至水。用体积分数为３％Ｈ２０２室窦细胞的胞质；ＭＭＰ．９主要位于静脉周围的肝细胞温处理１０ｍｉｎ以灭活内源性过氧化物酶。加入正及肝窦细胞的胞质。模型组ＭＭＰ．２、Ｍ＾但．９阳性常血清工作液及ＭＭＰ．２、ＭＩ、压Ｐ一９一抗（１：５０稀释），表达面积明显高于对照组（Ｐ＜００５），并且随造模时间延长进行性增加。见表２。表２两组大鼠肝组织ｈ岱ｍ．２、＾ｏ锄Ｐ－９免疫组化阳性表达面积比（％）’ｒａｂ．２Ｒａｔｉ０ｏｆａ嘲ｏｆｐ惦ｉｔｉｖｅｅｘｐ他ｓｓｉ咖ｏｆＭＭＰ－２，ＭＭＰ－９ｉＩＩｌｉｖ盯ｔｉ豁ｌ翳ｉｎｔｗｏｇｒｏｕ陌（％）与对照组相比８Ｐ＜０．０５；与４周相比６Ｐ＜Ｏ。０５；与８周比较。Ｐ＜０．０５万 方数据
新乡医学院学报ＪｏｕｍａｌｏｆｘｉｎｘｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌＣＯＵｅｇｅＶ０１．２１№．４Ｊｕ１．２００４２讨论应【４，５ｌ，明胶酶Ｍ御。２、Ｍ脚一９主要参与基底膜Ⅳ型胶原的代谢，降解正常肝窦基底膜，破坏肝脏细胞肝纤维化是继发于肝脏炎症或损伤后组织修复生存的内环境，有利于ＨｓＣ激活，与肝纤维化的发过程中的代偿反应，ＥＣＭ合成增加、降解减少，最终生发展紧密相关。ＭＭＰｓ在肝内主要由肝星状细胞导致ＥＣＭ在肝内的过度沉积，引起肝纤维化以致肝（ＨＳＣ）和Ｋｕｐｆｆｅｒ分泌表达［６ｌ。在纤维化早期，硬化。正常肝脏Ｄｉｓｓｅ间隙内ＨＳＣ处于由Ⅳ型胶原、ｌ、心伊ｓ轻度增高，而肝纤维化中晚期，ＭＭＰｓ活性则层连蛋白和蛋白多糖等构成的基底膜型基质环境明显降低，以致于Ｅ（、Ｍ合成超过降解，引起ＥＣＭ中，可保持静止状态，一旦移出这种环境，ＨＳＣ就会大量沉积［７ｌ。通过调节ＭＭＰｓ活性，有助于增加基被活化变为肌成纤维样细胞。这提示正常肝脏基质质的降解，促进肝纤维化的逆转。Ｔａｋａｈａｒａ【８ｊ用的降解有助于肝纤维化的形成，特别是在肝损伤反Ｎｏｒｔｈｅｍ杂交法检测人纤维化肝脏中ＭＭＰ一２比正应的早期。因为当肝纤维化时，细胞外基质重构，常对照组高１．４倍，免疫电镜检测Ｍ御．２表达主ＤｉＳｓＩｅ腔正常的不连续的Ⅳ型胶原转变为连续性，并要集中于ＨＳＣ以及纤维化区域的成纤维细胞，说明且Ｉ、Ⅲ型胶原增多。如胶原酶活性下降，引起胶原其来源于以上细胞。Ｈａｙａｓａｋａ【９Ｊ研究表明在肝纤维纤维沉积予ＤｉｓＳｅ腔，导致肝窦毛细血管化和胶原化过程中ＭＭＰ．９较正常组的表达逐渐增加，免疫化，是多种慢性肝病的病理基础。许多研究都表明荧光法证实ＭＭＰ一９主要产生于Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞。实基质金属蛋白酶随肝纤维化进展而呈动态变化，肝验发现，＾心僻．２主要位于窦内皮细胞、血管内皮细纤维化是ＥＣＭ生成与降解过程失衡的结果【２，３ｆ。胞及肝窦细胞，＾，ＩＭＰ一９主要位于静脉周围的肝细胞ＭＭＰｓ是一组能降解ＥＣＭ成分的重要蛋白分解及肝窦细胞，与以上研究结果相似。就此，ＭⅧ一２、酶，ＭＭＰｓ是一组锌酶，几乎能降解除多糖以外的所Ｍ＾但．９与肝纤维化关系密切，可能起促进作用。有ＥＣＭ成分，并能使别的ｌ、ｎ但ｓ激活，形成瀑布效参考文献：［１］ＬｉＤ．Ｆｒｉｅｄｍ蚰ＳＬ．Ｌｉ、ｒｅｒｆｉｂｒ。ｇｅｎ商ｓａｎｄｔｈｅｄｅｏｆｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｕａｔｅｃｅｌｌｓ：ｎｅｗｉＩｌＳｉｇｈｔｓａＩｌｄｐｒｏｓｐｅｃｔｓｆｏｒｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．ＪＧｈ豇ｒ唧挖细讲Ｈ￡舡删，１９９９，１４：６１８—６３３．［２］ＶａｌｋｏｖａＭ＋Ｈｅｐａｔｉｃｆ．ｂｒｃ曙ａ惜ｂ［Ｊ］．Ｂ，ｎ￡ｉ“Ｌ头Ｌｉｓ幻，，２００２，１０３：７６—８５．［３］Ｍｕｒａ、ⅣａｋｉＹ，Ｋａｗ蝴ｌ【ｉＨ．ＰａｔｈｏｐｈｙＳｉ０１０９ｙｏｆｈｅｐａｔｉｃｆｉｂｒ０８ｉｓ［Ｊ］．Ｎｉ坳Ｈ翻如＾渤∞Ｇｃ浊ｋｉ２｜ｎｓｓＩｌｉ，１９９９，９６：１１４３．１１５２．【４］ｗａｔａｎａｂｅＴ，Ｎｉｉ０＿ｋａＡ。Ｈ（珊ｗａｓ，露“．Ｄ３ｍ毗ｄｃｃ１１ａｎｇｅｏｆｃｅｌｌｓｅｘｐｒ氆函ｆｌｇＭＭＰ一２ｍＲＮＡａｎｄＭＴｌ一ＭＭＰｒｒ】Ｉ矾Ａｉｎｔｈｅｒｅｃ删ｆｍｒｎｂ、，ｅｒｆｉｂｒＤｓｉｓｉｎｔｈｅｒａｔ［Ｊ］．Ｊ拖细“，２００１，３５：４６５—４７３．［５］Ｌ池ｔｉｎｇｈａｇｅｎＲ，ＭｉｃｈｅｉｓＤ，姒＿ｂｅｆ妇ｎＣＩ，群４２．Ｍ８ｔ淑ｍｅｔａｕｏｐ赋西ｎａｓｅ（ｍ腰）．２，矗恐ｄＰ一７，ａｎｄｔｉＳｓｕｅｉ幽ｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｌａ啪ｔｅｉｎ瓣ｌａｒｅｃｌｏ鸵ＩｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｆｉｂＩＤｐｍｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｐｒｏｃｅｓｓｉｎｔｈｅｌｉｖｅｒｄ嘶Ｉｌｇｃｈ砌ｃｈｅｐａｔｉｔｉｓｃ［Ｊ］．．，胁加耐．２００ｌ，３４：２３９．２４７．［６］＆ｍｙｏｎＩ配，ＡｎｈｕｒＭＪ．Ｅ】ｍａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎａｒｌｄｔｈｅｍｌｅｏｆｈｅｐａｔｉｃＳｔｄｌａｔｅｃｅＵｓ［Ｊ］．＆辨抽Ｌｉ醒ｒ胰５，２００ｌ，２ｌ：３７３—３８４．［７］ｘｉｎｓＪ，ｚｏｕｚｓ．Ｍｅｔａ嘲ｉｚｅｏｆｅ）【ｔｒａｃｅＵｕｌａｒｒＩｌａｔｒｉｘ［Ｊ］凸抽儿硷，２００２，１０：５４．５６．［８］Ｔａｋａ：ＩｌａｒａＴ，ＦｕｍｉＫ，Ｆｕ∞ｋＪ，以口ｆ，Ｉｎｃｒ嗵ｓｅｄｅ】【ｐｒｅＳｓ疏ｏｆｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｒｍ盼２ｉｎｅ）【ｐｅｄｍ肌ｔａｌＩｉｖｅｒｆｉｂｒ璐ｉｓｉｎｒａｔｓ［Ｊ】，心加细缸秽。［９］Ｈａｙａ缸ｋａＡ，Ｓ皿ｕｌ【ｉＮ・Ｆｕｊ毗Ｎ．订ｎｆ．Ｅｌｅｖａｔｅｄ１９９５，２１：７８７—７９５．ｐＩａ锄ａｌｅ州ｓｏｆ啪ｔ＾ｘｍｅｔａｌｌｏｐｍｔｅｉｎ瓣９（９２ｋｄｔｙｐｅＩＶ∞ｌｈｇｅｎａｓｅ／ｇｅＩａｔｉｌｌａｓｅＢ）ｉｎｈｅｐａｔ０一ｃｅＩＩｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｈｉ抛细如斟，１９９６，２４：１０５８—１０６２．（本文编辑：徐自超）本刊常年征集获奖论文证书复印件为了客观评价我刊的学术质量和社会效益，了解我刊所发表论文的学术水平，我刊常年征集各种获奖证书和经济效益证明。凡在我刊发表过的有关论文的获奖证书均在征集之列。另外，凡提交证书复印件者，免费在本刊及时刊登研究信息及作者简介，并将优先发表该系列研究论文。本刊编辑都万 方数据
2024年2月21日发(作者：公叔又青)
・２５２・新乡医学院学报Ｊｏｕｍａｌ０ｆ）（ｉｎｘｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌＣ０ｎｅｇｅｖ０１．２１№．４Ｊｕ１．２００４基质金属蛋白酶一２、一９在大鼠肝纤维化中的表达及意义曹名波（西安交通大学第一医院内科，陕西西安７１００６１）目的探讨基质金属蛋白酶、２（＾低倒Ｐ－２）、基质金属蛋白酶．９（Ｍ＾伊一９）与肝纤维化的摘要：关系。方法用皮下注射四氯化碳的方法建立大鼠化学性肝纤维化模型，并在第４周、８周、１２周末处死大鼠，采用免疫组织化学方法分别检测肝组织中＾ｎ伊一２、＾心压Ｐ－９的表达。结果ｈｎ艘一２主要位于血管内皮细胞、肝窦内皮细胞及肝窦细胞的胞浆，ｎｎ伊一９主要位于静脉周围的肝窦细胞的胞浆。肝纤维化组Ｍ＾厦Ｐ－２、ＭＭＰ－９免疫组化阳性表达面积明显高于对照组（Ｐ＜０．０５），并随造模时间延长而进行性增加。结论Ｍ＾伊．２和Ｍ＾压Ｐ－９参与了肝纤维化的进展。关键词：基质金属蛋白酶；肝纤维化；肝窦内皮细胞；库普弗细胞；免疫组织化学；大鼠中图分类号：Ｑ５５６＋．５文献标识码：Ａ文章编号：１００４—７２３９（２００４）０４—０２５２—０３Ｅｘｐｒｅｓｓｉ蚰ａｎｄｓｉ妒ｉｆｉ伽ｃｅｏｆ删嗡ｔｒｉｘｍ制ｌｏｐＩⅥｔｅｉＩＩａｓｅ－２甜Ｉｄ－９ｗｉｔｈｉｎｒａｔｈｅ阳ｔｉｃｆｉｂ阳ｓｉｓＣＡｏＭｉｎｇ．ｂｏ（Ｄ伽ｎｍｅ挖￡盯黝ｉｃｉ扎８，ｆ矗ＰＡｂ帜ｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ（Ｍ＾但一２）ａｎｄｈ心＾Ｐ－９ｉｎＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｆ磁您ｆＨ却ｉ纽Ｚ衫Ｘｉ’口竹－，缸。幻喇｝渤ｉ馏掩ｉ锣，艇’ｎｎ７１００６１，（硫ｉ咒ｎ）ｄ”枷ｃｃｈａｎｇｅａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍａｔｄｘｍｅｔａｌｌ叩ｒｏｔｅｉｎａｓｅｌ２ａｎｄｒａｔ谢ｔｈｅ）【ｐ商ｍｅｎｔａｌｃｈ锄ｉｃａｌｈｅｐａｔｉｃｆｉｂｒｏｓｉｓ，ａＩｌｄｅ）【ｐｌ（）ｒｅｔｈｅｒＯｌｅｏｆＭ＾嗄Ｐ一２ａｎｄ＾哇ＭＰ一９ｉｎｌｉｖｅｒｆｉｂｒ０６ｉｓ．Ｍｅｔｌ的ｄＲａｔｍ。ｄｄｓｏｆｅｘｐｅｄｍｅｎｔａｌａｎｄｃｈｅｍｉｃａｌｈｅｐａｔｉｃｆｉｂｒｏｓｉｓｗｅｒｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｉｎｔｒａｐｅ＾ｔｏｎｅａＵｙｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈｃａ．ｒｂｏｎｆｉｃｅｄａｔｔｅｔｒａｃｈｌ商ｄｅ．Ｔｈｅｓｅｒａｔｓｗｅｒｅｒｅｓｐｅｃｖｉｅｌｙｓａｃｎ—ｔｈｅ∞ｄｏｆ４ｔｈ，８ｔｈａｎｄ１２ｔｈｗｅｅｋｓｄ血ｎｇｔｈｅＳｔｕｄｙ．Ｔ１１ｅＩｅｖｄｓａｎｄ雠ｐ∞ｅｓｓｉｏｎｏｆＭ＾ｄＰ－２ａｎｄｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＭ＾一Ｐ一９啪ｓｓ．ｎｕ鲥ｄ，ａｎｄｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｒＩｌｉｓｔ呵ｄｕｒｉｎｇｄｉｆｆｅｒ∞ｔｓｔａｇｅｓ．Ｒ悠ｌｌｌｂＢｙｉｎｍｌｕｎｏｈｉ蛐０ｃｈｅ—ｍｉｓｔｒｙ，＾心，ＩＰ．２ｗａｓ１１１ａｉｎｌｙｅ）【ｐｒ瞍划ｉｎｓｉｎｕ鲥ｄａｌｅｎｄｏｔｈｅＩｉａｌｃｄｌＳ，ｖａｓｃｕＬａｒ印曲ｔｈｄｉａｌｃｅｌｌｓａｎｄｃｄｌＳｉｎｔｈｅＭＭＰ９ｗａｓｍａ；Ｊ１ｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｔｈｅｃｙｔｏｐｌ８ｓＩｌｌ０ｆＳｉｎ喇ｄａｌｃｅｌｌｓ㈣ｄｅｒｅａｖｅｉｎ．Ｔｈｅｒｅ一“ｔｓｏｆｍｍｕ∞ｈｉｓｔｏｃｈｄｎｉｃａｌＳｔ撕１１９ｓｋ帅ｔｈａｔｈｉｇｈｅｒｉｎｒａｔｓｔｈｅｐ０６ｉｔｉｖｅｓ协ｍＩｌｇｏｆ＾删肚２ａＩｌｄⅦ以Ｐ－９ｗａｓｓｔａｎ—ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｇｅｒｅａｏｆｍＯｃＩｄ鼢ｌｐｔｈａｎｔｋ）ｓｅ０ｆ００ｎｔｒ０Ｉｇ删ｐ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄｔｈｅｐｏｓｉｔｉＶｅｉｎｃｒｅａｓｅｄ、＾，ｉｔｈｔｈｅ舯３９ｒｅ鹤ｏｆｈｅ阳ｔｉｃｆｉｂｌｌ。甑ｓ．ｆｉｂｒｏｓｉｓ．洲暖ｉ帅ＭＭＰ－２ａｎｄ一９ｍｉｇｈｔｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｈ印ａｔｉｃ１【ｅｙｗｏｎｂ：ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ；ｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓ；Ｓｉｎｕ幽ｄａｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ；Ｋｕｐｆｆｅｒｃｅｌｌｓ；ｉｍ—ｍｕｎ０＿ｈｉｓｔｏｃｈａ“ｓｔｒｙ；ｒａｔ肝纤维化（ｈｅｐａｔｉｃｆｉｂ硒ｉｓ，ＨＦ）是指各种致病因子引起的肝脏损害和炎症，进而导致纤维结缔组织广泛增生和沉积。其本质是肝脏对各种损害的一种愈合反应。但这种反应的结果导致肝脏功能受损¨Ｊ。在这个进行性的病理过程中，涉及多种细胞与分子因素的作用，引起细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｎｌａｔｒｉｘ，ＥＣＭ）合成与降解过程调节机制上的改变，这种改变有利于促进ＥＣＭ合成、沉积增多，而降解相对减少甚至抑制，其结果是肝细胞功能进一步受损、肝脏结构破坏而最终导致肝硬化。其中心过程是肝星状细胞（ｈｅｐａｔｉｃＳａｔｅｌｌｉｔｅｃｅｌｌｓ，ＨＳＣ）的活化而合成大量的ＥＣＭ，特别是Ｉ、Ⅲ型胶原的产生与沉积。在肝内参与ＥＣＭ降解的主要是基质金属蛋白类（ｍａｔｒｉｘｒｎｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ，ＭＩ＼但ｓ），它包括明胶酶、间质型胶原酶、基质溶解酶和膜型基质金属酶４类。间质型胶原酶ＭＭＰ—ｌ可以降解Ｉ、Ⅲ型胶原，收稿日期：２００４—０２一１１作者简介：曹名波（１９７３一），男，河南信阳人，讲师，硕士在读，礤｝究＿方向：旰病及消化系统疾病。万方数据
新乡医学院学报ＪｏｕｍａｌｏｆｘｉｎｘｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌ（Ｈｌｅｇｅｖ０１．２１Ｎｏ．４Ｊｕ１．２００４・２５３・预防或逆转肝纤维化；明胶酶ＭＭＰ．２、＾，ＩＭＰ．９降解Ⅸ蝎显色、脱水、透明、中性树胶封固。以肝细胞胞Ⅳ型胶原，可以降解正常肝脏的内皮下基质，破坏肝浆内有棕色颗粒为阳性，用病理图像分析仪分析。脏的正常结构，诱发或加剧肝纤维化。因此本研究每张切片选取５个高倍（１０×４０）视野，读取阳性细动态观察了化学性肝纤维化动物模型在肝纤维化过胞数，１０倍物镜下测定阳性反应面积百分比（阳性程中Ｉ＼，ＩＩ＼ｄＰ一２、ＭＭＰ．９的表达，并探讨了ＭＭＰ．２、厩积／肝组织面积×１００％），取平均值。ＭＭＰ一９与肝纤维化的可能关系，旨在阐明ＭＭＰ一２、１．４统计学处理数据经ＳＰＳｓ７．０作方差分析ＭＭＰ一９与肝纤维化的作用。（多样本均数的两两比较）和相关分析及ｑ检验。ｌ材料与方法２结果１．１动物及分组清洁级雄性ＳＤ大鼠５４只，购２．１大鼠肝脏组织病理学改变模型组大鼠４周、８自西普尔一必凯公司，体重１４０～１８０ｇ，随机分组：周、１２周未髓及Ｍａｓｓｏｎ染色可见肝细胞逐渐出正常对照组１８只，模型组３６只。模型组大鼠给予现灶性或片状坏死，大量炎细胞浸润及胶原纤维进４０％四氯化碳花生油混合液，以１．２“・ｋｇｏ体重行性增多，胶原纤维沿汇管区或炎症坏死区向外延皮下多点注射，每周２次，共１２周。对照组以等量伸，形成厚薄不一的纤维间隔分割包绕肝小叶，１２花生油同样方法注射。于４、８、１２周末随机分别处周时局部有假小叶形成。Ｍａｓｓｏｎ染色病理图像分死每组大鼠，模型组每次１２只，对照组每次６只。析：模型组胶原含量明显高于对照组（Ｐ＜Ｏ．０５），且麻醉后剖腹取肝脏，置于中性福尔马林液固定，进行随造模时间延长其含量进行性增加（Ｐ＜０．０５）。各病理学及免疫组化检测。期对照组大鼠肝脏组织学差异均无显著意义１．２主要试剂四氯化碳由西安化学试剂厂生产，（Ｐ＞０．０５）。见表ｌ。ＭＭＰ一２、ＭＭＰ一９多克隆抗体为美国ｓａｎｔａＣｒｕｚ公表ｌ两组大鼠组织胶原纤维面积比（％）司产品，ＳＰ试剂盒购于北京中山生物技术有限公Ｔａｂ．１Ｒａｔｉｏｏｆａ嗽０ｆ酬ｌａｇｅ舯峪ｎｂ瑚ｉｓｉｎｌｉｖｅｒｔｉｓ锄司。一ｉｎｔｗｏ殍岬（％）１．３免疫组化检测肝组织经中性福尔马林固定，组别ｎ４周８周１２周石蜡包埋，常规陋染色及ＭａｓＳｏｎ三色胶原染色。对照组６５．４２±２．１０９．８２±９．２９５．７８±１．７８ＭａｓＳｏｎ染色结果用病理图像分析仪分析。每张切模型组１２１４．８５±１２．０４ａ２３．３９±２４．２ｌ幽２７．０３±１６。７６妇片选四周及中央５个区域，取胶原纤维含量最多的与对照组相比８Ｐ＜Ｏ．０５；与４周相比６Ｐ＜０．０５；与８周视野（每个视野包括汇管区），１０倍物镜下测定胶原比较。Ｐ＜Ｏ．０５面积百分比（胶原纤维面积／肝组织面积×１００％），２．２舯．２、ＭＭＰ．９在肝组织中的表达ＭＭＰ一取平均值。肝组织经固定后，３０％蔗糖溶液中４℃２、Ｍ＾，ＩＰ一９在肝组织中表达的阳性物质呈棕黄色，过夜。免疫组化染色采用ＳＰ法。冰冻组织切片４ｌ、心俾．２主要位于肝窦内皮细胞、血管内皮细胞及肝肛ｍ，切片常规脱蜡至水。用体积分数为３％Ｈ２０２室窦细胞的胞质；ＭＭＰ．９主要位于静脉周围的肝细胞温处理１０ｍｉｎ以灭活内源性过氧化物酶。加入正及肝窦细胞的胞质。模型组ＭＭＰ．２、Ｍ＾但．９阳性常血清工作液及ＭＭＰ．２、ＭＩ、压Ｐ一９一抗（１：５０稀释），表达面积明显高于对照组（Ｐ＜００５），并且随造模时间延长进行性增加。见表２。表２两组大鼠肝组织ｈ岱ｍ．２、＾ｏ锄Ｐ－９免疫组化阳性表达面积比（％）’ｒａｂ．２Ｒａｔｉ０ｏｆａ嘲ｏｆｐ惦ｉｔｉｖｅｅｘｐ他ｓｓｉ咖ｏｆＭＭＰ－２，ＭＭＰ－９ｉＩＩｌｉｖ盯ｔｉ豁ｌ翳ｉｎｔｗｏｇｒｏｕ陌（％）与对照组相比８Ｐ＜０．０５；与４周相比６Ｐ＜Ｏ。０５；与８周比较。Ｐ＜０．０５万 方数据
新乡医学院学报ＪｏｕｍａｌｏｆｘｉｎｘｉａｎｇＭｅｄｉｃａｌＣＯＵｅｇｅＶ０１．２１№．４Ｊｕ１．２００４２讨论应【４，５ｌ，明胶酶Ｍ御。２、Ｍ脚一９主要参与基底膜Ⅳ型胶原的代谢，降解正常肝窦基底膜，破坏肝脏细胞肝纤维化是继发于肝脏炎症或损伤后组织修复生存的内环境，有利于ＨｓＣ激活，与肝纤维化的发过程中的代偿反应，ＥＣＭ合成增加、降解减少，最终生发展紧密相关。ＭＭＰｓ在肝内主要由肝星状细胞导致ＥＣＭ在肝内的过度沉积，引起肝纤维化以致肝（ＨＳＣ）和Ｋｕｐｆｆｅｒ分泌表达［６ｌ。在纤维化早期，硬化。正常肝脏Ｄｉｓｓｅ间隙内ＨＳＣ处于由Ⅳ型胶原、ｌ、心伊ｓ轻度增高，而肝纤维化中晚期，ＭＭＰｓ活性则层连蛋白和蛋白多糖等构成的基底膜型基质环境明显降低，以致于Ｅ（、Ｍ合成超过降解，引起ＥＣＭ中，可保持静止状态，一旦移出这种环境，ＨＳＣ就会大量沉积［７ｌ。通过调节ＭＭＰｓ活性，有助于增加基被活化变为肌成纤维样细胞。这提示正常肝脏基质质的降解，促进肝纤维化的逆转。Ｔａｋａｈａｒａ【８ｊ用的降解有助于肝纤维化的形成，特别是在肝损伤反Ｎｏｒｔｈｅｍ杂交法检测人纤维化肝脏中ＭＭＰ一２比正应的早期。因为当肝纤维化时，细胞外基质重构，常对照组高１．４倍，免疫电镜检测Ｍ御．２表达主ＤｉＳｓＩｅ腔正常的不连续的Ⅳ型胶原转变为连续性，并要集中于ＨＳＣ以及纤维化区域的成纤维细胞，说明且Ｉ、Ⅲ型胶原增多。如胶原酶活性下降，引起胶原其来源于以上细胞。Ｈａｙａｓａｋａ【９Ｊ研究表明在肝纤维纤维沉积予ＤｉｓＳｅ腔，导致肝窦毛细血管化和胶原化过程中ＭＭＰ．９较正常组的表达逐渐增加，免疫化，是多种慢性肝病的病理基础。许多研究都表明荧光法证实ＭＭＰ一９主要产生于Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞。实基质金属蛋白酶随肝纤维化进展而呈动态变化，肝验发现，＾心僻．２主要位于窦内皮细胞、血管内皮细纤维化是ＥＣＭ生成与降解过程失衡的结果【２，３ｆ。胞及肝窦细胞，＾，ＩＭＰ一９主要位于静脉周围的肝细胞ＭＭＰｓ是一组能降解ＥＣＭ成分的重要蛋白分解及肝窦细胞，与以上研究结果相似。就此，ＭⅧ一２、酶，ＭＭＰｓ是一组锌酶，几乎能降解除多糖以外的所Ｍ＾但．９与肝纤维化关系密切，可能起促进作用。有ＥＣＭ成分，并能使别的ｌ、ｎ但ｓ激活，形成瀑布效参考文献：［１］ＬｉＤ．Ｆｒｉｅｄｍ蚰ＳＬ．Ｌｉ、ｒｅｒｆｉｂｒ。ｇｅｎ商ｓａｎｄｔｈｅｄｅｏｆｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｕａｔｅｃｅｌｌｓ：ｎｅｗｉＩｌＳｉｇｈｔｓａＩｌｄｐｒｏｓｐｅｃｔｓｆｏｒｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．ＪＧｈ豇ｒ唧挖细讲Ｈ￡舡删，１９９９，１４：６１８—６３３．［２］ＶａｌｋｏｖａＭ＋Ｈｅｐａｔｉｃｆ．ｂｒｃ曙ａ惜ｂ［Ｊ］．Ｂ，ｎ￡ｉ“Ｌ头Ｌｉｓ幻，，２００２，１０３：７６—８５．［３］Ｍｕｒａ、ⅣａｋｉＹ，Ｋａｗ蝴ｌ【ｉＨ．ＰａｔｈｏｐｈｙＳｉ０１０９ｙｏｆｈｅｐａｔｉｃｆｉｂｒ０８ｉｓ［Ｊ］．Ｎｉ坳Ｈ翻如＾渤∞Ｇｃ浊ｋｉ２｜ｎｓｓＩｌｉ，１９９９，９６：１１４３．１１５２．【４］ｗａｔａｎａｂｅＴ，Ｎｉｉ０＿ｋａＡ。Ｈ（珊ｗａｓ，露“．Ｄ３ｍ毗ｄｃｃ１１ａｎｇｅｏｆｃｅｌｌｓｅｘｐｒ氆函ｆｌｇＭＭＰ一２ｍＲＮＡａｎｄＭＴｌ一ＭＭＰｒｒ】Ｉ矾Ａｉｎｔｈｅｒｅｃ删ｆｍｒｎｂ、，ｅｒｆｉｂｒＤｓｉｓｉｎｔｈｅｒａｔ［Ｊ］．Ｊ拖细“，２００１，３５：４６５—４７３．［５］Ｌ池ｔｉｎｇｈａｇｅｎＲ，ＭｉｃｈｅｉｓＤ，姒＿ｂｅｆ妇ｎＣＩ，群４２．Ｍ８ｔ淑ｍｅｔａｕｏｐ赋西ｎａｓｅ（ｍ腰）．２，矗恐ｄＰ一７，ａｎｄｔｉＳｓｕｅｉ幽ｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｌａ啪ｔｅｉｎ瓣ｌａｒｅｃｌｏ鸵ＩｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｆｉｂＩＤｐｍｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｐｒｏｃｅｓｓｉｎｔｈｅｌｉｖｅｒｄ嘶Ｉｌｇｃｈ砌ｃｈｅｐａｔｉｔｉｓｃ［Ｊ］．．，胁加耐．２００ｌ，３４：２３９．２４７．［６］＆ｍｙｏｎＩ配，ＡｎｈｕｒＭＪ．Ｅ】ｍａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎａｒｌｄｔｈｅｍｌｅｏｆｈｅｐａｔｉｃＳｔｄｌａｔｅｃｅＵｓ［Ｊ］．＆辨抽Ｌｉ醒ｒ胰５，２００ｌ，２ｌ：３７３—３８４．［７］ｘｉｎｓＪ，ｚｏｕｚｓ．Ｍｅｔａ嘲ｉｚｅｏｆｅ）【ｔｒａｃｅＵｕｌａｒｒＩｌａｔｒｉｘ［Ｊ］凸抽儿硷，２００２，１０：５４．５６．［８］Ｔａｋａ：ＩｌａｒａＴ，ＦｕｍｉＫ，Ｆｕ∞ｋＪ，以口ｆ，Ｉｎｃｒ嗵ｓｅｄｅ】【ｐｒｅＳｓ疏ｏｆｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｒｍ盼２ｉｎｅ）【ｐｅｄｍ肌ｔａｌＩｉｖｅｒｆｉｂｒ璐ｉｓｉｎｒａｔｓ［Ｊ】，心加细缸秽。［９］Ｈａｙａ缸ｋａＡ，Ｓ皿ｕｌ【ｉＮ・Ｆｕｊ毗Ｎ．订ｎｆ．Ｅｌｅｖａｔｅｄ１９９５，２１：７８７—７９５．ｐＩａ锄ａｌｅ州ｓｏｆ啪ｔ＾ｘｍｅｔａｌｌｏｐｍｔｅｉｎ瓣９（９２ｋｄｔｙｐｅＩＶ∞ｌｈｇｅｎａｓｅ／ｇｅＩａｔｉｌｌａｓｅＢ）ｉｎｈｅｐａｔ０一ｃｅＩＩｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｈｉ抛细如斟，１９９６，２４：１０５８—１０６２．（本文编辑：徐自超）本刊常年征集获奖论文证书复印件为了客观评价我刊的学术质量和社会效益，了解我刊所发表论文的学术水平，我刊常年征集各种获奖证书和经济效益证明。凡在我刊发表过的有关论文的获奖证书均在征集之列。另外，凡提交证书复印件者，免费在本刊及时刊登研究信息及作者简介，并将优先发表该系列研究论文。本刊编辑都万 方数据