2024年2月28日发(作者：汪忆梅)
膜蛋白提取试剂盒
Membrane Protein Extraction Kit
产品编号：C500049
包装规格：50 Assays
产品简介
本试剂盒提供独特的组份提取细胞及组织中的膜蛋白。特殊的提取Buffer 在裂解细胞的同时，经过特殊处理，还可以选择性地分离提取细胞膜蛋白和胞器质膜蛋白。提取方法简单，可靠，快速。获得的膜蛋白纯度高，可用于SDS-PAGE、Western
Blot 、免疫共沉淀或细胞信号传导等后续研究，每次可以提取10个培养细胞或200 mg动物组织，本试剂盒可以使用50次。
71.
2.
3.
4.
整个操作过程只需要60 min左右。
7
即可以用于培养细胞（50x10个），有可以用于动物组织（50 x 200 mg）蛋白质的提取。
提取的膜蛋白纯度高，不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。
运输和保存条件
在常温下运输，收到后，将蛋白酶抑制剂、Loading Buffer、DTT 于在-20°C的环境中保存，其余4°C保存，保质期一年。
成分
洗涤液
提取Buffer
蛋白酶抑制剂
Loading Buffer
DTT
go
San操作步骤
1.
2.
3.
n
1 mL
产品组成
对于悬浮培养或用细胞刮子刮下的贴壁培养的细胞，离心收集不少于1×10细胞，再用预冷的双蒸水稀释的一倍浓度的洗涤液洗涤细胞三次，每次3000 rpm（800 g）离心5 min。
组织样本（200 mg）尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，冰上剪碎，再用预冷的一倍浓度的洗涤液洗涤细胞三次。
在上述细胞或组织样本中加入1 mL提取Buffer（使用前，每mL提取Buffer 加入1 μL蛋白酶抑制剂和1 μL DTT），4°C下玻璃匀浆器上下手动匀浆30~50次。或超声破碎细胞，每次30 sec，3~4次，每次间隔1 min，置于冰上冷却。均质匀浆或超声破碎细胞后应镜检，细胞破碎率不小于90％，同时没有明显的组织小块。
ü
4.
5.
ü
因提取Buffer 在室温时会分层，请务必在冰上放置30 min后，混匀，立即加入。
装入1.5 mL的预冷的离心管中，冰上放置10 min左右，期间取出剧烈震荡2~3次，于4°C，14000 rpm（17500 g）离心10 min，弃沉淀，上清转至新管中。
上清置于37°C水浴10 min。再室温，13000 rpm 离心5 min，样品分成上层和下层（含膜蛋白）。
建议使用进口透明性较好的微量离心管，可见下层为含膜蛋白的有机相。上下两层因均为透明，只在交界处有一折光线，
BiotC500049
10×50 mL
50 mL
50 μL
50 μL
7避免蛋白酶对蛋白质的降解，保持膜蛋白质的完整性和天然活性。
ec
产品特点
h
需仔细观察才可见到。或室温静置30 min~60min 亦可见分层分上下两层，水平转头在高速旋转的时候容易使有机相和水相保持分层状态，以下亦同。
6.
7.
8.
9.
取下层，加入500 μL冰冷灭菌水，4°C放置5 min，再置于37°C 水浴10min。
室温，13000 rpm（15000 g）离心5 min，样品分成上层和下层（含膜蛋白）。
取下层，加入500 μL 冰冷灭菌水，4°C放置5 min，再置于37°C 水浴10 min。
室温，13000 rpm（15000 g）离心5 min，样品分成上层和下层（含膜蛋白）。
10. 最终得到的下层即为膜蛋白提取物，冷冻保存。
附SDS-PAGE电泳前样品准备
1.
2.
3.
4.
每100μL 膜蛋白提取混合物加入0.9 mL 丙酮，冰浴20 min，12000 rpm（12830g）离心20 min。
弃上清，沉淀真空旋干或置冰上干燥约10 min到30 min（敞开离心管盖）。
该步可选。可以加入Urea、Thiourea、NDSB-201 等强溶解能力试剂溶解膜蛋白。分装，冷冻保存。
吸或剧烈涡旋），煮沸5 min，离心取上清。
注意事项
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
加入适当体积的Loading Buffer（使用前每100 μL Loading Buffer 加入2~5 μL巯基乙醇）溶解，彻底分散（枪头反复吹所有的试剂及器具均需预冷后使用，以保证蛋白质的完整性。细胞或组织量需达到要求。
室温25°C~37°C时，抽提Buffer需静置30min以上可看到分为上下两层，其中约9/10 至4/5 为上层水相，下层只占1/10 至1/5 为有机相。
加入Urea、Thiourea、NDSB-201 等强溶解能力试剂的Loading Buffer 有助于膜蛋白的完全溶解。
如果需要，请在实验前，在提取Buffer中加入1倍浓度的生工生产的磷酸酶抑制试剂，（产品编号C500017 或C500018 或C500019），再进行动物组织或细胞膜蛋白质的提取。
对提取的膜蛋白质，可以采用我公司生产的非干扰型蛋白质浓度定量试剂盒（C503071）或改良型Lowry 法蛋白质浓度定量试剂盒（C504041）或改良型BCA 法蛋白质浓度定量试剂盒（C503051）对提取样品中的蛋白质进行定量。
提取的膜蛋白质，如果用于2D 电泳，可以将操作步骤10 所得的膜蛋白沉淀，使用我公司生产的膜蛋白质溶解液（C500024）或2D 样品提取液(C500042) 进行溶解，再用于2D 电泳。
如果用于蛋白质质谱研究，请用请用我公司生产的铜染（C510017）或锌染（C510019）或质谱用快速银染试剂盒(C500021)对胶上的蛋白质进行染色，这些染色方法对蛋白质没有修饰作用，所以对质谱图没有影响。对于一般的染色，可以采用无毒型考马氏亮蓝染色液（C503011）或高灵敏考马氏亮蓝染色液（C510041）进行染色。
使用后请旋紧瓶盖，防止溶液挥发和与空气的物质发生化学反应。 9.
10. 本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果，概不承担责任。
Sango
n
Biot抽提Buffer 4°C时，为混悬状态，请于此温度下混匀后吸取加入样本中。
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2024年2月28日发(作者：汪忆梅)
膜蛋白提取试剂盒
Membrane Protein Extraction Kit
产品编号：C500049
包装规格：50 Assays
产品简介
本试剂盒提供独特的组份提取细胞及组织中的膜蛋白。特殊的提取Buffer 在裂解细胞的同时，经过特殊处理，还可以选择性地分离提取细胞膜蛋白和胞器质膜蛋白。提取方法简单，可靠，快速。获得的膜蛋白纯度高，可用于SDS-PAGE、Western
Blot 、免疫共沉淀或细胞信号传导等后续研究，每次可以提取10个培养细胞或200 mg动物组织，本试剂盒可以使用50次。
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整个操作过程只需要60 min左右。
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即可以用于培养细胞（50x10个），有可以用于动物组织（50 x 200 mg）蛋白质的提取。
提取的膜蛋白纯度高，不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。
运输和保存条件
在常温下运输，收到后，将蛋白酶抑制剂、Loading Buffer、DTT 于在-20°C的环境中保存，其余4°C保存，保质期一年。
成分
洗涤液
提取Buffer
蛋白酶抑制剂
Loading Buffer
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San操作步骤
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1 mL
产品组成
对于悬浮培养或用细胞刮子刮下的贴壁培养的细胞，离心收集不少于1×10细胞，再用预冷的双蒸水稀释的一倍浓度的洗涤液洗涤细胞三次，每次3000 rpm（800 g）离心5 min。
组织样本（200 mg）尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，冰上剪碎，再用预冷的一倍浓度的洗涤液洗涤细胞三次。
在上述细胞或组织样本中加入1 mL提取Buffer（使用前，每mL提取Buffer 加入1 μL蛋白酶抑制剂和1 μL DTT），4°C下玻璃匀浆器上下手动匀浆30~50次。或超声破碎细胞，每次30 sec，3~4次，每次间隔1 min，置于冰上冷却。均质匀浆或超声破碎细胞后应镜检，细胞破碎率不小于90％，同时没有明显的组织小块。
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因提取Buffer 在室温时会分层，请务必在冰上放置30 min后，混匀，立即加入。
装入1.5 mL的预冷的离心管中，冰上放置10 min左右，期间取出剧烈震荡2~3次，于4°C，14000 rpm（17500 g）离心10 min，弃沉淀，上清转至新管中。
上清置于37°C水浴10 min。再室温，13000 rpm 离心5 min，样品分成上层和下层（含膜蛋白）。
建议使用进口透明性较好的微量离心管，可见下层为含膜蛋白的有机相。上下两层因均为透明，只在交界处有一折光线，
BiotC500049
10×50 mL
50 mL
50 μL
50 μL
7避免蛋白酶对蛋白质的降解，保持膜蛋白质的完整性和天然活性。
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产品特点
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需仔细观察才可见到。或室温静置30 min~60min 亦可见分层分上下两层，水平转头在高速旋转的时候容易使有机相和水相保持分层状态，以下亦同。
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取下层，加入500 μL冰冷灭菌水，4°C放置5 min，再置于37°C 水浴10min。
室温，13000 rpm（15000 g）离心5 min，样品分成上层和下层（含膜蛋白）。
取下层，加入500 μL 冰冷灭菌水，4°C放置5 min，再置于37°C 水浴10 min。
室温，13000 rpm（15000 g）离心5 min，样品分成上层和下层（含膜蛋白）。
10. 最终得到的下层即为膜蛋白提取物，冷冻保存。
附SDS-PAGE电泳前样品准备
1.
2.
3.
4.
每100μL 膜蛋白提取混合物加入0.9 mL 丙酮，冰浴20 min，12000 rpm（12830g）离心20 min。
弃上清，沉淀真空旋干或置冰上干燥约10 min到30 min（敞开离心管盖）。
该步可选。可以加入Urea、Thiourea、NDSB-201 等强溶解能力试剂溶解膜蛋白。分装，冷冻保存。
吸或剧烈涡旋），煮沸5 min，离心取上清。
注意事项
1.
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8.
加入适当体积的Loading Buffer（使用前每100 μL Loading Buffer 加入2~5 μL巯基乙醇）溶解，彻底分散（枪头反复吹所有的试剂及器具均需预冷后使用，以保证蛋白质的完整性。细胞或组织量需达到要求。
室温25°C~37°C时，抽提Buffer需静置30min以上可看到分为上下两层，其中约9/10 至4/5 为上层水相，下层只占1/10 至1/5 为有机相。
加入Urea、Thiourea、NDSB-201 等强溶解能力试剂的Loading Buffer 有助于膜蛋白的完全溶解。
如果需要，请在实验前，在提取Buffer中加入1倍浓度的生工生产的磷酸酶抑制试剂，（产品编号C500017 或C500018 或C500019），再进行动物组织或细胞膜蛋白质的提取。
对提取的膜蛋白质，可以采用我公司生产的非干扰型蛋白质浓度定量试剂盒（C503071）或改良型Lowry 法蛋白质浓度定量试剂盒（C504041）或改良型BCA 法蛋白质浓度定量试剂盒（C503051）对提取样品中的蛋白质进行定量。
提取的膜蛋白质，如果用于2D 电泳，可以将操作步骤10 所得的膜蛋白沉淀，使用我公司生产的膜蛋白质溶解液（C500024）或2D 样品提取液(C500042) 进行溶解，再用于2D 电泳。
如果用于蛋白质质谱研究，请用请用我公司生产的铜染（C510017）或锌染（C510019）或质谱用快速银染试剂盒(C500021)对胶上的蛋白质进行染色，这些染色方法对蛋白质没有修饰作用，所以对质谱图没有影响。对于一般的染色，可以采用无毒型考马氏亮蓝染色液（C503011）或高灵敏考马氏亮蓝染色液（C510041）进行染色。
使用后请旋紧瓶盖，防止溶液挥发和与空气的物质发生化学反应。 9.
10. 本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果，概不承担责任。
Sango
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Biot抽提Buffer 4°C时，为混悬状态，请于此温度下混匀后吸取加入样本中。
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