2024年3月28日发(作者：庄金)
１ ６９６
世界睡眠医学杂志
ＷｏｒｌｄＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｌｅｅｐＭｅｄｉｃｉｎｅ
２０２３年７月第１０卷第７期
Ｊｕｌｙ．２０２３，Ｖｏｌ．１０，Ｎｏ．７
睡眠实验医学
ＳｌｅｅｐＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ
林则徐戒烟方对地西泮自然戒断小鼠的
治疗作用及初步机制研究
焦 癑
１
李 鹏
２
刘艳骄
３
赵小亮
１
刘 洋
１
李 涛
１
王志国
１
王丹巧
３
（１中国中医科学院医学实验中心，北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室，北京，１００７００；２北京市海淀区
玉渊潭社区卫生服务中心，北京，１００３６３；３中国中医科学院广安门医院心理睡眠科，北京，１０００３２）
摘要 目的：探究林则徐戒烟方对地西泮自然戒断小鼠的治疗作用以及相关机制。方法：将４０只ＫＭ小鼠，按照体质量
随机分为正常对照组、模型组、戒烟方低剂量组、戒烟方中剂量组、戒烟方高剂量组，每组８只。正常对照组灌胃蒸馏水，
其余各组连续灌服地西泮（２ｍｇ／ｋｇ体质量）２８ｄ，随后停止给予地西泮进行戒断，戒烟方低、中、高剂量组分别灌胃３ｄ
林则徐戒烟方（７８ｇ、１５５、３１０ｇ／ｋｇ），模型组和正常对照组灌胃等容积蒸馏水。灌胃３ｄ期间监测小鼠的一般状态。
３ｄ后所有小鼠进行旷场实验，观察小鼠穿过中心格和周围格的数量、毛发梳理及直立次数。旷场实验结束后小鼠颈椎
脱位法处死，取脑纹状体。高效液相电化学方法检测小鼠纹状体中单胺类神经递质的含量。高效液相荧光法检测小
鼠纹状体中氨基酸类神经递质的含量。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ方法检测纹状体中脑源性神经营养因子（ＢＮＤＦ）、磷酸化哺乳动
物雷帕霉素靶蛋白（ｐｍＴＯＲ）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（ｍＴＯＲ）表达变化。结果：小鼠停止给药地西泮３ｄ后出现体
质量降低、探索欲望下降、运动减少，呈现出较明显的戒断反应。小鼠脑纹状体中多巴胺（ＤＡ）、５羟色胺（５ＨＴ）浓度和
谷氨酸（Ｇｌｕ）／氨基丁酸（ＧＡＢＡ）明显降低，ｐｍＴＯＲ／ｍＴＯＲ和ＢＤＮＦ表达显著降低。林则徐戒烟方灌胃后，小鼠运动
γ
量增加，脑内ＤＡ和５ＨＴ含量升高，抑制Ｇｌｕ／ＧＡＢＡ和ｐｍＴＯＲ／ｍＴＯＲ的降低。结论：林则徐戒烟方可以改善地西泮戒
断症状，其机制可能与通过调节纹状体内多种神经递质失衡，影响ｍＴＯＲ通路有关。
关键词 地西泮；纹状体；神经递质，林则徐戒烟方
ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＥｆｆｅｃｔａｎｄＰｒｅｌｉｍｉｎａｒｙＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＬｉｎｚｅｘｕＪｉｅｙａｎＦｏｒｍｕｌａ
ｏｎＮａｔｕｒａｌＷｉｔｈｄｒａｗａｌＳｙｍｐｔｏｍｓｆｒｏｍＤｉａｚｅｐａｍｉｎＭｉｃｅ
１２３１１１１３
ＪＩＡＯＹｕｅ，ＬＩＰｅｎｇ，ＬＩＵＹａｎｊｉａｏ，ＺＨＡＯＸｉａｏｌｉａｎｇ，ＬＩＵＹａｎｇ，ＬＩＴａｏ，ＷＡＮＧＺｈｉｇｕｏ，ＷＡＮＧＤａｎｑｉａｏ
（１ＢｅｉｊｉｎｇＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＢａｓｉｃＲｅｓｅａｒｃｈｏｎＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄＴｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＭａｊｏｒＤｉｓｅａｓｅｓ，
ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ；２Ｙｕｙｕａｎｔａｎ
ＣｏｍｍｕｎｉｔｙＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅＣｅｎｔｅｒｏｆＨａｉｄｉａｎＤｉｓｔｒｉｃｔ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１４２，Ｃｈｉｎａ；３Ｇｕａｎｇ′ａｎｍｅｎ
Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００５３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｅｆｆｅｃｔａｎｄｒｅｌｅｖａｎｔｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＬｉｎｚｅｘｕＪｉｅｙａｎｆｏｒｍｕｌａｏｎｎａｔｕｒａｌｗｉｔｈｄｒａｗａｌ
ｓｙｍｐｔｏｍｓｆｒｏｍｄｉａｚｅｐａｍｉｎｍｉｃｅＭｅｔｈｏｄｓ：ＦｏｒｔｙＫＭｍｉｃｅｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｓｅｌｅｃｔｅｄａｎｄｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ５ｇｒｏｕｐｓａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｈｅ
ｗｅｉｇｈｔ（ｎ＝８），ｎａｍｅｌｙ，ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｏｕｐ，ｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，Ｊｉｅｙａｎｆｏｒｍｕｌａｌｏｗｄｏｓｅｇｒｏｕｐ，ｍｅｄｉｕｍｄｏｓｅｇｒｏｕｐ，ａｎｄｈｉｇｈｄｏｓｅｇｒｏｕｐＡｌｌ
ｇｒｏｕｐｓｅｘｃｅｐｔｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｏｒａｌｌｙａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄｗｉｔｈ２ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙｆｏｒ２８ｄａｙｓ，ｔｈｅｎｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｇｉｖｅｎｅｑｕａｌｖｏｌｕｍｅｏｆ
ｗａｔｅｒＳｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙ，ｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｗａｓｄｉｓｃｏｎｔｉｎｕｅｄｆｏｒ３ｄａｙｓ（ｗｉｔｈｄｒａｗａｌｐｈａｓｅ）Ｄｕｒｉｎｇｗｉｔｈｄｒａｗａｌｐｈａｓｅ，ｍｉｃｅｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ
ｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄＪｉｅｙａｎｆｏｒｍｕｌａ（７８ｇ／ｋｇ，１５５ｇ／ｋｇ，３１０ｇ／ｋｇ）ｏｒｗａｔｅｒａｎｄｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｔｈｅｇｅｎｅｒａｌｓｔａｔｅＡｆｔｅｒ３ｄａｙｓ，ｔｈｅ
ｍｉｃｅｗｅｒｅｓｕｂｊｅｃｔｅｄｔｏａｏｐｅｎｆｉｅｌｄｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｆｏｒｏｂｓｅｒｖｉｎｇｔｈｅｎｕｍｂｅｒｓｏｆｃｅｎｔｅｒｃｅｌｌｓａｎｄｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｃｅｌｌｓｔｈａｔｍｉｃｅｓｔｅｐｐｅｄｏ
ｖｅｒ，ｇｒｏｏｍｉｎｇａｎｄｕｐｒｉｇｈｔｐｏｓｉｔｉｏｎＡｆｔｅｒｔｈｅｂｅｈａｖｉｏｒａｌｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ，ａｌｌｍｉｃｅｗｅｒｅｓａｃｒｉｆｉｃｅｄｂｙｃｅｒｖｉｃａｌｄｉｓｌｏｃａｔｉｏｎＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓ
ｏｆｍｏｎｏａｍｉｎｅｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓｉｎｔｈｅｓｔｒｉａｔｕｍｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｔｅｃ
ｔｏｒＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓｉｎｔｈｅｓｔｒｉａｔｕｍｏｆｍｉｃｅｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａ
ｐｈｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｄｅｔｅｃｔｏｒＴｈｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢＮＤＦ，ｐｍＴＯＲａｎｄｍＴＯＲｉｎｓｔｒｉａｔｕｍｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎ
ｂｌｏｔｔｉｎｇＲｅｓｕｌｔｓ：Ｄｕｒｉｎｇｔｈｅｗｉｔｈｄｒａｗａｌｐｈａｓｅ，ｔｈｅｍｉｃｅｈａｄｗｅｉｇｈｔｌｏｓｓ，ｅｘｐｌｏｒａｔｉｏｎａｎｄｅｘｅｒｃｉｓｅｄｅｃｒｅａｓｉｎｇＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆＤＡ，
５ＨＴ，Ｇｌｕ／ＧＡＢＡａｎｄｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｏｆｐｍＴＯＲ／ｍＴＯＲ，ＢＤＮＦｉｎｔｈｅｓｔｒｉａｔｕｍｏｆｍｉｃｅｂｒａｉｎｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅ
ｃｒｅａｓｅｄＪｉｅｙａｎｆｏｒｍｕｌａｃａｎｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅｅｘｅｒｃｉｓｅ，ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＤＡａｎｄ５ＨＴ，ａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｄｅｃｒｅａｓｅｏｆＧｌｕ／ＧＡＢＡａｎｄｐ
基金项目：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助项目（ＪＪＰＹ２０２２００２）；中国中医科学院医学实验中心科研项目结余经费科
研发展基金项目（ＦＺ２０２２００７）
作者简介：焦癑（１９８２—），女，博士，助理研究员，研究方向：中药药理学研究，Ｅｍａｉｌ：ｊｉａｏｙｕｅ＿ｍｅｄｉｃｉｎｅ＠１６３ｃｏｍ
通信作者：王丹巧（１９５９—），女，博士，研究员，研究方向：中药药理学和中西医结合基础研究，Ｅｍａｉｌ：ｄｑ＿ｗａｎｇ９６＠１６３ｃｏｍ
２０２３年７月第１０卷第７期
Ｊｕｌｙ．２０２３，Ｖｏｌ．１０，Ｎｏ．７
世界睡眠医学杂志
ＷｏｒｌｄＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｌｅｅｐＭｅｄｉｃｉｎｅ
１ ６９７
ｍＴＯＲ／ｍＴＯＲｉｎｔｈｅｓｔｒｉａｔｕｍＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＪｉｅｙａｎｆｏｒｍｕｌａｃａｎｓｏｏｔｈｅｄｉａｚｅｐａｍｗｉｔｈｄｒａｗａｌｓｙｍｐｔｏｍｓＩｔｍａｙｂｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅ
ｍＴＯＲｐａｔｈｗａｙａｎｄｒｅｇｕｌａｔｅｔｈｅｉｍｂａｌａｎｃｅｏｆｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓｉｎｔｈｅｓｔｒｉａｔｕｍ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ｄｉａｚｅｐａｍ；Ｓｔｒｉａｔｕｍ；Ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ；ＬｉｎｚｅｘｕＪｉｅｙａｎｆｏｒｍｕｌａ
中图分类号：Ｒ２４２；Ｒ７４９６１；Ｒ３３８１４文献标识码：Ａｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．２０９５－７１３０．２０２３．０７．０７５
地西泮是临床广泛使用的精神类药物，属于苯
二氮
艹
卓
类药物（ＢＺＤｓ），可用于镇静催眠、抗惊厥和
抗癫痫等治疗。临床推荐ＢＺＤｓ的使用时间不超过
６周
［１］
。刘逢安和徐涛
［２］
的调查显示，２０１６年潜江
市精神病医院的１８２０７例门诊处方中ＢＤＺｓ处方率
为３４９％，其中连续使用同一种ＢＺＤｓ超过２个月
者为２３５１％。ＢＺＤｓ长期使用不良反应多，容易造
成药物依赖，停药后出现焦虑、抑郁、反跳性失眠等
症状为主，结合心理对药物的渴求，使患者经常会增
量使用药物，造成不可逆的损伤。临床对于ＢＺＤｓ的
戒断治疗以逐渐减量或给予其他替代药物治疗为
主，耐药情况或者不良反应较多，且存在的心理依赖
问题难以解决
［１］
。
林则徐戒烟方（以下简称戒烟方），也称为林文
忠公戒烟方，来源于福州林则徐纪念馆，是林则徐和
名医何其伟合作研制，以解清末鸦片泛滥之毒。道
光十八年林则徐任湖广总督时，即将该方上奏朝
廷
［３］
。该方主方名“忌酸丸”，辅佐方名“补正丸”。
《湖广奏稿》卷四中记载该方在湖广地区“凡省城、
汉镇药店，所配戒烟之药，无家不有，无日不售”，并
“有耆民妇女在路旁叩头称谢，据云其夫男久患烟
瘾，今幸服药断绝，身体渐强”。中国中医科学院广
安门医院刘艳骄教授
［４］
借鉴林则徐戒除鸦片的思
路，采用戒烟方作为安眠药物中药替代治疗的主要
方剂，并提出安眠药物依赖性失眠的中医病因是“毒
邪滞留，内生燥火”，病机为“毒邪上脑”，全方以西
洋参、当归、黄芪等扶正，黄连、天麻、柴胡、沉香等解
毒，共奏“温补脾肾，益气升阳，滋阴平肝，治药毒
瘾”之效，在临床上收到良好的治疗效果，形成规范
化诊疗流程
［５］
，但戒烟方的作用机制尚无研究。由
于长期滥用药物会使大脑产生适应性改变，主要表
现为脑内多巴胺（ＤＡ）、
γ
氨基丁酸（ＧＡＢＡ）、谷氨酸
（Ｇｌｕ）等与奖赏系统有关的神经递质改变，神经营养
因子释放，突触可塑性改变等。哺乳动物雷帕霉素
靶蛋白（ｍＴＯＲ）信号通路与药物成瘾引起的神经适
应性和奖赏效应直接相关
［６］
。因此，本研究模拟临
床停药过程，采用小鼠规律灌胃地西泮２８ｄ后停止
给药的自然戒断方法，观察戒烟方对小鼠在戒断３ｄ
后发生的行为学变化、纹状体内多种神经递质的改
变以及对脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）、ｍＴＯＲ活性
的影响，探讨戒烟方治疗地西泮自然戒断的治疗作
用及其相关机制。现报道如下。
１ 材料与方法
１１ 材料
１１１ 动物 雄性ＫＭ小鼠４０只，体质量２０ｇ左
右。购于北京华阜康生物科技股份有限公司，许可
证编号：ＳＣＸＫ（京）２０１９０００８。所有动物饲养于独
立通气笼具（４６１ｍｍ×２７４ｍｍ×２２９ｍｍ），实验室
环境温度为２２℃左右，湿度为５０％左右，提前喂养
１周适应饲养环境，自由饮水和食用商业饲料。动
物实验伦理审批号：ＥＲＣＣＡＣＭＳ２１２３０３０５。
１１２ 药物 地西泮片（山东信谊有限公司，国药
准字Ｈ３７０２３０３９），戒烟方药物组成：西洋参１５ｇ、麸
炒白术１０ｇ、生黄芪１０ｇ、柴胡１５ｇ、当归６ｇ、关黄
柏１２ｇ、木香６ｇ、陈皮６ｇ、升麻５ｇ、天麻６ｇ、甘草
６ｇ、沉香６ｇ。中药购自北京同仁堂有限公司。
１１３ 试剂与仪器 ＤＡ（批号：ＢＣＢＣ７６１４Ｖ）、３，４
二羟基苯乙酸（ＤＯＰＡＣ，批号：０００１３６４２０９）、５羟色
胺（５ＨＴ，批号：０９１Ｍ１１２８Ｖ）、５羟吲哚乙酸（５
ＨＩＡＡ，批号：０４６Ｋ１５２０）、氯化钾（批号：
０８０Ｍ００９１Ｖ）、乙二胺四乙酸二钠（批号：
０８０Ｍ００１３Ｖ）均为Ｓｉｇｍａ公司（美国）产品。辛烷磺
酸钠（批号：７８７６９７６）、磷酸二氢钠（批号：
２４６１２２９）、磷酸（批号：４１０３５１２）、四氢呋喃（批号：
Ｒ１４１８９２）、甲醇（批号：Ｒ１４２１８８）、乙腈（批号：
Ｒ１４２０９１）均为Ｄｉｋｍａ公司产品（北京迪科马科技有
限公司）。Ｇｌｕ（批号：０６０Ｍ０１７１１Ｖ）、甘氨酸（Ｇｌｙ，批
号：１３９４０３１Ｖ）、牛磺酸（Ｔａｕ，批号：７１Ｋ０１３０）、ＧＡＢＡ
（批号：１２４Ｈ０３６４）、邻苯二甲醛（批号：
ＢＣＢＬ２５１４Ｖ）、乙酸钠（批号：５０４３Ｒ２８Ｖ）均购于Ａｌｆａ
Ａｅｓａｒ（Ｃｈｉｎａ）Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ公司（美国）。ＢＤＮＦ抗体
（批号：ＧＲ３３１９８２５２２）、ｍＴＯＲ抗体（批号：
ＧＲ３３５６２９９１８）购自Ａｂｃｏｍ公司（英国），ｐｍＴＯＲ
抗体（批号：２８２７３１ＡＰ）购自Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ公司。电
动组织研磨器（ＧＩＮＧＫＯ公司，型号：Ｇ１２４０２０３１），多
管涡旋震荡仪（ＴＡＲＧＡＩＮ，北京锦踏科技有限公
司），Ｒｏｔａｎｔａ４６０Ｒ离心机（ＡｎｄｒｅａｓＨｅｔｔｉｃｈ
ＧｍｂＨ＆ＣｏＫＧ，德国）。高效液相电化学检测系统：
Ｓｙｋａｍ高效液相色谱仪，包括Ｓ２１００溶剂输送系统，
Ｓ５２００自动进样器和Ｃｌａｒｉｔｙ色谱工作站［Ｓｙｋａｍ（赛
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２０２３年７月第１０卷第７期
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卡姆）公司，德国］。ＡｎｔｅｃＤｅｃａｄｅ
Ⅱ
ＳＤＣ电化学检
测器，ＶＴ０３玻璃碳工作电极（直径３ｍｍ），原位银／
氯化银参比电极，２５
μ
ｍ电极垫片，柱前连有ＡＤＦ
滤波器（００５Ｈｚ）和脉冲阻尼器（ＡｎｔｅｃＬｅｙｄｅｎＢＶ
公司，荷兰）。ＷａｔｅｒｓＸＳｅｌｅｃｔ＠ＨＳＳＴ３色谱柱（２５
μ
ｍ，２１ｍｍ×５０ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ公司，美国）。高效液
相荧光检测系统包括：Ａｇｌｉｅｎｔ１２６０Ｉｎｆｉｎｉｔｙ
Ⅱ
高效液
相色谱系统，包括自动进样器、四元泵、柱温箱、荧光
检测器和Ｏｐｅｎｌａｂ软件。ＡｇｌｉｅｎｔＥｃｌｉｐｓｅＡＡＡ色谱
柱（５
μ
ｍ，４６ｍｍ×１５０ｍｍ），以上均为Ａｇｉｌｅｎｔ科技
有限公司产品（美国）。稳压稳流电泳仪（型号：
ＰｏｗｅｒｐａｃＨＱ），垂直电泳槽（型号：ＭＰ３）、半干转电
转印仪（型号：ＴｒａｎｓＢｌｏｔＳＤ）均为ＢｉｏＲａｄ公司产品
（美国）。
１２ 方法
１２１ 分组与模型制备 将４０只小鼠称量体质量
后按照随机数字表法分为５组：正常对照组、模型
组、戒烟方低剂量组、戒烟方中剂量组、戒烟方高剂
量组。正常对照组小鼠灌胃蒸馏水２８ｄ。其余各组
小鼠连续灌胃地西泮（２ｍｇ／ｋｇ）２８ｄ。
１２２ 干预方法
１２２１ 林则徐戒烟方的制备方法 按照临床每
人每日用量折算小鼠每日使用的等效剂量。戒烟方
药材（西洋参另煎兑入）浸泡２ｈ后大火烧开，小火
煎煮后提取２次。所有药汁混合后浓缩，移入旋蒸
仪旋转蒸发至所需３１０ｇ／ｋｇ。分装，－８０℃保存。
１２２２ 给药方法 造模后停药３ｄ。在此期间，
模型组和正常对照组灌胃蒸馏水；戒烟方低剂量组
（７８ｇ／ｋｇ）、戒烟方中剂量组（１５５ｇ／ｋｇ）、戒烟方
高剂量组（３１０ｇ／ｋｇ）灌胃相应剂量的中药。
１２３ 检测指标与方法
记录每组小鼠每天总的饮食、饮水量。３ｄ后记
录每只小鼠体质量，进行行为学检测。小鼠脱颈处
死后剥离脑组织取纹状体，精密称取纹状体质量，
－８０℃保存。
１２３１ 行为学分析 应用旷场实验分析小鼠的
行为学变化。将小鼠放入５０ｃｍ×５０ｃｍ的旷场中。
底部平均分为２５个正方形格子。将与旷场箱壁相
连的方格或者区域称为周围格，不与反应箱壁连接
的区域称为中央格。每次将小鼠放正中格子中，观
察记录５ｍｉｎ内小鼠穿过中央格和外周格的数量。
穿过格子以小鼠半身以上进入格子记为１个。记录
小鼠直立和梳理的次数。直立以小鼠前肢全部离开
地面记为１次。梳理以小鼠完成整套梳理毛发过程
记为
１次。每只小鼠记录完毕后喷洒乙醇挥干以减
少对随后记录动物的干扰。
１２３２ 高效液相电化学方法检测小鼠纹状体中
单胺类神经递质的含量 将纹状体加入适量冷生理
盐水用手持式匀浆器在冰上进行匀浆，取定量匀浆
液加入３倍体积的１％甲酸乙腈，震荡３ｍｉｎ后离
心（离心半径９７ｍｍ），２００００×ｇ，４℃，离心５ｍｉｎ。
取上清液加入等体积１％高氯酸后重复上述步骤，
以同样条件再次离心取上清液。样本适量稀释后即
进行检测，避免反复冻融。流动相为水∶甲醇＝
９０∶１０（含０７４ｍｍｏｌ／Ｌ辛烷磺酸钠、８０ｍｍｏｌ／Ｌ二
水合磷酸二氢钠、００２７ｍｍｏｌ／Ｌ乙二胺四乙酸二钠
和２ｍｍｏｌ／Ｌ氯化钾），磷酸调ｐＨ＝３０，０２ｍＬ／ｍｉｎ
等度洗脱，柱温３５℃。所得数据根据稀释倍数和组
织质量进行浓度校正。检测ＤＡ、ＤＯＰＡＣ、ＨＶＡ、５
ＨＴ、５ＨＩＡＡ的含量。
１２３３ 高效液相荧光法检测小鼠纹状体中氨基
酸类神经递质的含量 将纹状体加入适量冷生理盐
水用手持式匀浆器在冰上进行匀浆。取定量匀浆液
加入３倍乙腈，震荡３ｍｉｎ后离心（离心半径
９７ｍｍ），２００００ｇ，４℃，离心５ｍｉｎ。取上清液以同
样条件再次离心。样本适量稀释后即进行检测，避
免反复冻融。流动相、衍生液配制等参见文献［７］。
二元梯度洗脱，流速０８ｍＬ／ｍｉｎ；激发波长３４０ｎｍ，
发射波长４５５ｎｍ。所得数据根据稀释倍数和组织
质量进行校正。检测Ｇｌｕ、ＧＡＢＡ、Ｔａｕ、Ｇｌｙ含量。
１２３４ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ方法检测纹状体中ＢＤＮＦ
及ｍＴＯＲ和ｐｍＴＯＲ蛋白表达 将纹状体组织放入
预冷的研钵中加入液氮进行快速研磨提取蛋白，
ＢＣＡ法测定蛋白浓度。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ操作流程包
括电泳、蛋白质的电转移和膜封闭、抗原抗体反应及
显影，用ＩＰＰ软件对扫描图像的目的条带进行灰度
分析。抗体稀释倍数１∶１０００。
１３ 统计学方法 采用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ（ｖｅｒｓｉｏｎ
８０）统计软件进行数据分析。计量资料以均数±标
准差（
珋
ｘ±ｓ）表示，２组间比较用ｔ检验，多组间比较采
用单因素方差分析，以Ｐ＜００５为差异有统计学意义。
２ 结果
２１ 地西泮停药３ｄ小鼠体质量、饮食、饮水量变
化 小鼠灌胃２８ｄ后，正常对照组与其余各组灌胃
地西泮小鼠的平均体质量没有差异。戒断３ｄ后，
每只小鼠的体质量按每日体质量减去戒断前体质量
得到的差值进行统计。与正常对照组比较，３ｄ后各
组小鼠与戒断前体质量增值明显下降，差异有统计
２０２３年７月第１０卷第７期
Ｊｕｌｙ．２０２３，Ｖｏｌ．１０，Ｎｏ．７
世界睡眠医学杂志
ＷｏｒｌｄＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｌｅｅｐＭｅｄｉｃｉｎｅ
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学意义（Ｐ＜００５），戒烟方低、中、高剂量组体质量
增值与模型组比较有升高趋势。连续观察各组小鼠
在这３ｄ内的平均饮食量和饮水量可以看到，模型
饮水量增多的表组小鼠在第１天出现饮食量下降、
现，在随后２ｄ内逐渐恢复。戒烟方低、中、高剂量组
对于饮食量降低有一定的改善作用。见图１，表１。
Ｐ＜００５）和周围格数量均减少，小鼠表现出探索
（
欲望下降，运动减少。戒断３ｄ中给予戒烟方治疗，
对于周围格运动的降低没有明显改善，但戒烟方高
Ｐ＜剂量组小鼠穿过中央格的数量显著增加（
００５），说明戒烟方对于小鼠探索兴趣和运动有一定
的提升作用。戒烟方低、中、高剂量组对于小鼠直立
次数的减少有增高趋势，对于小鼠自我梳理次数减
少没有影响。见图２。
２３ 戒烟方各组对于地西泮自然戒断后小鼠纹状
体内单胺类神经递质的影响 与正常对照组比较，
模型组中ＤＡ及其代谢产物ＤＯＰＡＣ、ＨＶＡ显著降低
（Ｐ＜００５或Ｐ＜００１），戒烟方对于ＤＡ的降低具有
升高作用，戒烟方高剂量组显著提高ＤＡ水平（Ｐ＜
００５）。模型组５ＨＴ也明显降低（Ｐ＜００５），戒烟
方高剂量组显著提高了５ＨＴ的含量（Ｐ＜００５），５
图１ 戒断３ｄ后各组小鼠的体质量增值（ｎ＝８）
注：与正常对照组比较，Ｐ＜００５
ＨＴ的代谢产物５ＨＩＡＡ含量略有降低。以上结果说
明，地西泮自然戒断状态下模型小鼠脑纹状体中
ＤＡ、５ＨＴ及其部分代谢产物发生明显变化，戒烟方
对于ＤＡ、５ＨＴ的下降有升高作用，而且没有增加代
谢产物含量，说明对脑内起到直接作用的ＤＡ和５ＨＴ
没有快速降解，可以维持较高的脑内浓度。见表２。
２４ 戒烟方对于地西泮自然戒断后小鼠纹状体内
氨基酸类神经递质的影响 与正常对照组比较，模
型组纹状体中兴奋性Ｇｌｕ水平降低，抑制性ＧＡＢＡ
水平升高趋势，导致Ｇｌｕ／ＧＡＢＡ比值明显下降（Ｐ＜
００５），戒烟方高剂量组可以明显抑制Ｇｌｕ／ＧＡＢＡ的
下降（Ｐ＜００１）。模型组Ｔａｕ水平明显下降（Ｐ＜
表１ 戒断３ｄ后各组小鼠平均饮食量和平均饮水量（ｎ＝８）
组别
正常对照组
模型组
戒烟方低剂量组
戒烟方中剂量组
戒烟方高剂量组
平均饮食量（ｇ／只）
ｄ１ｄ２ｄ３
５６７
３９５
４３８
４６４
５３１
６０２
４９５
５２１
５０３
５９５
５３９
５５７
５０８
５２６
５５１
平均饮水量（ｍＬ／只）
ｄ１ｄ２ｄ３
６７７
７３５
６７２
７０２
７１５
７１８７３８
６８８７２７
６５４７１４
６７２６６６
６９９７４９
２２ 各组小鼠行为学结果 戒断３ｄ后进行旷场
实验，记录小鼠穿过周围格次数以及穿过中央格次
数。与正常对照组比较，模型组小鼠穿过中央格
图２ 戒烟方对地西泮自然戒断小鼠行为学影响（ｎ＝８）
△
注：与正常对照组比较，Ｐ＜００５；与模型组比较，Ｐ＜００５
珋
表２ 戒烟方对于地西泮自然戒断后小鼠脑内单胺类神经递质的影响（ｘ±ｓ，ｇ／ｇ，ｎ＝５）
μ
组别
正常对照组
模型组
戒烟方低剂量组
戒烟方中剂量组
戒烟方高剂量组
ＤＡ
７０３±２１７
２１２±０５４
５２０±２４９
４７６±１６２
△
８５９±３７７
ＤＯＰＡＣ
１７００±３２９
１１７４±２９９
１２７４±４７８
ＨＶＡ
７９５±１７３
３９６±１１１
５１０±１９０
４１８±０４８
４３６±０７９
５ＨＴ
２２１±１９５
０７４±０３１
０９８±０８０
０９６±０５４
△
１９２±０５７
５ＨＩＡＡ
７２６±１８１
６０５±１４３
６１４±２７２
６１４±２０７
６０３±０７０
１０２２±１０８
１０８４±１４１
△
注：与正常对照组比较，Ｐ＜００５，Ｐ＜００１；与模型组比较，Ｐ＜００５
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Ｊｕｌｙ．２０２３，Ｖｏｌ．１０，Ｎｏ．７
００５），戒烟方有升高Ｔａｕ趋势，但差异无统计学意
义（Ｐ＞００５）。戒烟方对于纹状体中Ｇｌｙ水平没有
明显影响。以上结果说明，地西泮自然戒断状态下
模型小鼠脑内已经出现兴奋性和抑制性神经递质失
ｌｕ／ＧＡＢＡ失衡具有明显的调节作衡，戒烟方对于Ｇ
用。见表３。
２５ 戒烟方对地西泮自然戒断小鼠纹状体ｐ
ｍＴＯＲ、ｍＴＯＲ和ＢＤＮＦ蛋白表达的影响 与正常对
照组比较，模型组ｐｍＴＯＲ／ｍＴＯＲ和ＢＤＮＦ表达明
Ｐ＜００５或Ｐ＜００１），戒烟方有提高ｐ显降低（
ｍＴＯＲ／ｍＴＯＲ的作用（Ｐ＜００５）和增加ＢＤＮＦ表达
的趋势。见图３。
３ 讨论
ＢＺＤｓ药物主要通过作用于
γ
氨基丁酸Ａ型
（ＧＡＢＡＡ）受体复合物的苯二氮类（ＢＺＤ）受体起到
镇静、安眠作用，但由于受体的非选择性，长期使用
容易造成药物依赖，撤药症状明显。长期服用产生
耐受性后，可在同品种之间存在交叉耐受和交叉依
赖。目前，尚没有药物被推荐或批准用于治疗ＢＺＤｓ
药物依赖或促进长期使用后的戒断，主要以逐渐减
量及对症给药为主，但药物使用的结果差异很大，这
使ＢＺＤｓ依赖已经成为困扰健康状况的公共卫生问
８］
题和社会问题
［
。
中医学认为药物依赖多为“毒邪入脑”。所用
中药多为多靶点无成瘾性药物，在治疗药物依赖方
面具有较大优势。林则徐戒烟方由西洋参、生黄芪、
当归、柴胡、麸炒白术、关黄柏、木香、陈皮、升麻、天
麻、沉香和甘草组成。方中西洋参、黄芪、当归、甘草
是历代戒烟方中的常用药物。现代药理研究认为中
Ａ能和Ｇｌｕ能系统，通过调节药主要以靶标脑部Ｄ
神经递质的合成与释放、影响突触可塑性等功能调
９］
。在我们的节脑内微环境稳态，起到“解毒”作用
［
前期研究中，观察地西泮给药戒断后纹状体、下丘
脑、皮层、中脑和海马中的多种神经递质发生改变。
已知纹状体是基底神经节环路信号的传入及整合中
心，接受来自皮层、下丘脑、中脑的信号传入，经过局
部环路再传出到苍白球或者黑质网状部，参与药物
１０］
成瘾的从初始暴露到复吸的所有阶段
［
。
本研究中，小鼠在长期给予地西泮后戒断３ｄ，
发现明显影响小鼠饮食饮水，造成其体质量增长低
于正常小鼠；行为学检测发现穿过中央格数量减少，
直立探索次数降低，说明小鼠的探索及运动的欲望
珋
表３ 戒烟方对于地西泮自然戒断小鼠脑内氨基酸类神经递质的影响（ｘ±ｓ，ｇ／ｇ，ｎ＝５）
μ
组别
正常对照组
模型组
戒烟方低剂量组
戒烟方中剂量组
戒烟方高剂量组
Ｇｌｕ
７９７９９±１８０１１
５５５１４±２９９９５
７１９４２±３１０８２
５３８２５±３６４２４
８１８７９±３４７０２
ＧＡＢＡ
２５５６８±８７９０
３２３８６±９０１３
２０５２９±５８５７
１９９７２±８３９５
１８９６０±６７０４
Ｇｌｕ／ＧＡＢＡ
３４１±１２４
１７７±１０１
３４４±０９９
２４８±０９１
△
４２０±１２０
Ｔａｕ
１２１８５４±３０１６０
７７８２６±１５５４２
８５６２５±２６０６１
７４０５４±１９９５９
１０６９５７±２９０６３
Ｇｌｙ
７３５８±３５６５
９１８６±３８７２
８１４２±３３９８
６８２８±４３６６
７０２５±３０８８
△
与正常对照组比较，Ｐ＜００５；与模型组比较，Ｐ＜００５ 注：
图３ 戒烟方对地西泮自然戒断小鼠纹状体ＢＤＮＦ和ｐｍＴＯＲ／ｍＴＯＲ蛋白表达的影响（ｎ＝６）
△
注：与正常对照组比较，Ｐ＜００５，Ｐ＜００１；与模型组比较，Ｐ＜００５
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Ｊｕｌｙ．２０２３，Ｖｏｌ．１０，Ｎｏ．７
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降低，出现类似焦虑、抑郁样情绪变化，而戒烟方明
显改善了小鼠的一般状态及运动和探索兴趣，从整
体上说明药物的有效性。
本研究中，慢性给药戒断小鼠纹状体ＤＡ、５ＨＴ
及其代谢产物ＤＯＰＡＣ、ＨＶＡ等模型组明显降低。
已知脑内多巴胺能神经系统的改变是药物依赖的标
志性特征，而５ＨＴ与情绪改变密切相关。有研究
表明，ＢＺＤｓ药物引起的焦虑患者血液中ＤＡ、５ＨＴ
明显降低。不同剂量的地西泮，短期和长期处理斑
马鱼后可以引起５ＨＴ、ＤＡ等多种神经递质浓度随
时间发生改变，早期明显升高，长期则引起部分神经
递质显著下降，说明神经递质在不同病理阶段处于
动态变化的过程
［１１］
。戒烟方对于地西泮长期给药
引起的ＤＡ、５ＨＴ降低有明显的升高，而对于代谢产
物的影响不明显，说明戒烟方可能对于脑内ＤＡ、５
ＨＴ的生成有促进，或是对于其降解可能有抑制作
用，从而使脑内神经递质恢复且维持在较高水平，进
而缓解药物戒断引起的不良反应。
ＢＺＤｓ通过结合和增强ＧＡＢＡ受体发挥作用，本
研究中，虽然没有观察长期给药后ＧＡＢＡ的改变，
但是在戒断３ｄ后，ＧＡＢＡ含量仍然高于正常对照
组，同时抑制性氨基酸Ｇｌｙ具有同样趋势变化，兴奋
性神经递质Ｇｌｕ则相对正常对照组降低，Ｇｌｕ／ＧＡＢＡ
降低显著，说明戒断３ｄ后小鼠纹状体中仍然以抑
制性变化占据优势，尤其是戒烟方高剂量组改善了
纹状体的抑制状态，与行为学表现相符。已知Ｔａｕ
有明确的抗焦虑和抗抑郁作用，可以明显提升急性
或者慢性不可预知温和应激（ＣＵＭＳ）致抑郁小鼠脑
组织中ＤＡ、５ＨＴ含量，降低单胺氧化酶活性，升高
脑内ＢＤＮＦ含量
［１２］
。Ｔａｕ在模型小鼠脑中明显降
低。戒烟方则升高纹状体中Ｔａｕ含量，有益于改善
小鼠的抑郁状态。以上结果表明，戒烟方改善小鼠
的运动和探索能力与调节纹状体内多种神经递质失
衡有关。
长期灌胃地西泮的小鼠纹状体出现ＢＤＮＦ表达
降低、ｐｍＴＯＲ／ｍＴＯＲ降低的现象。甲基苯丙胺成
瘾者戒断阶段外周血中ＢＤＮＦ随戒断时间而逐渐降
低，如果伴有抑郁症状则ＢＤＮＦ下降更多，而抑郁会
明显增加甲基苯丙胺复吸的概率
［１３］
。
戒烟方在清末戒烟运动中发挥了重要作用，如
今古方新用，在临床治疗安眠药物依赖也取得了良
好的治疗效果。本研究中，我们以小鼠地西泮长期
给药后戒断模拟安眠药依赖，发现其改善小鼠行为
的作用机制与调节脑内多种神经递质稳态密切相
关，由于受组织样本量所限未进行神经递质代谢酶
等相关检测，此部分工作进行将会继续开展，以期更
好地揭示戒烟方对于药物依赖治疗作用机制，为戒
烟方临床治疗和药理机制提供新的依据。
利益冲突声明：无。
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Ａｄｄｉｃｔ，２００８，１７（５）：４４１４４６．
2024年3月28日发(作者：庄金)
１ ６９６
世界睡眠医学杂志
ＷｏｒｌｄＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｌｅｅｐＭｅｄｉｃｉｎｅ
２０２３年７月第１０卷第７期
Ｊｕｌｙ．２０２３，Ｖｏｌ．１０，Ｎｏ．７
睡眠实验医学
ＳｌｅｅｐＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ
林则徐戒烟方对地西泮自然戒断小鼠的
治疗作用及初步机制研究
焦 癑
１
李 鹏
２
刘艳骄
３
赵小亮
１
刘 洋
１
李 涛
１
王志国
１
王丹巧
３
（１中国中医科学院医学实验中心，北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室，北京，１００７００；２北京市海淀区
玉渊潭社区卫生服务中心，北京，１００３６３；３中国中医科学院广安门医院心理睡眠科，北京，１０００３２）
摘要 目的：探究林则徐戒烟方对地西泮自然戒断小鼠的治疗作用以及相关机制。方法：将４０只ＫＭ小鼠，按照体质量
随机分为正常对照组、模型组、戒烟方低剂量组、戒烟方中剂量组、戒烟方高剂量组，每组８只。正常对照组灌胃蒸馏水，
其余各组连续灌服地西泮（２ｍｇ／ｋｇ体质量）２８ｄ，随后停止给予地西泮进行戒断，戒烟方低、中、高剂量组分别灌胃３ｄ
林则徐戒烟方（７８ｇ、１５５、３１０ｇ／ｋｇ），模型组和正常对照组灌胃等容积蒸馏水。灌胃３ｄ期间监测小鼠的一般状态。
３ｄ后所有小鼠进行旷场实验，观察小鼠穿过中心格和周围格的数量、毛发梳理及直立次数。旷场实验结束后小鼠颈椎
脱位法处死，取脑纹状体。高效液相电化学方法检测小鼠纹状体中单胺类神经递质的含量。高效液相荧光法检测小
鼠纹状体中氨基酸类神经递质的含量。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ方法检测纹状体中脑源性神经营养因子（ＢＮＤＦ）、磷酸化哺乳动
物雷帕霉素靶蛋白（ｐｍＴＯＲ）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（ｍＴＯＲ）表达变化。结果：小鼠停止给药地西泮３ｄ后出现体
质量降低、探索欲望下降、运动减少，呈现出较明显的戒断反应。小鼠脑纹状体中多巴胺（ＤＡ）、５羟色胺（５ＨＴ）浓度和
谷氨酸（Ｇｌｕ）／氨基丁酸（ＧＡＢＡ）明显降低，ｐｍＴＯＲ／ｍＴＯＲ和ＢＤＮＦ表达显著降低。林则徐戒烟方灌胃后，小鼠运动
γ
量增加，脑内ＤＡ和５ＨＴ含量升高，抑制Ｇｌｕ／ＧＡＢＡ和ｐｍＴＯＲ／ｍＴＯＲ的降低。结论：林则徐戒烟方可以改善地西泮戒
断症状，其机制可能与通过调节纹状体内多种神经递质失衡，影响ｍＴＯＲ通路有关。
关键词 地西泮；纹状体；神经递质，林则徐戒烟方
ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＥｆｆｅｃｔａｎｄＰｒｅｌｉｍｉｎａｒｙＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＬｉｎｚｅｘｕＪｉｅｙａｎＦｏｒｍｕｌａ
ｏｎＮａｔｕｒａｌＷｉｔｈｄｒａｗａｌＳｙｍｐｔｏｍｓｆｒｏｍＤｉａｚｅｐａｍｉｎＭｉｃｅ
１２３１１１１３
ＪＩＡＯＹｕｅ，ＬＩＰｅｎｇ，ＬＩＵＹａｎｊｉａｏ，ＺＨＡＯＸｉａｏｌｉａｎｇ，ＬＩＵＹａｎｇ，ＬＩＴａｏ，ＷＡＮＧＺｈｉｇｕｏ，ＷＡＮＧＤａｎｑｉａｏ
（１ＢｅｉｊｉｎｇＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＢａｓｉｃＲｅｓｅａｒｃｈｏｎＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄＴｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＭａｊｏｒＤｉｓｅａｓｅｓ，
ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ；２Ｙｕｙｕａｎｔａｎ
ＣｏｍｍｕｎｉｔｙＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅＣｅｎｔｅｒｏｆＨａｉｄｉａｎＤｉｓｔｒｉｃｔ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１４２，Ｃｈｉｎａ；３Ｇｕａｎｇ′ａｎｍｅｎ
Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００５３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｅｆｆｅｃｔａｎｄｒｅｌｅｖａｎｔｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＬｉｎｚｅｘｕＪｉｅｙａｎｆｏｒｍｕｌａｏｎｎａｔｕｒａｌｗｉｔｈｄｒａｗａｌ
ｓｙｍｐｔｏｍｓｆｒｏｍｄｉａｚｅｐａｍｉｎｍｉｃｅＭｅｔｈｏｄｓ：ＦｏｒｔｙＫＭｍｉｃｅｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｓｅｌｅｃｔｅｄａｎｄｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ５ｇｒｏｕｐｓａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｈｅ
ｗｅｉｇｈｔ（ｎ＝８），ｎａｍｅｌｙ，ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｏｕｐ，ｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，Ｊｉｅｙａｎｆｏｒｍｕｌａｌｏｗｄｏｓｅｇｒｏｕｐ，ｍｅｄｉｕｍｄｏｓｅｇｒｏｕｐ，ａｎｄｈｉｇｈｄｏｓｅｇｒｏｕｐＡｌｌ
ｇｒｏｕｐｓｅｘｃｅｐｔｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｏｒａｌｌｙａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄｗｉｔｈ２ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙｆｏｒ２８ｄａｙｓ，ｔｈｅｎｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｇｉｖｅｎｅｑｕａｌｖｏｌｕｍｅｏｆ
ｗａｔｅｒＳｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙ，ｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｗａｓｄｉｓｃｏｎｔｉｎｕｅｄｆｏｒ３ｄａｙｓ（ｗｉｔｈｄｒａｗａｌｐｈａｓｅ）Ｄｕｒｉｎｇｗｉｔｈｄｒａｗａｌｐｈａｓｅ，ｍｉｃｅｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ
ｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄＪｉｅｙａｎｆｏｒｍｕｌａ（７８ｇ／ｋｇ，１５５ｇ／ｋｇ，３１０ｇ／ｋｇ）ｏｒｗａｔｅｒａｎｄｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｔｈｅｇｅｎｅｒａｌｓｔａｔｅＡｆｔｅｒ３ｄａｙｓ，ｔｈｅ
ｍｉｃｅｗｅｒｅｓｕｂｊｅｃｔｅｄｔｏａｏｐｅｎｆｉｅｌｄｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｆｏｒｏｂｓｅｒｖｉｎｇｔｈｅｎｕｍｂｅｒｓｏｆｃｅｎｔｅｒｃｅｌｌｓａｎｄｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｃｅｌｌｓｔｈａｔｍｉｃｅｓｔｅｐｐｅｄｏ
ｖｅｒ，ｇｒｏｏｍｉｎｇａｎｄｕｐｒｉｇｈｔｐｏｓｉｔｉｏｎＡｆｔｅｒｔｈｅｂｅｈａｖｉｏｒａｌｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ，ａｌｌｍｉｃｅｗｅｒｅｓａｃｒｉｆｉｃｅｄｂｙｃｅｒｖｉｃａｌｄｉｓｌｏｃａｔｉｏｎＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓ
ｏｆｍｏｎｏａｍｉｎｅｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓｉｎｔｈｅｓｔｒｉａｔｕｍｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｔｅｃ
ｔｏｒＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓｉｎｔｈｅｓｔｒｉａｔｕｍｏｆｍｉｃｅｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａ
ｐｈｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｄｅｔｅｃｔｏｒＴｈｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢＮＤＦ，ｐｍＴＯＲａｎｄｍＴＯＲｉｎｓｔｒｉａｔｕｍｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎ
ｂｌｏｔｔｉｎｇＲｅｓｕｌｔｓ：Ｄｕｒｉｎｇｔｈｅｗｉｔｈｄｒａｗａｌｐｈａｓｅ，ｔｈｅｍｉｃｅｈａｄｗｅｉｇｈｔｌｏｓｓ，ｅｘｐｌｏｒａｔｉｏｎａｎｄｅｘｅｒｃｉｓｅｄｅｃｒｅａｓｉｎｇＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆＤＡ，
５ＨＴ，Ｇｌｕ／ＧＡＢＡａｎｄｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｏｆｐｍＴＯＲ／ｍＴＯＲ，ＢＤＮＦｉｎｔｈｅｓｔｒｉａｔｕｍｏｆｍｉｃｅｂｒａｉｎｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅ
ｃｒｅａｓｅｄＪｉｅｙａｎｆｏｒｍｕｌａｃａｎｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅｅｘｅｒｃｉｓｅ，ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＤＡａｎｄ５ＨＴ，ａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｄｅｃｒｅａｓｅｏｆＧｌｕ／ＧＡＢＡａｎｄｐ
基金项目：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助项目（ＪＪＰＹ２０２２００２）；中国中医科学院医学实验中心科研项目结余经费科
研发展基金项目（ＦＺ２０２２００７）
作者简介：焦癑（１９８２—），女，博士，助理研究员，研究方向：中药药理学研究，Ｅｍａｉｌ：ｊｉａｏｙｕｅ＿ｍｅｄｉｃｉｎｅ＠１６３ｃｏｍ
通信作者：王丹巧（１９５９—），女，博士，研究员，研究方向：中药药理学和中西医结合基础研究，Ｅｍａｉｌ：ｄｑ＿ｗａｎｇ９６＠１６３ｃｏｍ
２０２３年７月第１０卷第７期
Ｊｕｌｙ．２０２３，Ｖｏｌ．１０，Ｎｏ．７
世界睡眠医学杂志
ＷｏｒｌｄＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｌｅｅｐＭｅｄｉｃｉｎｅ
１ ６９７
ｍＴＯＲ／ｍＴＯＲｉｎｔｈｅｓｔｒｉａｔｕｍＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＪｉｅｙａｎｆｏｒｍｕｌａｃａｎｓｏｏｔｈｅｄｉａｚｅｐａｍｗｉｔｈｄｒａｗａｌｓｙｍｐｔｏｍｓＩｔｍａｙｂｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅ
ｍＴＯＲｐａｔｈｗａｙａｎｄｒｅｇｕｌａｔｅｔｈｅｉｍｂａｌａｎｃｅｏｆｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓｉｎｔｈｅｓｔｒｉａｔｕｍ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ｄｉａｚｅｐａｍ；Ｓｔｒｉａｔｕｍ；Ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ；ＬｉｎｚｅｘｕＪｉｅｙａｎｆｏｒｍｕｌａ
中图分类号：Ｒ２４２；Ｒ７４９６１；Ｒ３３８１４文献标识码：Ａｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．２０９５－７１３０．２０２３．０７．０７５
地西泮是临床广泛使用的精神类药物，属于苯
二氮
艹
卓
类药物（ＢＺＤｓ），可用于镇静催眠、抗惊厥和
抗癫痫等治疗。临床推荐ＢＺＤｓ的使用时间不超过
６周
［１］
。刘逢安和徐涛
［２］
的调查显示，２０１６年潜江
市精神病医院的１８２０７例门诊处方中ＢＤＺｓ处方率
为３４９％，其中连续使用同一种ＢＺＤｓ超过２个月
者为２３５１％。ＢＺＤｓ长期使用不良反应多，容易造
成药物依赖，停药后出现焦虑、抑郁、反跳性失眠等
症状为主，结合心理对药物的渴求，使患者经常会增
量使用药物，造成不可逆的损伤。临床对于ＢＺＤｓ的
戒断治疗以逐渐减量或给予其他替代药物治疗为
主，耐药情况或者不良反应较多，且存在的心理依赖
问题难以解决
［１］
。
林则徐戒烟方（以下简称戒烟方），也称为林文
忠公戒烟方，来源于福州林则徐纪念馆，是林则徐和
名医何其伟合作研制，以解清末鸦片泛滥之毒。道
光十八年林则徐任湖广总督时，即将该方上奏朝
廷
［３］
。该方主方名“忌酸丸”，辅佐方名“补正丸”。
《湖广奏稿》卷四中记载该方在湖广地区“凡省城、
汉镇药店，所配戒烟之药，无家不有，无日不售”，并
“有耆民妇女在路旁叩头称谢，据云其夫男久患烟
瘾，今幸服药断绝，身体渐强”。中国中医科学院广
安门医院刘艳骄教授
［４］
借鉴林则徐戒除鸦片的思
路，采用戒烟方作为安眠药物中药替代治疗的主要
方剂，并提出安眠药物依赖性失眠的中医病因是“毒
邪滞留，内生燥火”，病机为“毒邪上脑”，全方以西
洋参、当归、黄芪等扶正，黄连、天麻、柴胡、沉香等解
毒，共奏“温补脾肾，益气升阳，滋阴平肝，治药毒
瘾”之效，在临床上收到良好的治疗效果，形成规范
化诊疗流程
［５］
，但戒烟方的作用机制尚无研究。由
于长期滥用药物会使大脑产生适应性改变，主要表
现为脑内多巴胺（ＤＡ）、
γ
氨基丁酸（ＧＡＢＡ）、谷氨酸
（Ｇｌｕ）等与奖赏系统有关的神经递质改变，神经营养
因子释放，突触可塑性改变等。哺乳动物雷帕霉素
靶蛋白（ｍＴＯＲ）信号通路与药物成瘾引起的神经适
应性和奖赏效应直接相关
［６］
。因此，本研究模拟临
床停药过程，采用小鼠规律灌胃地西泮２８ｄ后停止
给药的自然戒断方法，观察戒烟方对小鼠在戒断３ｄ
后发生的行为学变化、纹状体内多种神经递质的改
变以及对脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）、ｍＴＯＲ活性
的影响，探讨戒烟方治疗地西泮自然戒断的治疗作
用及其相关机制。现报道如下。
１ 材料与方法
１１ 材料
１１１ 动物 雄性ＫＭ小鼠４０只，体质量２０ｇ左
右。购于北京华阜康生物科技股份有限公司，许可
证编号：ＳＣＸＫ（京）２０１９０００８。所有动物饲养于独
立通气笼具（４６１ｍｍ×２７４ｍｍ×２２９ｍｍ），实验室
环境温度为２２℃左右，湿度为５０％左右，提前喂养
１周适应饲养环境，自由饮水和食用商业饲料。动
物实验伦理审批号：ＥＲＣＣＡＣＭＳ２１２３０３０５。
１１２ 药物 地西泮片（山东信谊有限公司，国药
准字Ｈ３７０２３０３９），戒烟方药物组成：西洋参１５ｇ、麸
炒白术１０ｇ、生黄芪１０ｇ、柴胡１５ｇ、当归６ｇ、关黄
柏１２ｇ、木香６ｇ、陈皮６ｇ、升麻５ｇ、天麻６ｇ、甘草
６ｇ、沉香６ｇ。中药购自北京同仁堂有限公司。
１１３ 试剂与仪器 ＤＡ（批号：ＢＣＢＣ７６１４Ｖ）、３，４
二羟基苯乙酸（ＤＯＰＡＣ，批号：０００１３６４２０９）、５羟色
胺（５ＨＴ，批号：０９１Ｍ１１２８Ｖ）、５羟吲哚乙酸（５
ＨＩＡＡ，批号：０４６Ｋ１５２０）、氯化钾（批号：
０８０Ｍ００９１Ｖ）、乙二胺四乙酸二钠（批号：
０８０Ｍ００１３Ｖ）均为Ｓｉｇｍａ公司（美国）产品。辛烷磺
酸钠（批号：７８７６９７６）、磷酸二氢钠（批号：
２４６１２２９）、磷酸（批号：４１０３５１２）、四氢呋喃（批号：
Ｒ１４１８９２）、甲醇（批号：Ｒ１４２１８８）、乙腈（批号：
Ｒ１４２０９１）均为Ｄｉｋｍａ公司产品（北京迪科马科技有
限公司）。Ｇｌｕ（批号：０６０Ｍ０１７１１Ｖ）、甘氨酸（Ｇｌｙ，批
号：１３９４０３１Ｖ）、牛磺酸（Ｔａｕ，批号：７１Ｋ０１３０）、ＧＡＢＡ
（批号：１２４Ｈ０３６４）、邻苯二甲醛（批号：
ＢＣＢＬ２５１４Ｖ）、乙酸钠（批号：５０４３Ｒ２８Ｖ）均购于Ａｌｆａ
Ａｅｓａｒ（Ｃｈｉｎａ）Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ公司（美国）。ＢＤＮＦ抗体
（批号：ＧＲ３３１９８２５２２）、ｍＴＯＲ抗体（批号：
ＧＲ３３５６２９９１８）购自Ａｂｃｏｍ公司（英国），ｐｍＴＯＲ
抗体（批号：２８２７３１ＡＰ）购自Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ公司。电
动组织研磨器（ＧＩＮＧＫＯ公司，型号：Ｇ１２４０２０３１），多
管涡旋震荡仪（ＴＡＲＧＡＩＮ，北京锦踏科技有限公
司），Ｒｏｔａｎｔａ４６０Ｒ离心机（ＡｎｄｒｅａｓＨｅｔｔｉｃｈ
ＧｍｂＨ＆ＣｏＫＧ，德国）。高效液相电化学检测系统：
Ｓｙｋａｍ高效液相色谱仪，包括Ｓ２１００溶剂输送系统，
Ｓ５２００自动进样器和Ｃｌａｒｉｔｙ色谱工作站［Ｓｙｋａｍ（赛
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卡姆）公司，德国］。ＡｎｔｅｃＤｅｃａｄｅ
Ⅱ
ＳＤＣ电化学检
测器，ＶＴ０３玻璃碳工作电极（直径３ｍｍ），原位银／
氯化银参比电极，２５
μ
ｍ电极垫片，柱前连有ＡＤＦ
滤波器（００５Ｈｚ）和脉冲阻尼器（ＡｎｔｅｃＬｅｙｄｅｎＢＶ
公司，荷兰）。ＷａｔｅｒｓＸＳｅｌｅｃｔ＠ＨＳＳＴ３色谱柱（２５
μ
ｍ，２１ｍｍ×５０ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ公司，美国）。高效液
相荧光检测系统包括：Ａｇｌｉｅｎｔ１２６０Ｉｎｆｉｎｉｔｙ
Ⅱ
高效液
相色谱系统，包括自动进样器、四元泵、柱温箱、荧光
检测器和Ｏｐｅｎｌａｂ软件。ＡｇｌｉｅｎｔＥｃｌｉｐｓｅＡＡＡ色谱
柱（５
μ
ｍ，４６ｍｍ×１５０ｍｍ），以上均为Ａｇｉｌｅｎｔ科技
有限公司产品（美国）。稳压稳流电泳仪（型号：
ＰｏｗｅｒｐａｃＨＱ），垂直电泳槽（型号：ＭＰ３）、半干转电
转印仪（型号：ＴｒａｎｓＢｌｏｔＳＤ）均为ＢｉｏＲａｄ公司产品
（美国）。
１２ 方法
１２１ 分组与模型制备 将４０只小鼠称量体质量
后按照随机数字表法分为５组：正常对照组、模型
组、戒烟方低剂量组、戒烟方中剂量组、戒烟方高剂
量组。正常对照组小鼠灌胃蒸馏水２８ｄ。其余各组
小鼠连续灌胃地西泮（２ｍｇ／ｋｇ）２８ｄ。
１２２ 干预方法
１２２１ 林则徐戒烟方的制备方法 按照临床每
人每日用量折算小鼠每日使用的等效剂量。戒烟方
药材（西洋参另煎兑入）浸泡２ｈ后大火烧开，小火
煎煮后提取２次。所有药汁混合后浓缩，移入旋蒸
仪旋转蒸发至所需３１０ｇ／ｋｇ。分装，－８０℃保存。
１２２２ 给药方法 造模后停药３ｄ。在此期间，
模型组和正常对照组灌胃蒸馏水；戒烟方低剂量组
（７８ｇ／ｋｇ）、戒烟方中剂量组（１５５ｇ／ｋｇ）、戒烟方
高剂量组（３１０ｇ／ｋｇ）灌胃相应剂量的中药。
１２３ 检测指标与方法
记录每组小鼠每天总的饮食、饮水量。３ｄ后记
录每只小鼠体质量，进行行为学检测。小鼠脱颈处
死后剥离脑组织取纹状体，精密称取纹状体质量，
－８０℃保存。
１２３１ 行为学分析 应用旷场实验分析小鼠的
行为学变化。将小鼠放入５０ｃｍ×５０ｃｍ的旷场中。
底部平均分为２５个正方形格子。将与旷场箱壁相
连的方格或者区域称为周围格，不与反应箱壁连接
的区域称为中央格。每次将小鼠放正中格子中，观
察记录５ｍｉｎ内小鼠穿过中央格和外周格的数量。
穿过格子以小鼠半身以上进入格子记为１个。记录
小鼠直立和梳理的次数。直立以小鼠前肢全部离开
地面记为１次。梳理以小鼠完成整套梳理毛发过程
记为
１次。每只小鼠记录完毕后喷洒乙醇挥干以减
少对随后记录动物的干扰。
１２３２ 高效液相电化学方法检测小鼠纹状体中
单胺类神经递质的含量 将纹状体加入适量冷生理
盐水用手持式匀浆器在冰上进行匀浆，取定量匀浆
液加入３倍体积的１％甲酸乙腈，震荡３ｍｉｎ后离
心（离心半径９７ｍｍ），２００００×ｇ，４℃，离心５ｍｉｎ。
取上清液加入等体积１％高氯酸后重复上述步骤，
以同样条件再次离心取上清液。样本适量稀释后即
进行检测，避免反复冻融。流动相为水∶甲醇＝
９０∶１０（含０７４ｍｍｏｌ／Ｌ辛烷磺酸钠、８０ｍｍｏｌ／Ｌ二
水合磷酸二氢钠、００２７ｍｍｏｌ／Ｌ乙二胺四乙酸二钠
和２ｍｍｏｌ／Ｌ氯化钾），磷酸调ｐＨ＝３０，０２ｍＬ／ｍｉｎ
等度洗脱，柱温３５℃。所得数据根据稀释倍数和组
织质量进行浓度校正。检测ＤＡ、ＤＯＰＡＣ、ＨＶＡ、５
ＨＴ、５ＨＩＡＡ的含量。
１２３３ 高效液相荧光法检测小鼠纹状体中氨基
酸类神经递质的含量 将纹状体加入适量冷生理盐
水用手持式匀浆器在冰上进行匀浆。取定量匀浆液
加入３倍乙腈，震荡３ｍｉｎ后离心（离心半径
９７ｍｍ），２００００ｇ，４℃，离心５ｍｉｎ。取上清液以同
样条件再次离心。样本适量稀释后即进行检测，避
免反复冻融。流动相、衍生液配制等参见文献［７］。
二元梯度洗脱，流速０８ｍＬ／ｍｉｎ；激发波长３４０ｎｍ，
发射波长４５５ｎｍ。所得数据根据稀释倍数和组织
质量进行校正。检测Ｇｌｕ、ＧＡＢＡ、Ｔａｕ、Ｇｌｙ含量。
１２３４ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ方法检测纹状体中ＢＤＮＦ
及ｍＴＯＲ和ｐｍＴＯＲ蛋白表达 将纹状体组织放入
预冷的研钵中加入液氮进行快速研磨提取蛋白，
ＢＣＡ法测定蛋白浓度。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ操作流程包
括电泳、蛋白质的电转移和膜封闭、抗原抗体反应及
显影，用ＩＰＰ软件对扫描图像的目的条带进行灰度
分析。抗体稀释倍数１∶１０００。
１３ 统计学方法 采用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ（ｖｅｒｓｉｏｎ
８０）统计软件进行数据分析。计量资料以均数±标
准差（
珋
ｘ±ｓ）表示，２组间比较用ｔ检验，多组间比较采
用单因素方差分析，以Ｐ＜００５为差异有统计学意义。
２ 结果
２１ 地西泮停药３ｄ小鼠体质量、饮食、饮水量变
化 小鼠灌胃２８ｄ后，正常对照组与其余各组灌胃
地西泮小鼠的平均体质量没有差异。戒断３ｄ后，
每只小鼠的体质量按每日体质量减去戒断前体质量
得到的差值进行统计。与正常对照组比较，３ｄ后各
组小鼠与戒断前体质量增值明显下降，差异有统计
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学意义（Ｐ＜００５），戒烟方低、中、高剂量组体质量
增值与模型组比较有升高趋势。连续观察各组小鼠
在这３ｄ内的平均饮食量和饮水量可以看到，模型
饮水量增多的表组小鼠在第１天出现饮食量下降、
现，在随后２ｄ内逐渐恢复。戒烟方低、中、高剂量组
对于饮食量降低有一定的改善作用。见图１，表１。
Ｐ＜００５）和周围格数量均减少，小鼠表现出探索
（
欲望下降，运动减少。戒断３ｄ中给予戒烟方治疗，
对于周围格运动的降低没有明显改善，但戒烟方高
Ｐ＜剂量组小鼠穿过中央格的数量显著增加（
００５），说明戒烟方对于小鼠探索兴趣和运动有一定
的提升作用。戒烟方低、中、高剂量组对于小鼠直立
次数的减少有增高趋势，对于小鼠自我梳理次数减
少没有影响。见图２。
２３ 戒烟方各组对于地西泮自然戒断后小鼠纹状
体内单胺类神经递质的影响 与正常对照组比较，
模型组中ＤＡ及其代谢产物ＤＯＰＡＣ、ＨＶＡ显著降低
（Ｐ＜００５或Ｐ＜００１），戒烟方对于ＤＡ的降低具有
升高作用，戒烟方高剂量组显著提高ＤＡ水平（Ｐ＜
００５）。模型组５ＨＴ也明显降低（Ｐ＜００５），戒烟
方高剂量组显著提高了５ＨＴ的含量（Ｐ＜００５），５
图１ 戒断３ｄ后各组小鼠的体质量增值（ｎ＝８）
注：与正常对照组比较，Ｐ＜００５
ＨＴ的代谢产物５ＨＩＡＡ含量略有降低。以上结果说
明，地西泮自然戒断状态下模型小鼠脑纹状体中
ＤＡ、５ＨＴ及其部分代谢产物发生明显变化，戒烟方
对于ＤＡ、５ＨＴ的下降有升高作用，而且没有增加代
谢产物含量，说明对脑内起到直接作用的ＤＡ和５ＨＴ
没有快速降解，可以维持较高的脑内浓度。见表２。
２４ 戒烟方对于地西泮自然戒断后小鼠纹状体内
氨基酸类神经递质的影响 与正常对照组比较，模
型组纹状体中兴奋性Ｇｌｕ水平降低，抑制性ＧＡＢＡ
水平升高趋势，导致Ｇｌｕ／ＧＡＢＡ比值明显下降（Ｐ＜
００５），戒烟方高剂量组可以明显抑制Ｇｌｕ／ＧＡＢＡ的
下降（Ｐ＜００１）。模型组Ｔａｕ水平明显下降（Ｐ＜
表１ 戒断３ｄ后各组小鼠平均饮食量和平均饮水量（ｎ＝８）
组别
正常对照组
模型组
戒烟方低剂量组
戒烟方中剂量组
戒烟方高剂量组
平均饮食量（ｇ／只）
ｄ１ｄ２ｄ３
５６７
３９５
４３８
４６４
５３１
６０２
４９５
５２１
５０３
５９５
５３９
５５７
５０８
５２６
５５１
平均饮水量（ｍＬ／只）
ｄ１ｄ２ｄ３
６７７
７３５
６７２
７０２
７１５
７１８７３８
６８８７２７
６５４７１４
６７２６６６
６９９７４９
２２ 各组小鼠行为学结果 戒断３ｄ后进行旷场
实验，记录小鼠穿过周围格次数以及穿过中央格次
数。与正常对照组比较，模型组小鼠穿过中央格
图２ 戒烟方对地西泮自然戒断小鼠行为学影响（ｎ＝８）
△
注：与正常对照组比较，Ｐ＜００５；与模型组比较，Ｐ＜００５
珋
表２ 戒烟方对于地西泮自然戒断后小鼠脑内单胺类神经递质的影响（ｘ±ｓ，ｇ／ｇ，ｎ＝５）
μ
组别
正常对照组
模型组
戒烟方低剂量组
戒烟方中剂量组
戒烟方高剂量组
ＤＡ
７０３±２１７
２１２±０５４
５２０±２４９
４７６±１６２
△
８５９±３７７
ＤＯＰＡＣ
１７００±３２９
１１７４±２９９
１２７４±４７８
ＨＶＡ
７９５±１７３
３９６±１１１
５１０±１９０
４１８±０４８
４３６±０７９
５ＨＴ
２２１±１９５
０７４±０３１
０９８±０８０
０９６±０５４
△
１９２±０５７
５ＨＩＡＡ
７２６±１８１
６０５±１４３
６１４±２７２
６１４±２０７
６０３±０７０
１０２２±１０８
１０８４±１４１
△
注：与正常对照组比较，Ｐ＜００５，Ｐ＜００１；与模型组比较，Ｐ＜００５
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００５），戒烟方有升高Ｔａｕ趋势，但差异无统计学意
义（Ｐ＞００５）。戒烟方对于纹状体中Ｇｌｙ水平没有
明显影响。以上结果说明，地西泮自然戒断状态下
模型小鼠脑内已经出现兴奋性和抑制性神经递质失
ｌｕ／ＧＡＢＡ失衡具有明显的调节作衡，戒烟方对于Ｇ
用。见表３。
２５ 戒烟方对地西泮自然戒断小鼠纹状体ｐ
ｍＴＯＲ、ｍＴＯＲ和ＢＤＮＦ蛋白表达的影响 与正常对
照组比较，模型组ｐｍＴＯＲ／ｍＴＯＲ和ＢＤＮＦ表达明
Ｐ＜００５或Ｐ＜００１），戒烟方有提高ｐ显降低（
ｍＴＯＲ／ｍＴＯＲ的作用（Ｐ＜００５）和增加ＢＤＮＦ表达
的趋势。见图３。
３ 讨论
ＢＺＤｓ药物主要通过作用于
γ
氨基丁酸Ａ型
（ＧＡＢＡＡ）受体复合物的苯二氮类（ＢＺＤ）受体起到
镇静、安眠作用，但由于受体的非选择性，长期使用
容易造成药物依赖，撤药症状明显。长期服用产生
耐受性后，可在同品种之间存在交叉耐受和交叉依
赖。目前，尚没有药物被推荐或批准用于治疗ＢＺＤｓ
药物依赖或促进长期使用后的戒断，主要以逐渐减
量及对症给药为主，但药物使用的结果差异很大，这
使ＢＺＤｓ依赖已经成为困扰健康状况的公共卫生问
８］
题和社会问题
［
。
中医学认为药物依赖多为“毒邪入脑”。所用
中药多为多靶点无成瘾性药物，在治疗药物依赖方
面具有较大优势。林则徐戒烟方由西洋参、生黄芪、
当归、柴胡、麸炒白术、关黄柏、木香、陈皮、升麻、天
麻、沉香和甘草组成。方中西洋参、黄芪、当归、甘草
是历代戒烟方中的常用药物。现代药理研究认为中
Ａ能和Ｇｌｕ能系统，通过调节药主要以靶标脑部Ｄ
神经递质的合成与释放、影响突触可塑性等功能调
９］
。在我们的节脑内微环境稳态，起到“解毒”作用
［
前期研究中，观察地西泮给药戒断后纹状体、下丘
脑、皮层、中脑和海马中的多种神经递质发生改变。
已知纹状体是基底神经节环路信号的传入及整合中
心，接受来自皮层、下丘脑、中脑的信号传入，经过局
部环路再传出到苍白球或者黑质网状部，参与药物
１０］
成瘾的从初始暴露到复吸的所有阶段
［
。
本研究中，小鼠在长期给予地西泮后戒断３ｄ，
发现明显影响小鼠饮食饮水，造成其体质量增长低
于正常小鼠；行为学检测发现穿过中央格数量减少，
直立探索次数降低，说明小鼠的探索及运动的欲望
珋
表３ 戒烟方对于地西泮自然戒断小鼠脑内氨基酸类神经递质的影响（ｘ±ｓ，ｇ／ｇ，ｎ＝５）
μ
组别
正常对照组
模型组
戒烟方低剂量组
戒烟方中剂量组
戒烟方高剂量组
Ｇｌｕ
７９７９９±１８０１１
５５５１４±２９９９５
７１９４２±３１０８２
５３８２５±３６４２４
８１８７９±３４７０２
ＧＡＢＡ
２５５６８±８７９０
３２３８６±９０１３
２０５２９±５８５７
１９９７２±８３９５
１８９６０±６７０４
Ｇｌｕ／ＧＡＢＡ
３４１±１２４
１７７±１０１
３４４±０９９
２４８±０９１
△
４２０±１２０
Ｔａｕ
１２１８５４±３０１６０
７７８２６±１５５４２
８５６２５±２６０６１
７４０５４±１９９５９
１０６９５７±２９０６３
Ｇｌｙ
７３５８±３５６５
９１８６±３８７２
８１４２±３３９８
６８２８±４３６６
７０２５±３０８８
△
与正常对照组比较，Ｐ＜００５；与模型组比较，Ｐ＜００５ 注：
图３ 戒烟方对地西泮自然戒断小鼠纹状体ＢＤＮＦ和ｐｍＴＯＲ／ｍＴＯＲ蛋白表达的影响（ｎ＝６）
△
注：与正常对照组比较，Ｐ＜００５，Ｐ＜００１；与模型组比较，Ｐ＜００５
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降低，出现类似焦虑、抑郁样情绪变化，而戒烟方明
显改善了小鼠的一般状态及运动和探索兴趣，从整
体上说明药物的有效性。
本研究中，慢性给药戒断小鼠纹状体ＤＡ、５ＨＴ
及其代谢产物ＤＯＰＡＣ、ＨＶＡ等模型组明显降低。
已知脑内多巴胺能神经系统的改变是药物依赖的标
志性特征，而５ＨＴ与情绪改变密切相关。有研究
表明，ＢＺＤｓ药物引起的焦虑患者血液中ＤＡ、５ＨＴ
明显降低。不同剂量的地西泮，短期和长期处理斑
马鱼后可以引起５ＨＴ、ＤＡ等多种神经递质浓度随
时间发生改变，早期明显升高，长期则引起部分神经
递质显著下降，说明神经递质在不同病理阶段处于
动态变化的过程
［１１］
。戒烟方对于地西泮长期给药
引起的ＤＡ、５ＨＴ降低有明显的升高，而对于代谢产
物的影响不明显，说明戒烟方可能对于脑内ＤＡ、５
ＨＴ的生成有促进，或是对于其降解可能有抑制作
用，从而使脑内神经递质恢复且维持在较高水平，进
而缓解药物戒断引起的不良反应。
ＢＺＤｓ通过结合和增强ＧＡＢＡ受体发挥作用，本
研究中，虽然没有观察长期给药后ＧＡＢＡ的改变，
但是在戒断３ｄ后，ＧＡＢＡ含量仍然高于正常对照
组，同时抑制性氨基酸Ｇｌｙ具有同样趋势变化，兴奋
性神经递质Ｇｌｕ则相对正常对照组降低，Ｇｌｕ／ＧＡＢＡ
降低显著，说明戒断３ｄ后小鼠纹状体中仍然以抑
制性变化占据优势，尤其是戒烟方高剂量组改善了
纹状体的抑制状态，与行为学表现相符。已知Ｔａｕ
有明确的抗焦虑和抗抑郁作用，可以明显提升急性
或者慢性不可预知温和应激（ＣＵＭＳ）致抑郁小鼠脑
组织中ＤＡ、５ＨＴ含量，降低单胺氧化酶活性，升高
脑内ＢＤＮＦ含量
［１２］
。Ｔａｕ在模型小鼠脑中明显降
低。戒烟方则升高纹状体中Ｔａｕ含量，有益于改善
小鼠的抑郁状态。以上结果表明，戒烟方改善小鼠
的运动和探索能力与调节纹状体内多种神经递质失
衡有关。
长期灌胃地西泮的小鼠纹状体出现ＢＤＮＦ表达
降低、ｐｍＴＯＲ／ｍＴＯＲ降低的现象。甲基苯丙胺成
瘾者戒断阶段外周血中ＢＤＮＦ随戒断时间而逐渐降
低，如果伴有抑郁症状则ＢＤＮＦ下降更多，而抑郁会
明显增加甲基苯丙胺复吸的概率
［１３］
。
戒烟方在清末戒烟运动中发挥了重要作用，如
今古方新用，在临床治疗安眠药物依赖也取得了良
好的治疗效果。本研究中，我们以小鼠地西泮长期
给药后戒断模拟安眠药依赖，发现其改善小鼠行为
的作用机制与调节脑内多种神经递质稳态密切相
关，由于受组织样本量所限未进行神经递质代谢酶
等相关检测，此部分工作进行将会继续开展，以期更
好地揭示戒烟方对于药物依赖治疗作用机制，为戒
烟方临床治疗和药理机制提供新的依据。
利益冲突声明：无。
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